1. 1. Anis Susilo 4411411056 Deasy Amalia Wulandari 4411411058 SPEKTrOFOTOMETeR Biology Non Education Second Group Semarang State University
2. 2. Spektrofotometer Spektrofotometer adalah alat untuk mengukur transmitan atau absorban suatu sampel sebagai fungsi panjang gelombang. Spektrofotometri UV-Vis merupakan gabungan antara spektrofotometri UV dan Visible. Alat ini menggunakan dua buah sumber cahaya yang berbeda, yaitu sumber cahaya UV dan sumber cahaya Visible.
3. 3. spektrofotometer Spektrofotometer spektrometer + fotometer Spektrometer menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang gelombang tertentu Fotometer alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau diabsorpsikan Spektrofotometer untuk mengukur energi secara relatif jika energi tersebut ditransmisikan, direfleksikan atau diemisikan.
4. 4. Spektrofotometer UV Vis Zat yang dapat dianalisis dengan spektrofotometri UV-Vis yaitu zat dalam bentuk larutan dan zat yang tampak berwarna maupun berwarna. Spektrofotometer UV-Vis merupakan spektrofotometer berkas ganda, dimana blanko dan sampel dimasukan atau disinari secara bersamaan
5. 5. Prinsip kerja Spektrofotometri uv-vis mengacu pada hukum Lambert-Beer. Apabila cahaya monokromatik melalui suatu media (larutan), maka sebagian cahaya tersebut akan diserap, sebagian dipantulkan dan sebagian lagi akan dipancarkan. Sinar dari sumber cahaya akan dibagi menjadi dua berkas oleh cermin yang berputar pada bagian dalam spektrofotometer. Berkas pertama akan melewati kuvet berisi blanko, sementara berkas kedua akan melewati kuvet berisi sampel.
6. 6. Gambar Skematis Spektrofotometer
7. 7. Prinsip Spektrometri Larutan sampel dikenai radiasi elektromagnetik, sehingga menyerap energi / radiasi terjadi interaksi antara radiasi elektromagnetik dengan materi (atom/molekul) Jumlah intensitas radiasi yang diserap oleh larutan sampel dikonversi dengan konsentrasi analit data kuantitatif
8. 8. Spektrometri Berdasarkan jenis materi yang berinteraksi dengan radiasi elektromagnetik, dibagi : Spektrometri molekul radiasi elektromagnetik berinteraksi dengan molekul Contoh : NMR, IR, UV-Vis, XRD Spektrometri atom radiasi elektromagnetik berinteraksi dengan atom Contoh : AAS, AFS
9. 9. A = abc A : absorbance Hukum Lambert Beer hubungan linear antara absorbansi dengan konsentrasi zat yang diserap Dasar pengukuran Spektrofotometer c konsentrasi sampel dalam (mol/L) a is molar absorptivity dalam L/[(mole)(cm)] b : panjang kuvet dalam cm Diameter kuvet atau tempat sampel = jarak cahaya yang melalui sampel yang diserap
10. 10. warna yang teramati Warna yang diserap Panjang gelombang Green Red 700 nm Blue-green Orange-red 600 nm Violet Yellow 550 nm Red-violet Yellow-green 530 nm Red Green 500 nm Orange Blue 450 nm Yellow Violet 400 nm
11. 11. Penyimpangan Hk Lambert-Beer Larutan pekat pada konsentrasi larutan yang terlalu pekat, Absorbansi yang terbaca terlalu tinggi, sehingga grafik tidak linear Larutan yang diukur harus encer faktor instrumentasi sinar yang diserap tidak monokromatis menyebabkan 2 panjang gelombang maksimum Faktor kimia karena terjadinya reaksi disosiasi, asosiasi, polimerisasi, solvolisis Jika terjadi reaksi konsentrasi zat yang akan diukur berkurang
12. 12. sumber cahaya monokromator sel sampel detektor read out (pembaca).
13. 13. Spektrofotometer
14. 14. Spektrofotometer Sumber cahaya (Lampu) : memancarkan semua warna cahaya (yaitu, cahaya putih). Monokromator : memilih satu panjang gelombang dan panjang gelombang yang dikirimkan melalui sampel. Detektor : mendeteksi panjang gelombang cahaya yang telah melewati sampel. Amplifier : meningkatkan sinyal sehingga lebih mudah untuk baca terhadap kebisingan latar belakang.
