bioaktivitas minyak atsiri rimpang lengkuas merah...
TRANSCRIPT
BIOAKTIVITAS MINYAK ATSIRI RIMPANG LENGKUAS MERAH
Alpinia purpurata K. SCHUM TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI
Bacillus cereus DAN Pseudomonas aeruginosa
YULINAR
H411 09291
JURUSAN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS HASANUDDIN
MAKASSAR
2013
i
BIOAKTIVITAS MINYAK ATSIRI RIMPANG LENGKUAS MERAH
Alpinia purpurata K. SCHUM TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI
Bacillus cereus DAN Pseudomonas aeruginosa
YULINAR
H411 09291
Skripsi ini dibuat untuk Melengkapi Tugas Akhir dan Memenuhi Syarat untuk
Memperoleh Gelar Sarjana Sains Pada Jurusan Biologi
JURUSAN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS HASANUDDIN
MAKASSAR
2013
ii
LEMBAR PENGESAHAN
BIOAKTIVITAS MINYAK ATSIRI RIMPANG LENGKUAS MERAH
Alpinia purpurata K. SCHUM TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI
Bacillus cereus DAN Pseudomonas aeruginosa
Disetujui Oleh :
Pembimbing Utama Pembimbing Pertama
Prof. Dr. Hj. Dirayah R. Husain, DEA Drs. Asadi Abdullah, M.Si
Nip. 19600525 198601 2 001 Nip. 19620303 198903 1 007
iii
KATA PENGANTAR
Alhamdulillah, segala puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah
SWT. atas segala rahmat, hidayah dan karuniaNya, sehingga penulis dapat
menyelesaikan skripsi yang berjudul “Bioaktivitas Minyak Atsiri Rimpang
Lengkuas Merah Alpinia purpurata K. Schum Terhadap Pertumbuhan Bakteri
Bacillus cereus dan Pseudomonas aeruginosa“. Shalawat serta salam senantiasa
tercurahkan kepada Nabi besar Muhammad SAW. Yang diutus untuk membawa
rahmat bagi seluruh alam. Juga untuk keluarga dan sahabat beliau yang dirahmati
oleh Allah SWT.
Penyelesaian skripsi ini tidak terlepas dari bantuan dan peran dari berbagai
pihak, baik berupa bantuan moral maupun material. Pada kesempatan ini, penulis
ingin mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada ayahanda (Alm.
Abd. Rajab) dan ibunda (Nurbia) tercinta, kakakku tercinta (Juniarti, A.Md),
adikku tersayang (Rahmat Hidayat), serta seluruh keluarga atas segala kasih
sayang, do’a, nasehat, dukungan, dan bimbingan yang tak henti-hentinya
diberikan kepada penulis.
Rasa terima kasih penulis sampaikan kepada ibu Prof. Dr. Hj. Dirayah R.
Husain, DEA selaku pembimbing utama dan Bapak Drs. Asadi Abdullah, M.Si
selaku pembimbing pertama atas segala perhatian, dorongan, arahan dan
bimbingan kepada penulis selama pelaksanaan penelitian dan penyusunan skripsi
iv
ini, serta ibu Dra. Eva Johannes, M.Si selaku penasehat akademik yang selalu
memberikan arahan dan bimbingan kepada penulis selama masa kuliah hingga
penulisan skripsi ini. Selanjutnya, penulis mengucapkan terima kasih kepada:
- Bapak Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas
Hasanuddin beserta para staf.
- Ketua Jurusan Biologi beserta staf dosen dan pegawai jurusan Biologi Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Hasanuddin.
- Tim penguji skripsi Dr. Zohrah Hasyim, M.Si, Dr. Elis Tambaru, M.Si, Dr.
Irma Andriani, S.Pi, M.Si, dan Drs. Muh. Ruslan Umar, M.Si yang telah
memberikan kritik dan saran kepada penulis dalam menyempurnakan
kesalahan-kesalahan dalam penulisan skripsi ini.
- Bapak Markus selaku laboran di Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas
Kedokteran, Universitas Hasanuddin. Terima kasih atas segala bimbingan dan
bantuannya selama pelaksanaan penelitian.
- Ibu Rahmayani beserta keluarga. Terima kasih atas dukungan dan bantuannya
selama ini.
- Teman-teman Bi09enesis. Terima kasih atas segala dukungan, bantuan,
kerjasama, kebersamaan serta kekeluargaan yang telah tercipta diantara kita.
- Saudara-saudariku Jurusan Biologi dan Keluarga Mahasiswa Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Terima kasih atas doa dan
dukungannya selama ini.
- Pihak-pihak lain yang tidak dapat disebutkan satu per satu atas semangat dan
dukungannya.
v
Penulis menyadari masih terdapat kekurangan dalam penyusunan skripsi ini,
untuk itu penulis sangat mengharapkan kritik dan saran yang membangun demi
kesempurnaan skripsi. Semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat dalam
rangka pembelajaran bagi penulis pada khususnya dan pembaca pada umumnya.
Makassar, 2013
Penulis
vi
ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui bioaktivitas dan efektivitas
antibakteri minyak atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum
dalam menghambat pertumbuhan bakteri Bacillus cereus dan Pseudomonas
aeruginosa. Minyak atsiri diperoleh dengan destilasi uap. Pengujian daya hambat
dilakukan dengan metode difusi agar dan menggunakan berbagai variasi
konsentrasi (10%, 20%, 40% dan 80%) yang dibandingkan dengan ciprofloxacin
sebagai kontrol positif dan DMSO (Dimetil Sulfoksida) sebagai kontrol negatif
dengan masa inkubasi 2x24 jam. Hasil pengujian menunjukkan bahwa minyak
atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum efektif dalam
menghambat pertumbuhan bakteri Bacillus cereus dan Pseudomonas aeruginosa
dengan daya hambatan yang efektif pada konsentrasi 20% yakni 18,5-17,2 mm
untuk Bacillus cereus dan 18,7-19,3 mm untuk Pseudomonas aeruginosa.
Kata kunci: Bioaktivitas, rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum,
minyak atsiri, antibakteri.
vii
ABSTRACT
The aims of this research were to determine the bioactivity and effectivity of
essential oils antibacterial from rhizome of Alpinia purpurata K. schum, in
inhibiting the growth of bacteria Bacillus cereus and Pseudomonas aeruginosa.
Essential oils obtained by steam distillation. The inhibition test did by agar
diffusion method and using various concentration (10%, 20%, 40% and 80%) that
compared with ciprofloxacin as a positive control and DMSO (dimethyl
sulfoxide) as a negative control with incubation period of 2x24 hours. The test
result showed that the essential oils from rhizome of Alpinia purpurata K. Schum
effective in inhibiting the growth of bacteria Bacillus cereus and Pseudomonas
aeruginosa with resistance power effective in concentration of 20% which is 18,5-
17,2 mm for Bacillus cereus and 18,7-19,3 mm to Pseudomonas aeruginosa.
Keywords: Bioactivity, rhizome of Alpinia purpurata K. schum, essential oils,
antibacterial.
viii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ...................................................................................... i
LEMBAR PENGESAHAN ........................................................................... ii
KATA PENGANTAR .................................................................................... iii
ABSTRAK ...................................................................................................... vi
ABSTRACT..... ............................................................................................... vii
DAFTAR ISI ................................................................................................... viii
DAFTAR TABEL .......................................................................................... xi
DAFTAR GAMBAR ...................................................................................... xii
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................. xiv
BAB I PENDAHULUAN ............................................................................... 1
I.1 Latar Belakang .................................................................................. 1
I.2 Tujuan Penelitian ............................................................................... 3
I.3 Manfaat Penelitian ............................................................................. 3
I.4 Waktu dan Tempat Penelitian ........................................................... 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .................................................................... 4
II.1 Gambaran Umum Lengkuas Merah Alpinia purpurata K.
