deteksi resistensi aedes aegypti terhadap sipermetrin...
TRANSCRIPT
i
DETEKSI RESISTENSI Aedes aegypti TERHADAP
SIPERMETRIN MENGGUNAKAN TEKNIK
POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR)
DI AMBARAWA KABUPATEN SEMARANG
TAHUN 2019
SKRIPSI
Diajukan sebagai Salah Satu Syarat untuk
Memperoleh Gelar Sarjana Kesehatan Masyarakat
Disusun oleh:
Laila Fitriani
NIM 6411415099
JURUSAN ILMU KESEHATAN MASYARAKAT
FAKULTAS ILMU KEOLAHRAGAAN
UNIVERSITAS NEGERI SEMARANG
2019
ii
Jurusan Ilmu Kesehatan Masyarakat
Fakultas Ilmu Keolahrgaan
Universitas Negeri Semarang
Oktober 2019
ABSTRAK
Laila Fitriani
Deteksi Resistensi Aedes aegypti terhadap Sipermetrin Menggunakan Teknik
Polymerase Chain Reaction (PCR) di Ambarawa Kabupaten Semarang
Tahun 2019
XIX + 102 halaman + 11 tabel + 17 gambar + 8 lampiran
Kecamatan Ambarawa adalah salah satu kecamatan endemis sejak tahun
2017 selalu menyumbang kasus DBD tertinggi di Kabupaten Semarang. Deteksi
resistensi Aedes aegypti terhadap sipermetrin secara molekuler menggunakan
teknik Polymerase Chain Reaction (PCR). Penelitian dilakukan untuk melihat
adanya mutasi pada gen VGSC Ae. aegypti.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimen murni. Sampel Ae. aegypti
yang diperiksa berjumlah 10 tiap kelurahan diambil dari 3 kelurahan endemis
DBD dengan intensitas fogging tinggi di Ambarawa. Pengambilan sampel
menggunakan teknik random sampling diambil dengan ovitrap yang terlebih
dahulu telah dipasang selama Bulan Agustus. Uji deteksi resistensi dengan
metode PCR dilakukan di Balai Litbangkes Banjarnegara pada Bulan September.
Data dianalisis secara deskriptif untuk menggambarkan hasil penelitian.
Hasil penelitian menunjukkan di Kelurahan Tambakboyo 2 sampel
susceptible (V/V), 7 sampel terdeteksi resisten homozigot (G/G), 1 sampel
terdeteksi resisten heterozigot (V/G); di Kelurahan Kupang 5 sampel terdeteksi
resisten homozigot (G/G) dan 5 sampel terdeteksi resisten heterozigot (V/G); dan
di Kelurahan Panjang 1 sampel susceptible (V/V), 8 sampel terdeteksi resisten
homozigot (G/G), 1 sampel terdeteksi resisten heterozigot (V/G).
Berdasarkan hasil penelitian mutasi telah ditemukan pada gen VGSC pada
kodon V1016G. Pelaksanaan manajemen penggunaan, pemilihan, dan rotasi jenis
insektisida secara tepat diharapkan dapat mengurangi resiko terjadinya resistensi
pada populasi nyamuk Ae. aegypti.
Kata kunci: Resistensi, Aedes aegypti, Sipermetrin, PCR
Kepustakaan: 62 (1992-2019)
iii
Public Health Science Department
Faculty of Sports Science
Universitas Negeri Semarang
October 2019
ABSTRACT
Laila Fitriani
Detection of Aedes aegypti Resistance towards Sipermetrin with Polymerase
Chain Reaction (PCR) Techniques in Ambarawa Semarang Regency 2019
XIX + 102 pages + 11 tables + 17 images + 8 appendices
Ambarawa Regency is one of the endemic sub-districts since 2017 which
always accounts for the highest DHF cases in Semarang Regency. Molecular
detection of Aedes aegypti resistance towards sipermetrin using Polymerase Chain
Reaction (PCR) techniques. The study was conducted to see mutations in the Ae.
aegypti VGSC gene.
This research was a true experimental study. The Ae. aegypti samples
examined were 10 in every village taken from 3 endemic DHF villages with high
fogging intensity in Ambarawa. The research used random sampling techniques
taken with ovitrap which was first installed during the month of August.
Resistance detection test using the PCR method were conducted at the
Banjarnegara Research and Development Center in September. Data were
analyzed descriptively to illustrate the results of the study.
The results showed that in Tambakboyo Village, 2 samples were
susceptible (V/V), 7 samples were detected as homozygous (G/G) resistant, 1
sample was detected as heterozygous (V/G) resistant; in Kupang District 5
samples were detected as being homozygous resistant (G/G) and 5 samples were
detected as heterozygous resistant (V/G); and in Panjang Village 1 susceptible
sample (V/V), 8 samples were detected as homozygous resistant (G/G), 1 sample
was detected as heterozygous resistant (V/G).
Based on the results of mutation studies have been found in the VGSC
gene in codon V1016G. The proper implementation of management, selection and
rotation of insecticides is expected to reduce the risk of resistance in the Ae.
aegypti mosquito population.
Keywords: Resistance, Aedes aegypti, Cypermethrin, PCR
Literatures: 62 (1992-2019)
iv
PERNYATAAN
v
vi
PRAKATA
Puji syukur penulis ucapkan kepada Allah SWT atas segala rahmat dan
karunia-Nya, shalawat dan salam penulis limpahkan kepada Nabi Muhammad
SAW atas hidayah-Nya, sehingga penulis dapat menyusun skripsi yang berjudul
“Deteksi Resistensi Aedes aegypti terhadap Sipermetrin Menggunakan Teknik
Polymerase Chain Reaction (PCR) di Wilayah Kerja Dinas Kesehatan Kabupaten
Semarang Tahun 2019”. Penyusunan skripsi ini dapat terselesaikan berkat
motivasi, dukungan, bimbingan, arahan, dan bantuan dari berbagai pihak. Pada
kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih kepada:
1. Prof. Dr. Tandiyo Rahayu, M.Pd., selaku Dekan Fakultas Ilmu
Keolahragaan Universitas Negeri Semarang atas izin penelitian.
2. Dr. Irwan Budiono, S.K.M., M.Kes(Epid)., selaku Ketua Jurusan Ilmu
Kesehatan Masyarakat, Fakultas Ilmu Keolahragaan, Universitas Negeri
Semarang atas izin penelitian.
3. Dr. Widya Hary Cahyati, S.K.M., M.Kes(Epid)., selaku Dosen
Pembimbing atas bimbingan, arahan, masukan, dan dukungannya selama
penyusunan skripsi ini.
4. drh. Dyah Mahendrasari Sukendra, M.Sc., selaku Dosen Penguji I atas
bimbingan, saran, dan masukan dalam perbaikan skripsi ini.
5. Lukman Fauzi, S.K.M., M.P.H., selaku Dosen Penguji II atas bimbingan,
saran, dan masukan dalam perbaikan skripsi ini.
6. Mardiana, S.K.M. M.Si., selaku Pendamping Akademik yang telah
mendampingi sejak awal perkuliahan hingga akhir.
7. Staf pengajar dan Staf administrasi Jurusan Ilmu Kesehatan Masyarakat,
atas dukungan dan bantuan, sehingga skripsi ini dapat terselesaikan.
8. Petugas Sanitarian Puskesmas Ambarawa, Bapak Sunaryono atas
dukungan dan bantuan serta keterlibatan dalam lancarnya pelaksanaan
penelitian ini.
9. Kepala Balai Litbang Kesehatan Kelas 1 Banjarnegara, atas izin penelitian
yang diberikan dan Petugas Laboratorium Biomolekuler Ibu Dyah, Ibu
vii
Isya, Ibu Ani, dan Bapak Wella atas bantuan pelaksanaan penelitian ini
serta kesabaran dalam memberikan ilmu baru bagi peneliti.
10. Kader Busungan, Kelurahan Tambakboyo (Ibu Kurtiningsih), Kader
Kupang Dukuh, Kelurahan Kupang (Ibu Djalal), dan Kader Kelurahan
Panjang (Ibu Chatrin) atas bantuan yang diberikan.
11. Orangtua yang tersayang dan tercinta, Bapak Cahyono dan Ibu
Mundriyah, keluarga tersayang, adikku Rosi, kakakku Mila dan Mela,
keponakanku Abiel, yang selalu mendoakan dengan tulus ikhlas dan
memberikan semangat tiada henti serta memberikan dukungan secara
moral dan material.
12. Sahabat dan teman-teman terbaik yang selalu memberikan motivasi dan
dukungan.
Semoga amal baik yang telah diberikan bagi seluruh pihak yang terlibat
mendapatkan balasan yang setimpal dari Yang Maha Kuasa. Penulis menyadari
bahwa skripsi ini masih belum sempurna, sehingga membutuhkan kritik dan saran
yang bersifat membangun.
Semarang, 19 September 2019
Penulis
Laila Fitriani
viii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ................................................................................................ i
ABSTRAK .............................................................................................................. ii ABSTRACT ............................................................................................................. iii PERNYATAAN ..................................................................................................... iv PENGESAHAN ...................................................................................................... v PRAKATA ............................................................................................................. vi
DAFTAR ISI ........................................................................................................ viii
DAFTAR TABEL ................................................................................................... x DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. xi
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xii BAB I PENDAHULUAN ....................................................................................... 1
1.1. LATAR BELAKANG .............................................................................. 1 1.2. RUMUSAN MASALAH ......................................................................... 5
1.3. TUJUAN PENELITIAN .......................................................................... 5 1.4. MANFAAT PENELITIAN ...................................................................... 5
1.4.1. Manfaat Bagi Masyarakat ................................................................. 5 1.4.2. Manfaat Bagi Instansi Pemerintah .................................................... 6 1.4.3. Manfaat Bagi Peneliti ........................................................................ 6
1.5. KEASLIAN PENELITIAN ...................................................................... 6 1.6. RUANG LINGKUP PENELITIAN ......................................................... 8
1.6.1. Ruang Lingkup Tempat..................................................................... 8 1.6.2. Ruang Lingkup Waktu ...................................................................... 8
1.6.3. Ruang Lingkup Keilmuan ................................................................. 8 BAB II TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................. 9
2.1. LANDASAN TEORI ................................................................................... 9 2.1.1. Resistensi .............................................................................................. 9
2.1.2. Tinjauan Tentang Vektor DBD di Kabupaten Semarang ................... 13 2.1.3. Insektisida ........................................................................................... 20 2.1.4. Sipermetrin .......................................................................................... 24
2.1.5. Kode Genetik ...................................................................................... 26 2.1.6. Mutasi DNA ........................................................................................ 29
2.1.7. Polymerase Chain Reaction (PCR) ..................................................... 33
2.2. KERANGKA TEORI................................................................................. 37
BAB III METODE PENELITIAN........................................................................ 38 3.1. ALUR PIKIR ............................................................................................. 38 3.2. FOKUS PENELITIAN ........................................................................... 38 3.3. HIPOTESIS PENELITIAN .................................................................... 38 3.4. JENIS DAN RANCANGAN PENELITIAN ......................................... 39
3.5. DEFINISI OPERASIONAL DAN SKALA PENGUKURAN .............. 39 3.6. SAMPEL PENELITIAN ........................................................................ 39 3.7. BAHAN DAN ALAT ............................................................................ 43
3.7.1. Bahan dan Alat Pembuatan Ovitrap ................................................ 43 3.7.2. Bahan dan Alat Penelitian di Laboratorium .................................... 43
ix
3.8. PROSEDUR PENELITIAN ................................................................... 51 3.8.1. Persiapan Larva Nyamuk Aedes aegypti Instar IV ......................... 51
3.8.2. Pelaksanaan Penelitian .................................................................... 52 3.9. TEKNIK ANALISIS DATA .................................................................. 56
BAB IV HASIL PENELITIAN ............................................................................ 58 4.1. GAMBARAN UMUM .............................................................................. 58 4.2. HASIL PENELITIAN ................................................................................ 61
BAB V PEMBAHASAN ...................................................................................... 67 5.1. PEMBAHASAN ........................................................................................ 67 5.2. HAMBATAN DAN KELEMAHAN PENELITIAN ................................ 74
BAB VI SIMPULAN DAN SARAN .................................................................... 76 6.1. SIMPULAN ............................................................................................... 76 6.2. SARAN ...................................................................................................... 76
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 77
LAMPIRAN .......................................................................................................... 81
x
DAFTAR TABEL
Tabel 1.1. Keaslian Penelitian ............................................................................... 6
Tabel 2.1. Daftar Kodon ...................................................................................... 27 Tabel 2.2. Kode Genetik Aedes aegypti .............................................................. 28
Tabel 3.1. Definisi Operasional, Cara Pengukuran, dan Skala ........................... 39 Tabel 3.2. Jumlah Rumah diperiksa untuk Mendeteksi Larva ............................ 40
Tabel 3.3. Urutan Basa Forward Primer dan Reverse Primer ............................. 54
Tabel 4.1. Rincian Jumlah RT dan RW di Wilayah Kerja Puskesmas
Ambarawa .......................................................................................... 59
Tabel 4.2. Hasil Pemeriksaan Sampel Larva Aedes aegypti dari Kelurahan
Tambakboyo ....................................................................................... 64 Tabel 4.3. Hasil Pemeriksaan Sampel Larva Aedes aegypti dari Kelurahan
Kupang ............................................................................................... 65
Tabel 4.4. Hasil Pemeriksaan Sampel Larva Aedes aegypti dari Kelurahan
Panjang ............................................................................................... 65
Tabel 4.5. Hasil Pemeriksaan Sampel Larva Aedes aegypti menurut
Kelurahan ........................................................................................... 66
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1. Telur Nyamuk Ae. aegypti ............................................................... 13 Gambar 2.2. Larva Ae. aegypti Instar I ................................................................. 15 Gambar 2.3. Larva Ae. aegypti Instar II ............................................................... 15 Gambar 2.4. Larva Ae. aegypti Instar III .............................................................. 16 Gambar 2.5. Larva Ae. aegypti Instar IV .............................................................. 16
Gambar 2.6. Pupa Ae. aegypti .............................................................................. 17 Gambar 2.7. Nyamuk Ae. aegypti Dewasa ........................................................... 17 Gambar 2.8. Siklus PCR ....................................................................................... 36
Gambar 2.9. Kerangka Teori ................................................................................ 37
Gambar 3.1. Alur Pikir ......................................................................................... 38 Gambar 3.2. Proses Penelitian .............................................................................. 56
Gambar 4.1. Hasil PCR pada Gel Doc Sampel Kode 448, 449, 450, 458, 459,
460, dan 461 ..................................................................................... 61 Gambar 4.2. Hasil PCR pada Gel Doc Sampel Kode 462, 463, 464, 465, 466,
468, 469, dan 470. ............................................................................ 62 Gambar 4.3. Hasil PCR pada Gel Doc Sampel Kode 451, 452, 453, 454, dan
455. .................................................................................................. 62 Gambar 4.4. Hasil PCR pada Gel Doc Sampel Kode 473, 471, 472, dan 456. .... 63 Gambar 4.5. Hasil PCR pada Gel Doc Sampel Kode 477 dan 453. ..................... 63
Gambar 4.6. Hasil PCR pada Gel Doc Sampel Kode 467, 457, 474, 475, dan
476. .................................................................................................. 64
xii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Tugas Pembimbing.................................................................. 81 Lampiran 2. Surat Izin Penelitian dari Fakultas Ilmu Keolahragaan, UNNES ..... 82 Lampiran 3. Surat izin penelitian dari Kesbangpol dan Dinas Kesehatan ............ 84 Lampiran 4. Salinan Ethical Clearance ................................................................ 86 Lampiran 5. Surat Keterangan Selesai Penelitian ................................................. 87
Lampiran 6. Instrumen Penelitian ......................................................................... 89 Lampiran 7. Data Mentah Hasil Penelitian ........................................................... 90 Lampiran 8. Dokumentasi ..................................................................................... 93
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1. LATAR BELAKANG
Penyakit Demam Berdarah Dengue (DBD) adalah penyakit yang
disebabkan oleh virus Dengue yang tergolong Arthropod-Borne Virus, genus
Flavivirus, dan famili Flaviviridae. DBD ditularkan melalui gigitan nyamuk dari
genus Aedes, terutama Aedes aegypti atau Aedes albopictus. Penyakit DBD dapat
muncul sepanjang tahun dan dapat menyerang seluruh kelompok umur. Penyakit
ini berkaitan denga kondisi lingkungan dan perilaku masyarakat (Kemenkes RI,
2017).
