7/22/2019 Diktat Uji Kuantitatif Glukosa Dengan Metode Kolorometri

http://slidepdf.com/reader/full/diktat-uji-kuantitatif-glukosa-dengan-metode-kolorometri 1/4

Materi Praktikum Biokimia

Acara IIIFakultas Pertanian dan Bisnis

2013/2014

UJI KUANTITATIF GLUKOSA DENGAN METODE

KOLOROMETRI

Kompetensi :

  Dapat mempraktekan penentuan kadar glukosa suatu bahan dengan menggunakan metode

kolorometri.

Pengantar :

Karbohidrat secara sederhana dapat diartikan sebagai suatu senyawa yang terdiri dari

molekul-molekul karbon (C), hidrogen (H) dan oksigen (O) atau karbon dan hidrat (H2O)

sehingga dinamakan karbo-hidrat. Dalam tumbuhan, senyawa ini dibentuk melalui proses

fotosintesis antara air (H2O) dengan karbondioksida (CO2) dengan bantuan sinar matahari dan

klorofil. 

Gula pereduksi merupakan golongan gula (karbohidrat) yang dapat mereduksi senyawa-

senyawa penerima elektron, contohnya adalah glukosa dan fruktosa. Ujung dari suatu gula

 pereduksi adalah ujung yang mengandung gugus aldehida atau keto bebas. Semua monosakarida

(glukosa, fruktosa,  galaktosa)  dan disakarida (laktosa ,maltosa) ,  kecuali sukrosa dan  pati

(polisakarida) , termasuk sebagai gula pereduksi. 

Penamaan  gula reduksi  ialah didasarkan pada adanya gugus aldehid (  – CHO pada

 glukosa dan galaktosa) yang dapat mereduksi larutan Cu2SO4 membentuk endapan merah bata.

Adapun  gula non-reduksi ialah gula yang tidak dapat mereduksi akibat tidak adanya gugus

aldehid seperti pada fruktosa dan sukrosa/dektrosa yang memiliki gugus keton (C=O). 

Umumnya gula pereduksi yang dihasilkan berhubungan erat dengan aktifitas enzim, 

dimana semakin tinggi aktifitas enzim maka semakin tinggi pula gula pereduksi yang dihasilkan.

Jumlah gula pereduksi yang dihasilkan selama reaksi diukur dengan menggunakan pereaksi asam

dinitro salisilat/dinitrosalycilic acid   (DNS) pada panjang gelombang 540 nm. Semakin tinggi

nilai absorbansi yang dihasilkan, semakin banyak pula gula pereduksi yang terkandung.

Prinsip penentuan ini adalah terbentuknya produk tereduksi berwarna merah-coklat 3-

amino 5-nitrosalisilic dan asam 3,5 dinitrosalisilc alkalin dengan gula terduksi jika dipanaskan.

7/22/2019 Diktat Uji Kuantitatif Glukosa Dengan Metode Kolorometri

http://slidepdf.com/reader/full/diktat-uji-kuantitatif-glukosa-dengan-metode-kolorometri 2/4

Materi Praktikum Biokimia

Acara IIIFakultas Pertanian dan Bisnis

2013/2014

ALAT DAN BAHAN

Alat

1.  Spektrofotometer

2.  Kuvet

3.  Waterbath

4.  Timbangan digital

5.  Tabung reaksi

6.  Pipet ukur

7.  Pipet tetes

8.  Pilius

9.  Labu takar

10.  Vortex

Bahan

1.  Sampel buah

2.  Larutan glukosa stok 15mg

/ml 

3.  Larutan glukosa standar 0,25 mg

/ml , 0,5 mg

/ml , 1 mg

/ml , 1,25 mg

/ml dan 1,5mg

/ml. 

4.  Reagen DNSA

CARA KERJA

Persiapan sampel

Sampel buah disiapkan , timbang 10 gram. Ditambahkan ± 100 ml akuades , dan kemudian

dihaluskan dengan blender. Tepatkan volume memakai labu takar sampai dengan 250 ml dengan

akuades. Saring sampai didapat larutan yang jernih. 

Pembuatan larutan standar

Larutan glukosa stok 15mg

/ml diencerkan dengan cara ditempatkan pada labu takar

kemudian dicampur dengan akuades dan dipindahkan ke tabung reaksi.  

7/22/2019 Diktat Uji Kuantitatif Glukosa Dengan Metode Kolorometri

http://slidepdf.com/reader/full/diktat-uji-kuantitatif-glukosa-dengan-metode-kolorometri 3/4

Materi Praktikum Biokimia

Acara IIIFakultas Pertanian dan Bisnis

2013/2014

Persiapan pengukuran absorbansi

Pipet 0,5 ml sampel dan larutan standar, dimasukkan ke dalam labu erlenmeyer. 

Ditambahkan 1 ml akuades dan 1 ml reagen DNSA.  Dipanaskan dalam waterbath mendidih

selama 5 menit. Dinginkan, ditambahkan 8 ml akuades. Vortex (homogenisasi) sampai homogen. 

Mengukur absorbansi

Ukur nilai absorbansi larutan standar dan larutan sampel dengan menggunakan

spektrofotometer pada panjang gelombang 540 nm. Sampel dimasukkan kedalam kuvet (jangan

 sampai menyentuh bagian bening).  Hasil nilai absorbansi larutan standar dan larutan sampel

diolah kedalam ms. Excel. Grafik dibuat hingga mendapat persamaan Y = ax + b . Konsentrasi

dan persentase glukosa dari larutan sampel dapat dicari berdasarkan persamaan yang sudah

diperoleh. 

HASIL PENGAMATAN 

Pembuatan larutan standar

Konsentrasi

Standar

Glukosa

ml glukosa stok

15 mg/ml 

Volume Akuades

(ml)

Volume Akhir

(ml)

0 10

0,25 10

0,5 10

1 10

1,25 10

1,5 10

Volume Larutan stok 15mg

/ml yang digunakan dihitung dengan rumus: 

V1 (volume akhir) x M1 (konsentrasi standar glukosa yang diinginkan) = V2 x M2 (glukosa stok

15mg 

 / ml  ) 

7/22/2019 Diktat Uji Kuantitatif Glukosa Dengan Metode Kolorometri

http://slidepdf.com/reader/full/diktat-uji-kuantitatif-glukosa-dengan-metode-kolorometri 4/4

Materi Praktikum Biokimia

Acara IIIFakultas Pertanian dan Bisnis

2013/2014

Absorbansi pada larutan standar

[Glukosa] Absorbansi

0

0,25

0,5

1

1,25

1,5

Absorbansi pada larutan sampel

Nama Sampel Absorbansi