Schum ............................................................................................ 4
II.1.1 Deskripsi Tanaman .............................................................. 4
II.1.2 Klasifikasi ............................................................................ 6
II.1.3 Nama Daerah dan Nama Asing ........................................... 7
II.1.4 Habitat dan Persebaran ........................................................ 8
II.1.5 Kandungan dan Manfaat ...................................................... 8
II.2 Ekstraksi ........................................................................................... 10
II.2.1 Defenisi ................................................................................ 10
II.2.2 Tujuan .................................................................................. 10
II.2.3 Metode Ekstraksi ................................................................. 10
II.2.3.1 Destilasi Uap Air ..................................................... 10
II.2.3.2 Maserasi .................................................................. 12
ix
II.2.3.3 Soxhletasi ................................................................... 12
II.3 Uji Daya Hambat Antimikroba ........................................................ 13
II.3.1 Antimikroba ......................................................................... 13
II.3.2 Mekanisme Kerja Antimikroba ........................................... 14
II.3.3 Metode Uji Aktivitas Antimikroba ...................................... 17
II.4 Gambaran Umum Bakteri Bacillus cereus....................................... 20
II.4.1 Klasifikasi ............................................................................ 20
II.4.2 Deskripsi Bacillus cereus .................................................... 21
II.5 Gambaran Umum Bakteri Pseudomonas aeruginosa ...................... 22
II.5.1 Klasifikasi ............................................................................ 22
II.5.2 Deskripsi Pseudomonas aeruginosa .................................... 23
BAB III METODE PENELITIAN ............................................................... 25
III.1 Alat ................................................................................................. 25
III.2 Bahan .............................................................................................. 25
III.3 Metode kerja ................................................................................... 26
III.3.1 Pengambilan Sampel .......................................................... 26
III.3.2 Pengolahan Sampel ............................................................ 26
III.3.3 Destilasi Bahan ................................................................... 26
III.3.4 Variasi Konsentrasi Bahan ................................................. 27
III.3.5 Sterilisasi Alat .................................................................... 27
III.3.6 Pembuatan Medium Pertumbuhan Bakteri Uji .................. 28
III.3.6.1 Pembuatan Medium NA (Nutrient Agar) .............. 28
III.3.6.2 Pembuatan Medium MHA (Muller Hinton
Agar).................................................................... 28
III.3.7 Penyiapan Bakteri Uji ........................................................ 28
III.3.7.1 Peremajaan Bakteri Uji .......................................... 28
III.3.7.2 Pembuatan Suspensi Bakteri Uji ........................... 29
III.3.8 Penyiapan Larutan Pembanding ......................................... 29
III.3.9 Uji Daya Hambat ................................................................ 29
III.3.10 Pengukuran Diameter Daerah Hambatan ......................... 30
III.3.11 Analisis Data .................................................................... 30
x
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................... 31
IV.1 Bioaktivitas Minyak Atsiri Rimpang Lengkuas Merah Alpinia
purpurata K. Schum Terhadap Bakteri Bacillus cereus dan
Pseudomonas aeruginosa .............................................................. 32
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ......................................................... 44
V.1 Kesimpulan ...................................................................................... 44
V.2 Saran ................................................................................................ 44
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 45
LAMPIRAN .................................................................................................... 49
xi
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
1. Hasil analisis kimiawi dari berbagai jenis lengkuas .................................... 9
2. Diameter zona hambat minyak atsiri rimpang lengkuas Merah
Alpinia purpurata K. Schum pada bakteri Bacillus cereus dengan masa
inkubasi 24 jam hingga 48 jam .................................................................... 34
3. Diameter zona hambat minyak atsiri rimpang lengkuas Merah
Alpinia purpurata K. Schum pada bakteri Pseudomonas aeruginosa
dengan masa inkubasi 24 jam hingga 48 jam .............................................. 38
xii
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1. Habitus Lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum ............................ 5
2. Rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum ........................... 6
3. Alat destilasi .............................................................................................. 11
4. Proses penyaringan simplisia .................................................................... 12
5. Alat sokhlet ............................................................................................... 13
6. Penghambatan sintesis dinding sel oleh antimikroba ............................... 14
7. Mekanisme antibiotik dalam menghambat sintesis protein ...................... 16
8. Tempat kerja dari masing-masing golongan antibiotik ............................ 16
9. Teknik dilusi ............................................................................................. 17
10. Difusi dengan Metode Kirby Bauer dan hasil uji daya hambat yang
memperlihatkan adanya zona hambatan yang terbentuk .......................... 18
11. Hasil uji daya hambat dengan metode Pour Plate .................................... 20
12. Bacillus cereus yang diamati di bawah mikroskop elektron..................... 22
13. Morfologi Pseudomonas aeruginosa yang diamati di bawah
mikroskop elektron dengan pembesaran 14.500 ....................................... 23
14. Rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum yang telah
diolah dan minyak atsiri dalam berbagai variasi konsentrasi ................... 31
15. Hasil uji daya hambat minyak atsiri rimpang Lengkuas Merah Alpinia
purpurata K. Schum terhadap bakteri Bacillus cereus dengan masa
inkubasi 24 dan 48 jam ............................................................................. 33
16. Histogram perbandingan hasil pengukuran rata-rata diameter
hambatan (mm) minyak atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia
purpurata K. Schum terhadap Bacillus cereus dengan masa inkubasi
24 jam dan 48 jam ..................................................................................... 36
xiii
17. Hasil uji daya hambat minyak atsiri rimpang Lengkuas Merah Alpinia
purpurata K. Schum terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa
dengan masa inkubasi 24 dan 48 jam........................................................ 37
18. Histogram perbandingan hasil pengukuran rata-rata diameter
hambatan (mm) minyak atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia
purpurata K. Schum terhadap Pseudomonas aeruginosa dengan masa
inkubasi 24 jam dan 48 jam ...................................................................... 40
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
A. Skema Kerja Penelitian ............................................................................... 49
B. Skema Penyiapan Bahan Rimpang Lengkuas Merah Alpinia purpurata
K. Schum untuk Ekstraksi ........................................................................... 50
C. Skema Destilasi Rimpang Lengkuas Merah Alpinia purpurata K.
Schum .......................................................................................................... 51
D. Skema Pembuatan Variasi Konsentrasi ....................................................... 52
E. Skema Pembuatan Medium ......................................................................... 53
F. Skema Pembuatan Suspensi Bakteri Uji ..................................................... 54
G. Skema Uji Daya Hambat ............................................................................. 55
1
BAB I
PENDAHULUAN
I.1 Latar Belakang
Indonesia merupakan negara yang memiliki keanekaragaman hayati yang
dapat diolah menjadi berbagai macam obat. Sumber daya alam yang dimiliki telah
memberikan manfaat dalam kehidupan sehari-hari disamping sebagai bahan
makanan, juga dimanfaatkan sebagai obat-obatan herbal (Parwata dan Dewi,
2008).
Tingkat resistensi mikroorganisme terhadap antibiotik semakin meningkat.
Untuk mengatasi resistesi yang terjadi maka perlu dilakukan penelitian untuk
menemukan senyawa-senyawa baru dari hasil metabolisme sekunder tumbuhan
(Bhunia dan Amal, 2012). Menurut Kainsa dan Reena (2012), tumbuhan sering
dimanfaatkan sebagai obat herbal karena dapat mengurangi efek samping yang
ditinggalkan dan mudah didapatkan. Salah satu tanaman yang dapat digunakan
sebagai bahan obat-obatan herbal adalah lengkuas merah Alpinia purpurata K.
Schum (Itokawa dan Takeya, 1993).
Bagian tanaman dari lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum yang
sering digunakan adalah rimpang. Rimpang lengkuas mengandung minyak atsiri
yang terdiri dari metilsinamat, sineol, kamfer, δ-pinen, galangin, dan eugenol.
Rimpang lengkuas juga mengandung kamfor, galangol, seskuiterpen dan kristal
kuning (Hembing dan Wijayakusuma, 2001). Selain itu, rimpang lengkuas merah
Alpinia purpurata K. Schum mengandung senyawa flavonoid, kaempferol-3-
2
rutinoside dan kaempferol-3-oliucronide (Victorio et al., 2009). Itokawa dan
Takeya (1993) menjelaskan bahwa tanaman lengkuas mengandung golongan
senyawa flavonoid, fenol dan terpenoid yang dapat digunakan sebagai bahan dasar
obat-obatan modern. Rimpang lengkuas merah Alpinia purpurat K. Schum dapat
digunakan untuk mengobati masuk angin, diare, gangguan perut, penyakit kulit,
radang telinga, bronkhitis, dan pereda kejang (Soenanto dan Sri, 2009).
Penelitian yang dilakukan oleh Sukandar et al. (2009) membuktikan
bahwa pada konsentrasi 20% minyak atsiri dari rimpang lengkuas merah Alpinia
purpurat K. Schum dapat menghambat aktivitas bakteri Bacillus cereus dan
Pseudomonas aeruginosa dengan diameter zona hambat sebesar 17,6 mm. Dari
hasil analisa minyak atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum
menunjukkan bahwa senyawa yang berperan penting sebagai antibakteri adalah
sineol, similiaritas, dan dodekatriena.
Berdasarkan uraian di atas, maka dibutuhkan penelitian lebih lanjut
tentang aktivitas antibakteri dari minyak atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia
purpurata K. Schum. Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan untuk menguji
kemampuan minyak atsiri dari rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K.
Schum terhadap pertumbuhan bakteri Bacillus cereus penyebab kebusukan
makanan dan diare, serta Pseudomonas aeruginosa penyebab infeksi pada luka,
meningitis, infeksi saluran kemih, dan penyakit nosokomial.
3
I.2 Tujuan Penelitian
Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk :
1. Mengetahui bioaktivitas minyak atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia
purpurata K. Schum dalam menghambat pertumbuhan bakteri Bacillus cereus
dan Pseudomonas aeruginosa yang ditunjukkan oleh pembentukan zona
bening pada media pertumbuhan bakteri uji yang digunakan.
2. Mengetahui efektivitas antibakteri minyak atsiri rimpang lengkuas merah
Alpinia purpurata K. Schum terhadap pertumbuhan bakteri Bacillus cereus dan
Pseudomonas aeruginosa.