Penyakit DBD merupakan masalah kesehatan utama bagi setengah dari
populasi dunia. Data WHO tahun 2014 mencatat 198 juta kasus DBD terjadi
secara global dan penyebab 584.000 kematian pada tahun 2013. Tahun 2015
WHO memperkirakan ada 214 juta kasus baru DBD dengan kematian sekitar
438.000 orang di seluruh dunia (WHO, 2014). DBD menyebar di seluruh wilayah
Indonesia, di beberapa daerah mempunyai tingkat endemisitas yang cukup tinggi.
Tahun 2017 kasus DBD berjumlah 68.407 kasus, dengan jumlah kematian
sebanyak 493 orang. Angka Bebas Jentik (ABJ) secara nasional belum mencapai
target program yang sebesar ≥ 95% (Kemenkes RI, 2017). Penyakit DBD masih
merupakan permasalahan serius di Provinsi Jawa Tengah, dari 35 kabupaten/kota
seluruhnya sudah terjangkit penyakit DBD (Dinas Kesehatan Provinsi Jawa
Tengah, 2017). Incidence Rate (IR) DBD Kabupaten Semarang tahun 2018
2
sebesar 16,63 per 100.000 penduduk, sedangkan Case Fatality Rate (CFR)
sebesar 1,16%. Meskipun IR mengalami penurunan, Kabupaten Semarang
merupakan salah satu kabupaten/kota di Jawa Tengah dengan kasus DBD tinggi
(Dinas Kesehatan Provinsi Jawa Tengah, 2018).
Kasus DBD menurut puskesmas di Kabupaten Semarang tahun 2015-2017
menunjukkan 3 puskesmas dengan jumlah kasus tertinggi berturut-turut yaitu
Puskesmas Ambarawa, Puskesmas Bergas, dan Puskesmas Pringapus. Puskesmas
Ambarawa jumlah kasus 247 kasus dan 2 kasus kematian, dengan jumlah
penduduk 62.310. Puskesmas Pringapus jumlah kasus 235 kasus dan 1 kasus
kematian, dengan jumlah penduduk 57.344. Puskesmas Bergas jumlah kasus 216
kasus dan 3 kasus kematian, dengan jumlah penduduk 85.022 (Dinas Kesehatan
Kabupaten Semarang, 2017). IR DBD per 100.000 penduduk di Kecamatan
Ambarawa pada tahun 2018 yaitu 30,5 per 100.000 penduduk dan CFR tahun
2018 sebesar 5,3%. Data suspek DBD Puskesmas Ambarawa tahun 2015-2019
menurut desa/kelurahan menunjukkan 3 desa/kelurahan dengan jumlah kasus
tertinggi adalah Kelurahan Kupang sebanyak 66 kasus dengan jumlah penduduk
14.850; Kelurahan Panjang 45 kasus dengan jumlah penduduk 8.557; dan
Kelurahan Tambakboyo 28 kasus dan 1 kasus kematian dengan jumlah penduduk
5.699 (Puskesmas Ambarawa, 2019).
Data Puskesmas Ambarawa tahun 2019 menunjukkan bahwa di wilayah
kerja Puskesmas Ambarawa sepanjang tahun 2016-2019 telah dilakukan fogging
sebanyak 47 kali yang dilakukan di 8 kelurahan dari 10 kelurahan. Fogging
dilaksanakan oleh Dinas Kesehatan Kabupaten Semarang diantaranya 9 kali di
3
Kelurahan Kupang, 8 kali di Kelurahan Panjang, dan 5 kali di Kelurahan
Tambakboyo menggunakan insektisida merk dagang zeta 15 UL yang
mengandung bahan aktif utama zeta-sipermetrin 15 g/l (Puskesmas Ambarawa,
2019). Kecamatan Ambarawa adalah salah satu kecamatan endemis sejak tahun
2017 selalu menyumbang kasus DBD tertinggi (Dinas Kesehatan Kabupaten
Semarang, 2017).
Sipermetrin adalah insektisida golongan piretroid yang sering digunakan
sebagai salah satu bahan aktif dalam aplikasi fogging di Indonesia (Arasy &
Nurwidayati, 2017). Fogging yang dilakukan di Jawa Tengah menggunakan
insektisida malathion dan cynof (Dinas Kesehatan Provinsi Jawa Tengah, 2011).
Insektisida piretroid yang paling lama (lebih dari 10 tahun) dan sering digunakan
di Jawa Tengah adalah jenis sipermetrin (Sayono et al., 2012). Berdasarkan data
Dinas Kesehatan Kabupaten Semarang, wilayah kerja Dinas Kesehatan Kabupaten
Semarang telah menggunakan insektisida sipermetrin sejak tahun 2013 sampai
sekarang (Dinas Kesehatan Kabupaten Semarang, 2017). Sipermetrin telah
digunakan sebagai bahan aktif pengendalian vektor di Indonesia sehingga
menyebabkan adanya resistensi terhadap sipermetrin (Susanti & Boesri, 2012).
Penelitian di Yogyakarta melaporkan bahwa Ae. aegypti telah resisten terhadap
sipermetrin 0,05% dengan angka kematian rata-rata 4,03% (Mulyani et al., 2017).
Sipermetrin dapat berikatan dengan protein pada saraf yang dikenal
sebagai voltage-gate sodium channel. Ikatan tersebut akan mencegah penutupan
voltage-gate sodium channel secara normal sehingga menyebabkan ion natrium
tetap mengalir pada membran saraf dan akan timbul impuls ganda. Timbulnya
4
impuls ganda akan menginduksi pengeluaran neurotransmiter asetilkolin dan
menstimulasi saraf lainnya sehingga menimbulkan kelumpuhan hingga kematian
serangga dalam waktu singkat (Cox, 2009).
Deteksi resistensi vektor terhadap insektisida dapat dilakukan dengan
berbagai cara yaitu deteksi secara konvensional dengan metode standar WHO
susceptibility test menggunakan impregnated paper, deteksi secara biokimia atau
enzimatis menggunakan mikroplate, dan deteksi secara molekuler. Prinsip dasar
deteksi resistensi pada vektor secara molekuler adalah mengidentifikasi gen yang
menjadi target kelompok insektisida secara konvensional, salah satunya adalah
gen voltage gated sodium channel (VGSC). Pada serangga yang telah resisten
terhadap insektisida kelompok pyrethroid dan DDT mekanisme resistensi penting
adalah terjadinya perubahan atau mutasi pada gen VGSC (Widiarti et al., 2012).
Secara molekuler pada gen VGSC terjadi perubahan satu basa nukleotida pada
asam amino valin menjadi glisin, dimana terjadi transisi basa timin dengan guanin
pada susunan GTA menjadi GGA yang berkaitan dengan resistensi. Uji molekuler
digunakan untuk mendeteksi resistensi piretroid pada Ae. aegypti dengan cara
menemukan mutasi titik gen VGSC sebagai resistensi target (Ghiffari et al.,
2013). Mutasi gen VGSC di beberapa posisi dapat terjadi secara bersamaan dalam
satu nyamuk individu dan efek yang mungkin akan lebih besar pada sifat
resistensi nyamuk (Widiastuti et al., 2015).
Metode Polymerase Chain Reaction (PCR) adalah salah satu metode yang
digunakan dalam melipatgandakan DNA. PCR penting digunakan sebagai alat
diagnostik untuk mendeteksi dan menentukan serotipe virus. Penelitian ini
5
menggunakan metode PCR dengan mendeteksi mutasi DNA gen VGSC. Mutasi
gen VGSC menandai adanya resistensi. Dengan demikian, peneliti ingin meneliti
tentang “Deteksi Resistensi Aedes aegypti terhadap Sipermetrin Menggunakan
Teknik Polymerase Chain Reaction (PCR) di Ambarawa Kabupaten Semarang
Tahun 2019”.
1.2. RUMUSAN MASALAH
Bagaimana status resistensi Aedes aegypti terhadap sipermetrin
menggunakan teknik Polymerase Chain Reaction (PCR) di Ambarawa Kabupaten
Semarang tahun 2019?
1.3. TUJUAN PENELITIAN
Untuk mengetahui status resistensi Aedes aegypti terhadap sipermetrin
menggunakan teknik Polymerase Chain Reaction (PCR) di Ambarawa Kabupaten
Semarang tahun 2019.
1.4. MANFAAT PENELITIAN
1.4.1. Manfaat Bagi Masyarakat
Hasil penelitian ini diharapkan mampu memberikan wawasan dan
pencerahan kepada masyarakat secara khusus terkait status resistensi vektor utama
DBD yaitu Ae. aegypti terhadap insektisida.
6
1.4.2. Manfaat Bagi Instansi Pemerintah
Bagi Dinas Kesehatan Kabupaten Semarang, hasil penelitian ini
diharapkan dapat menjadi rekomendasi penggunaan insektisida tertentu dalam
pengendalian penyakit tular vektor, terutama DBD.
1.4.3. Manfaat Bagi Peneliti
Bagi peneliti sendiri hasil penelitian ini diharapkan dapat menambah
pengetahuan dan wawasan, meningkatan kebermanfaatan, serta dapat menerapkan
pembelajaran secara langsung sebagai wujud pengabdian kepada masyarakat.
1.5. KEASLIAN PENELITIAN
Tabel 1.1. Keaslian Penelitian
No Peneliti Judul Rancangan
Penelitian Variabel Hasil Penelitian
1 Widiarti,
Damar Tri
Boewono,
Triwibowo
Ambar
Garjito,
Rima
Tunjungsari,
Puji BS
Asih, Din
Syafruddin
(Widiarti,
Boewono,
Syafruddin,
Garjito,
Tunjungsari,
& Asih,
2012)
Identifikasi
mutasi noktah
pada gen
voltage gated
sodium
channel Aedes
aegypti
resisten
terhadap
insektisida
pyrethroid di
Semarang
Jawa Tengah.
Eksperimen
murni.
Insektisida
piretroid,
mutasi
noktah pada
gen voltage
gated
sodium
channel Ae.
aegypti.
Mutasi pada
kodon 1014 dari
leusin(TTA)
menjadi
fenilalanin
(TTT) tipe kdr-
w, gen VGSC
pada nyamuk Ae.
aegypti yang
berkaitan dengan
resistensi
terhadap
insektisida
kelompok
pyrethroid.
2 Ahmad
Ghiffari,
Humairo
Fatimi,
Chairil
Anwar
Deteksi
resistensi
insektisida
sintetik
piretroid pada
Aedes aegypti
Eksperimen
murni.
