(bismillah upload)pkm-p-13-ub-dwi fitria r-shilovacc vaksin shigellosis (salinan berkonflik erlin...

USULAN PROGRAM KREATIVITAS MAHASISWA

SHILOVacc : Vaksin Shigellosis dengan Menggunakan Protein omp-A dari Pengisolasian Outer Membran Bakteri Shigella dysentriae

pada Model Mencit (Mus musculus) Galur Balb/C

BIDANG KEGIATAN:

PKM - PENELITIAN

Diusulkan oleh :

Dwi Fitria Rahayuningwati 115070501111006 (Farmasi 2011)

Dewangga Primananda S. 105070103121008 (Pend. Dokter 2010)

Ivan Bintang Pratama 115070107121003 (Pend. Dokter 2011)

Erlin Aditia Purmitasari 125070507111015 (Farmasi 2012)

Novia Putri Kusumaningtyas125070500111008 (Farmasi 2012)

UNIVERSITAS BRAWIJAYA

MALANG

2013

i

HALAMAN PENGESAHAN

USUL PROGRAM KREATIVITAS MAHASISWA

1. Judul : SHILOVacc : Vaksin Shigellosis dengan Menggunakan Protein omp-A dari Pengisolasian Outer Membran Bakteri Shigella dysentriae pada Model Mencit (Mus musculus) Galur Balb/C

2. Bidang Kegiatan : PKM - P3. Ketua Pelaksana Kegiatan

a. Nama : Dwi Fitria Rahayuningwatib. NIM :115070501111006c. Jurusan : Farmasi 2011d. Universitas/Institut/politeknik : Universitas Brawijaya Malange. Alamat Rumah dan No.Telp/ HP : Perum. Villa Sengkaling RE 12

Malang/ 081333843820f. Alamat Email : [email protected]

4. Anggota Pelaksana Kegiatan/Penulis : 4 orang5. Dosen Pendamping

a. Nama Lengkap dan Gelar : Dr. dr. Dwi Yuni Nur Hidayati, M.Kesb. NIDN : 0023036607c. Alamat Rumah dan / HP : Jl. Lowokdoro III/13b Malang /

0341- 831452; 081252291696. Biaya Kegiatan Total

a. DIKTI : Rp 12.340.000, 00b. Sumber Lain : -

7. Jangka Waktu Pelaksanaan : 4 Bulan

Malang, 18 Oktober 2013

ii

DAFTAR ISI

Halaman Judul..................................................................................................... iHalaman Pengesahan........................................................................................... iiDaftar Isi........................................................................................................................ iiiDaftar Gambar..................................................................................................... ivDaftar Lampiran.............................................................................................................. vRingkasan........................................................................................................................ viBAB I PENDAHULUAN.............................................................................................. 11.1 Latar Belakang........................................................................................................ 11.2 Rumusan Masalah.......................................................................................... 21.3 Tujuan............................................................................................................ 31.4 Luaran yang Diharapkan ............................................................................... 31.5 Kegunaan ...................................................................................................... 3BAB II Tinjauan Pustaka.................................................................................. 32.1 Shigella dysentriae.........................................................................................32.2 Patologi Shigellosis....................................................................................... 42.3 Sistem Imun .................................................................................................. 52.4 Outer Membrane Protein A............................................................................ 52.5 Prinsip Vaksinasi .......................................................................................... 6BAB III Metode Penelitian................................................................................ 73.1 Rancangan Penelitian .................................................................................... 73.2 Variabel Penelitian ........................................................................................ 73.3 Objek dan Sampel ......................................................................................... 73.4 Tempat Penelitian ......................................................................................... 73.5 Definisi Operasional ..................................................................................... 73.6 Alat dan Bahan Penelitian ............................................................................. 83.7 Prosedur Penelitian ....................................................................................... 8BAB IV Biaya dan Jadwal Kegiatan................................................................ 104.1 Jadwal Kegiatan............................................................................................. 104.2 Rancangan Biaya...........................................................................................10Daftar Pustaka...................................................................................................11Lampiran............................................................................................................13

iii

DAFTAR BAGAN

Bagan 1. Kerangka Konsep...............................................................................13Bagan 2. Rancangan Penelitian.........................................................................13

iv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Kerangka Konsep dan Rancangan Penelitia....................................13Lampiran 2. Biodata Penulis................................................................................15Lampiran 3. Justifikasi Anggaran Kegiatan.........................................................22Lampiran 4. Sususan Organisasi Tim Peneliti dan Pembagian Tugas.................23Lampiran 5. Surat Pernyataan Ketua Peneliti / Pelaksana...................................25

v

RINGKASAN

Penyebab penyakit diare bermacam-macam seperti karena infeksi bakteri, protozoa ataupun virus. Salah satu penyebab diare terbesar adalah karena factor infeksi bakteri, dan bakteri Shigella merupakan penyebab terbesar diare. Spesies Shigella merupakan penyebab utama disentri basiller, merupakan suatu penyakit yang ditandai dengan nyeri perut hebat, diare yang sering dan sakit dengan volume tinja sedikit disertai lendir dan darah. Penyakit diare yang disebabkan oleh spesies Shigella disebut Shigellosis. Menurut data WHO, perkiraan terbaru penyakit Shigella adalah dari 90 juta penderita Shigellosis, 108.000 diantaranya mengalami kematian per tahun. Shigella dysentriae termasuk bakteri gram negative. Pada dinding sel Shigella dysentriae mengandung lipopolisakarida, fosfolipid, dan lipoprotein yang berperan dalam proses masukannya bahan asing dari luar ke dalam sel. Pada dinding sel tersebut terdapat salah satu protein ompA yang berfungsi membantu penetrasi ke dalam sel dan membantu perlekatan bakteri pada reseptor sel hospes yang spesifik. Shilovacc merupakan suatu inovasi vaksin untuk pencegahan Shigellosis. Vaksin ini menggunakan protein omp-A dari bakteri Shigella dysentriae. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui peningkatan respon antibodi spesifik (IgG) sebagai vaksin Shigellosis pada model Mencit. Pada penelitian ini hewan coba dibagi menjadi 5 kelompok yaitu kontrol negatif (kelompok sehat), kontrol positif (kelompok sakit shigellosis), P1 (vaksin omp-A 50ul/ Kg BB) , P2 (vaksin omp-A 100ul/ Kg BB) dan P3 (vaksin omp-A 200ul/ Kg BB). Sedangkan, prosedur penelitian akan dilakukan pengkulturan Shigella dysentriae, ekstrasi protein omp-A, penambahan adjuvant, pengkondisian shigellosis, prosen vaksinasi, booster, pengambilan darah, pengecekkan IgG, dan terakhir pengumpulan dan analisa data. Sehingga diharapkan penelitian ini dapat menghasilkan jurnal artikel ilmiah yang terakreditasi dan produk vaksin paten.