I.3 Manfaat Penelitian
Manfaat penelitian ini yaitu dapat memberikan informasi tentang khasiat
lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum dalam menghambat pertumbuhan
bakteri patogen Bacillus cereus yang dapat menyebabkan kebusukan makanan dan
diare, serta Pseudomonas aeruginosa yang dapat menyebabkan infeksi pada luka,
meningitis, infeksi saluran kemih dan penyakit nosokomial.
I.4 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Januari – April 2013. Pengambilan
sampel rimpang Lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum di Desa Tamasaju,
Kecamatan Galesong Utara, Kabupaten Takalar, Sulawesi Selatan. Analisis
kandungan minyak atsiri rimpang Lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum
dilakukan di Balai Besar Laboratorium Kesahatan Makassar. Pengujian terhadap
bakteri Bacillus cereus dan Pseudomonas aeruginosa di Laboratorium
Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Hasanuddin, Makassar.
4
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
II.1 Gambaran Umum Lengkuas Merah Alpinia purpurata K. Schum
II.1.1 Deskripsi Tanaman
Lengkuas merupakan tanaman menahun, berbatang basah (herbaceus),
tinggi sekitar 1 sampai 2 meter, bahkan dapat mencapai 3,5 meter. Biasanya
tumbuh dalam rumpun yang rapat. Batangnya tegak, tersusun oleh pelepah-
pelepah daun yang bersatu membentuk batang semu, berwarna hijau agak keputih-
putihan. Batang muda keluar sebagai tunas dari pangkal batang tua. Daun tunggal,
berwarna hijau, bertangkai pendek, tersusun berseling. Bentuk daun lanset
memanjang, ujung runcing, pangkal tumpul, dengan tepi daun rata. Pertulangan
daun menyirip. Panjang daun sekitar 25 - 50 cm, dan lebarnya 7 – 15 cm
(Hembing dan Wijayakusuma, 2001).
Bunga majemuk, berbentuk tandan. Kelopak bunga berbentuk lonceng,
warnanya putih kehijauan. Mahkota bunga yang masih kuncup pada bagian
ujungnya berwarna putih, sedangkan bagian bawah berwarna hijau. Buah dari
tanaman lengkuas seperti buah buni, berbentuk bulat, keras. Sewaktu masih muda
berwarna hijau-kuning, setelah tua berubah menjadi hitam kecoklatan dengan
diameter lebih kurang 1 cm (Hembing dan Wijayakusuma, 2001). Rimpang
lengkuas bentuknya besar dan tebal, berdaging, berbentuk silindris dengan
diameter sekitar 2-4 cm, dan bercabang-cabang. Bagian luar berwarna coklat agak
kemerahan atau kuning pucat mempunyai sisik-sisik berwarna putih atau
5
kemerahan, keras mengkilap, sedangkan bagian dalamnya berwarna putih. Daging
rimpang yang sudah tua memiliki serat yang kasar. Rasanya tajam pedas,
menggigit, dan berbau harum karena kandungan minyak atsirinya (Sukandar et
al., 2009).
Menurut Wardana et al., (2002), lengkuas dibedakan menjadi 2
berdasarkan warna rimpangnya yaitu lengkuas berimpang putih dan berimpang
merah. Lengkuas berimpang putih mempunyai batang semu setinggi 3 m,
diameter batang 2,5 cm, dan diameter rimpang 3 – 4 cm. Sedangkan lengkuas
merah Alpinia purpurata K. Schum (Gambar 1) memiliki batang semu berukuran
tinggi 1 – 1,5 m, diameter batang 1 cm, dan diameter rimpang 2 cm. Rimpang
lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum dapat dilihat pada (Gambar 2).
Lengkuas putih sering dimanfaatkan sebagai penyedap masakan. Sedangkan
lengkuas merah lebih sering digunakan sebagai obat herbal (Hembing dan
Wijayakusuma, 2001).
Gambar 1. Habitus Lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum (Yulinar, 2012)
6
Gambar 2. Rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum (Yulinar, 2012)
II.1.2 Klasifikasi
Menurut Tjitrosoepomo (1994), sistematika lengkuas merah Alpinia
purpurata K. Schum adalah sebagai berikut:
Regnum : Plantae
Divisio : Spermatophyta
Sub Divisio : Angiospermae
Classis : Monocotyledoneae
Ordo : Zingiberales
Familia : Zingiberaceae
Genus : Alpinia
Species : Alpinia purpurata K. Schum
7
II.1.3 Nama Daerah dan Nama Asing
Menurut Hembing dan Wijayakusuma (2001); Sinaga (2000), nama daerah
dan nama asing dari A. Purpurata K. Schum adalah sebagai berikut:
Nama Daerah
Sumatra : langkueueh (Aceh), lengkues (Gayo), kelawas atau halawas
(Batak), lakuwe (Nias), lengkuas atau langkuwas (Melayu),
langkuweh (minangkabau), lawas (Lampung).
Jawa : laja (Sunda), laos (Jawa).
Kalimantan : langkuwas (Banjar).
Nusa Tenggara : kalawasan, laja, lahwas, isem (Bali), langkuwas (pulau Roti).
Sulawesi : laja, langkuwasa (Makassar), aliku (Bugis), lingkuwas(Manado),
lingkuboto (Gorontalo), ringkuwas, lingkoas (Minahasa).
Maluku : lawase, lakwase, kourola (Seram), galiasa (Halmahera, Ternate),
laawasi, lawasi, lakuwase (Ambon), languase (Buru), lauwasel
(Saparua).
Nama Asing
Grote galanga (Belanda), Galanga de inde (Perancis), Groser galgant
(Jerman), Greater galangan, Java galangal, Siamese ginger atau Galangal
(Inggris), Khulanyan (Arab), Kong deng (Kamboja), Langkuas atau palia
(Filipina), Padagoji (Burma), Kulayan (Urdu India), Lengkuas atau Puar
(Malaysia), Padagoji (Burma), Kom deng atau Pras (Kamboja), Kha (Laos,
Thailand) dan Hong dou ku (Cina).
8
II.1.4 Habitat dan Persebaran
Lengkuas diduga berasal dari Cina dan sekarang tersebar luas di berbagai
daerah di Asia tropis, antara lain Indonesia, Malaysia, Filipina, Cina bagian
selatan, Hongkong, India, Bangladesh, dan Suriname. Di Indonesia, mula-mula
banyak ditemukan tumbuh di daerah Jawa tengah, tetapi sekarang sudah di budi-
dayakan di berbagai daerah (Sinaga, 2000). Umumnya tanaman ini tumbuh baik di
tanah yang subur, gembur, banyak mengandung humus dan tidak tergenang air.
Tumbuh di daerah dataran rendah sampai ketinggian 1.200 meter dpl (dari
permukaan laut) (Hembing dan Wijayakusuma, 2001).
II.1.5 Kandungan dan Manfaat
Rimpang lengkuas mengandung karbohidrat, lemak, sedikit protein,
mineral (K, P, Na), komponen minyak atsiri, dan berbagai komponen lain yang
susunannya belum diketahui. Rimpang lengkuas segar mengandung air sebesar 75
%, dalam bentuk kering mengandung 22.44 % karbohidrat, 3.07 % protein dan
sekitar 0.07 % senyawa kamferid (Darwis et al. 1991).
Hasil analisis minyak atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K.
Schum menunjukkan bahwa senyawa yang berperan penting sebagai antibakteri
adalah sineol 12,64%, similiaritas 98% dan dodekatriena 12,86% (Sukandar et al.,
2009). Menurut Rosyidah (2009), A. purpurata juga banyak mengandung
senyawa metabolit sekunder diantaranya flavonoid, fenilpropanoid, piron, stilben
dan diarilheptanoid. Sedangkan menurut Yuharmen et al. (2002), rimpang
lengkuas mengandung golongan senyawa flavonoid, fenol, dan terpenoid yang
memiliki khasiat sebagai antijamur dan antibakteri. Salah satu sifat biologis utama
9
flavonoid yaitu sebagai antimikroba dan berperan sebagai senyawa pelindung
terhadap penyakit yang disebabkan oleh mikroorganisme seperti jamur bakteri
dan virus (Kochuthressia et al. 2010).
Lengkuas yang efektif sebagai antimikroba adalah lengkuas pada umur
yang masih muda dibandingkan dengan rimpang lengkuas yang sudah tua. Daya
antimikroba yang tinggi pada lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum yang
berumur muda dapat disebabkan karena kandungan senyawa bioaktif yang relatif
berbeda baik dari segi kuantitas maupun kualitas. Adapun perbedaan komponen
yang terdapat pada berbagai jenis lengkuas tersebut dapat dilihat pada Tabel 1.
Sebagai berikut (Robinson, 1995).