Deteksi
resistensi
insektisida
sintetik
piretroid,
teknik
Mutasi gen
VGSC pada titik
Val1016Ile;
sebagai
pembuktian
mekanisme
7
(Ghiffari,
Fatimi, &
Anwar,
2013).
(l.) strain
Palembang
menggunakan
teknik
polymerase
chain
reaction.
polymerase
chain
reaction.
resistensi yang
bersifat target
site insektisida
sintetik piretroid
pada vektor
dengue, Ae.
Aegypti di
Palembang.
3 Dyah
Widiastuti,
Sunaryo,
Nova
Pramestuti,
Tika Fiona
Sari, Nastiti
Wijayanti
(Widiastuti,
Sunaryo,
Pramestuti,
Sari, &
Wijayanti,
2015).
Deteksi mutasi
V1016G pada
Gen Voltage-
Gated Sodium
Channel
pada populasi
Aedes aegypti
(Diptera:
Culicidae) di
Kabupaten
Klaten, Jawa
Tengah
dengan
metode Allele-
Specific PCR.
Eksperimen
murni.
Mutasi gen
VGSC,
metode
Allele-
specific
PCR.
22,7% nyamuk
belum
mengalami
mutasi (V/V),
59,1% nyamuk
mengalami
mutasi
heterozigot
(V/G), dan
18,2% nyamuk
mengalami
mutasi
homozigot
(G/G).
4 Aditya
Yudhana,
Ratih Novita
Praja, Maya
Nurwartanti
Yunita
(Yudhana,
Praja, &
Yunita,
2017).
Deteksi gen
resisten
insektisida
organofosfat
pada Aedes
aegypti di
Banyuwangi,
Jawa Timur
menggunakan
polymerase
chain
reaction.
Eksperimen
murni.
Deteksi gen
resisten
insektisida
organofosfat,
polymerase
chain
reaction.
Hasil deteksi gen
melalui PCR
didapatkan band
yang muncul
dengan panjang
250 bp. Hal
tersebut
menunjukkan
bahwa gen
VGSC telah
terdeteksi pada
sampel yang
diuji.
Beberapa hal yang membedakan penelitian ini dengan penelitian-
penelitian sebelumnya adalah tempat penelitian. Penelitian dengan judul sejenis
belum pernah di lakukan di Kabupaten Semarang.
8
1.6. RUANG LINGKUP PENELITIAN
1.6.1. Ruang Lingkup Tempat
Penelitian ini dilakukan di wilayah kerja Puskesmas Ambarawa. Pengujian
dilakukan di Laboratorium Balai Litbang Kesehatan Kelas I Banjarnegara.
1.6.2. Ruang Lingkup Waktu
Penelitian ini dilakukan dari bulan Agustus sampai bulan September 2019.
1.6.3. Ruang Lingkup Keilmuan
Penelitian ini merupakan penelitian berbasis ilmu kesehatan masyarakat
bidang entomologi yaitu mengenai pengendalian vektor DBD Ae. aegypti.
9
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. LANDASAN TEORI
2.1.1. Resistensi
2.1.1.1. Pengertian Resistensi
Resistensi vektor merupakan suatu kemampuan populasi serangga untuk
bertahan terhadap suatu dosis insektisida yang dalam keadaan normal dapat
membunuh serangga tersebut. Resistensi dapat berlangsung secara cepat ataupun
lambat. Faktor pendukung terjadinya resistensi yaitu penggunaan insektisida yang
sama secara terus menerus, penggunaan bahan aktif atau formulasi yang
mempunyai aktifasi sama, efek residual lama, dan faktor biologis vektor
(Kemenkes RI, 2012).
2.1.1.2. Mekanisme Resistensi
Mekanisme resistensi suatu serangga terhadap insektisida dapat dibagi
menjadi 3 yaitu:
1. Peningkatan detoksifikasi dalam tubuh insektisida oleh karena bekerjanya
enzim-enzim tertentu, seperti enzim mixed function oxidase, hidrolase,
esterase, dan glutathion-S-transferase.
2. Penurunan kepekaan tempat sasaran insektisida pada tubuh serangga yang
berupa insensitivitas saraf dan insensitivitas enzim asetilkolinesterase (AchE).
3. Penurunan laju penetrasi insektisida melalui kulit atau integumen (Untung,
2004).
10
Proses terjadinya penurunan resistensi pada beberapa serangga termasuk
nyamuk dapat dipengaruhi oleh 3 faktor, yaitu:
1. Faktor genetik, diketahui adanya sejumlah gen yang berperan dalam
pengendali resisten (R-gen), baik dominan atau resesif, homozigot maupun
heterozigot yang terdapat pada nyamuk maupun serangga lainnya. Faktor
genetik seperti gen-gen yang menjadi pembentukan enzim esterase, yang
dapat menyebabkan resistensi serangga terhadap insektisida organofosfat dan
piretroid. Faktor genetik lain seperti adanya gen knockdown resistence (kdr)
sehingga serangga resisten terhadap DDT dan dieldrin.
2. Faktor biologis, meliputi biotik (adanya pergantian generasi, perkawinan
monogami atau poligami, dan waktu berakhirnya perkembangan setiap
generasi pada serangga di alam), perilaku serangga misalnya migrasi, isolasi,
monofagi atau polifagi, serta kemampuan serangga di luar kebiasaannya
dalam melakukan perlindungan terhadap bahaya atau perubahan tingkah laku.
3. Faktor operasional, meliputi bahan kimia yang digunakan dalam
pengendalian vektor (golongan insektisida, kesamaan target dan sifat
insektisida yang pernah digunakan, persistensi residu dan formulasi
insektisida yang digunakan), serta aplikasi insektisida tersebut di lapangan
(cara aplikasi, frekuensi, dan lama penggunaan).
Faktor operasional merupakan tekanan seleksi terhadap populasi serangga.
Faktor operasional pertama adalah jenis insektisida yang digunakan. Jenis
insektisida yang satu ternyata menyebabkan proses terjadinya resistensi lebih
cepat dibandingkan dengan insektisida lainnya. Ada insektisida yang telah
11
digunakan selama berpuluh tahun tidak menimbulkan resistensi, tetapi ada
insektisida yang baru dipakai beberapa tahun sudah menimbulkan resistensi.
Penggunaan insektisida lain sebelumnya juga memiliki pengaruh (cross
resistance). Misalnya telah diketahui adanya cross resistance antara DDT dan
insektisida piretroid, serta cross resistance antara insektisida organofosfat dan
karbamat. Populasi serangga yang sudah resisten terhadap insektisida DDT
cenderung resisten terhadap piretroid. Demikian halnya populasi serangga yang
sudah kebal terhadap insektisida golongan organofosfat cenderung resisten
terhadap insektisida karbamat. Penggunaan insektisida secara terus menerus
cenderung mempercepat proses terjadinya resistensi serangga. Sementara
penggunaan insektisida secara bergantian dengan insektisida dari kelompok kimia
yang berbeda dan cara kerja yang berbeda akan menghambat terjadinya resistensi
serangga (Sucipto, 2011).
Mekanisme resistensi terhadap insektisida piretroid dapat dideteksi secara
molekuler. Target site mutasi pada gen VGSC mengenai ketahanan terhadap
piretroid menunjukkan bahwa ada mekanisme resistensi yang sedang
berlangsung. Deteksi mutasi gen VGSC bisa langsung menilai transformasi sel
target yang menjadi sasaran insektisida. Mutasi gen menyebabkan perubahan
konformasi dalam saluran natrium karena tidak dapat dibuka oleh molekul
insektisida. Mutasi seperti ini hanya dapat dideteksi dengan metode molekuler.
Prinsip dasar dari deteksi molekuler resistensi vektor adalah mengidentifikasi
gen. Mutasi adalah penanda untuk memantau resistensi (Purwaningsih et al.,
2019).
12
Target site resistance, yaitu tempat ikatan target site berubah pada
serangga, sehingga insektisida tidak dapat mengikat target/sasaran secara
efektif. Target site organofosfat dan karbamat adalah acetylcholinesterase
(AchE) pada sel syaraf synapsis yang akan memecah neurotransmitter. Target
site untuk insektisida DDT (dichloro-diphenyl-trichloroethane) dan piretroid
adalah sel saraf membran Voltage Gated Sodium Channel (VGSC). Terjadi
mutase gen yang menyebabkan penghalangan antara ikatan insektisida dengan
VGSC. Dalam hal ini terjadi penurunan afinitas VGSC dalam mengikat
metabolik insektisida sintetik piretorid. Struktur VGSC adalah protein
transmembran yang terdapat pada sel syaraf dan sel otot dan berperan pada
potensial aksi sel. Sub unit penyusun VGSC adalah rantai polipeptida yang
terdiri dari lebih 1.800 asam amino. Prinsip kerja VGSC, bila digunakan
insektisida piretroid maka yang seharusnya channel tertutup maka akan tetap
terbuka, sehingga sodium tetap banyak berada di dalam sel dan menyebabkan
discharge aksi potensial yang terjadi terus menerus di dalam syaraf serangga
menyebabkan hiperexitability dan kejang pada serangga (Safar, 2010).
Uji kerentanan adalah suatu tes untuk mengetahui tingkat kerentanan atau
kekebalan serangga terhadap suatu racun/insektisida. Kekebalan serangga
terhadap insektisida adalah kemampuan populasi serangga untuk bertahan
terhadap pengaruh insektisida yang biasanya mematikan. Beberapa cara untuk
menguji kerentanan sesuai panduan WHO yaitu dengan uji impregnated paper, uji
MPA (microplate assays), dan menggunakan marker DNA (Kemenkes RI, 2012).
13
2.1.2. Tinjauan Tentang Vektor DBD di Kabupaten Semarang
Menurut Dinas Kesehatan Kabupaten Semarang vektor utama DBD di
Kabupaten Semarang adalah Ae. aegypti.
2.1.2.1. Klasifikasi Nyamuk Aedes aegypti
Klasifikasi Aedes aegypti adalah sebagai berikut :
Kingdom : Animalia
Filum : Arthropoda
Kelas : Insecta
Ordo : Diptera
Famili : Culicidae
Genus : Aedes
Spesies : Aedes aegypti (Borror, 1992)
2.1.2.2. Siklus Hidup Aedes aegypti
1. Telur
Gambar 2.1. Telur Nyamuk Ae. aegypti
(Zottel & Kaufman, 2016).
14
Telur nyamuk Aedes aegypti berwarna hitam dengan ukuran sangat kecil
kira-kira 0,80 mm (Kemenkes RI, 2011). Nyamuk Ae. aegypti betina meletakkan
sekitar 50 hingga 120 telur pada wadah yang berukuran kecil seperti vas bunga,
stoples penyimpanan air, dan penampungan air lain yang berada dalam ruangan,
serta di air hujan yang berada di dalam wadah berukuran kecil seperti cangkir,
ban, dll. di luar ruangan. Telur diendapkan di permukaan lembab tepat di atas
permukaan air. Kebanyakan nyamuk Ae. aegypti betina bertelur dalam beberapa
masa oviposisi selama satu siklus gonotropik. Perkembangan embrio biasanya
selesai dalam 48 jam di lingkungan yang hangat dan lembab. Setelah
perkembangan embrio selesai, telur dapat bertahan lama dengan kekeringan
(selama lebih dari satu tahun). Telur menetas begitu kontainer dibanjiri oleh air,
tetapi tidak semua telur menetas pada saat yang bersamaan (WHO, 2011).
2. Larva
Larva Ae. aegypti terdiri dari kepala, toraks, dan abdomen yang pada ujung
abdomen terdapat siphon sehingga ekor tampak bercabang. Larva kecil yang
menetas dari telur akan tumbuh menjadi besar yang panjangnya 0,5-1 cm, larva
selalu bergerak aktif di dalam air. Gerakannya berulang-ulang dari bawah ke atas
permukaan air untuk bernafas (mengambil udara) kemudian turun kembali ke
bawah dan seterusnya. Pada waktu istirahat, posisi larva hampir tegak lurus dengan
permukaan air, biasanya berada di sekitar dinding tempat penampungan air.
Setelah 6-8 hari larva tersebut akan berubah menjadi kepompong atau pupa
(Kemenkes RI, 2011). Larva melewati empat tahap perkembangan. Durasi
perkembangan larva tergantung pada suhu, ketersediaan makanan, dan kepadatan
larva di wadah (WHO, 2011).
15
1) Larva instar I berukuran paling kecil yaitu 1-2 mm atau satu sampai dua
hari setelah telur menetas, duri-duri (spinae) pada dada belum jelas dan
corong pernapasan pada siphon belum menghitam.
Gambar 2.2. Larva Ae. aegypti Instar I
(Zottel & Kaufman, 2016).
2) Larva instar II berukuran 2,5-3,5 mm berumur dua sampai tiga hari setelah
telur menetas, duri-duri dada belum jelas, corong pernapasan sudah
mulai menghitam.
Gambar 2.3. Larva Ae. aegypti Instar II
(Zottel & Kaufman, 2016).
3) Larva instar III berukuran 4-5 mm berumur tiga sampai empat hari
setelah telur menetas, duri-duri dada mulai jelas dan corong
pernapasan berwarna coklat kehitaman.
16
Gambar 2.4. Larva Ae. aegypti Instar III
(Zottel & Kaufman, 2016).
4) Larva instar IV berukuran paling besar yaitu 5-6 mm berumur empat
sampai enam hari setelah telur menetas dengan warna kepala gelap.