Kata kunci : Shigella dysentriae, Shigellosis, protein omp-A, vaksin

vi

1

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar BelakangPenyakit diare masih merupakan masalah kesehatan masyarakat di negara

berkembang seperti di Indonesia karena morbiditas dan mortalitasnya yang masih tinggi. Survei morbiditas yang dilakukan oleh Subdit Diare, Departemen Kesehatan dari tahun 2000 s/d 2010 terlihat kecenderungan insiden naik. Pada tahun 2000 IR penyakit Diare 301/1000 penduduk, tahun 2003 naik menjadi 374/1000 penduduk, tahun 2006 naik menjadi 423/1000 penduduk dan tahun 2010 menjadi 411/1000 penduduk. Kejadian Luar Biasa (KLB) diare juga masih sering terjadi, dengan CFR yang masih tinggi. Pada tahun 2008 terjadi KLB di 69 Kecamatan dengan jumlah kasus 8133 orang, kematian 239 orang (CFR 2,94%). Tahun 2009 terjadi KLB di 24 Kecamatan dengan jumlah kasus 5.756 orang, dengan kematian 100 orang (CFR 1,74%), sedangkan tahun 2010 terjadi KLB diare di 33 kecamatan dengan jumlah penderita 4204 dengan kematian 73 orang (CFR 1,74 %) (Kemenkes RI, 2011).

Penyebab penyakit diare bermacam-macam seperti karena infeksi bakteri, protozoa ataupun virus. Salah satu penyebab diare terbesar adalah karena factor infeksi bakteri, dan bakteri Shigella merupakan penyebab terbesar diare. Spesies Shigella merupakan penyebab utama disentri basiller, merupakan suatu penyakit yang ditandai dengan nyeri perut hebat, diare yang sering dan sakit dengan volume tinja sedikit disertai lendir dan darah. Penyakit diare yang disebabkan oleh spesies Shigella disebut Shigellosis. Kebanyakan penyakit Shigellosis terjadi pada usia anak-anak sekitar 1-10 tahun. Di Amerika Serikat, diduga sekitar 15% kasus diare pada anak disebabkan oleh Shigella, sementara di Negara berkembang mikroorganisme ini merupakan penyebab utama dari diare infantile (Nair et al, 2010). Menurut data dari World Health Organization (2009), Shigellosis endemik di seluruh dunia dan menjadi penyebab dari 120 juta kasus disentri di dunia.Shigellosis mempunyai manifestasi klinik berupa diare yang parah dengan darah dan lendir dalam tinja. Mayoritas Shigellosis terjadi di negara berkembang dan biasa terjadi pada anak-anak usia kurang dari lima tahun. Sekitar 1,1 juta orang diperkirakan meninggal akibat infeksi Shigella setiap tahun, dengan 60% kematian terjadi pada anak di bawah usia 5 tahun.

Menurut data WHO, perkiraan terbaru penyakit Shigella adalah dari 90 juta penderita Shigellosis, 108.000 diantaranya mengalami kematian per tahun. Penyebab utama penyakit Shigellosis adalah bakteri Shigella dysentriae.Komplikasi akut yang dapat terjadi mencakup peritonitis dan septikemia, terutama pada anak-anak kurang gizi, dan uremic Syndrome hemolitik berat (HUS) dengan gagal ginjal. Shigellosis ditularkan dari manusia ke manusia via rute fekal - oral melalui makanan dan air yang terkontaminasi atau melalui kontak orang ke orang. Transmisi oleh lalat rumah juga dapat membantu penyebaran infeksi Shigella.Keadaan tempat tinggal dan lingkungan yang tidak terjaga kebersihannya juga menjadi penunjang penyebaran infeksi Shigella (WHO, 2009).

Dengan tidak adanya vaksin yang efektif dalam menanggulangi Shigellosis, seperti yang diketahui frekuensi antimikroba yang resisten terhadap mikroba Shigella semakin meningkat di seluruh dunia telah menjadi sumber keprihatinan utama. Selama survei dari 600.000 orang dari segala usia yang

2

berada di Bangladesh, Cina, Pakistan, Indonesia, Vietnam dan Thailand, Shigella diisolasi dalam 5 % dari 60.000 kejadian diare terdeteksi antara tahun 2000 dan 2004 dan mayoritas dari isolat bakteri resisten terhadap amoksisilin dan kotrimoksazol. Bahkan, 95 % isolat dari Shigella sonnei dan Shigella flexneri resisten untuk tetrasiklin dan kotrimoksazol, dan 90 % dari isolat Shigella flexneri juga resisten terhadap ampisilin dan kloramfenikol. Temuan serupa dilakukan di Jakarta Utara, Indonesia, di mana penelitian surveilans yang dilakukan antara Agustus 2001 dan Juli 2003 menemukan bahwa anak-anakberusia 1 sampai 2 tahun memiliki insiden tinggi Shigellosis (32/1000/tahun) dengan 73% sampai 95% dari isolat yang resisten terhadap ampisilin, trimethoprim-sulfamethoxazole, kloramfenikol dan tetrasiklin (WHO, 2009).

Shigella dysentriae termasuk bakteri gram negative. Pada dinding sel Shigella dysentriae mengandung lipopolisakarida, fosfolipid, dan lipoprotein yang berperan dalam proses masukannya bahan asing dari luar ke dalam sel. Selain itu lipopolisakarida juga menghalangi terjadinya proses fagositosis dan juga bersifat toksik. Pada dinding sel tersebut terdapat salah satu protein ompA yang berfungsi membantu penetrasi ke dalam sel dan membantu perlekatan bakteri pada reseptor sel hospes yang spesifik.Outer Membrane Protein A (ompA) pada Shigella dysenteriae telah digunakan untuk membangun "vektor ekspresi permukaan" untuk gen asing: gen asing dimasukkan ke dalam gen ompA dan protein fusi yang dihasilkan diekspresikan pada permukaan sel oleh organisme. Gen asing yang berfusi membangun gen-ompA. Outer Membrane Protein A (ompA) dapat digunakan sebagai sistem vektor untuk protein asing pada permukaan bakteri. Sistem ini telah diuji dengan pengkodean gen beta-galaktosidase, kaki dan mulut penyakit virus (FMDV), antigen malaria, influenza dan hemaglutinin. Dalam setiap kasus ini, produk gen yang berhasil dikirim ke permukaan sel bakteri. Sistem vektor memiliki implikasi dalam perkembangan vaksin. Dalam perkembangannya, antigen permukaan Shigella digunakan untuk mengaktifkan limfosit T dan limfosit B untuk menginduksi respon antigen-spesifik dalam Shigellosis (Zwadyk, 1992).