Tabel 1. Hasil analisis kimiawi dari berbagai jenis lengkuas (Robinson, 1995)
Kandungan Pada Bahan
Jenis
Lengkuas Merah Lengkuas
Putih
Berumur Tua Muda Tua
Kadar air 7,90 6,67 6,52
Kadar abu 11,63 7,74 8,20
Kadar abu yang tidak larut asam 4,15 3,01 4,07
Kadar komponen yang larut air 1,13 0,29 0,58
Kadar komponen yang larut etanol 4,48 2,79 4,50
Kadar minyak atsiri 0,22 0,15 0,13
Kadar pati 35,77 32,45 32,71
Kadar lemak 5,38 3,39 3,22
Kadar protein 7,22 6,10 3,82
Kadar serat kasar 35,20 37,94 36,28
Manfaat lengkuas telah banyak digunakan oleh industri farmasi sebagai
bahan pembuatan obat modern. Khasiat lengkuas bisa dibuktikan secara medis
melalui tes laboratorium dan tidak mengandung senyawa atau unsur yang
berbahaya bagi manusia. Sehingga aman dikonsumsi oleh semua anggota
keluarga. Rimpang lengkuas merah biasa digunakan untuk mengobati ejakulasi
10
dini, keputihan, masuk angin, diare, gangguan perut (kembung, mulas), penyakit
kulit (eksim, kurap), radang telinga, bronkhitis, pereda kejang dan dapat
digunakan sebagai obat kuat (Hembing dan Wijayakusuma, 2001).
II.2 Ekstraksi
II.2.1 Defenisi
Menurut Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan (1986),
Ekstraksi berasal dari bahasa latin extraction yang diturunkan dari kata kerja
extrahare berarti menarik keluar. Ekstraksi adalah penyarian zat-zat berkhasiat
atau zat-zat aktif dari berbagai tanaman obat, hewan atau beberapa jenis ikan
dengan menggunakan metode dan pelarut tertentu.
II.2.2 Tujuan
Tujuan ekstraksi adalah untuk menarik semua komponen kimia yang
terdapat dalam simplisia. Ekstraksi ini didasarkan pada perpindahan massa
komponen zat padat ke dalam pelarut dimana perpindahan mulai terjadi pada
lapisan antar muka, kemudian berdifusi masuk ke dalam pelarut
(Handa et al. 2008).
II.2.3 Metode Ekstraksi
Beberapa metode ekstraksi yang umum digunakan dalam memperoleh
senyawa dari hasil metabolik sekunder tumbuhan, antara lain (Handa et al. 2008):
II.2.3.1 Destilasi Uap Air
Destilasi uap merupakan ekstraksi zat kandungan menguap dari bahan
dengan uap air berdasarkan peristiwa tekanan parsial zat kandungan menguap
dengan fase uap air dari ketel secara kontinyu sampai sempurna dan diakhiri
11
dengan kondensasi fase uap campuran menjadi destilat air bersama kandungan
yang memisah sempurna atau sebagian. Proses destilasi dapat dilihat pada
(Gambar 3).
Destilasi uap air dipertimbangkan untuk menyaring serbuk simplisia yang
mengandung komponen yang mempunyai titik didih tinggi pada tekanan normal.
Pada pemanasan biasanya akan terjadi kerusakan zat aktifnya. Untuk mencegah
hal tersebut maka penyaringan dilakukan dengan destiliasi.
Destilasi uap adalah istilah yang secara umum digunakan untuk destilasi
campuran air dengan senyawa yang tidak larut dalam air. Cara mengalirkan uap
air ke dalam campuran, sehingga bagian yang dapat menguap berubah menjadi
uap pada temperatur yang lebih rendah dari pada dengan pemanasan langsung.
Gambar 3. Alat destilasi (Yulinar, 2012)
12
II.2.3.2 Maserasi
Maserasi merupakan cara penyaringan sederhana yang dilakukan dengan
merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari selama beberapa hari pada
temperatur kamar dan terlindung dari cahaya. Maserasi umumnya digunakan
untuk bahan alam yang segar. Dalam proses ini, tanaman yang akan diekstraksi
ditempatkan dalam wadah dan dibiarkan pada suhu kamar untuk jangka waktu
minimal 3 hari dengan agitasi atau pengadukan sering dilakukan sampai materi
larut. Campuran kemudian disaring dan semua cairan digabung kemudian
dievaporasi dan diuapkan. Pada (Gambar 4) dapat dilihat proses penyaringan
simplisia.
Gambar 4. Proses penyaringan simplisia (Puspita, 2011)
II.2.3.3 Soxhletasi
Soxhletasi merupakan ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru,
umumnya dilakukan menggunakan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi konstan
dengan adanya pendingin balik (kondensor). Ekstraksi dengan cara ini pada
13
dasarnya adalah penyarian berkesinambungan secara dingin. Alat sokhlet dapat
dilihat pada (Gambar 5).
Gambar 5. Alat sokhlet (Lansida, 2012)
II.3 Uji Daya Hambat Antimikroba
II.3.1 Antimikroba
Menurut Pelczar dan Chan (1988), antimikroba merupakan suatu senyawa
yang dapat mengganggu pertumbuhan dan metabolisme mikroba. Suatu senyawa
antimikroba yang ideal harus memiliki toksisitas selektif yang berarti obat
berbahaya bagi parasit tetapi tidak membahayakan inang.
Berdasarkan aktivitasnya, antimikroba dibedakan menjadi 2 jenis, yaitu
(Ganiswara, 1995):
1. Bakteriostatik
Senyawa antimikroba yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri namun,
jika pemberian senyawa ini dihentikan atau habis, maka pertumbuhan dan
14
perbanyakan dari bakteri akan kembali meningkat. Contohnya Penisilin,
Aminoglikosid, Sefalosporin, Kotrimoksasol, Isoniasid, dan Vankomisin.
2. Bakteriosida
Senyawa antimikroba yang mampu membunuh dan menghentikan aktivitas
fisiologis dari bakteri, meskipun pemberian senyawa tersebut dihentikan.
Contohnya Tetrasiklin, Asam fusidat, Kloramfenikol, Linkomisin, Eritromisin
(kadar rendah) dan klindamisin.
II.3.2 Mekanisme Kerja Antimikroba
Mekanisme kerja dari antimikroba, antara lain (Pelczar dan Chan, 1988):
1. Merusak dinding sel
Antimikroba dapat menghambat sintesis atau menghambat aktivitas enzim
yang dapat merusak dinding sel mikroorganisme (Gambar 6). Kerusakan
dinding sel juga dapat terjadi dengan cara mengubahnya setelah selesai
terbentuk. Contohnya penisilin dan sefalosporin.
Gambar 6. Penghambatan sintesis dinding sel oleh antimikroba (Denikrisna, 2012)
15
2. Merubah permeabilitas sel
Antimikroba bekerja scara langsung pada membran sel. Kerusakan pada
membran sel dapat mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan sel atau matinya
sel. Contohnya polimiksin, nistatin, dan amfoteresin B.
3. Merubah molekul protein dan asam nukleat
Terjadinya perubahan molekul protein seperti denaturasi protein dan asam
nukleat dapat merusak sel tanpa dapat diperbaiki kembali. Suhu tinggi dan
konsentrasi pekat beberapa zat kimia dapat mengakibatkan koagulasi
(denaturasi) ireversibel (tak dapat balik) komponen-komponen selular yang
vital ini.
4. Menghambat kerja enzim
Di dalam sel terdapat enzim dan protein yang membantu kelangsungan proses-
proses metabolisme. Penghambatan enzim dapat mengakibatkan terganggunya
metabolisme atau matinya sel.
5. Menghambat sintesis asam nukleat dan protein
DNA, RNA dan protein memegang peranan penting dalam proses kehidupan
normal sel. Hal ini berarti bahwa gangguan apapun yang terjadi pada
pembentukan atau pada fungsi zat-zat tersebut dapat mengakibatkan kerusakan
total pada sel. Contohnya obat yang menghambat sintesis protein adalah
kloramfenikol, tetrasiklin, eritromisin, klindamisin, dan pristinamisin.
Sedangkan Rifamisin, aminoglikosida. Pada (Gambar 7) dapat dilihat
penghambatan sintesis protein oleh aminoglikosida. Antibiotik yang
16
menghambat RNA polimerase, dan yang menghambat topoisomerase adalah
kuinolon. Kerja dari masing-masing antibiotik dapat dilihat pada (Gambar 8).
Gambar 7. Mekanisme antibiotik dalam menghambat sintesis protein
(http://sectiocadavires.wordpress.com, 2012)
Gambar 8. Tempat kerja dari masing-masing golongan antibiotik (Mahsunah, 2011)
17
II.3.3 Metode Uji Aktivitas Antimikroba
Penentuan kepekaan bakteri patogen terhadap antimikroba dapat dilakukan
dengan dua metode yakni dilusi dan difusi (Brooks et al. 2005).
1. Metode Dilusi
Metode ini menggunakan antimikroba dengan kadar yang menurun secara
bertahap, baik dengan media cair atau padat. Kemudian media diinokulasikan
bakteri uji dan dieramkan. Teknik dilusi dapat dilihat pada (Gambar 9). Uji
kepekaan menggunakan metode dilusi agar memakan waktu dan penggunaannya
dibatasi pada keadaan tertentu saja. Sedangkan, uji kepekaan cara dilusi cair
dengan menggunakan tabung reaksi, tidak praktis dan jarang dipakai, namun kini
ada cara yang lebih sederhana yakni menggunakan microdilution platen(Brooks et
al. 2005).