Gambar 2.5. Larva Ae. aegypti Instar IV
(Zottel & Kaufman, 2016).
17
3. Pupa
Gambar 2.6. Pupa Ae. aegypti
(Zottel & Kaufman, 2016).
Dalam kondisi optimal, waktu yang diambil dari menetas sampai
munculnya nyamuk dewasa dapat menjadi perkiraan 10 hari dan singkat-
singkatnya 7 hari, dua hari di tahap kepompong atau pupa (WHO, 2011). Pupa
atau kepompong berbentuk seperti koma, gerakannya lamban, sering berada di
permukaan air, setelah 1-2 hari berkembang menjadi nyamuk (Kemenkes RI,
2011).
4. Dewasa
Gambar 2.7. Nyamuk Ae. aegypti Dewasa
(Zottel & Kaufman, 2016).
18
Nyamuk Ae. aegypti berwarna hitam dengan belang-belang atau loreng
putih pada seluruh tubuhnya. Mampu terbang sampai kurang lebih 100 meter.
Hanya nyamuk betina yang aktif menghisap darah manusia. Waktu menghisap
darah pada pagi hari dan sore hari setiap 2 hari. Protein darah yang dihisap
tersebut diperlukan untuk pematangan telur yang dikandungnya, setelah
menghisap darah nyamuk akan mencari tempat untuk hinggap (istirahat). Nyamuk
jantan hanya menghisap sari bunga/tumbuhan yang mengandung gula. Umur
nyamuk Ae. aegypti rata-rata 2 minggu, tetapi ada yang dapat bertahan hingga 2-3
bulan (Kemenkes RI, 2011).
2.1.2.3. Bionomik Nyamuk Aedes aegypti
1. Tempat Perindukan
Ae. aegypti menyukai tempat gelap yang tersembunyi di dalam rumah
untuk berkembang biak. Nyamuk Ae. aegypti berkembang biak di tempat
penampungan air untuk keperluan sehari-hari atau barang-barang lain yang
memungkinkan air tergenang dan tidak beralaskan tanah, misalnya bak
mandi/WC, tempayan, drum, tempat minum burung, vas bunga, kaleng bekas, ban
bekas, botol, tempurung kelapa, sampah plastik, dan lain-lain yang dibuang
sembarang tempat (Kemenkes RI, 2011).
2. Perilaku Beristirahat
Lebih dari 90% dari populasi Ae. aegypti terletak pada permukaan yang
gelap, lembab, tempat-tempat terpencil di dalam rumah atau bangunan, termasuk
kamar tidur, lemari, kamar mandi, dan dapur. Istirahat dalam ruangan yang
disukai adalah permukaan bagian bawah furnitur, menggantung benda-benda
19
seperti pakaian dan gorden, dan dinding. Oleh karena itu, alat semprot dalam
ruangan bukan pilihan untuk pengendaliannya seperti vektor DHF (WHO, 2011).
3. Aktivitas Menghisap Darah
Ae. aegypti sangat antropofilik, meskipun mungkin menggigit hewan
berdarah panas lainnya yang tersedia. Nyamuk Ae. aegypti betina memiliki dua
periode aktivitas menggigit yaitu padaa pagi hari untuk beberapa kali waktu
setelah fajar dan di sore hari selama beberapa jam sebelum gelap. Ae. aegypti
dapat menggigit lebih dari satu orang. Perilaku ini sangat luar biasa
meningkatkan efisiensi transmisi epidemi. Dengan demikian, tidak jarang melihat
beberapa anggota rumah tangga yang sama dengan timbulnya penyakit yang
terjadi dalam 24 jam, menunjukkan bahwa mereka terinfeksi oleh nyamuk infektif
yang sama (WHO, 2011).
4. Aktivitas Terbang
Ketinggian merupakan faktor penting dalam membatasi distribusi Ae.
aegypti. Ae. aegypti di India berkisar sekitar 1.200 meter di atas permukaan laut.
Di negara-negara Asia Tenggara, ketinggian terbang Ae. aegypti mencapai 1.000
hingga 1.500 meter. Di Kolumbia Ae. aegypti ditemukan di ketinggian hingga
2.200 meter. Penyebaran nyamuk dewasa Ae. aegypti betina dipengaruhi oleh
sejumlah faktor termasuk ketersediaan tempat perindukan dan ketersediaan darah
sebagai pematangan telurnya, tetapi tampaknya sering terbatas dalam jarak 30-50
meter dari kemunculannya. Namun, penelitian terbaru di Puerto Rico (AS)
menunjukkan bahwa mereka mungkin menyebar lebih dari 400 meter terutama
20
mencari tempat perindukan. Transportasi pasif dapat terjadi melalui telur kering
dan larva dalam wadah (WHO, 2011).
5. Masa Hidup
Ae. aegypti dewasa memiliki masa hidup sekitar 3-4 minggu. Selama
musim hujan bertahan hidup lebih lama, risiko penularan virus lebih besar.
Penelitian lebih lanjut diperlukan pada kelangsungan hidup alami Ae. aegypti di
berbagai kondisi lingkungan (WHO, 2011).
2.1.3. Insektisida
Insektisida adalah bahan yang mengandung senyawa kimia yang
digunakan untuk membunuh serangga. Aplikasi insektisida dibagi menjadi dua
yaitu bersifat kontak/non-residual dan insektisida residual. Insektisida non-
residual yaitu insektisida yang langsung berkontak dengan tubuh serangga saat
diaplikasikan berupa penyemprotan udara (sprace spray), sedangkan insektisida
residual yaitu insektisida yang diaplikasikan pada permukaan suatu tempat dengan
tujuan apabila serangga melewati/hinggap pada permukaan tersebut akan terpapar
dan mati (Kemenkes RI, 2012).
Cara kerja insektisida dalam tubuh serangga dikenal dengan istilah mode
of action dan mode of entry. Mode of action adalah cara insektisida memberikan
pengaruh melalui titik tangkap (target site) di dalam tubuh serangga. Titik
tangkap tersebut biasanya berupa enzim atau protein. Cara kerja insektisida yang
digunakan dalam pengendalian vektor terbagi menjadi 5 kelompok yaitu
mempengaruhi sistem saraf, menghambat produksi energi, mempengaruhi sistem
21
endokrin, menghambat produksi kutikula, dan menghambat keseimbangan air.
Mode of entry adalah cara insektisida masuk ke dalam tubuh serangga dapat
melalui kutikula (racun kontak), alat pencernaan (racun perut), dan pernapasan
(racun pernapasan). Suatu insektisida dapat mempunyai satu atau lebih cara
masuk ke dalam tubuh serangga (Kemenkes RI, 2012).
Sifat yang terkandung dalam insektisida yang baik dan ideal adalah
sebagai berikut:
1. Mempunyai daya bunuh yang besar dan cepat serta tidak berbahaya bagi
manusia, mikroorganisme bukan sasaran, serta hewan vertebrata;
2. Harganya murah dan mudah didapat;
3. Mempunyai susunan kimia stabil dan tidak mudah terbakar;
4. Mudah digunakan dan dapat dicampur dengan bahan pelarut;
5. Tidak berwarna dan tidak berbau yang tidak menyenangkan (Safar, 2010).
Ada beberapa golongan insektisida yang berasal dari bahan sintetik, yaitu:
1) Organofosfat
Insektisida paling toksik terhadap nyamuk, namun tidak membahayakan
manusia. Mengandung fosfat dalam susunan kimianya. Contoh insektisida
golongan ini adalah malathion (Sembiring, 2009).
2) Organoklorin
Organoklorin (chlorinated hydrocarbon) terdiri dari beberapa kelompok
yang diklasifikasi menurut bentuk kimianya. Yang paling popular dan pertama
kali digunakan disintesis adalah “Dichloro-diphenyl-trichloroethan” atau disebut
22
DDT. Mekanisme toksisitas terfokus pada neurotoksin dan otak. DDT tidak
mudah larut dalam air dan larut dalam pelarut organik (Safar, 2010).
3) Karbamat
Insektisida dari golongan karbamat adalah racun saraf yang bekerja dengan
menghambat kolinesterase. Pada karbamat hambatan bersifat reversible.
Insektisida dari golongan ini relatif mudah terurai di lingkungan dan tidak
terakumulasi oleh jaringan lemak (Djojosumarto, 2008).
4) Piretroid (Sintetik Piretroid)
Insektisida kelompok piretroid merupakan insektisida sintetik yang
merupakan tiruan atau analog dari piretrum. Kebanyakan piretroid merupakan
racun yang mempengaruhi saraf serangga dengan cara kerja yang cepat dan
menimbulkan paralisis bersifat sementara. Contoh golongan sintetik piretroid
adalah sipermetrin. Insektisida piretroid digunakan karena terajadnya resistensi
pada insektisida organochlorin, organophosphat, dan karbamat. Saat ini piretroid
digunakan sebagai senjata ampuh dalam pengendalian serangga dalam
kepentingan umum maupun kesehatan (Sembiring, 2009).
Insektisida piretroid dapat pula disebut sebagai sintetik piretroid,
merupakan insektisida yang secara kimia memiliki kemiripan dengan pirethrin
yang ditemukan dalam pyretrum alami pada ekstrak bunga chrisanthemum, dan
diketahui memiliki aktivitas toksik. Generasi piretroid pertama muncul pada tahun
1949 dan satu satunya insektisida golongan ini adalah allethrin. Generasi kedua
adalah tetametrin, resmetrin, bioresmetrin, bioalletrin, dan ponotrin. Generasi
ketiga piretroid adalah fenvalerat dan permetrin yang menjadi piretroid pertama
23
dalam bidang pertanian karena aktivitasnya pada serangga dan stabilitas pada
cahaya matahari. Piretroid golongan keempat adalah bifentrin, sipermerin,
cyhalotrin, deltametrin, dan esfenfalerat (Firmanta, 2008).
Secara garis besar piretroid dibagi menjadi 2 jenis, yaitu piretroid tipe 1
dan tipe 2. Piretroid tipe 1 umumnya tidak stabil pada lingkungan ketika
digunakan sebagai insektisida dalam bidang pertanian, sedangkan tipe 2 lebih
stabil dalam lingkungan. Efek mematikan sebagai hasil toksisitas piretroid terjadi
pada impuls saraf pada sistem saraf pusat dan sistem safar tepi. Mekanisme kerja
piretroid yaitu memodifikasi saluran garam pada saraf dengan cara memperlambat
gerakan aktivasi maupun inaktivasi dari saluran garam tersebut, sehingga saluran
tersebut akan membuka dalam waktu lama dan pada proses selanjutnya akan
terjadi paralisis bahkan kematian. Efek piretroid pada serangga dapat terjadi
dalam waktu 1-2 menit setelah digunakan dan menghasilkan knockdown effect,
yaitu kehilangan keseimbangan tubuh dan gerakan. Tanda khusus toksisitas
piretroid pada serangga terjadi dengan cepat, termasuk hiperereksia, konvulsi,
ataksia, sampai kehilangan koordinasi gerak (Sembiring, 2009).
Berdasarkan struktur dasarnya (keberadaan gugus cyano pada posisi alfa),
piretroid tipe 1 tidak mempunyai gugus cyano, efek khususnya adalah onset yang
cepat sehinga terjadi tingkah agresif, peningkatan sensifitas pada rangsangan luar,
dilanjutkan dengan terjadi tremor, peningkatan suhu tubuh, koma, dan kematian.
Piretroid tipe 2 terdapat gugus cyano pada struktur kimianya, karakteristik
efeknya antara lain tingkah laku mencakar dan menggali, dilanjutkan dengan
profusi saliva, peningkatan respon kejut, serta gerakan mundur yang abnormal
(Firmanta, 2008).
24
2.1.4. Sipermetrin
Insektisida sipermetrin merupakan insektisida yang termasuk golongan
peritroid. Rumus molekul sipermetrin adalah C22H19Cl12NO3. Sipermetrin
berbentuk bubuk putih, memiliki bau kimia yang ringan, berwarna kuning hingga
coklat untuk cairan atau semisolid, dan memiliki bau yang khas (Perdana, 2016).
Sipermetrin lebih dikenal sebagai Synthetic Pyretroid (SP) yang bekerja
mengganggu sistem saraf, sehingga dapat mengganggu implus ke organ
(Kemenkes RI, 2012).
Sipermetrin dilaporkan efektif digunakan pada hasil penelitian yang
menunjukkan insektisida berbahan aktif cypermethrin 100 g/l pada dosis 100, 150,
dan 200 ml/ha dengan pelarut solar yang diaplikasikan secara pengasapan
(thermal fogging) efektif digunakan untuk membunuh nyamuk vektor DBD Ae.
aegypti, vektor filariasis Cx. quinqefasciatus, dan vektor malaria An. aconitus di
dalam dan di luar rumah dengan tingkat kematian 100% (Susanti & Boesri, 2012).
Insektisida sipermetrin merupakan insektisida piretroid sintetik yang
memiliki efek kuat dalam melawan sejumlah serangga. Insektisida ini selain
merupakan racun perut juga merupakan racun kontak yang berefek pada sistem
saraf hewan vertebrata maupun invertebrata sipermetrin relatif aman untuk
mamalia dan burung, namun sangat toksik untuk ikan dan organisme air. Tempat
aksi sipermetrin adalah pada sel saraf, yaitu dengan menginduksi peningkatan
permeabilitas garam pada membran saraf selama terjadi rangsangan. Aksi tersebut
dapat menyebabkan terjadinya impuls berulang-ulang pada serabut saraf sensori
(efferent). Hal tersebut dapat mengakibatkan terjadinya rangsangan yang lama
25
pada permeabilitas garam membran saraf dan saluran garam akan membuka
selama proses rangsangan (Sembiring, 2009).