Berdasarkan uraian di atas, sebuah inovasi pencegahan Shigellosis yang dirasa terbaik adalah dengan cara vaksinasi. Mengingat seperti yang diketahui, kebersihan di Indonesia masih belum maksimal dan masih banyak daerah-daerah yang kebersihannya dibawah standar termasuk sanitasi yang buruk.Pemanfaatan ompA sebagai bahan utama vaksin harapannya dapat mencegah pengikatan bakteri Shigella dengan sel hospes, sehingga bakteri tidak dapat masuk ke dalam mukosa usus lebih dalam dan mencegah penghasilan shigatoksin. Selain itu penelitian ini untuk mengidentifikasi in vivo komponen T-sel menggunakan 57 kDa fraksi utama antigenik Shigella dysenteriae 1 (IPC-31) protein membran luar A (ompA) dalam respon bagian T-sel modulasi spesifik terhadap Shigellosis.

1.2 Rumusan Masalah

1. Bagaimanakah peningkatan IgG yang optimal pada tes serologi dengan pemberian Outer Membrane Protein A hasil isolasi dari bakteri Shigella dysentriae pada model Mencit (Mus musculus) strain Balb/c?

3

2. Apakah manifestasi klinik Shigellosis dapat dicegah melalui pemberian Outer Membrane Protein A hasil isolasi dari bakteri Shigella dysentriae pada model Mencit (Mus musculus) strain Balb/c?

1.3 Tujuan

Umum:

Memperoleh bukti bahwa Outer Membrane Protein A hasil isolasi dari bakteri Shigella dysentriae dapat bermanfaat dalam peningkatan respon antibodi spesifik (IgG) sebagai vaksin Shigellosis pada model Mencit (Mus musculus) strain Balb/c.

Khusus: 1. Mengetahui peningkatan respon antibodi spesifik terhadap IgG pada

model Mencit (Mus musculus) strain Balb/c yang diinduksi Outer Membrane Protein A (ompA) sebagai vaksin Shigellosis.

2. Mengetahui kemampuan Outer Membrane Protein A (ompA) hasil isolasi bakteri Shigella dysentriae terhadap manifestasi klinik dari Shigellosis.

1.4 Luaran yang Diharapkan

Luaran yang diharapkan berupa artikel ilmiah, jurnal yang terakreditasi, dan produk yang paten.

1.5 Kegunaan

Manfaat Keilmuan:

Dapat dijadikan sebagai dasar teori untuk menambah wawasan ilmu pengetahuan sekaligus sebagai dasar untuk pengembangan penelitian selanjutnya dalam bidang kesehatan, khususnya tentang pencegahan Shigellosis menggunakan vaksinasi

Manfaat Aplikatif:

Dapat dijadikan sebagai bahan pertimbangan perusahaan industri obat untuk menciptakan suatu alternatif baru dalam pencegahan terhadap Shigellosis, khususnya vaksin Shigellosis menggunakan Outer Membrane Protein A (ompA) hasil isolasi bakteri Shigella dysentriae.

BAB II

Tinjauan Pustaka

2.1 Shigella dysentriaeCiri-ciri fisik Shigella dysentriae adalah kecil, uncapsulated, non - motil,

basil Gram-negatif (berbentuk batang). Shigella dysentriae tidak membentuk spora. Habitat Shigella dysentriae ditemukan di seluruh dunia tetapi berkonsentrasi di daerah-daerah yang penduduknya terlalu padat dan kekurangan gizi serta tidak memiliki pengelolaan limbah yang memadai dan pasokan air

4

minum yang aman. Shigella dysentriae menyebabkan disentri endemik di Afrika, Asia Tenggara, dan India. Manusia adalah satu-satunya host alami untuk Shigella dysentriae, meskipun lalat dapat berfungsi sebagai vektor untuk transmisi Shigella dysentriae (Niyogi, 2005).

Shigella adalah bakteri Gram -negatif yang menyebabkan disentri basiler atau juga dikenal sebagai shigellosis. Shigellosis adalah infeksi enterik akut invasif sering ditandai oleh sakit perut , demam dan diare berdarah (disentri). Dalam klasifikasi sebelumnya, Shigella dan Escherichia coli diklasifikasikan dalam yang sama genus karena kesamaan genetik mereka (Wang et al., 2002). Namun, strain Shigella diletakkan di genus berbeda dari E. coli karena signifikansi, host manusia medis mereka interaksi, patogenisitas, fisiologi (kegagalan untuk memfermentasi laktosa atau mengalami dekarboksilasilisin) dan serologi karakteristik (Kweon, 2008). Shigellosis masih merupakan masalah kesehatan umum dan serius di seluruh dunia (Kimura et al, 2004). Shigella dysenteriae serotipe 1, juga dikenal sebagai Shiga bacillus telah diakui sebagai penyebab utama epidemi disentri (Faruque et al, 2002). Spesies Shigella dibagi lagi menjadi serotipe berdasarkan antigen-O komponen lipopolisakarida yang terdapat pada membran luar dari dinding sel. Shigella dysenteriae terdiri dari 13 serotipe (Faruque et al, 2002).

2.2 Patologi ShigellosisShigella dysenteriae tipe 1 menghasilkan gejala penyakit berat kolektif

yang disebut Shigellosis. Gejala Shigellosis termasuk diare dan disentri, bersama dengan sering tinja berdarah berlendir dan kram perut. Shigella dysenteriae penyebab disentri dengan menyerang mukosa kolon. Organisme mengalikan dalam sel epitel kolon, menyebabkan kematian sel, dan menyebar lateral untuk menginfeksi dan membunuh sel-sel epitel yang berdekatan. Infeksi Shigella dysenteriae menyebabkan ulserasi mukosa, peradangan dan perdarahan (Niyogi, 2005). Dalam kasus paling serius, Shigellosis dapat menyebabkan gagal ginjal akut, yang disebut sindrom uremik hemolitik (HUS), dan juga dapat menyebabkan kelainan SSP (Cherla, 2013).

Toksin Shiga bertanggung jawab untuk sebagian besar patologi Shigellosis. Toksin Shiga meliputi neurotoksik, sitotoksik, dan enterotoxic. Efek Enterotoxic dari toksin Shiga berikatan dengan reseptor pada sel epitel usus dan blok penyerapan (uptake) dari elektrolit dan nutrisi dari lumen usus. Enterotoxicity ini menyebabkan diare, disentri, dehidrasi, kehilangan elektrolit, dan penyerapan nutrisi terganggu (Niyogi, 2005).