Gambar 9. Teknik dilusi (Hermanto, 2012)
18
2. Metode Difusi
Media yang dipakai adalah Mueller Hinton. Metode difusi ini ada
beberapa cara, yaitu (Zabadi, 2010) :
a. Cara Kirby Bauer
Beberapa koloni kuman dari pertumbuhan 24 jam diambil, disuspensikan
ke dalam 0,5 ml BHI cair, diinkubasikan 5-8 jam pada 37°C. Suspensi ditambah
akuades steril hingga kekeruhan tertentu sesuai dengan standar konsentrasi bakteri
108
CFU per ml. Kapas lidi steril dicelupkan ke dalam suspensi bakteri lalu
ditekan-tekan pada dinding tabung hingga kapasnya tidak terlalu basah, kemudian
dioleskan pada permukaan media agar hingga rata. Kemudian kertas samir (disk)
yang mengandung antibakteri diletakkan di atasnya, diinkubasi pada 37° selama
18-24 jam. Pada (Gambar 10) dapat dilihat metode kerja kirby bauer dan hasil dari
uji daya hambat oleh adanya pembentukan zona hambatan.
(A) (B)
Gambar 10. A: Difusi dengan Metode Kirby Bauer; B: Hasil uji daya hambat yang
memperlihatkan adanya zona hambatan yang terbentuk (Eigmon, 2010)
19
b. Cara Sumuran
Beberapa koloni kuman dari pertumbuhan 24 jam diambil, disuspensikan
ke dalam 0,5 ml BHI cair, diinkubasikan 5-8 jam pada suhu 37°C. Suspensi
ditambah akuades steril hingga kekeruhan tertentu sesuai dengan standar
konsentrasi bakteri 108 CFU per ml. Kapas lidi steril dicelupkan ke dalam
suspensi bakteri lalu ditekan-tekan pada dinding tabung hingga kapasnya tidak
terlalu basah, kemudian dioleskan pada permukaan media agar hingga rata. Media
agar dibuat sumuran dengan garis tengah tertentu, ke dalam sumuran diteteskan
larutan antibakteri kemudian diinkubasi pada 37°C selama 18-24 jam. Hasilnya
dibaca seperti pada cara Kirby Bauer.
c. Cara Pour Plate
Beberapa koloni kuman dari pertumbuhan 24 jam diambil, disuspensikan
ke dalam 0,5 ml BHI cair, diinkubasi 5-8 jam pada suhu 37°C. Suspensi ditambah
akuades steril hingga kekeruhan tertentu sesuai dengan standar konsentrasi bakteri
108 CFU per ml. Suspensi bakteri diambil satu mata ose dan dimasukkan ke dalam
4 ml agar base 1,5 % yang mempunyai temperatur 50°C. Setelah suspensi kuman
tersebut homogen dituang ke dalam media agar Mueller Hinton, ditunggu sebentar
sampai agar tersebut membeku, disk diletakkan di atas media kemudian
diinkubasi 15-20 jam dengan temperatur 37°C. Hasil dibaca sesuai dengan standar
masing-masing bakteri. Hasil uji daya hambat dengan cara Pour Plate dapat
dilihat pada (Gambar 11).
20
Gambar 11. Hasil uji daya hambat dengan metode Pour Plate (Zabadi, 2010)
II.4 Gambaran Umum Bakteri Bacillus cereus
II.4.1 Klasifikasi
Menurut Brooks et al.,(2005), klasifikasi Bacillus cereus adalah sebagai
berikut :
Kingdom : Prokaryota
Phylum : Firmicutes
Classis : Bacilli
Ordo : Bacillales
Familia : Bacillaceae
Genus : Bacillus
Species : Bacillus cereus
21
II.4.2 Deskripsi Bacillus cereus
Menurut Buchanan dan Gibbons (1974), Bacillus cereus (Gambar 12)
termasuk genera Bacillus, organisme bersel tunggal, berbentuk batang, termasuk
bakteri gram positif, dapat membentuk spora dan bersifat aerobik. Umumnya
mempunyai ukuran lebar 1,0 µm – 1,2 µm dan panjang 3 µm – 5 µm.
Menurut Vlaemynck dan Van Heddeghem (1992), pertumbuhan dan
generasi Bacillus cereus dapat dipengaruhi oleh faktor suhu, pH, kandungan
oksigen, serta terdapatnya kandungan nitrogen dan karbon. Bacillus cereus dapat
tumbuh pada suhu 4 – 50ºC dengan suhu optimum 30-40ºC dan tumbuh pada pH
5,5-8,5 (Purwanti et al. 2009).
Bacillus cereus merupakan bakteri pembentuk spora yang tahan panas,
dapat menyebabkan keracunan dan kebusukan pada makanan. Bacillus cereus
dapat berbagai bentuk keracunan makanan, seperti makanan yang mengandung
daging, nasi, susu, kentang dan sereal (Rahayu, 2000). Penyakit yang disebabkan
oleh Bacillus cereus, seperti emetik dan penyakit diare. Penyakit emetik
dimediasi oleh racun yang sangat stabil yang bertahan pada suhu tinggi, paparan
tripsin, pepsin dan pH ekstrem dengan masa inkubasi berkisar antara 1-5 jam
setelah makanan dikonsumsi. Sedangkan penyakit diare dimediasi oleh panas dan
asam yang labil dengan masa inkubasi berkisar antara 4-16 jam dan gejala sakit
berlangsung selama 12-24 jam (Lancette dan Harmon, 1980).
22
Gambar 12. Bacillus cereus yang diamati di bawah mikroskop elektron
(http://microbewiki.kenyon.edu/Bacillus_cereus, 2012)
II.5 Gambaran Umum Bakteri Pseudomonas aeruginosa
II.5.1 Klasifikasi
Klasifikasi Pseudomonas aeruginosa menurut Brooks et al., (2005) adalah
sebagai berikut :
Kingdom : Procaryota
Phylum : Proteobacteria
Classis : Gammaproteobacteria
Ordo : Pseudomonales
Familia : Pseudomonadaceae
Genus : Pseudomonas
Species : Pseudomonas aeruginosa
23
II.5.2 Deskripsi Pseudomonas aeruginosa
Menurut Buchanan dan Gibbons (1974), Pseudomonas aeruginosa
(Gambar 13) termasuk genera Pseudomonas, bersel tunggal, berbentuk batang,
termasuk bakteri gram negatif, motil dengan flagel berjumlah satu, tidak
membentuk spora, aerob dan bersifat saprofit. Diameter sel berukuran 0,5 – 0,7
µm dan panjang 1,5 – 3 µm. Membentuk koloni bulat, halus dengan warna
flouresens kehijauan. Juga sering memproduksi pigmen kebiruan dan tidak
flouresens yang disebut piosianin yang larut dalam agar lainnya (Brooks et al.
2005).
Gambar 13. Morfologi Pseudomonas aeruginosa yang diamati di bawah
mikroskop elektron dengan pembesaran 14.500
(http://id.wikipedia.org/wiki/Biofilm, 2012)
Pseudomonas aeruginosa menghasilkan satu atau lebih pigmen, yang
dihasilkan dari asam amino aromatik seperti tirosin dan fenilalanin. Beberapa pigmen
tersebut antara lain: piosianin (pigmen berwarna biru), pioverdin (pigmen berwarna
kuning), piorubin (pigmen berwarma merah), dan piomelanin (pigmen berwarna
coklat). Piosianin, piorubin, dan piomelanin tidak berfluoresensi serta larut dalam
24
air. Strain yang tidak menghasilkan piosianin disebut apiosianogenik. Kebanyakan
strain membentuk koloni halus bulat dengan warna fluoresensi kehijauan, yang
merupakan kombinasi pioverdin dan piosianin. Pseudomonas aeruginosa tumbuh
baik pada suhu 37-42º C. Bakteri ini banyak terdapat dalam tanah, air, sampah,
udara, termasuk flora normal dalam usus dan kulit. Bakteri ini menyebabkan
infeksi pada luka dan luka bakar, menghasilkan nanah warna hijau biru,
meningitis, infeksi saluran kemih dan berbagai penyakit sistemik lainnya (Brooks
et al. 2005).
Penyakit yang disebabkan karena Pseudomonas aeruginosa dimulai
dengan penempelan dan kolonisasi bakteri ini pada jaringan inang. Bakteri ini
menggunakan fili untuk menempel pada permukaan inang. Pseudomonas
aeruginosa memproduksi sejumlah endotoksin dan produk ekstaseluler yang
menunjang invasi local dan penyebaran mikroorganisme. Toksin dan produk
ekstraseluler ini mencakup protease ekstraseluler, sitotoksin, hemolisin, dan
piosianin (Rahmaningsih et al. 2012).