Sipermetrin memiliki nama kimia cyano-(3-phenoxyphenyl) methyl-3-
(2,2-dichloroethenyl)-2, 2-dimethylcyclopropane-1-carboxylate, dengan rumus
kimia C22H19Cl2NO3. Sipermetrin memiliki berat molekul sebesar 416,298
g/mol (Perdana, 2016). Senyawa ini larut dalam pelarut organik seperti metanol
dan aseton (Susanti & Boesri, 2012). Sipermetrin banyak digunakan pada sektor
pertanian, peternakan, dan pengendalian hama pemukiman terutama vektor
penyakit. Insektisida ini memiliki efektivitas dan daya bunuh yang baik serta
memiliki harga yang murah, sehingga banyak digunakan di Indonesia maupun di
dunia. Di Indonesia, produk sipermetrin banyak digunakan untuk pengendalian
rayap, nyamuk, lalat, lipas (Arasy & Nurwidayati, 2017). Sipermetrin adalah
senyawa racun kontak dan perut yang biasa digunakan untuk insektisida rumah
tangga. Sipermetrin dapat berikatan dengan protein pada saraf yang dikenal
sebagai voltage gate sodium channel. Ikatan tersebut akan mencegah penutupan
VGSC secara normal, sehingga menyebabkan ion natrium tetap mengalir pada
membran saraf dan akan timbul impuls ganda. Timbulnya impuls ganda akan
menginduksi pengeluaran neurotransmiter asetilkolin dan menstimulasi saraf
lainnya, sehingga menimbulkan kelumpuhan hingga kematian serangga dalam
waktu singkat (Cox, 2009).
Insektisida sipermetrin termasuk dalam golongan insektisida Synthetic
Pyretroid (SP) yang bekerja mengganggu sistem saraf. Golongan SP banyak
digunakan di Indonesia dalam pengendalian vektor untuk serangga dewasa (space
spraying dan IRS), kelambu celup atau Insecticide Treated Net (ITN), Long
26
Lasting Insecticidal Net (LLIN), dan berbagai formulasi insektisida rumah tangga
(Sukmawati et al., 2018). Sipermetrin mempunyai aktivitas insektisida yang dapat
menyebabkan knockdown pada serangga dan bekerja dengan cara membloking
chanel ion natrium yang terdapat pada membran syaraf serangga. Insektisida
sipermetrin sangat efektif sebagai racun kontak dan racun lambung dalam
mengendalikan serangga pada laju aplikasi yang relatif rendah. Insektisida
sipermetrin lebih dikenal dengan sintetik piretroid yang bekerja menganggu
sistem syaraf yang menyebabkan neurotoksik dengan cara menganggu transduksi
sinyal dalam sistem syaraf dengan mempengaruhi transportasi ion yang melintasi
membran sel (Arasy & Nurwidayati, 2017).
2.1.5. Kode Genetik
DNA merupakan material genetik yang tersusun dari gula, fosfat, dan basa
nitrogen yang membawa informasi genetik dari satu sel ke sel yang lain. Urutan
untuk setiap molekul DNA gula dan fosfat mempunyai urutan yang sama, tetapi
berbeda untuk urusan basa-basa nitrogennya. Urutan basa nitrogen yang
menyusun DNA membedakan DNA satu dengan lainnya. Informasi genetik yang
terdapat pada DNA berbentuk kode yang disusun oleh tiga diantara empat basa
nitrogen yang ada yaitu Adenin (A), Sitosin (C), Guanin (G), dan Urasil (U).
Kode genetik melambangkan macam asam amino sebagai bahan utama penyusun
protein. Kode genetik (kodon) tersusun dari tiga basa nitrogen, sehingga empat
macam basa nitrogen akan menghasilkan 64 kode. Asam amino berjumlah 20
yaitu phenylalanin, leusin, isoleusin, metionin, valin, serin, prolin, threonin,
alanin, tyrosin, histidin, glutamine, asparagin, lysine, asam aspartat, asam
27
glutamat, cystein, tryptophan, arginin, dan glysin. Ada beberapa asam amino yang
mempunyai kode lebih dari satu. Meskipun ada 64 kode genetik, hanya 61 kodon
yang mengkode asam amino, dan 3 kodon lainnya berfungsi sebagai kodon
terminasi (stop codon) yaitu UAA, UAG, dan UGA. Ketiga kodon tersebut
disebut kodon nonsense yang berfungsi menghentikan proses sintetis protein.
Selain kodon terminasi, terdapat pula kodon awal (starting codon) yaitu AUG
yang mengawali proses sintetis protein (Widianti & Anggraito, 2017).
Tabel 2.1. Daftar Kodon
Basa I Basa II
Basa III U C A G
U UUU phe
UUC phe
UUA leu
UUG leu
UCU ser
UCC ser
UCA ser
UCG ser
UAU tyr
UAC tyr
UAA stop
UAG stop
UGU cys
UGC cys
UGA stop
UGG trp
U
C
A
G
C CUU leu
CUC leu
CUA leu
CUG leu
CCU pro
CCC pro
CCA pro
CCG pro
CAU his
CAC his
CAA gln
CAG his
CGU arg
CGC arg
CGA arg
CGG arg
U
C
A
G
A AUU ileu
AUC ileu
AUA ileu
AUG met
ACU thr
ACC thr
ACA thr
ACG thr
AAU asn
AAC asn
AAA lys
AAG lys
AGU ser
AGC ser
AGA arg
AGG arg
U
C
A
G
G GUU val
GUC val
GUA val
GUG val
GCU ala
GCC ala
GCA ala
GCG ala
GAU asp
GAC asp
GAA glu
GAG glu
GGU gly
GGC gly
GGA gly
GGG gly
U
C
A
G
(Griffiths et al., 2007; Widianti & Anggraito, 2017).
Keterangan:
phe : phenylalanin his : histidin
leu : leusin gln : glutamine
ileu : isoleusin asn : asparagin
met : metionin lys : lysine
ser : serin glu : asam glutamat
28
pro : prolin cys : cystein
thr : threonin trp : tryptophan
ala : alanin arg : arginin
val : valin asp : asam aspartat
tyr : tyrosin gly : glysin
Panjang pasangan basa (base pairs) standar nyamuk Ae. aegypti normal
adalah 764 bp linear DNA. Jumlah asam amino nyamuk Ae. aegypti sebanyak 658
asam amino yang menunjukkan kode genetik, dengan urutan sebagai berikut:
Tabel 2.2. Kode Genetik Aedes aegypti
Urutan
Asam Amino ke Kode Genetik
1 ACC AAT TAT AAT TGG AGG ATT TGG AAA TTG ATT
AGT TCC TTT AAT ATT AGG AGC CCC TGA
61 TAT AGC TTT TCC TCG AAT AAA TAA TAT AAG TTT
TTG AAT ACT ACC TCC TTC ATT GAC TCT
121 TCT ATT ATC AAG CTC AAT AGT AGA AAA TGG GGC
AGG AAC TGG GTG AAC AGT TTA TCC TCC
181 TCT CTC TTC AGG AAC AGC TCA TGC TGG AGC TTC
TGT TGA TTT AGC TAT TTT TTC TCT TCA
241 TTT AGC TGG AAT TTC CTC AAT TTT AGG GGC AGT
AAA TTT TAT TAC AAC TGT AAT TAA TAT
301 ACG ATC GTC AGG AAT TAC TTT AGA TCG ACT ACC
CTT ATT TGT TTG ATC TGT AGT TAT TAC
361 AGC TAT CTT ATT ACT TCT TTC TCT TCC TGT TTT
AGC TGG AGC TAT TAC TAT GTT ATT AAC
421 AGA CCG AAA CTT AAA TAC ATC TTT CTT TGA TCC
AAT CGG AGG AGG AGA TCC TAT TTT ATA
481 CCA ACA CTT ATT CTG ATT CTT TGG ACA CCC AGA
AGT TTA TAT TTT AAT TTT ACC CGG ATT
541 TGG AAT AAT TTC TCA TAT TAT TAC TCA AGA AAG
TGG AAA AAA GGA AAC ATT TGG AAC TTT
601 AGG AAT AAT TTA TGC TAT ATT AAC AAT TGG ATT
ATT GGG ATT TAT TGT TTG AGC TCA TCA
661 TAT ATT TAC AGT AGG TAT AGA CGT AGA TAC TCG
AGC TTA TTT TAC TTC AGC AAC TAT AAT
721 TAT TGC TGT TCC TAC AGG AAT TAA AAT TTT TAG
TTG ATT AGC AA
(Salgueiro et al., 2019).
29
2.1.6. Mutasi DNA
Molekul DNA yang rusak atau berubah dapat mengakibatkan
meningkatnya mutasi, kromosom menjadi tidak stabil, karsinogenesis, atau
kematian sel. Apabila DNA atau gen mengalami mutasi dan akibat yang
ditimbulkan bersifat tidak menguntungkan, maka perlu ada mutasi balik sehingga
sifat yang dikendalikan oleh gen menjadi normal kembali. Sel mempunyai
kemampuan untuk merespon perubahan pada DNA dengan cara memperbaiki dan
memulihkan sehingga DNA kembali normal fisik dan fungsinya. Mutasi yang
terjadi pada hewan terutama serangga vektor penyakit akan menyebabkan
terhambatnya pengendalian penyakit menular.
Mutasi DNA dapat digolongkan menurut perubahan-perubahan yang
terjadi pada struktur gen, yaitu:
1. Mutasi titik (point mutations), yaitu mutasi yang terjadi pada unit gen
paling kecil yakni pada 1 pasang nukleotida.
2. Mutasi banyak basa (multi base mutations), yaitu mutasi yang terjadi pada
beberapa pasang nukleotida.
3. Mutasi pada segmen DNA, sehingga dapat mengubah struktu kromosom
(aberasi kromosom).
Mutasi gen terjadi melalui beberapa cara antara lain penggantian basa
(substitusi basa), penambahan atau penyisipan basa, dan pengurangan basa.
Struktur basa-basa dalam DNA tidak statik, sebab atom hidrogen dapat berpindah
dari satu posisi ke posisi lain dalam satu purin atau purimidin. Kasus ini disebut
dengan pergeseran tautomerik. Mutasi yang diakibatkan oleh pergeseran
30
tautomerik menyebabkan penggantian atau substitusi basa yang satu oleh basa
yang lain.
Mutasi substitusi basa dapat terjadi karena satu nukleotida menggantikan
nukleotida yang lain. Kejadian ini membuat perubahan atau penggantian satu
asam amino. Mutasi karena substitusi basa dikenal ada dua macam yaitu transisi
dan transversi. Transisi adalah mutasi yang disebabkan oleh penggantian basa
sejenis, misal basa purin diganti basa purin, basa pirimidin diganti basa pirimidin.
Transversi adalah penggantian basa yang tidak sejenis, misal basa purin diganti
basa pirimidin. Beberapa contoh mutasi digambarkan sebagai berikut:
1. Mutasi Silent
Mutasi ini tidak menimbulkan perubahan asam amino yang menyusun
polipeptida, karena perubahan terjadi pada basa ketiga dari triplet sehingga saat
translasi kodon-kodon ini diterjemahkan kedalam asam amino yang sama.
GTT -> GTC -> GTG -> GTA = Valin
Perubahan GTT menjadi GTC, GTG, atau GTA tetap mengkode asam amino yang
sama yaitu valin.
2. Mutasi Missens
Mutasi missens adalah mutasi salah arti yang membuat perubahan
nukleotida diikuti dengan perubahan asam amino.
DNA normal : ATG GCA ATT GCT TTT TTA CGT AAC CCG
Asam amino : met – ala – ile – ala – phe – leu – arg – asn – pro
DNA mutan : ATG GCA ATT GCT TTT TCA CGT AAC CCG
Asam amino : met – ala – ile – ala – phe – ser – arg – asn – pro
31
3. Mutasi Nonsens
Mutasi nonsens adalah mutasi tidak berarti. Mutasi nonsens terjadi apabila
penggantian basa menyebabkan munculnya kodon nonsens atau kodon stop yang
menghentikan proses sintetis protein, sehingga tidak mengkode asam amino
apapun.
DNA normal : ATG GCA ATT GCT TTT TTA CGT AAC CCG
Asam amino : met – ala – ile – ala – phe – leu – arg – asn – pro
DNA mutan : ATG GCA ATT GCT TTT TGA CGT AAC CCG
Asam amino : met – ala – ile – ala – phe – stop
4. Mutasi Penambahan/Penyisipan Basa (Adisi)
Pada mutasi ini satu atau lebih nukleotida menyisip ke dalam rantai
polinukleotida, menyebabkan semua asam amino pada dan sesudah titik mutasi
mengalami perubahan, sehingga mutasi ini disebut juga sebagai mutasi perubahan
kerangka baca (frame shift mutations).
DNA normal DNA mutan nukleotida dengan basa G menyisip
AGA GTC TTC AGA GGT CTT C
ser gln lis ser pro glu
5. Mutasi Pengurangan Basa (Delesi)
Pada mutasi ini satu nukleotida hilang saat replikasi DNA. Seperti halnya
mutasi adisi, mutasi delesi juga dapat menyebabkan terjadinya perubahan
kerangka baca, menyebabkan semua asam amino pada dan sesudah titik mutasi
berubah. Contoh dari mutasi ini adalah penyakit talasemia.