Selain itu, sitotoksik merusak kapiler usus dengan membunuh sel-sel pembuluh darah. Sitotoksik juga memicu reaksi inflamasi neutrofil dalam usus, menyebabkan kerusakan lebih lanjut pada lapisan epitel. Sitotoksik juga mampu melintasi lapisan epitel usus dan memasuki aliran darah. Setelah dalam aliran darah, sitotoksik menempel pada neutrofil beredar dan menyerang sel - jenis yang berbeda, khususnya, sel glomerulus di ginjal dan neuron SSP, menyebabkan kegagalan ginjal dan kelainan SSP (Cherla, 2013).

Efek sitotoksik mengikat glikolipid sel inang di usus besar, yang memungkinkan domain A1 toksin masuk ke dalam sel melalui endositosis reseptor-mediated dan menyebabkan inaktivasi ireversibel dari subunit ribosom 60S, sintesis protein sehingga menghambat. Kematian sel sel usus dan usus

5

endotel hasil sel. Kerusakan pada pembuluh darah usus yang disebabkan oleh kematian sel pada sel endotel menyebabkan perdarahan (Niyogi, 2005). Ada juga bukti bahwa Sitotoksik dapat memicu jalur apoptosis pada sel yang terinfeksi, mempromosikan kematian sel besar di instestines (Cherla, 2013).

Efek neurotoksik berhubungan dengan demam dan kram perut (Niyogi, 2005). Kelainan SSP juga dapat terjadi dan termasuk kelesuan, disorientasi, kejang, kelumpuhan dan koma. Neurotoksisitas terjadi paling sering pada anak-anak dan orang tua (Cherla, 2013).

2.3 Sistem Imun

Sistem imun merupakan salah satu sistem pertahanan yang penting untuk melindungi tubuh manusia dari penyakit. Sistem imun innate adalah sistem pertahanan tubuh pertama yang mengawali suatu respon tubuh terhadap benda asing atau mikroba yang masuk ke dalam tubuh. Fungsi sistem ini adalah untuk menghalangi masuknya mikroba. Komponen yang menjadi perisai depan pada respon imun innate adalah fagosit, limfosit khusus yaitu sel NK (natural killer)dan protein pada sistem komplemen. Mekanisme kerjanya hanya bereaksi dan mengenali mikroba infektif dan bukan normal flora tubuh manusia. Selanjutnya sistem imun adaptif dibagi menjadi dua yaitu imunitas humoral dan imun yang dimediasi sel. Keduanya dimediasi oleh sel dan molekul yang berbeda dan didesain untuk menyediakan pertahanan terhadap mikroba secara extraselular dan intraselular (Abbas,2004).

Imunitas humoral melibatkan antibodi yang dihasilkan setelah paparan antigen dari mikroba. Dimana imunitas yang dimediasi sel mengaktivasi makrofag untuk membunuh mikroba secara ektraselulardan membunuh sel yang terinfeksi serta mengeliminasi reservoir infeksi secara intraselular. Benda asing yang memasuki tubuh atau disebut juga antigen akan dikenali oleh MHC kelas 2 (macrofag) yang ada di dalam tubuh kita. Lalu dengan proses fagositosis antigen diuraikan lalu sebagian dari antigen akan di ekspresikan keluar sel disebut Antigen Presenting Cell (APC). Lalu TH2 (CD4+) mengikuti APC dan membawa ekspresi gen menuju limfonodul untuk dikenali oleh T sel memori untuk pembentukan antibodi sehingga jika ada eksposur antigen yang sama maka CD8+ yang merupukan diferensiasi dari CD4+ yang mampu menjadi efektor melisiskan antigen dengan lebih cepat (Abbas,2004).

2.4 Outer Membrane Protein A

Outer Membrane Protein A (ompA) pada Shigella dysenteriae telah digunakan untuk membangun "vektor ekspresi permukaan" untuk gen asing: gen asing dimasukkan ke dalam gen ompA dan protein fusi yang dihasilkan diekspresikan pada permukaan sel oleh organisme. Gen asing yang berfusi membangun gen-ompA. Outer Membrane Protein A (ompA) dapat digunakan sebagai sistem vektor untuk protein asing pada permukaan bakteri. Sistem ini telah diuji dengan pengkodean gen beta-galaktosidase, kaki dan mulut penyakit virus (FMDV), antigen malaria, influenza danhemaglutinin. Dalam setiap kasus ini, produk gen yang berhasil dikirim ke permukaan sel bakteri (Hobom, 1995). Dalam perkembangannya, antigen permukaan atau Outer Membrane Protein A

6

(ompA) pada Shigella digunakan untuk mengaktifkan limfosit T dan limfosit B untuk menginduksi respon antigen-spesifik dalam Shigellosis (Zwadyk, 1992).

2.5 Prinsip Vaksinasi

Vaksin dapat didefinisikan sebagai keseluruhan atau sebagian mikroorganisme yang diberikan untuk mencegah timbulnya penyakit infeksi. Vaksin dapat terdiri atas seluruh mikroorganisme yang inaktif, beberapa bagian dari organisme, kapsul polisakarida terkonjugasi oleh protein karier, mikroorganisme yang dilemahkan, dan toxoid (Kliegman et al., 2007).

Vaksin dapat mengandung berbagai variasi kandungan selain antigen utama untuk vaksin. Suspending fluid dapat berupa air steril atau saline tetapi dapat berupa cairan yang kompleks yang mengandung beberapa protein dan kandungan lain yang dapat berasal dari sistem biologis yang digunakan untuk pertumbuhan immunobiologik. Preservative, stabilizer, danantimicrobial agent digunakan untuk menghambat pertumbuhan bakteri dan untuk mencegah degradasi dari antigen. Komponen tersebut dapat berupa gelatin, 2-phonoxyethanol, dan agen antimikrobial yang spesifik. Adjuvan digunakan dalam berbagai vaksin untuk menambah respon imun (Kliegman et al., 2007).

Vaksin dapat menginduksi imunitas melalui stimulasi dari pembentukan antibodi, imunitas seluler, maupun stimulasi keduanya. Perlindungan yang diinduksi oleh kebanyakan vaksin diyakini dimediasi secara primer oleh limfosit B, yang menghasilkan antibodi. Antibodi tersebut dapat menginaktivasi toksin, menetralkan virus dan mencegah penempelan ke reseptor seluler, memfasilitasi fagositosis dan pembunuhan bakteri, berinteraksi oleh komplemen untuk melisiskan bakteri, dan mencegah adhesi bakteri ke permukaan mukosa (Kliegman et al., 2007).