25
BAB III
METODE PENELITIAN
III.1 Alat
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah tabung reaksi, erlenmeyer
(Pyrex), cawan petri (Pyrex), corong pisah (Pyrex), gelas ukur 50 ml (Pyrex),
gelas kimia (Pyrex), tabung pengenceran, pembakar bunsen, jarum ose, batang
pengaduk, corong, sendok tanduk, mikropipet, pinset, spoit, pencadang,
timbangan analitik (Mettler AG160), rak tabung, neraca ohaus (Harvard Trip
Balance), labu destilasi, otoklaf (Webeco), oven (Heraeus), inkubator (Memmert),
laminary air flow, lemari pendingin, Rotavapor, blender, jangka sorong, dan
kamera.
III.2 Bahan
Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah rimpang lengkuas merah
Alpinia purpurata K. Schum, biakan Bacillus cereus dan Pseudomonas
aeruginosa, NaCl fisiologis 0,9%, ciprofloxacin, DMSO (Dimetil sulfoksida),
Nutrien Agar (NA) sintetik (Oxoid), Muller Hinton Agar (MHA) sintetik (BD),
kloroform, spiritus, alkohol 70%, Na-CMC, aquades steril, kertas label, tissue,
kertas saring, kapas, swab steril dan aluminium foil.
26
III.3 Metode kerja
III.3.1 Pengambilan Sampel
Sampel yang digunakan pada penelitian ini yaitu rimpang lengkuas merah
Alpinia purpurata K. Schum segar yang diperoleh di Desa Tamasaju, Kecamatan
Galesong Utara, Kabupaten Takalar, Sulawesi Selatan.
III.3.2 Pengolahan Sampel
Rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum yang masih segar
sebanyak 1 kg dikupas kemudian dicuci bersih. Rimpang lengkuas yang telah
dibersihkan selanjutnya dipotong kecil-kecil dan diblender.
III.3.3 Destilasi Bahan
Rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata yang telah diolah selanjutnya
didestilasi menggunakan destilasi uap secara bertahap. Penyulingan atau destilasi
uap dilakukan dengan cara rimpang lengkuas merah yang telah diolah dimasukkan
ke dalam labu destilasi yang telah dirangkai dengan pendingin (kondensor),
kemudian dipanaskan. Temperatur kondensor dijaga tetap dingin agar minyak
yang menguap semuanya terembunkan dan tidak lepas ke udara (Parwata dan
Dewi, 2008). Distilat yang diperoleh merupakan campuran antara minyak dan air
Selanjutnya, distilat ditambahkan pelarut kloroform untuk mengikat minyak atsiri
sehingga terbentuk 2 lapisan pada cairan distilat yang kemudian dipisahkan
dengan menggunakan corong pisah. Kloroform yang telah berikatan dengan
minyak atsiri selanjutnya dievaporasi dengan tujuan untuk menguapkan pelarut
kloroform sehingga diperoleh minyak atsiri.
27
III.3.4 Variasi Konsentrasi Bahan
Minyak atsiri yang diperoleh dibuatkan variasi konsentrasi untuk
menentukan efektivitas minyak atsiri dengan menggunakan konsentrasi 10%,
20%, 40%, dan 80% (b/v) dengan stok 2 ml. Minyak atsiri ditambahkan dengan
Na-CMC sebanyak 0,5% agar minyak atsiri dapat bercampur dengan DMSO.
Konsentrasi 10% dibuat dengan memasukkan 0,2 ml minyak atsiri ke dalam
tabung dan ditambahkan 1,8 ml DMSO. Selanjutnya untuk konsentrasi 20%,
sebanyak 0,4 ml minyak atsiri dimasukkan dalam tabung dan ditambahkan 1,6 ml
DMSO. Untuk konsentrasi 40%, minyak atsiri dimasukkan ke dalam tabung
sebanyak 0,8 ml dan ditambahkan 1,2 ml DMSO. Selanjutnya konsentrasi 80%
dibuat dengan memasukkan 1,6 ml minyak atsiri ke dalam tabung dan
ditambahkan 0,4 ml DMSO. Kemudian masing-masing tabung dihomogenkan.
III.3.5 Sterilisasi Alat
Semua alat yang akan digunakan disterilkan terlebih dahulu. Alat-alat
gelas disterilkan dalam oven pada suhu 180o
C selama 2 jam. Alat-alat non gelas,
medium dan alat-alat yang tidak tahan suhu tinggi disterilkan menggunakan
otoklaf pada suhu 121º C tekanan 2 atm selama 15 menit, sedangkan ose dan alat-
alat logam disterilkan dengan cara pemanasan langsung pada nyala api spirtus
hingga memijar.
28
III.3.6 Pembuatan Medium Pertumbuhan Bakteri Uji
III.3.6.1 Pembuatan Medium NA (Nutrient Agar)
Medium yang digunakan adalah NA (Nutrien Agar) sintetik yang
dilarutkan dalam 1000 ml aquades.
Cara membuatnya :
Bahan ditimbang sebanyak 20 gram, kemudian dimasukkan ke dalam
erlenmeyer dan dilarutkan dengan aquades sambil dipanaskan. Setelah larut,
medium tersebut diukur pH-nya hingga 7, kemudian disterilkan di dalam otoklaf
pada suhu 121oC dengan tekanan 2 atm selama 15 menit.
III.3.6.2 Pembuatan Medium MHA (Muller Hinton Agar)
Medium yang digunakan adalah MHA (Muller Hinton Agar) sintetik yang
dilarutkan dalam 1000 ml aquades.
Cara membuatnya:
Bahan ditimbang sebanyak 38 gram, kemudian dimasukkan ke dalam
erlenmeyer dan dilarutkan dengan aquades sambil dipanaskan. Setelah larut,
medium diukur pH-nya hingga 7, kemudian disterilkan di dalam otoklaf pada
suhu 121o C dengan tekanan 2 atm selama 15 menit.
III.3.7 Penyiapan Bakteri Uji
III.3.7.1 Peremajaan Bakteri Uji
Bakteri Bacillus cereus dan Pseudomonas aeruginosa berasal dari biakan
murni yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran,
Universitas Hasanuddin, masing-masing diambil sebanyak satu ose lalu
diinokulasikan dengan cara goresan pada medium NA (Nutrien Agar) cawan petri.
29
Kemudian diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam. Bakteri Bacillus cereus dan
Pseudomonas aeruginosa yang telah diinokulasikan pada medium NA cawan
petri, diinokulasikan kembali dengan cara digores pada medium Nutrien Agar
miring dan diinkubasi ke dalam inkubator selama 24 jam pada suhu 37oC.
III.3.7.2 Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri Bacillus cereus dan Pseudomonas aeruginosa yang telah
diinokulasikan pada medium NA (Nutrient Agar) miring, selanjutnya masing-
masing diambil 1 ose kemudian disuspensikan ke dalam larutan NaCl fisiologis
0,9% steril. Kemudian diukur serapan suspensi biakan dengan Mc. Farland 0,5
yang setara dengan 1,5 x 108 CFU/ml. Tujuannya untuk mengurangi kepadatan
mikroba yang akan diujikan.
III.3.8 Penyiapan Larutan Pembanding
a. Larutan Kontrol Positif menggunakan ciprofloxacin dengan konsentrasi 5 µg.
Sebanyak 0,0005 gr ciprofloxacin dilarutkan dengan 200 ml aquades.
b. Larutan Kontrol Negatif menggunakan 1 ml DMSO (Dimetil sulfoksida).
III.3.9 Uji Daya Hambat
Pengujian dilakukan secara in vitro dengan metode difusi agar yang
menggunakan pencadang. 6 buah pencadang steril diletakkan ke dalam cawan
petri. Medium Muller Hinton Agar (MHA) steril dipanaskan hingga encer lalu
didinginkan hingga suhu 40o
C – 45o
C. Kemudian dituang sebanyak 20 ml secara
aseptis ke dalam cawan petri dan dibiarkan memadat sebagai lapisan dasar “based
layer”. Selanjutnya dimasukkan suspensi bakteri uji ke dalam 15 ml medium
Muller Hinton Agar (MHA) kemudian dihomogenkan dan dituang di atas lapisan
30
based layer dan dibiarkan padat sebagai lapisan pembenihan “seed layer”.
Selanjutnya, pencadang dilepas hingga terbentuk sumuran. Masing-masing
sumuran diisi dengan 0,25 µl minyak atsiri pada kadar konsentrasi
efektivitas. Demikian pula larutan ciprofloxacin sebagai kontrol positif dan
DMSO sebagai kontrol negatif dengan menggunakan mikropipet. Selanjutnya
diinkubasi pada suhu 37o C selama 24 jam.
III.3.10 Pengukuran Diameter Daerah Hambatan
Daerah hambatan diukur untuk masing-masing konsentrasi minyak atsiri
rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum yaitu pada konsentrasi
10%, 20%, 40%, 80%. Pengukuran dilakukan menggunakan jangka sorong
dengan membaca skala utama dan skala nonius pada jangka sorong untuk
menentukan besarnya diameter daerah zona hambatan dalam satuan milimeter
(mm). Pengukuran dilakukan pada inkubasi selama 24 jam dan 48 jam. Hasil yang
diperoleh dicatat untuk proses analisis data.