32
DNA normal DNA mutan nukleotida dengan basa T hilang
AGA GTC TTC AGA GCT TC
ser gln lis ser arg
(Widianti & Anggraito, 2017).
2.1.6.1. Mutasi Kodon V1016G Gen Voltage-Gated Sodium Channel (VGSC)
Voltage-Gated Sodium Channel memiliki peran penting dalam mengelola
fisiologi untuk mengirimkan impuls depolarisasi secara cepat ke seluruh sel dan
jaringan sel, sehingga memungkinkan proses koordinasi daya penggerak kepada
kognisi. VGSC dapat ditemukan pada banyak organisme sebab berperan penting
untuk inisiasi dan propagasi dalam sel saraf dan sel yang mengalami rangsangan
(Cox, 2009).
Sejumlah polimorfisme pada VGSC strain Ae. aegypti yang telah
dilaporkan tahan terhadap sipermetrin antara lain S989P dan V1016G
(Purwaningsih et al., 2019). Polimorfisme yang diyakini berkaitan terhadap
interaksi piretroid di sodium channel yaitu V1016G karena koeksistensi substitusi
kodon berada pada domain II dan III yang sangat sensitif menimbulkan
knockdown resistance pada Ae. aegypti dari paparan insektisida sipermetrin.
Adanya polimorfisme V1016G menjadi penanda perubahan substitusi asam amino
valin menjadi glisin pada kodon 1016 dengan transisi basa Timin-Guanin pada
susunan GTA menjadi GGA (Tyasningrum, 2017).
Mutasi target pada gen VGSC mengenai resistensi terhadap piretroid
menunjukkan bahwa ada mekanisme resistensi yang sedang berlangsung. Deteksi
mutasi gen VGSC secara langsung dapat menilai transformasi sel target yang
menjadi target insektisida. Mutasi gen menyebabkan perubahan konformasi dalam
33
saluran natrium karena tidak dapat dibuka oleh molekul insektisida. Mutasi seperti
ini hanya dapat dideteksi dengan metode molekuler. Prinsip dasar deteksi
molekuler resistensi dalam vektor adalah mengidentifikasi gen (Purwaningsih et
al., 2019). Insektisida piretroid bekerja dengan cara melekat pada bagian VGSC
yang terletak di bagian neuron serangga vektor (Ghiffari et al., 2013).
2.1.7. Polymerase Chain Reaction (PCR)
Polymerase Chain Reaction (PCR) adalah suatu metode melipatgandakan
(amplifikasi) secara eksponensial suatu sekuen nukleotida tertentu dengan cara
invitro. PCR merupakan suatu teknik enzimatis dalam biomolekuler untuk
menghasilkan salinan urutan DNA. PCR merupakan metode amplifikasi DNA
target dengan dua kali running PCR. Running PCR pertama menggunakan satu
pasang primer (forward dan reverse), sedangkan pada running PCR kedua salah
satu primernya (forward atau reverse) adalah primer yang digunakan pada PCR
pertama. Primer adalah suatu sekuen oligonukleotida pendek yang berfungsi
mengawali sintesis rantai DNA dalam reaksi berantai polymerase (Triwibowo,
2006). Pada proses PCR diperlukan beberapa komponen utama adalah:
1. DNA cetakan, yaitu fragmen DNA yang akan dilipatgandakan. DNA
cetakan yang digunakan sebaiknya berkisar antara 105-106 molekul.
2. Oligonukleotida primer, yaitu suatu sekuen oligonukleotida pendek (18-28
basa nukleotida) yang digunakan untuk mengawali sintesis rantai DNA. Dan
mempunyai kandungan G+C sebesar 50-60%.
34
3. Deoksiribonukelotida trifosfat (dNTP), terdiri dari dATP, dCTP, dGTP,
dTTP. dNTP mengikat ion Mg2+ sehingga dapat mengubah konsentrasi efektif
ion.
4. Enzim DNA polimerase, yaitu enzim yang melakukan katalisis reaksi
sintesis rantai DNA.
5. Komponen pendukung lain adalah senyawa buffer. Larutan buffer PCR
umumnya mengandung 10–50 mM Tris-HCl pH 8,3-8,8 (suhu 20˚C); 50 mM
KCl; 0,1% gelatin atau BSA (Bovine Serum Albumin); Tween 20 sebanyak
0,01% atau dapat diganti dengan Triton X-100 sebanyak 0,1%; disamping itu
perlu ditambahkan 1,5 mM MgCl2.
Pada proses PCR menggunakan menggunakan alat termosiklus. Sebuah
mesin yang memiliki kemampuan untuk memanaskan sekaligus mendinginkan
tabung reaksi dan mengatur temperatur untuk tiap tahapan reaksi. Ada tiga
tahapan penting dalam proses PCR yang selalu terulang dalam 30-40 siklus dan
berlangsung dengan cepat:
1. Denaturasi
Denaturasi awal dilakukan sebelum enzim taq polimerase ditambahkan ke
dalam tabung reaksi. Denaturasi DNA merupakan proses pembukaan DNA untai
ganda menjadi DNA untai tunggal. Ini biasanya berlangsung sekitar 3 menit,
untuk meyakinkan bahwa molekul DNA terdenaturasi menjadi DNA untai
tunggal. Denaturasi yang tidak lengkap mengakibatkan DNA mengalami
renaturasi (membentuk DNA untai ganda lagi) secara cepat, dan ini
mengakibatkan gagalnya proses PCR. Adapun waktu denaturasi yang terlalu lama
dapat mengurangi aktifitas enzim Taq polymerase. Aktifitas enzim tersebut
35
mempunyai waktu paruh lebih dari 2 jam, 40 menit, 5 menit masing-masing pada
suhu 92,5; 95 dan 97,5˚C.
2. Annealing (Penempelan Primer)
Kriteria yang umum digunakan untuk merancang primer yang baik adalah
bahwa primer sebaiknya berukuran 18–25 basa, mengandung 50–60 % G+C dan
untuk kedua primer tersebut sebaiknya sama. Sekuens DNA dalam masing-
masing primer itu sendiri juga sebaiknya tidak saling berkomplemen, karena hal
ini akan mengakibatkan terbentuknya struktur sekunder pada primer tersebut dan
mengurangi efisiensi PCR. Waktu annealing yang biasa digunakan dalam PCR
adalah 30-45 detik. Semakin panjang ukuran primer, semakin tinggi
temperaturnya. Kisaran temperatur penempelan yang digunakan adalah antara
36˚C sampai dengan 72˚C, namun suhu yang biasa dilakukan itu adalah antara
50–60˚C.
3. Pemanjangan Primer (Extention)
Selama tahap ini Taq polymerase memulai aktivitasnya memperpanjang
DNA primer dari ujung 3’. Kecepatan penyusunan nukleotida oleh enzim tersebut
pada suhu 72˚C diperkirakan 35-100 nukleotida/detik, bergantung pada buffer,
pH, konsentrasi garam, dan molekul DNA target. Dengan demikian untuk produk
PCR dengan panjang 2000 pasang basa, waktu 1 menit sudah lebih dari cukup
untuk tahap perpanjangan primer ini. Biasanya di akhir siklus PCR waktu yang
digunakan untuk tahap ini diperpanjang sampai 5 menit, sehingga seluruh produk
PCR diharapkan terbentuk DNA untai ganda.
36
Gambar 2.8. Siklus PCR
Reaksi-reaksi tersebut di atas diulangi lagi dari 25–30 kali siklus, sehingga
pada akhir siklus akan diperoleh molekul-molekul DNA rantai ganda yang baru
yang merupakan hasil polimerasi dalam jumlah yang jauh lebih banyak
dibandingkan dengan jumlah DNA cetakan yang digunakan. Banyaknya siklus
amplifikasi tergantung pada konsentrasi DNA target dalam campuran reaksi.
Produk PCR dapat diidentifikasi melalui ukurannya dengan menggunakan
elektroforesis gel agarosa. Metode ini terdiri atas menginjeksi DNA ke dalam gel
agarosa dan menyatukan gel tersebut dengan listrik. Hasilnya untai DNA kecil
pindah dengan cepat dan untai yang besar diantara gel menunjukkan hasil positif.
Keunggulan PCR dikatakan sangat tinggi. Hal ini didasarkan atas spesifitas,
efisiensi, dan keakuratannya. Spesifitas PCR terletak pada kemampuannya
mengamplifikasi, sehingga menghasilkan produk melalui sejumlah siklus.
Keakuratan yang tinggi karena DNA polymerase mampu menghindari kesalahan
37
pada amplifikasi produk. Masalah yang berkenaan dengan PCR yaitu biaya PCR
yang masih tergolong tinggi. Selain itu kelebihan lain metode PCR dapat
diperoleh pelipatgandaan suatu fragmen DNA (110 bp, 5×10-9 mol) sebesar
200.00 kali setelah dilakukan 20 siklus reaksi selama 220 menit. Reaksi ini
dilakukan dengan menggunakan komponen dalam jumlah sangat sedikit, DNA
cetakan yang diperlukan hanya sekitar 5 µg oligonukleotida yang diperlukan
hanya sekitar 1 mM dari reaski ini biasa dilakukan dalam volume 50-100 µl. DNA
cetakan yang digunakan juga tidak perlu dimurnikan terlebih dahulu, sehingga
metode PCR dapat digunakan untuk melipatgandakan suatu sekuen DNA dalam
genom bakteri hanya dengan mencampukan kultur bakteri di dalam tabung PCR
(Yusuf, 2010).
2.2. KERANGKA TEORI
Pengendalian Vektor Kimiawi
Mutasi Gen
VGSC
Deteksi
Resistens
Biomolekuler
Kodon PCR
1. Faktor Gen
2. Faktor Biologis
3. Faktor
Operasional
Penggunaan
Insektisida
Rumah Tangga
Aplikasi
Insektisida
Fogging
Piretroid:
Sipermetrin
Vektor
Rentan
67
BAB V
PEMBAHASAN
5.1. PEMBAHASAN
Hasil penelitian menunjukkan di Kelurahan Tambakboyo 8 dari 10 sampel
yang diperiksa telah terdeteksi resisten (80%), Kelurahan Kupang 10 dari 10
sampel yang berarti seluruh sampel yang diperiksa telah terdeteksi resisten
(100%), dan Kelurahan Panjang 9 dari 10 sampel yang diperiksa telah terdeteksi
resisten (90%). Hal ini berarti sampel larva Ae. aegypti pada ketiga kelurahan
tersebut telah mengalami mutasi pada gen VGSC tepatnya pada kodon V1016G.
Hanya 2 sampel dari Kelurahan Tambakboyo dan 1 sampel dari Kelurahan
Panjang yang masih normal.
Mutasi pada gen VGSC yang disebabkan insektisida piretroid juga terjadi
di dunia dan di Indonesia. Deteksi resistensi dengan melihat mutasi pada gen
VGSC di dunia terjadi pada populasi Ae. aegypti di Panama dengan ditemukannya
mutasi pertama kali di Amerika pada kodon V1016G dan I1011M (Murcia et al.,
2019), serta di Taiwan yang mendeteksi mutasi pada kodon V1016G (28,03%),
S989P (17,83%), F1534C (21,97%), dan D1763Y (66,69%) (Chung et al., 2019).
Mutasi serupa juga ditemukan di Indonesia pada sampel Ae. aegypti yang berasal
dari Palembang pada penelitian yang menunjukkan hasil gen V1016G dengan
target DNA 82 bp (Ghiffari et al., 2013). Selain itu, mutasi pada VGSC kodon
V1016G dan S989P Ae. aegypti juga terjadi di Padang dengan target DNA 579 bp
(Hasmiwati et al., 2016), di Sumatera Barat identifikasi titik mutasi pada gen
68
VGSC menunjukan hasil positif pada kodon S989P dan V1016G (Hasmiwati &
Supargiyono, 2018), dan di Palu mutasi pada VGSC terdeteksi pada sampel yang
diperiksa dari Balaroa kodon V1016G dan S989P dengan target DNA 619 bp
(Purwaningsih et al., 2019).
Hal demikian dapat mengindikasikan bahwa larva Ae. aegypti yang
diperiksa tersebut telah mengalami penekanan secara selektif insektisida
kelompok piretroid dalam hal ini sipermetrin. Seperti diketahui bahwa insektisida
kelompok piretroid banyak digunakan masyarakat/rumah tangga, sehingga Ae.
aegypti sering terpapar dengan insektisida tersebut, dan ditambah dengan
insektisida dari bidang kesehatan. Dinas Kesehatan Provinsi Jawa Tengah
menginformasikan bahwa insektisida cynof telah digunakan di beberapa kota di
Jawa Tengah disamping malathion untuk pengendalian Ae. aegypti secara fogging
(Widiarti et al., 2012). Dinas Kesehatan Kabupaten Semarang menggunakan
insektisida merk dagang zeta 15 UL yang mengandung bahan aktif utama zeta-
sipermetrin 15 g/l pada fogging yang dilakukan di Ambarawa (Puskesmas
Ambarawa, 2019). Mutasi V1016G adalah perubahan pada kodon pengkode valin
menjadi glisin, dimana terjadi transisi basa timin dengan guanin pada susunan
GTA menjadi GGA (Ghiffari et al., 2013). Hasil penelitian ini memperlihatkan
bahwa sebagian besar nyamuk Ae. aegypti telah mengalami mutasi V1016G pada
gen VGSC yang merupakan sasaran target insektisida sintetik piretroid
(Widiastuti et al., 2015).