Kebanyakan respon limfosit B membutuhkan bantuan dari limfosit T, CD-4 sel helper. Limfosit T tersebut akan menginduksi antibodi dalam jumlah banyak, dimulai dari IgM secara primer sampai IgG yang persisten dalam waktu lama, dan menginduksi memori. Vaksin limfosit T dependen yang merupakan turunan protein dapat menginduksi respon imun secara baik, baik pada bayi yang baru lahir. Secara kontras, antigen polisakarida dapat menginduksi limfosit B tanpa bantuan dari limfosit T. Vaksin limfosit T independent tersebut hanya menghasilkan respon imun yang lemah pada anak-anak kurang dari dua tahun, imunitas jangka pendek, dan tidak adanya dari respon booster pada paparan ulangan antigen. Untuk mengatasi masalah tersebut, polisakarida harus dikonjugasi, atau digabungkan secara kovalen kepada protein karier, mengubah vaksin tersebut menjadi vaksin limfosit T dependen. Vaksin terkonjugasi dapat menginduksi antibodi lebih banyak, sel memori dapat memberikan respon booster pada paparan ulangan antigen, dan imunitas jangka panjang (Kliegman et al., 2007).

7

BAB III

Metode Penelitian

3.1 Rancangan Penelitian

Penelitian ini menggunakan desain eksperimen murni (true experimental design) di laboratorium secara in vivo menggunakan rancangan Randomized Post Test Only Controlled Group Design.Desain penelitian tersajikan dalam gambar 1 (terlampir).

3.2 Variabel Penelitian

- Variabel bebas dalam penelitian ini adalah pemberian omp A hasil isolasi Shigella dysentriae yang dibagi dalam kelompok:

1. Kelompok 1 (kontrol negative): Mencit (Mus musculus) galur Balb/c dengan kondisi sehat

2. Kelompok 2 (kelompok kontrol positif): Mencit (Mus musculus) galur Balb/c yang dikondisikan Shigellosis tanpa diberikan vaksinasi

3. Kelompok 3 (P1): Mencit (Mus musculus) galur Balb/c yang diberikan ompA 50ul/kgBB dan dikondisikan Shigellosis



- Variabel tergantung dalam penelitian ini adalah: (a) kadar IgG; (b) keadaan feses masing-masing kelompok perlakuan

3.3 Objek dan Sampel

Sampel penelitian menggunakan model Mencit (Mus musculus) galur Balb/c yang kemudian diberikan perlakuan. Perhitungan besarnya pengulangan pada sampeladalah sebagai berikut (Federer, 1993):

(t-1) (r-1) ≥ 15 t : jumlah perlakuan, r : jumlah ulangan Pada penelitian ini t = 5 sehingga jumlah pengulangan adalah: (5-1) (r-1) ≥ 15 r-1 ≥ 15:4 r = 3.75 + 1 = 4.75 Dibesarkan menjadi 5 pengulangan 3.4 Tempat Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biomedik, Laboratorium Mikrobiologi, Laboratorium Faal, dan Laboratorium Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang.

3.5 Definisi Operasional

1. Hewan coba: hewan coba yang digunakan dalam penelitian ini adalah Mencit (Mus musculus) galur Balb/c jantan berusia 1,5 bulan. Pemilihan

8

waktu paruh yang diperlukan agar IgG pada mencit mencapai tingkat yang tinggi dan stabil lebih cepat dibandingkan hewan coba lainnya.

2. Pengondisian Shigellosis: Hewan coba yang diberikan perlakuan dikondisikan terkena Shigellosis dengan cara menginduksi Shigella dysentriae 108 cfu/ml. Penanda hewan coba telah terinfeksi Shigellosis dengan ditemukannya lendir, darah dan pus pada feses.

3. Shigella dysentriae: termasuk bakteri gram negative yang dapat menginfeksi manusia dan primata lainnya seperti mencit, mencit, kelinci dan lainnya. Salah satu penyakit yang disebabkan oleh Shigella dysentriae adalah Shigellosis.

4. ompA: merupakan protein sebagai sistem vektor untuk protein asing pada permukaan bakteriCFA dan IFA: digunakan sebagai adjuvant vaksin untuk meningkatkan imunitas. Adjuvant CFA dan IFA ditambahkan pada ompA dengan perbandingan 1:1 pada booster pertama, kedua dan ketiga.

5. IgG: Merupakan merupakan salah satu jenis immunoglobulin sebagai bentuk dari antibody. IgG memiliki komposis tertinggi dalam antibody dan mengaktifkan sel darah putih untuk menentang serangan kuman serta bacteria.

3.6 Alat dan Bahan Penelitian

1. Perawatan Mencit (Mus musculus) galur Balb/cBak plastik berukuran 30 cm x 20 cm x 14,5 cm 25 buah, tutup kandang terbuat dari kawat 25 buah, botol air 25 buah, sekam.

2. Isolasi Shigella dysentriaeSterile cotton pledget, 2 ml prereduced anaerobically sterilized Ringer solution, TSBV media, vortex mixer, biochemical test kit, gliserol, dan anaerobic jar.

3. Kultur Shigella dysentriaeTryptic Soy Agar 40.0 g, Tripton Soy Broth 40.0 g, Brain Heart Infussion 40.0 g, Distilled Water 1000.0 ml.

4. Ekstraksi ompAProtein marker, aquadest, dan alat elektroforesis.

5. Adjuvant CFA dan IFASyringe 1 ml, alcohol, kapas, CFA dan IFA

6. Pengondisian ShigellosisAlat sonde, falcon.

7. Pengambilan DarahSyringe 3 ml, alkohol, dan kapas, ependorf.

8. Pengecekan IgGELISA KIT, ependorf, falcon, mikropippet, tissue.

3.7 Prosedur Penelitian

a. Kultur Shigella dysentriaeKoloni Shigella dysentriae diambil sedikit pada media BAP (Blood Agar Plate) dan ditanam kembali pada media MSA (Manitol Salt Agar), diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam, dan diambil kembali dari media BAP (Blood

9

Agar Plate) pada koloni yang sama dan dikultur pada media penyubur BHI, inkubasi pada suhu 37°C, selama 12-18 jam.