III.3.11 Analisis Data
Data yang diperoleh dari hasil pengukuran dianalisis dengan cara
membandingkan diameter zona hambatan yang terbentuk pada pertumbuhan 24
jam hingga 48 jam untuk semua konsentrasi. Bioaktivitas minyak atsiri rimpang
lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum dalam menghambat pertumbuhan
bakteri Bacillus cereus dan Pseudomonas aeruginosa diketahui berdasarkan ada
tidaknya penambahan zona hambat yang terbentuk dari 24 jam ke 48 jam.
Bioaktivitas tersebut dapat bersifat bakteriostatik atau bakteriosida.
31
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada penelitian ini, dilakukan uji bioaktivitas minyak atsiri rimpang
Lengkuas Merah Alpinia purpurata K. Schum terhadap bakteri Bacillus cereus
dan Pseudomonas aeruginosa. Minyak atsiri yang diperoleh merupakan hasil
destilasi uap dari rimpang Alpinia purpurata K. Schum yang telah dihaluskan.
Rimpang lengkuas merah yang telah dihaluskan dan minyak atsiri yang telah
dibuat dalam berbagai konsentrasi dapat dilihat pada Gambar 14.
(A) (B)
Gambar 14. Rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum yang telah diolah (A),
minyak atsiri dalam berbagai variasi konsentrasi (B)
Pada proses destilasi diperoleh distilat yang merupakan campuran antara
minyak dan air. Proses pemisahan antara minyak atsiri dan air dilakukan dengan
penambahan kloroform pada distilat karena kloroform merupakan pelarut
nonpolar yang dapat berikatan dengan minyak dan tidak dapat menyatu dengan
air. Selanjutnya, larutan kloroform yang telah berikatan dengan minyak
dipisahkan dari air dan dievaporasi dengan tujuan untuk menguapkan kloroform
32
hingga diperoleh minyak atsiri murni yang selanjutnya diujikan dengan
menggunakan metode difusi agar.
Bakteri uji yang digunakan pada penelitian ini yaitu Bacillus cereus yang
merupakan bakteri gram positif, pembentuk spora yang tahan panas, dapat
menyebabkan keracunan dan kebusukan pada makanan (Rahayu, 2000) dan
Pseudomonas aeruginosa yang merupakan bakteri gram negatif penyebab infeksi
pada luka dan luka bakar, menghasilkan nanah warna hijau biru, meningitis,
infeksi saluran kemih dan berbagai penyakit sistemik lainnya (Brooks et al. 2005).
IV.1 Bioaktivitas Minyak Atsiri Rimpang Lengkuas Merah Alpinia
purpurata K. Schum Terhadap Bakteri Bacillus cereus dan
Pseudomonas aeruginosa
Uji efektivitas minyak atsiri rimpang Lengkuas Merah Alpinia purpurata K.
Schum terhadap bakteri Bacillus cereus dan Pseudomonas aeruginosa dilakukan
dengan menggunakan konsentrasi 10%, 20%, 40% dan 80% (b/v) yang
dibandingkan dengan ciprofloxacin sebagai kontrol positif (+) dan DMSO
(Dimetil Sulfoksida) sebagai kontrol negatif (-). Pengujian dilakukan selama masa
inkubasi 2x24 jam. Hasil uji daya hambat minyak atsiri rimpang lengkuas merah
Alpinia purpurata K. Schum terhadap bakteri Bacillus cereus menunjukkan
adanya zona hambatan yang terbentuk pada semua variasi konsentrasi. Hal ini
dapat dilihat pada Gambar 15.
33
Ulangan I
0
(Y) (Z)
Ulangan II v
(Y) (Z)
Gambar 15. Hasil uji daya hambat minyak atsiri rimpang Lengkuas Merah Alpinia
purpurata K. Schum terhadap bakteri Bacillus cereus dengan masa
inkubasi 24 (Y) jam dan 48 jam (Z)
Keterangan :
A. Konsentrasi 10%
B. Konsentrasi 20%
C. Konsentrasi 40%
D. Konsentrasi 80%
E. DMSO (Dimetil Sulfoksida)
F. Ciprofloxacin (5 µg)
Diameter pencadang : 8 mm
34
Pada Gambar 15. ditunjukkan bahwa minyak atsiri rimpang lengkuas
merah Alpinia purpurata K. Schum dapat menghambat pertumbuhan bakteri
Bacillus cereus dengan konsentrasi 10%, 20%, 40% dan 80% yang ditandai
dengan terbentuknya zona hambatan pada sekitar daerah minyak atsiri. Zona
hambatan juga terbentuk pada pemberian ciprofloxacin (kontrol positif). Namun,
pada pemberian DMSO (kontrol negatif) tidak terlihat adanya pembentukan zona
hambatan. Setelah inkubasi 48 jam, terlihat bahwa zona hambatan yang terbentuk
semakin mengecil dan terlihat adanya pertumbuhan koloni bakteri disekitar zona
hambatan. Hasil pengukuran diameter zona hambat minyak atsiri rimpang
lengkuas Merah Alpinia purpurata K. Schum pada bakteri Bacillus cereus setelah
inkubasi 24 dan 48 jam dapat dilihat pada Tabel 2. berikut :
Tabel 2. Diameter zona hambat minyak atsiri rimpang lengkuas Merah Alpinia purpurata
K. Schum pada bakteri Bacillus cereus dengan masa inkubasi 24 jam hingga
48 jam
Waktu
Inkubasi
Diameter Zona Hambatan (mm)
10% 20% 40% 80% K (-) K (+)
24 Jam 17,9 18,5 18,7 18,9 0 27,9
16 17,2 17,5 17,8 0 26,1
48 Jam 15,8 16,7 17,2 17 0 27,4
12,6 13,8 14,1 14,5 0 25,6
Keterangan :
Kontrol (-) : DMSO (Dimetil Sulfoksida)
Kontrol (+) : Ciprofloxacin 5 µg
35
Berdasarkan Tabel 2. dapat dilihat bahwa lengkuas merah Alpinia
purpurata K. schum pada konsentrasi 10%, 20%, 40%, dan 80% efektif dalam
menghambat pertumbuhan bakteri Bacillus cereus. Hal ini ditunjukkan dari hasil
pengukuran diameter zona hambatan yang telah diperoleh dengan masa inkubasi
2x24 jam yang dilakukan dengan 2 kali pengulangan.
Pada pengulangan I, diameter zona hambatan yang terbentuk setelah
inkubasi 24 jam yaitu pada konsentrasi 10% sebesar 17,9 mm, untuk konsentrasi
20% yaitu 18,5 mm, konsentrasi 40% yaitu 18,7 mm, dan pada konsentrasi 80%
mampu menghambat dengan diameter zona hambatan 18,9 mm. Untuk
ciprofloxacin (kontrol positif) diperoleh diameter zona hambat sebesar 27,9 mm
dan untuk DMSO (kontrol negatif) tidak terbentuk zona hambatan. Setelah
inkubasi 48 jam, diameter zona hambat pada masing-masing konsentrasi
mengalami penurunan. Konsentrasi 10% mengalami penurunan zona hambat
menjadi 15,8 mm, konsentrasi 20% menjadi 16,7 mm, konsentrasi 40% menjadi
17,2 mm, dan konsentrasi 80% menjadi 17 mm. Pada kontrol positif (+) juga
mengalami penurunan diameter zona hambatan menjadi 27,4 mm.
Pada pengulangan II, diameter zona hambatan yang terbentuk setelah
inkubasi 24 jam pada konsentrasi 10% yaitu 16 mm, konsentrasi 20% yaitu 17,2
mm, konsentrasi 40% yaitu 17,5 mm, konsentrasi 80% yaitu 17,8 mm. Diameter
zona hambatan yang terbentuk pada kontrol positif (+) yaitu 26,1 mm dan untuk
kontrol negatif (-) tidak terbentuk diameter zona hambatan. Setelah inkubasi 48
jam, terjadi penurunan diameter zona hambatan yang signifikan yaitu pada
konsentrasi 10% menjadi 12,6 mm, konsentrasi 20% menjadi 13,8 mm,
36
0
5
10
15
20
25
30
10% 20% 40% 80% K (+) K (-)
Dia
me
ter
Zon
a H
amb
atan
(m
m)
Konsentrasi Minyak Atsiri (%)
24 Jam
48 Jam
konsentrasi 40% menjadi 14,1 mm, konsentrasi 80% menjadi 17 mm dan kontrol
positif (+) mengalami penurunan diameter zona hambatan menjadi 25,6 mm.
Perbedaan zona hambatan pada masing-masing konsentrasi dapat dilihat pada
histogram berikut (Gambar 16).