15. 15. Komponen : lampu Lampu Spektrofotometer UV 1. Lampu Gas hidrogen 2. Lampu Merkuri Spektrofotometer Visible Lampu Tungsen / lampu wolfram UV-VIS menggunakan photodiode yang telah dilengkapi monokromator.
16. 16. Komponen : monokromator Cahaya Semua cahaya Cahaya polikromatik
17. 17. Komponen : monokromator Monokromator memilih cahaya monokromatik Cahaya satu warna Cahaya merah yang diserap oleh larutan hijau
18. 18. Komponen Monokromator Prisma : mendispersikan radiasi elektromagnetik Kisi Difraksi : menghasilkan penyebaran dispersi sinar secara merata Celah optis : mengarahkan sinar monokromatis yang diharapkan dari sumber radiasi Filter : menyerap warna komplementer sehingga cahaya yang diteruskan merupakan cahaya berwarna
19. 19. Komponen Spektrofotometer Kompartemen sampel Kompartemen ini digunakan sebagai tempat diletakkannya kuvet. Detektor berfungsi menangkap cahaya yang diteruskan dari sampel dan mengubahnya menjadi arus listrik. Read out merupakan suatu sistem baca yang menangkap besarnya isyarat listrik yang berasal dari detektor
20. 20. Komponen : sample cells Sample cells (kuvet) Spektrofotometer UV Quartz (crystalline silica) Spektrofotometer Visible Glass
21. 21. Tombol Pengatur panjang gelombang Penunjuk panjang gelombang Penunjuk serapan & % transmittance Tombol pengatur cahaya (A=0, T=100%) Tempat sample Tombol on/off Keterangan Alat
22. 22. Cara Kerja Spektrofotometer Spectronic 20 + Putar tombol on ke kanan. Biarkan 15 menit untuk memanaskan alat. Atur tombol sampai menunjukkan angka 0 pada petunjuk %T. Putar tombol pengatur gelombang untuk memilih panjang gelombang yang sesuai. Memasukkan kuvet yang berisi paling sedikit 3 ml akuadest ke dalam tempat sampel (sebelum memasukkan kuvet, pastikan bahwa kuvet dalam keadaan kering). Tutup penutup tempat sampel. Putar tombol pengatur cahaya sehingga %T menunjukkan angka 100 / A menunjukkan angka 0. Angkat kuvet yang berisi aquadest dari tempat sampel. Ganti isi kuvet dengan larutan blanko, baca serapannya. Ganti larutan blanko dalam kuvet dengan larutan standar atau larutan uji. Baca serapannya.
23. 23. Struktur kimia dan absorpsi UV Larutan yang dapat dianalisis dengan spektrofotometer UV senyawa yang mempunyai gugus kromofor Gugus kromofor : gugus molekul yang mengandung sistem elektronik yang dapat menyerap energi pada daerah UV
24. 24. Larutan yang dapat dianalisis dengan spektrofotometer visible senyawa yang berwarna Contoh : KMnO4 Apabila senyawa tersebut tidak berwarna, maka perlu ditambahkan pengompleks yang dapat membentuk warna Contoh : analisis logam Pb Struktur kimia dan absorpsi Visible
25. 25. Cara Perawatan dan Penyimpanan Alat 1. Sebelum digunakan, biarkan mesin warming-up selama 15-20 menit. 2. Spektrofotometer sebisa mungkin tidak terpapar sinar matahari langsung, karena cahaya dari matahari akan dapat mengganggu pengukuran. 3. Simpan spektrofotometer di dalam ruangan yang suhunya stabil dan diatas meja yang permanen. 4. Pastikan kompartemen sampel bersih dari bekas sampel. 5. Saat memasukkan kuvet, pastikan kuvet kering. 6. Lakukan kalibrasi panjang gelombang dan absorban secara teratur.
26. 26. Kelebihan Spektrofotometer 1. Penggunaannya luas. Dapat digunakan untuk senyawa organic, anorganik dan biokimia yang diabsorbsi pada daerah ultraviolet maupun daerah tampak 2. Sensitivitasnya tinggi. Batas deteksi untuk mengabsorbsi dapat diperpanjang menjadi 10-6 sampai 10-7 M 3. Selektivitasnya tinggi 4. Ketelitiannya baik 5. Pengukurannya mudah, dengan kinerja yang cepat
27. 27. Suwun Hebak