b. Isolasi protein ompA dari Shigella dysentriaeModifikasi yang dilakukan adalah pada bagian sampel yang digunakan yaitu endapan pellet pada putaran terakhir dan tidak dilakukan kolom kromatografi. Pelet disuspensikan dengan PBS pH 7,4 sampai volumenya mencapai 5 kali, kemudian ditambahkan n-octyl-β-Dglucopyranoside (NOG) sehingga konsentrasinya mencapai 0,05 %. Kemudian dilakukan homogenisasi dengan vorteks dengan menggunakan kecepatan penuh selama 1 menit.Setelah selesai melakukan homogenisasi maka dikerjakan sentrifugasi dengan kecepatan 12000 rpm. Pada suhu 4 0C selama 15 menit. Pada bagian endapannya dilakukan isolasi bagian outer membran dengan cara yang sama seperti langkah-langkah tersebut diatas. Monitoring bobot molekul dikerjakan menggunakan SDS-PAGE. Sampel yang telah diencerkan dengan PBS diambil sebanyak 500 ml dipanaskan 100 0C selama 5 menit dalam 500 ml larutan penyangga yang mengandung 5 mM Tris HCl pH 6,8 , 2-mercapto ethanol 5%, w/v sodium dodecyl sulfate 2.5%, v/v glyserol 10% dengan warna pelacak bromophenol blue. Dipilih mini slab gel 12,5% dengan tracking gel 4%.Voltase yang digunakan 125 mV. Bahan pewarna yang digunakan adalah coomassie brilliant blue. Digunakan molekul standard sigma range marker untuk mengetahui berat molekul dari antigen yang akan digunakan.

c. Ekstraksi ompAProtein dari Shigella dysentriae yang diperoleh dilkukan elektroforesis untuk mendapatkan ompA yang nantinya digunakan sebagai bahan aktif vaksin Shigellosis. Gel dipotong lurus pada bobot molekul yang diinginkan dan potongan pita tersebut dikumpulkan dan dimasukkan dalam tabung membran dialisa memakai cairan penyangga elektroforesis running buffer. Selanjutnya dilakukan elektroelusi menggunakan elektroforesis horisontal apparatus aliran 125 mV selama 25 menit. Hasil elektroforesis dilakukan dialisa dengan cairan penyangga PBS dan PH 7,4 selama 2 X 24 jam @ 2 liter dan diganti 3 kali.

d. Penambahan AdjuvantSediaan adjuvant CFA (Complete Freud Adjuvant) dan IFA(Incomplete Freud Adjuvant) siap digunakan dalam suspense cair tanpa memerlukan proses persiapan sebelumnya. Alasan memilih CFA dan IFA pada pembuatan vaksin ini mempertimbangkan peningkatan IgG sehingga pembentukan antibodi dapat dipercepat.Campur adjuvant dengan ompA dari Shigella dysentriae dengan perbandingan 1:1.Campur dengan vortexing.

e. BoosterVaksin diinjeksikan secara intra peritoneal (i.p).Kelompok Perlakuan 1 mendapatkan ompA 6,25cc/KgBB; Kelompok Perlakuan 2 mendapatkan ompA 12,5cc /KgBB; Kelompok Perlakuan 3 mendapatkan ompA 25cc/KgBB.

f. Pengondisian ShigellosisHewan coba yang telah divaksinasi dikondisikan terkena Shigellosis dengan cara menginduksi hewan coba dengan Shigella dysentriae 108cfu/ml.

g. Pengambilan DarahDarah mencit masing-masing kelompok diambil sebanyak + 1 cc melalui organ jantung pada minggu terakhir.

10

h. Pengecekkan IgGProses pertama adalah Coating antigen yaitu menambahkan antigen ke dalam wadah uji. Tutup plate dan diinkubasi 24 jam dalam suhu 24o C. antigen yang telah diinkubasi dikeluarkan dari wadah uji (wells). Selanjutnya dicuci dua kali dengan larutan Buffer PBST dan dikocok selama 5 menit setiap pencuciannya. Lalu larutan buffer dalam wells dikeluarkan. Tambahkan blocking buffer untuk memblok pada wells yang kosong. Selanjutnya dilakukan inkubasi selama 1 jam dalam suhu 24 oC. Kemudian dibaca dengan menggunakan elisa reader untuk mengetahui kadar IgG dari masing-masing kelompok.

i. Prosedur Pengumpulan dan Analisa DataData yang diambil berupa data-data hasil pengukuran IgG mencit dan pengamatan keadaan feses hewan coba.Analisis yang dilakukan adalah uji normalitas dan uji varian. Jika sebaran data normal dan varian data sama (p>0,05) maka digunakan uji hipotesis one way anova. Namun, jika tidak sama (p<0,05) digunakan uji Kruskal Wallis. Selanjutnya, dilakukan uji Post Hoc tukey sebagai lanjutan one way anova dan Mann Whitney sebagai uji lanjutan Kruskal Wallis untuk menentukan perbedaan yang bermakna dalam tiap kelompok. Perbedaan tiap kelompok dinilai bermakna atau signifikan apabila nilai p<0,05. Uji statistik dicek dengan SPSS 16.

BAB IV

BIAYA DAN JADWAL KEGIATAN

4.1 Anggaran Biaya

Jenis Pengeluaran Biaya (Rp)

1 Peralatan penunjang, ditulis sesuai kebutuhan

Rp 4.040.000,00

2 Bahan habis pakai, ditulis sesuai dengan kebutuhan

Rp 8.150.000,00

3 Perjalanan Rp 0,00

4 Lain-lain : Laporan Rp 150.000,00

Jumlah Rp 12.340.000,00

4.2 Jadwal Kegiatan Program

No Kegiatan Bulan 1 Bulan 2 Bulan 3 Bulan 41 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4

Tahap Persiapan1. Mengurus ethical

clearance

11

2. Mengurus perijinan laboratorium

3. Belanja alat dan bahan penelitian

Isolasi dan Kultur Shigella dysentriae1. Isolasi dan kultur

bakteri 2. Isolasi Protein

ompA3. Ekstraksi ompA4. Pemotongan band

ompAPembuatan Vaksin Shigellosis1. Pembuatan Vaksin

ShigellosisTahap Pelaksanaan 1. Pemberian

vaksinasi2. Booster 3. Induksi S.

dysentriae4. Pengambilan Darah 5. Pengujian IgG6. Pengamatan fesesTahap Penyelesaian1. Analisa2. Penyusunan

Laporan Akhir

Daftar Pustaka

Abbas, Abul K., Andrew H. Lichtman. 2004. “Basic Immunology” Philadelphia.Elsevier : 3;5

Cherla, R.; Lee, S.; Vernon, T. “Shiga toxins and apoptosis.” FEMS microbiology letters. 2003. volume 228. p.159 –66. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=pubmed&cmd=Retrieve&dopt=AbstractPlus&list_uids=14638419&query_hl=4&itool=pubmed_docsum Diakeses 10 Oktober 2013

Faruque SM, Khan R, Kamruzzaman M, Yamasaki S, Ahmad QS, Azim T, Nair GB, Takeda Y, Sack DA 2002. Isolation of Shigella dysenteriae type 1 and S. flexneri strains from surface waters in Bangladesh: comparative molecular analysis of environmental Shigella isolates versus clinical strains. Appl Environ Microbiol 68: 3908-3913.