Mekanisme resistensi terhadap insektisida piretroid dapat dideteksi secara
molekuler. Mutasi target pada gen VGSC mengenai resistensi terhadap piretroid
69
menunjukkan bahwa ada mekanisme resistensi yang sedang berlangsung. Deteksi
mutasi gen VGSC secara langsung dapat menilai transformasi sel target yang
menjadi target insektisida. Mutasi gen menyebabkan perubahan konformasi dalam
saluran natrium karena tidak dapat dibuka oleh molekul insektisida. Mutasi seperti
ini hanya dapat dideteksi dengan metode molekuler. Prinsip dasar deteksi
molekuler resistensi dalam vektor adalah mengidentifikasi gen (Purwaningsih et
al., 2019). Insektisida piretroid bekerja dengan cara melekat pada bagian VGSC
yang terletak di bagian neuron serangga vektor (Ghiffari et al., 2013).
Insektisida piretroid mengikat protein VGSC yang mengatur denyut
impuls saraf. Pada awalnya, molekul insektisida piretroid akan melekat untuk
membuka channel sodium dan mengikatnya hingga tetap dalam kondisi terbuka.
Hal ini akan memicu terjadinya repetitivenervefiring yang akan menimbulkan
gerakan atau aktivitas di luar kontrol. Serangga target akan mengalami convulsion
dan tidak dapat mengontrol perilaku terbangnya. Apabila ada mutasi pada gen
VSGC, maka asam amino yang dihasilkan akan berubah, sehingga dapat
menurunkan sensitivitas molekul insektisida piretroid untuk membentuk ikatan
pada bagian tersebut (Widiastuti et al., 2015).
Deteksi resistensi insektisida piretroid secara uji molekuler diketahui
melalui dua cara yaitu perubahan enzim detoksifikasi dan perubahan target site
VGSC. Deteksi enzim detoksifikasi yaitu deteksi mutasi titik gen yang
menyebabkan peningkatan kadar enzim yang mendetoksifikasi insektisida
(resistensi metabolik) (Ghiffari et al., 2013). Pada penelitian ini hanya dilakukan
uji molekuler dengan melihat perubahan atau mutasi pada gen VGSC. Perubahan
70
gen nyamuk Ae. aegypti sebagai mayor vektor virus dengue yang diperkirakan
menjadi penyebab sulitnya pengendalian penyakit DBD. Resistensi terhadap
insektisida juga berpotensi masih tingginya siklus nyamuk vektor DBD tidak bisa
ditanggulangi secara tuntas. Ekspresi gen spesifik dan autosom diindikasikan
memengaruhi lokus pada gen terlebih lagi apabila timbul efek resistensi dari
paparan insektisida (Yudhana et al., 2017).
VGSC dapat dijadikan indikasi penting sejauh mana perkembangan
nyamuk Ae. aegypti resisten terhadap insektisida golongan tertentu, sehingga
penggunaannya bisa dievaluasi dan diperbaiki untuk meningkatkan tindakan
preventif. Hasil penelitian tersebut berkaitan dengan spesies Ae. aegypti yang
telah mengalami penekanan secara selektif terhadap insektisida dari golongan
piretroid (Sinkins, 2010). Diketahui bahwa insektisida golongan piretroid telah
banyak digunakan masyarakat atau rumah tangga sehingga nyamuk Ae. aegypti
sering terpapar dengan insektisida tersebut dan ditambah dengan insektisida dari
golongan lain. Berdasarkan hasil penelitian susceptibility test nyamuk Ae. aegypti
dari Kabupaten Semarang sudah resisten terhadap insektisida sipermetrin. Dengan
demikian kemungkinan mekanisme resistensi lain dalam hal ini mekanisme secara
molekuler dapat berlangsung pada spesies nyamuk tersebut (Ilham et al., 2017).
Penggunaan insektisida piretroid yang dilakukan secara terus menerus
dalam waktu lama, tidak membunuh 100% nyamuk Ae. aegypti yang terpapar dan
selalu ada serangga yang tetap hidup. Pada awalnya jumlahnya hanya sedikit,
tetapi dalam periode tertentu akan mengalami peningkatan populasi nyamuk yang
hidup karena terjadi proses berkembangbiak sekaligus mewariskan kemampuan
71
untuk resisten terhadap insektisida yang sama kepada keturunan selanjutnya
(Yudhana et al., 2017).
Pada penelitian ini ditemukan adanya mutasi 2 jenis mutasi yaitu mutasi
homozigot (G/G) dan mutasi heterozigot (V/G). Hasil penelitian menunjukkan
bahwa di Kelurahan Tambakboyo 2 nyamuk belum mengalami mutasi (V/V), 7
nyamuk mengalami mutasi homozigot (G/G), dan 1 nyamuk mengalami mutasi
heterozigot (V/G). Seluruh nyamuk yang diperiksa di Kelurahan Kupang telah
mengalami mutasi, 5 nyamuk mengalami mutasi homozigot (G/G) dan 5 nyamuk
mengalami mutasi heterozigot (V/G). Hasil dari Kelurahan Panjang menunjukkan
1 nyamuk belum mengalami mutasi (V/V), 8 nyamuk mengalami mutasi
homozigot (G/G), dan 1 nyamuk mengalami mutasi heterozigot (V/G). Hal ini
dapat diartikan bahwa dari keseluruhan sampel yang diperiksa terdapat 3 nyamuk
yang belum mengalami mutasi (V/V), 20 nyamuk mengalami mutasi homozigot
(G/G) pada alel 1016G, dan 7 nyamuk mengalami mutasi heterozigot pada
domain kedua gen V1016G.
Terdapat 3 dari 30 sampel yang belum mengalami mutasi, selaras dengan
hasil penelitian di Thailand yang menunjukkan bahwa 74 dari 170 sampel nyamuk
Ae. aegypti masih susceptible atau belum mengalami mutasi (V/V) (Stenhouse et
al., 2013). Ae. aegypti susceptible juga ditemukan pada penelitian yang dilakukan
di Bengal Barat, India, memeriksa 5 sampel menunjukkan bahwa hasil penelitian
tidak ditemukan mutasi pada alel 1016G terkait dengan resistensi yang diamati,
baik mutasi homozigot maupun heterozigot, seluruhnya masih susceptible. Pada
wilayah dengan individu nyamuk Ae. aegypti susceptible, frekuensi penggunaan
72
piretroid yang digunakan dan polimorfisme pada gen target harus dipantau secara
berkala untuk mendeteksi munculnya resistensi piretroid pada populasi Ae.
aegypti (Saha et al., 2018).
Hasil penelitian ini menunjukkan 20 dari 30 sampel Ae. aegypti yang
diperiksa terdeteksi telah mengalami mutasi homozigot (V/V). Hal tersebut
sejalan dengan penelitian di Yogyakarta, nyamuk Ae. aegypti didapatkan telah
mengalami perkembangan resistensi terhadap piretroid. Individu nyamuk yang
homozigot hampir sama mutasi genetiknya dengan tingkat resistensi individu
yang heterozigot. Belum ditemukan adanya generasi strain rentan homozigot
murni. Resistensi secara genetik diturunkan dan tingkat perkembangan resistensi
bergantung pada frekuensi gen resisten, frekuensi penggunaan insektisida, dan
lamanya aplikasi. Studi resistensi juga akan memberikan informasi penting untuk
mengenali mekanisme resistensi. Hasil screening molukuler ditemukan adanya
mutasi target-site dan mutasi kdr V10161 yang tinggi (87%). Pembentukan strain
homozigot rentan memerlukan waktu di atas lima generasi (Isfanda et al., 2017).
Sebuah hasil penelitian menunjukkan bahwa tidak semua individu nyamuk
yang mengalami mutasi V1016G homozigot mampu bertahan hidup atau bersifat
resisten pada paparan insektisida permetrin (0,75%) dan 23,4% dari kelompok
yang mengalami mutasi heterozigot mampu bertahan hidup (Harris et al., 2010).
Hal ini mengindikasikan bahwa kemungkinan mekanisme resistensi terhadap
insektisida piretroid pada nyamuk Ae. aegypti dipengaruhi oleh beberapa faktor
yang tidak berdiri sendiri-sendiri. Selain melalui mutasi V1016G, resistensi Ae.
aegypti terhadap insektisida sintetik piretroid juga dapat disebabkan karena
73
beberapa mutasi gen VGSC pada posisi yang lain diantaranya mutasi V1016G,
F1534C, dan S989P (Kawada et al., 2014).
Mutasi heterozigot ditemukan pada 7 dari 30 sampel Ae. aegypti yang
diperiksa pada penelitian ini. Alel 1016G bersifat resesif. Hal ini mengindikasikan
bahwa nyamuk yang mengalami mutasi heterozigot masih berpeluang besar untuk
tetap sensitif terhadap insektisida piretroid (Stenhouse et al., 2014). Hasil
penelitian menunjukkan sebagian besar mutasi terjadi secara heterozigot, namun
hal ini perlu menjadi perhatian dalam menentukan jenis insektisida yang akan
digunakan dalam program pengendalian nyamuk Ae. aegypti. Adanya mutasi ini
akan menyebabkan resistensi juga pada jenis insektisida lain yang berasal dari
golongan sintetik piretroid (Widiastuti et al., 2015). Adanya perbedaan tingkat
resistensi pada setiap strain disebabkan oleh perbedaan tingkat penggunaan dan
jenis insektisida di tiap wilayah tersebut, selain latar belakang genetik dan variasi
ekologis. Aplikasi insektisida yang dihentikan akan memberikan kesempatan bagi
genotip rentan untuk bertahan hidup. Genotip rentan berasal dari pewarisan sifat
gen resesif resisten heterozigot yang dihasilkan oleh perkawinan silang antara
individu yang rentan dan resisten (Mantolu et al., 2016).
Frekuensi yang lebih tinggi pada mutasi heterozigot dibandingkan mutasi
homozigot mempercepat terjadinya resistensi di masa depan karena tidak ada
mekanisme pelindung pada nyamuk. Mekanisme perlindungan tergantung pada
faktor genetik; tunggal atau resesif, semi dominan, atau dominan dalam proses
keturunan. Resistensi heterozigot jarang terjadi pada suatu populasi, tetapi jika
mutasi heterozigot muncul dan bertahan hidup hingga terjadi perkawinan dengan
74
heterozigot lainnya menghasilkan mutan-mutan homozigot dengan resistensi lebih
kuat terhadap insektisida. Jika mutan homozigot menjadi dominan, resistensi
menyebar dengan cepat dalam suatu populasi dikarenakan kemudahan Ae. aegypti
untuk beradaptasi dengan lingkungannya (Hasmiwati & Supargiyono, 2018).
5.2. HAMBATAN DAN KELEMAHAN PENELITIAN
Hambatan dalam penelitian ini antara lain ovitrap untuk mengambil
sampel beberapa ada yang tumpah atau bahkan dijadikan mainan anak-anak.
Tetapi sejak kasus DBD di Kecamatan Ambarawa meningkat pada tahun 2017
dan ditetapkan sebagai wilayah endemis, penduduk di wilayah kerja Puskesmas
Ambarawa telah membuat ovitrap secara mandiri sehingga sampel larva Ae.
aegypti dapat diambil dari ovitrap yang sudah ada tersebut.
Selain itu pada pelaksanaan uji deteksi resistensi Ae. aegypti menggunakan
teknik PCR di laboratorium beberapa kali terjadi human errors salah satunya
adalah saat sedang melaksanakan serangkaian teknik isolasi DNA sampai pada
tahap wash buffer II, seluruh sampel dari Kelurahan Tambakboyo tumpah dan
hasil PCR pada gel documentation system tidak dapat terbaca, sehingga harus
dilakukan pengambilan sampel ulang dari Kelurahan Tambakboyo.
Kelemahan pada penelitian ini diantaranya yaitu uji PCR seharusnya
adalah uji lanjutan dari uji kovensional. Namun pada penelitian ini tidak
dilakukan uji konvensional dan langsung mengambil sampel dari lapangan untuk
dilakukan uji molekuler karena keterbatasan waktu. Secara metodologi uji
lanjutan tanpa uji konvensional tidak menjadi masalah selama dapat dipastikan
75
tidak adanya penggunaan insektisida jenis lain dan cross-resisten yang terjadi.
Dalam penelitian ini penggunaan insektisida hanya dapat dipastikan dengan
paparan insektisida dari fogging yang telah dilaksanakan. Kelemahan lain pada
penelitian ini adalah hanya melihat satu mutasi saja yaitu mutasi V1016G. Mutasi
gen VGSC pada beberapa posisi dapat terjadi secara bersamaan dalam satu
individu nyamuk, seperti yang dilakukan peneliti-peneliti terdahulu salah satunya
dilakukan di Palu dengan temuan mutasi pada titik V1016G dan S989P
(Purwaningsih et al., 2019).
76
BAB VI
SIMPULAN DAN SARAN
6.1. SIMPULAN
Hasil penelitian menggunakan uji molekuler menunjukkan bahwa 80%
sampel dari Kelurahan Tambakboyo telah terdeteksi resisten, 100% dari
Kelurahan Kupang telah terdeteksi resisten, dan 90% sampel dari Kelurahan
Panjang telah terdeteksi resisten. Hal tersebut mengindikasikan adanya mutasi
pada gen VGSC pada kodon 1016 Ae. aegypti yang diperiksa.
6.2. SARAN
Beberapa saran yang dapat diberikan antara lain:
1. Manajemen penggunaan, pemilihan, dan rotasi jenis insektisida yang
dilakukan oleh Dinas Kesehatan secara tepat diharapkan dapat mengurangi
risiko terjadinya resistensi pada populasi nyamuk Ae. aegypti khususnya di
wilayah kerja Dinas Kesehatan Kabupaten Semarang.