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=pubmed&cmd=Retrieve&dopt=AbstractPlus&list_uids=14638419&query_hl=4&itool=pubmed_docsum



12

Federer, Walter T. 1993.“Statistical Design and Analysis for Intercropping Experiment vol II: Three or More Crops”. New York: Biometrics Unit Cornell University.

Hobom, G; Arnold, N Ruppert, A. “OmpA fusion proteins for presentation of foreign antigens on the bacterial outer membrane.” Developments in Biological Standardization. 1995. volume 84. p. 255-62. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=pubmed&cmd=Retrieve&dopt=AbstractPlus&list_uids=7796962&query_hl=4&itool=pubmed_docsum. Diakses 9 Oktober 2013

Kemenkes RI, 2011. Morbiditas dan Mortalitas Diare pada Balita di Indonesia tahun 2000-2007.Buletin Jendela Data dan Informasi Kesehatan. Jakarta: Kementerian Kesehatan Republik Indonesia

Kimura AC, Johnson K, Palumbo MS, Hopkins J, Boase JC, Reporter R, Goldoft M, Stefonek KR, Farrar JA, Van Gilder TJ, Vugia DJ (2004) Multistate shigellosis outbreak and commercially prepared food, United States. Emerging Infectious Diseases 10(6):1147–1149

Kliegman, R.M., Behrman, R.E., Jenson, et al. 2007. Nelson Textbook of Pediatric (18th Edition). New York: Saunders.

Kweon M (2008) Shigellosis: The current status of vaccine development. Current Opinion in Infectious Diseases 21:313–318

Nair, G.B., Thandavarayan R., Mihir K.B., Triveni K., Sandipan G., Dhira R.S., Krishnan R., Byomkesh M., Mrinmoy G., Keinosuke O., Yoshifumi T. 2010. Emerging trends in the etiology of enteric pathogens as evidenced from an active surveillance of hospitalized diarrhoeal patients in Kolkata, India. http://www.gutpathogens.com/content/2/1/4Diakses 10 Oktober 2013

Niyogi, S. “Shigellosis” The journal of microbiology. 2005. volume 43. p. 133 –43. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=pubmed&cmd=Retrieve&dopt=AbstractPlus&list_uids=15880088&query_hl=4&itool=pubmed_docsum Diakses 10 Oktober 2013

Wang H, Feng E, Lin Y, Xiang L, Jin M, Huang L, Su G, Huang C (2002) Construction of a trivalent candidate vaccine against Shigella species with DNA recombination. Science in China (Series C) 45(1):10–20

World Health Organization.2012.“Initiative For Vaccine Research, Diarrhoeal Disease







13

s”.http://www.who.int/vaccine_research/diseases/soa_parasitic/en/index1.html. Diakses 10 Oktober 2013.

Zwadyk P., 1992. Enterobacteriaceae: Salmonella and Shigella, Intestinal Pathogen, in Zinsser Microbiology 20th Ed. Appleton and Lange: USA.

Lampiran 1. Kerangka Konsep dan Rancangan Penelitian

Kerangka Konsep.

Bagan 1. Kerangka Konsep

Rancangan Penelitian

Diare

Bakteri Virus Protozoa

Shigella dysentriae

Shigellosis

Medikamentosa Usaha PreventifVaksinasi

Protein omp A

Outer Membran

Shigella dysentriae

Medikamentosa dan Vaksin Rotavirus

Medikamentosa

Kultur Shigella dysentriae

Mencit galu Balb/c berusia 1,5 bulanPembuatan Vaksin Shigellosis

Isolasi Protein ompA pada Shigella dysentriae

Ekstraksi protein ompA

http://www.who.int/vaccine_research/diseases/soa_parasitic/en/index1.html

http://www.who.int/vaccine_research/diseases/soa_parasitic/en/index1.html

14

Bagan 2. Rancangan Penelitian

Evaluasi dan pengamatan feses hewan coba

Penginduksian Shigella dysentry

ompA

200ul/ Kg BB

ompA

50ul/ Kg BB

ompA

100ul/ Kg BB

Perlakuan 3

Perlakuan 2

Perlakuan 1

Control +Control -

Analisa data Akhir

Booster (3 kali booster)

Pengambilan darah dan Pengukuran kadar IgG dengan metode ELISA

15

Lampiran 2 Biodata Penulis

Biodata KetuaA. Identitas Diri1 Nama Lengkap Dwi Fitria Rahayuningwati

2 Jenis Kelamin Perempuan

3 Program Studi Farmasi

4 NIM 115070501111006

5 Tempat/Tanggal Lahir Malang, 18 Maret 1993

6 E-mail [email protected]

7 Nomor Telepon/HP 081333843820

B. Riwayat PendidikanSD SMP SMA Kuliah

Nama Institusi SDN Bareng 3 Malang

SMPN 1 Malang

SMAN 4 Malang

Universitas Brawijaya

Jurusan - - IPA Farmasi

Tahun Masuk - Lulus

1999-2005 2005-2008 2008-2011 2011-sekarang

C. Pemakalah Seminar Ilmiah (Oral Presentation)No. Nama Pertemuan

Ilmiah/SeminarJudul Artikel Ilmiah Waktu dan

Tempat

1. - - -

D. Penghargaan dalam 10 tahun Terakhir (dari pemerintah, asosiasi atau institusi lainnya)No. Jenis Penghargaan Judul Artikel Ilmiah Tahun

1. Finalis PIMNAS XXVI Mataram. AMOEVAX: Vaksin Amoebiasis Yang Disebabkan

2012

16

Oleh Entamoeba histolytica Dengan Menggunakan Protein Lec A Spesifik Yang Terdapat Pada Biofilm Staphylococcus aureus

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapatdipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila di kemudian hari ternyata dijumpai ketidaksesuaiandengan kenyataan, saya sanggup menerima sanksi.Demikian biodata ini saya buat dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu persyaratann dalam pengajuan Hibah PKM Penelitian

Malang, 21 Oktober 2013Pengusul,

. Biodata AnggotaA. Identitas Diri1 Nama Lengkap Dewangga Primananda Susanto

2 Jenis Kelamin Laki-Laki

3 Program Studi Pendidikan Dokter

4 NIM 105070103121008

5 Tempat/Tanggal Lahir Sukabumi, 27 Maret 1992




Nama Institusi SD Mardi yuana

SMPIT Al-Kahfi

SMA PU Albayan


Jurusan - - IPA Pendidikan Dokter

Tahun Masuk - Lulus

2001-2006 2006-2008 2008-2010 2010-sekarang

mailto:[email protected]

17



Tempat

1. - Rekayasa DNA Salmonella typhii dengan Zat Tanin Meniran (Phylanthus niruri) sebagai Inhibitor DNA Polimerase Virus Hepatitis B (2010)

- HEPAREGS (Hepar Regenerated by Stem Cells): Pengembangan Terapi Regeneratif sebagai Alternatif Transplantasi pada Penyakit Sirosis Hepar Menggunakan Ekstrak Oats (Avena sativa L.) (2012)


1. Medali Emas PIMNAS XXVI HEPAREGS (Hepar Regenerated by Stem Cells): Pengembangan Terapi Regeneratif sebagai Alternatif Transplantasi pada Penyakit Sirosis Hepar Menggunakan Ekstrak Oats (Avena sativa L.)

2012



18

Biodata AnggotaA. Identitas Diri1 Nama Lengkap Ivan Bintang Pratama

2 Jenis Kelamin Laki-Laki

3 Program Studi Pendidikan Dokter

4 NIM 115070107121003

5 Tempat/Tanggal Lahir Jakarta, 14 Juli 1992


7 Nomor Telepon/HP 08 1333107913


Nama Institusi SDI Tunas Karya III

SMPI Al-Azhar Kelapa Gading

SMAI Al-Azhar Kelapa

Gading


Jurusan - - IPA Pend. Dokter

Tahun Masuk - Lulus

1998-2004 2004-2007 2007-2010 2011 – sekarang



Tempat

1. - - -


1. Finalis PIMNAS XXVI Mataram. AMOEVAX: Vaksin Amoebiasis Yang Disebabkan

2012


19

Oleh Entamoeba histolytica Dengan Menggunakan Protein Lec A Spesifik Yang Terdapat Pada Biofilm Staphylococcus aureus



.

Biodata AnggotaA. Identitas Diri1 Nama Lengkap Erlin Aditia Purmitasari



4 NIM 125070507111015

5 Tempat/Tanggal Lahir Malang, 11 Agustus 1994




Nama Institusi SD Negeri Klojen 2 Malang

SMP Negeri 5 Malang

SMK Farmasi Yayasan Pharmasi Semarang

Univeritas Brawijaya

Jurusan - - - Farmasi


20

Tahun Masuk – Lulus

2000-2006 2006-2009 2009-2012 2012-sekarang



Tempat

1. -


1. - - -



Ttd.

(Erlin Aditia Purmitasari)Biodata AnggotaA. Identitas Diri1 Nama Lengkap Novia Putri Kusumaningtyas



4 NIM 125070500111008

5 Tempat/Tanggal Lahir Trenggalek, 06 November 2013




21


Nama Institusi SDN 3 Surodakan, Trenggalek

SMPN 1 Trenggalek

SMAN 1 Trenggalek


Jurusan - - IPA Farmasi

Tahun Masuk – Lulus

2001-2006 2006-2009 2009-2012 2012-sekarang



Tempat

1. -


1.



Ttd.

(Novia Putri Kusumaningtyas)

22

Lampiran 3. Justifikasi Anggaran Biaya1. Peralatan penunjang

Material Justifikasi Pemakaian

Kuantitas Harga Satuan (Rp)

Keterangan

Mencit Sampel 25 ekor Rp 15.000 Rp 375.000

Sewa Kandang -Tempat Perawatan hewan

Perawatan hewan coba

25 buah Rp 20.000 Rp 500.000

Botol minum dan tempat makan


25 buah Rp 5000 Rp 125.000

Kultur Shigella dysentriae

Shigella dysentriae

sebagai objek penelitian

Rp 500.000 Rp 500.000

Isolasi – sds page-purifikasi

Isolasi – sds page-purifikasi

Sebagai prosedur

penunjang

Rp 2.500.000 Rp 2.500.000

Elisa reader Pengecekan IgG Rp 40.000 Rp 40.000

Subtotal (Rp) Rp 4.040.000

2. Bahan Habis PakaiMaterial Justifikasi

PemakaianKuantitas Harga

Satuan (Rp)Keterangan

Makanan hewan coba


2 karung Rp 250.000 Rp 500.000

Sekam Perawatan hewan coba

4 karung Rp 5.000 Rp 20.000

NOG Isolasi-sds page purifikasi

1 pack Rp 1.500.000 Rp 1.500.000

CFA Adjuvant 3 cc Rp 200.000 Rp 600.000

IFA Adjuvant 3 cc Rp 100.000 Rp 300.000

23

Kloroform Pengambilan darah

Rp 50.000

Falcon Pengambilan darah

50 buah Rp 1.000 Rp50.000

ELISA KIT for IgG Test

Pemeriksaan IgG 1 pack (96 wells)

Rp 5.000.000 Rp 5.000.000

Syringe 1 ml Lain-lain 1 pack Rp 80.000

Handscoen Lain-lain 1 pack Rp 50.000

Subtotal (Rp) Rp 8.150.000

3. PerjalananMaterial Justifikasi

PemakaianKuantitas Harga Satuan

(Rp)Keterangan

- - - Rp 0,00 Rp 0,00

Subtotal (Rp) Rp 0,00

4. Lain-lain Material Justifikasi

PemakaianKuantitas Harga Satuan

(Rp)Keterangan

Fotokopi, kertas A4,alat tulis

Administrasi Rp 150.000

Subtotal (Rp) Rp 150.000

Total Anggaran Biaya Rp 12.340.000,00

Lampiran 4.Sususan Organisasi Tim Peneliti dan Pembagian Tugas

No.

Nama / NIM Program Studi / Bidang Ilmu

Alokasi Waktu

Uraian Tugas

1 Dwi Fitria R.

115070501111006

Farmasi / Kesehatan

14 minggu

- Menyampaikan info dari dosen, rektorat maupun lembaga

- Laboratory Work

24

- Reminder anggota lain

2 Dewangga Primananda Susanto

1050710103121008

Pend. Dokter / Kesehatan

14 minggu

Laboratory Work, Desain presentasi

3 Ivan Bintang Pratama

115070107121003

Pend. Dokter / Kesehatan

14 minggu

Laboratory Work, Bendahara dan Presentator

4 Erlin Aditia

125070507111015

Farmasi / Kesehatan

14 minggu

Administrasi dan Laboratory Work

5 Novia Putri K.

125070500111008

Farmasi / Kesehatan

14 minggu

Laboratory Work, Membuat Logbook

25

Lampiran 5. Surat Pernyataan Ketua Peneliti/Pelaksana

(bismillah upload)pkm-p-13-ub-dwi fitria r-shilovacc vaksin shigellosis (salinan berkonflik erlin...

Documents