2. Peneliti selanjutnya diharapkan melaksanakan lebih banyak deteksi pada
beberapa kodon, tidak hanya mendeteksi pada kodon V1016G. Perlu diteliti
lebih lanjut kejadian double-mutant atau bahkan multiple-mutant Ae. aegypti.
77
DAFTAR PUSTAKA
Ahmad, I., Astari, S., Rahayu, R., & Hariani, N. (2009). Status Kerentanan Aedes
aegypti (Diptera: Culicidae) pada Tahun 2006-2007 terhadap Malathion di
Bandung, Jakarta, Surabaya, Palembang, dan Palu. Biosfera, 26 (2): 82-89.
Arasy, A. A., & Nurwidayati, A. (2017). Status Resistensi Anopheles barbirostis
terhadap Permethrin 0,75% Desa Wawosangula, Kecamatan Puriala,
Kabupaten Konawe, Provinsi Sulawesi Tenggara. Jurnal Vektor Penyakit,
11 (1): 27-32.
Borror, D. J. (1992). Pengenalan Pelajaran Serangga (Edisi Keenam ed.). (S.
Partosoedjono, Trans.) Yogyakarta: Yrama Widya.
Chung, H.-H., Cheng, I.-C., Chen, Y.-C., Lin, C., Tomita, T., & Teng, H.-J.
(2019). Voltage-Gated Sodium Channel Intron Polymorphismand
Fourmutations Comprise Six Haplotypes in an Aedes Aegypti Population
in Taiwan. PLOS Neglected Tropical Disease, 13 (3): 1-16.
Cox, R. H. (2009). New Expression Profiles of Voltage-gated Sodium Channels.
Microcirculation, 48 (3): 243-257.
Dinas Kesehatan Kabupaten Semarang. (2017). Laporan Tahunan. Kabupaten
Semarang: Dinas Kesehatan Kabupaten Semarang.
Dinas Kesehatan Kabupaten Semarang. (2017). Profil Kesehatan Kabupaten
Semarang. Kabupaten Semarang: Dinas Kesehatan Kabupaten Semarang.
Dinas Kesehatan Provinsi Jawa Tengah. (2017). Profil Kesehatan Jawa Tengah.
Semarang: Dinas Kesehatan Provinsi Jawa Tengah.
Dinas Kesehatan Provinsi Jawa Tengah. (2018). Buku Saku Kesehatan Jawa
Tengah. Semarang: Dinas Kesehatan Provinsi Jawa Tengah.
Djojosumarto, P. (2008). Teknik Aplikasi Pestisida Pertanian. Yogyakarta:
Kanisius.
Firmanta, Y. (2008). Deteksi Resistensi Nyamuk Aedes aegypti yang Berasal dari
Daerah Endemis dan Non Endemis Dengue di Kota Jambi. Skripsi.
Yogyakarta: Universitas Sanata Dharma.
Ghiffari, A., Fatimi, H., & Anwar, C. (2013). Deteksi Resistensi Insektisida
Sintetik Piret Aedes Aegypti (L.) Strain Palembang Menggunakan
Polymerase Chain Reaction. Aspirator, 5 (2): 37-44.
Harris, A. F., Rajatileka, S., & Ranson, H. (2010). Pyrethroid Resistance in Aedes
aegypti from Grand Cayman. The American Journal of Tropical Medicine
and Hygiene, 83 (2): 277-284.
Hasmiwati, & Supargiyono. (2018). Short Communication: Genotyping of Kdr
Allele in Insecticide Resistant Aedes aegypti Populations from West
Sumatra, Indonesia. Biodiversitas, 19 (2): 552-558.
Hasmiwati, Tjong, D. H., & Novita, E. (2016). Detection and Identification of
Synthetic Insecticide Resistance in Aedes aegypti Dengue Hemorrhagic
Fever (DHF) Vector in Padang. Seminar Nasional Biologi (pp. 277-284).
Medan: USU Press.
Ilham, M. M., Rahmi, D. T., & Lusiyana, N. (2017). Survei Entomologi,
Kerentanan Aedes aegypti terhadap Insektisida Sintetik Piretroid, dan
78
Identifikasi Gen VGSC di Desa Gondoriyo, Kabupaten Semarang.
Aspirator, 1 (3): 40-48.
Isfanda, Hadi, U. K., & Soviana, S. (2017). Determination of Homozygous Strain
in Aedes aegypti (Linn.) Using Single Sib-selection Method. Aspirator, 9
(1): 21-28.
Jahan, N., & Shahid, A. (2013). Evaluation Of Resistance Against Deltamethrin
And Cypermethrin In Dengue Vector From Lahore, Pakistan. The Journal
of Animal & Plant Sciences, 23 (5): 1321-1326.
Kawada, H., Oo, T. S., Kawashima, E., Maung Maung, Y. N., & Thant, M.
(2014). Co-occurrence of Point Mutations in the Voltage-gated Sodium
Channel of Pyrethroid Resistant Aedes aegypti Populations in Myanmar.
PLOS Neglected Tropical Diseases, 7 (17): 8-13.
Kemenkes RI. (2011). Modul Pengendalian Demam Berdarah Dengue. Jakarta:
Kementerian Kesehatan Republik Indonesia.
Kemenkes RI. (2012). Pedoman Penggunaan Insektisida (Pestisida) dalam
Pengendalian Vektor. Jakarta: Kemenkes RI.
Kemenkes RI. (2013). Survei Entomologi DBD. Jakarta: Ditjen P3M dan PLP
Depkes RI.
Kemenkes RI. (2017). Profil Kesehatan Indonesia. Jakarta: Kementerian
Kesehatan RI.
Lima, E., Araujo, S., & Oliveira, S. S. (2011). Insecticide Resistance in Aedes
aegypti Populations from Ceara, Brazil. Parasites & Vectors, 4 (1): 5.
Mantolu, Y., Kustiati, Ambarningrum, T. B., Yusmalinar, S., & Ahmad, I. (2016).
Status dan Perkembangan Resistensi Aedes aegypti (Linnaeus) (Diptera:
Culicidae) strain Bandung, Bogor, Makassar, Palu, dan VCRU terhadap
Insektisida Permetrin dengan Seleksi Lima Generasi. Jurnal Entomologi
Indonesia, 13 (1): 1-8.
Martins, A., Lins, R., Linss, J., Peixoto, A., & Valle, D. (2009). Voltage-gated
Sodium Channel Polymorphism and Metabolic Resistance in Pyrethroid-
resistant Aedes aegypti from Brazil. Am J Trop Med Hyg, 81 (2): 108-15.
Mulyani, A., Boewono, D. T., & Baskoro, T. (2017). A Study of Aedes aegypty
Susceptibility Against Cypermetrin at Elementary Schools Yogyakarta.
TMJ, 4 (1): 25-33.
Murcia, O., Henríquez, B., Castro, A., Koo, S., Josue, Y., Márquez, R., Pérez, D.,
Cáceres, L., & Valderrama, A. (2019). Presence of the Point Mutations
Val1016Gly in the Voltage-Gated Sodium Channel Detected in a Single
Mosquito from Panama. Parasites and Vectors, 12 (62): 1-7.
Perdana, F. (2016). Penetapan Kadar Pestisida Sipermetrin dalam Daun Teh Hijau
(Camellia sinensis) dengan Metode KCKT. Skripsi. Surabaya: Universitas
Airlangga.
Purwaningsih. (2017). Status Kerentanan dan Mekanisme Resistensi Nyamuk
Aedes Aegypti (Diptera: Culicidae) Sebagai Vektor Dengue terhadap
Insektisida Malation dan Sipermetrin di Kecamatan Palu Barat . Tesis.
Yogyakarta: Universitas Gadjah Mada.
Purwaningsih, Umniyati, S. R., & Mulyaningsih, B. (2019). Combined Target Site
VGSC Mutations Play a Primary Role in Pyrethrod Resistant Phenotypes
79
of Aedes aegypti as Dengue Vector from Palu City, Central Sulawesi.
Indonesian Jurnal Of Tropical and Infectious Disease, 7 (5): 93-98.
Puskesmas Ambarawa. (2019). Laporan Tahunan. Semarang: Puskesmas
Ambarawa.
Safar, R. (2010). Insektisida dan Resistensi, Buku Parasitologi Kedokteran.
Bandung: Yrama Widya.
Saha, P., Moytrey, C., Ballav, S., Chowdhury, A., Basu, N., & Maji, A. K. (2018).
Prevalence of Kdr Mutations and Insecticide Susceptibility Among
Natural Population of Aedes aegypti in West Bengal. Plos One, 14 (4): 10-
15.
Salgueiro, P., Serrano, C., Gomes, B., Alves, J., & Sous. (2019). Aedes aegypti
Isolate CV_01 Cytochrome c Oxidase Subunit I (COI) Gene, Partial CDS;
Mitochondrial. GenBank.
Sarkar, Bhattacharyya, K., Borkotoki, A., Goswami, D., Rabha, B., Baruah, I., &
Srivastava, R. B. (2009). Insecticide Resistance and Detoxifying Enzyme
Acticity in The Principal Bancroftian Filariasis Vector, Culex
quinquefasciatus in Northeastern India. Medical and Veterinary
Entomology, 23 (2): 122-131.
Sayono, Syafruddin, D., & Sumanto, D. (2012). Distribusi Resistensi Nyamuk
Aedes aegypti terhadap Insektisida Sipermetrin di Semarang. Jurnal
UNIMUS, 6 (1): 263-269.
Sembiring, O. (2009). Efektifitas Beberapa Jenis Insektisida terhadap Nyamuk
Aedes Aegypti. Tesis. Medan: Universitas Sumatera Utara.
Sinkins, S. (2010). Genome Sequence of Aedes aegypti, a Major Arbovirus
Vectors. J Sci, 16 (5832): 1718-1723.
Stenhouse, S. A., Plernsub, S., Yanola, J., Lumjuan, N., Dantrakool, A.,
Choochote, W., & Soombon, P. (2013). Detection of the V1016G
Mutation in the Voltage-gated Sodium Channel Gene of Aedes aegypti
(Diptera: Culicidae) by Allele-specific PCR assay, and Its Distribution and
Effect on Deltamethrin Resistance in Thailand. Parasit Vectors, 6 (1):
1756-1763.
Sucipto, C. D. (2011). Vektor Penyakit Tropis. Yogyakarta: Gosyen Publishing.
Sukmawati, Ishak, H., & Arsin, A. A. (2018). Uji Kerentanan untuk Insektisida
Malathion dan Cypermethrine (Cyf 50 EC) terhadap Populasi Nyamuk
Aedes aegypti di Kota Makassar dan Kabupaten Barru. Higiene, 4 (1): 41-
47.
Susanti, L., & Boesri, H. (2012). Insektisida Sipermetrin 100 g/l terhadap
Nyamuk dengan Metode Pengasapan. Kemas, 7 (2): 156-163.
Triwibowo, Y. (2006). Teori dan Aplikasi Polymerase Chain Reaction.
Yogyakarta: CV Andi Offset.
Tyasningrum, W. S. (2017). Distribusi Alel 1016G Gen Voltage-Gated Sodium
Channel pada Populasi Aedes aegypti Strain Dataran Tinggi. Skripsi.
Semarang: Universitas Muhammadiyah Semarang.
Untung, K. (2004). Manajemen Resistensi Pestisida Sebagai Penerapan
Pengelolaan Hama Terpadu. Yogyakarta: Universitas Gajah Mada.
80
WHO. (2011). Comprehensive Guidelines for Prevention and Control of Dengue
and Dengue Haemorrhagic Fever. Geneva: World Health Organization.
WHO. (2013). Test Procedures for Insecticide Resistance Monitoring in Vector
Mosquitoes. Geneva: World Health Organization.
WHO. (2014). Dengue and Severe Dengue. Geneva: World Health Organization.
WHO. (2016). Monitoring and Managing Insecticide Resistance in Aedes
mosquito populations (Interim Guidance for Entomologists). Geneva:
World Health Organization.
Widianti, T., & Anggraito, Y. U. (2017). Buku Ajar Biologi Molekuler. Semarang:
UNNES.
Widiarti, Boewono, D. T., Syafruddin, D., Garjito, T. A., Tunjungsari, R., & Asih,
P. B. (2012). Identifikasi Mutasi Noktah pada ”Gen Voltage Gated
Sodium Channel” Aedes aegypti Resisten terhadap Insektisida Pyrethroid
di Semarang Jawa Tengah. Buletin Penelitian Kesehatan, 40 (1): 31-38.
Widiastuti, D., Sunaryo, Pramestuti, N., Sari, T. V., & Wijayanti, N. (2015).
Deteksi Mutasi V1016G pada Gen Voltage-Gated Sodium Channel pada
Populasi Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) di Kabupaten Klaten, Jawa
Tengah dengan Metode Allele-Specific PCR. Vektora, 7 (2): 65-70.
Yudhana, A., Praja, R. N., & Yunita, M. N. (2017). Deteksi Gen Resisten
Insektisida Organofosfat. Jurnal Veteriner, 18 (3): 446-452.
Yusuf, Z. K. (2010). Polymerase Chain Reaction (PCR). Saintek, 5 (6): 1-6.
Zottel, C., & Kaufman, P. (2016). Aedes aegypti (Linaeus) (Insecta: Diptera:
Culicidae). University of California.