Gambar 16. Histogram perbandingan hasil pengukuran diameter hambatan (mm) minyak
atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum terhadap
Bacillus cereus dengan masa inkubasi 24 jam dan 48 jam
37
Hasil uji daya hambat minyak atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia
purpurata K. Schum terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa dapat dilihat
pada Gambar 17. sebagai berikut:
Ulangan I
(Y) (Z)
Ulangan II
(Y) (Z)
Gambar 17. Hasil uji daya hambat minyak atsiri rimpang Lengkuas Merah Alpinia
purpurata K. Schum terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa dengan
masa inkubasi 24 (Y) jam dan 48 jam (Z)
Keterangan :
A. Konsentrasi 10%
B. Konsentrasi 20%
C. Konsentrasi 40%
D. Konsentrasi 80%
E. DMSO (Dimetil Sulfoksida)
F. Ciprofloxacin (5 µg)
Diameter pencadang : 8 mm
38
Pada Gambar 16. ditunjukkan bahwa minyak atsiri rimpang lengkuas
merah Alpinia purpurata K. Schum dapat menghambat pertumbuhan bakteri
Pseudomonas aeruginosa dengan konsentrasi 10%, 20%, 40% dan 80% yang
ditandai dengan adanya pembentukan zona hambatan. Selain itu, pembentukan
zona hambatan juga dapat dilihat pada pada pemberian ciprofloxacin (kontrol
positif). Namun, pada pemberian DMSO (kontrol negatif) tidak terlihat adanya
pembentukan zona hambatan. Pada inkubasi 48 jam, zona hambatan semakin
mengecil namun tidak mengalami perbedaan yang signifikan dengan zona
hambatan pada inkubasi 24 jam. Hasil pengukuran diameter zona hambat minyak
atsiri rimpang lengkuas Merah Alpinia purpurata K. Schum pada bakteri
Pseudomonas aeruginosa dengan masa inkubasi 24 jam dan 48 jam dapat dilihat
pada Tabel 3. Berikut ini:
Tabel 3. Diameter zona hambat minyak atsiri rimpang lengkuas Merah Alpinia purpurata
K. Schum pada bakteri Pseudomonas aeruginosa dengan masa inkubasi 24
jam hingga 48 jam
Waktu
Inkubasi
Diameter Zona Hambatan (mm)
10% 20% 40% 80% K (-) K (+)
24 Jam 17,6 18,7 19 19,1 0 25,4
18,6 19,3 19,7 20 0 26,7
48 Jam 17,3 18,5 18,8 19 0 26,2
18,4 19,1 19,5 19,9 0 28,8
Keterangan :
Kontrol (-) : DMSO (Dimetil Sulfoksida)
Kontrol (+) : Ciprofloxacin 5 µg
39
Berdasarkan Tabel 3. dapat dilihat, bahwa lengkuas merah Alpinia
purpurata K. schum pada konsentrasi 10%, 20%, 40%, dan 80% efektif dalam
menghambat pertumbuhan bakteri Pseudomonas aeruginosa. Pada pengulangan I,
diameter zona hambatan yang terbentuk setelah inkubasi 24 jam yaitu pada
konsentrasi 10% sebesar 17,6 mm, untuk konsentrasi 20% yaitu 18,7 mm,
konsentrasi 40% yaitu 19 mm, dan pada konsentrasi 80% mampu menghambat
dengan diameter zona hambatan 19,1 mm. Ciprofloxacin (kontrol positif)
diperoleh diameter zona hambat sebesar 25,4 mm dan untuk DMSO (kontrol
negatif) tidak terbentuk zona hambatan. Setelah inkubasi 48 jam, diameter zona
hambat pada masing-masing konsentrasi mengalami penurunan. Konsentrasi 10%
mengalami penurunan zona hambat menjadi 17,3 mm, konsentrasi 20% menjadi
18,5 mm, konsentrasi 40% menjadi 18,8 mm, dan konsentrasi 80% menjadi 19
mm. Sedangkan, pada kontrol positif (+) mengalami peningkatan diameter zona
hambatan menjadi 26,2 mm.
Pada pengulangan II, diameter zona hambatan yang terbentuk setelah
inkubasi 24 jam tidak berbeda jauh dari hasil yang diperoleh pada pengulangan I.
Pada konsentrasi 10% diameter zona hambatan yang terbentuk yaitu 18,6 mm,
konsentrasi 20% yaitu 19,3 mm, konsentrasi 40% yaitu 19.7 mm, konsentrasi 80%
yaitu 20 mm. Diameter zona hambatan yang terbentuk pada kontrol positif (+)
yaitu 26,7 mm dan untuk kontrol negatif (-) tidak terbentuk diameter zona
hambatan. Setelah inkubasi 48 jam, terjadi penurunan diameter zona hambatan
yang tidak terlalu signifikan yaitu pada konsentrasi 10% menjadi 18,4 mm,
konsentrasi 20% menjadi 19,1 mm, konsentrasi 40% menjadi 19,5 mm,
40
0
5
10
15
20
25
30
10% 20% 40% 80% K (+) K (-)
Dia
me
ter
Zon
a H
amb
atan
(m
m)
Konsentrasi Minyak Atsiri (%)
24 Jam
48 Jam
konsentrasi 80% menjadi 19,9 mm, sedangkan kontrol positif (+) mengalami
peningkatan diameter zona hambatan menjadi 28,8 mm.
Perbandingan zona hambatan minyak atsiri rimpang lengkuas merah
Alpinia purpurata K. Schum pada berbagai konsentrasi terhadap Pseudomonas
aeruginosa dengan masa inkubasi 24 jam dan 48 jam dapat dilihat pada histogram
berikut (Gambar 18).
Gambar 18. Histogram perbandingan hasil pengukuran diameter hambatan (mm) minyak
atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum terhadap
Pseudomonas aeruginosa dengan masa inkubasi 24 jam dan 48 jam
Hasil penelitian yang diperoleh menunjukkan, bahwa minyak atsiri
rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum efektif dalam menghambat
pertumbuhan bakteri Bacillus cereus dan Pseudomonas aeruginosa karena
diameter zona hambat yang terbentuk masing-masing konsentrasi ˃ 14 mm,
seperti yang telah dikemukakan oleh Lay (1994), bahwa senyawa yang sensitif
dan efektif untuk dijadikan senyawa antimikroba adalah senyawa yang mampu
menunjukkan efektivitas dengan luas diameter hambatan > 14 mm. Hal ini juga
41
dijelaskan oleh Elgayyar et al., (2001) bahwa ekstrak tumbuh-tumbuhan dapat
dikelompokkan berdasarkan diameter penghambatan menjadi tiga kategori yaitu
tinggi (> 11 mm), sedang (> 6 mm - < 11 mm) dan rendah (< 6 mm).
Daerah hambatan yang dihasilkan minyak atsiri rimpang lengkuas merah
Alpinia purpurata K. Schum disebabkan karena minyak atsiri pada rimpang
lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum mengandung senyawa, seperti sineol
12,64%, similiaritas 98% dan dodekatriena 12,86% yang berperan penting sebagai
antibakteri (Sukandar et al. 2009). Mulyaningsih (1996) yang menganalisis
minyak atsiri lengkuas merah juga menemukan adanya berbagai senyawa yang
terkandung di dalamnya, seperti β-pinen, α-terpineol, 4-alifenil asetat, α-famesen,
β-famesen, kariofilen, germakren, 3,7,11-termetil-1,6,10-dodekatrien-3ol.
Mekanisme penghambatan pertumbuhan bakteri oleh minyak atsiri disebabkan
karena minyak atsiri dapat menyebabkan terjadinya perubahan permeabilitas
membran dan mengganggu sistem transpor (Ismaiel dan Pierson, 1990).
Uji efektivitas minyak atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K.
Schum terhadap bakteri Bacillus cereus dan Pseudomonas aeruginosa dilakukan
dengan menggunakan berbagai variasi konsentrasi (10%, 20%, 40%, dan 80%).
Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa terjadi peningkatan diameter zona
hambatan seiring dengan peningkatan konsentrasi. Adanya perbedaan diameter
zona hambatan pada masing-masing konsentrasi disebabkan karena perbedaan
besarnya zat aktif yang terkandung pada konsentrasi tersebut. Semakin besar suatu
konsentrasi, semakin besar pula komponen zat aktif yang terkandung di dalamnya
sehingga zona hambatan yang terbentuk juga berbeda (Brooks et al. 2005).
42
Pada Tabel 2 dan 3 tentang hasil pengukuran diameter zona hambat
minyak atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum menunjukkan
adanya penurunan diameter zona hambatan pada bakteri Bacillus cereus dan
Pseudomonas aeruginosa setelah inkubasi 48 jam dan pada gambar 15 tentang
hasil uji daya hambat minyak atsiri terhadap Bacillus cereus menunjukkan bahwa
setelah inkubasi 48 jam, pada zona bening terlihat adanya pertumbuhan koloni
bakteri. Hal ini membuktikan bahwa minyak atsiri rimpang lengkuas merah
Alpinia purpurata K. Schum bersifat bakteriostatik terhadap Bacillus cereus.
Meskipun diameter zona hambat yang terbentuk pada bakteri Pseudomonas
aeruginosa mengalami penurunan setelah inkubasi 48 jam, namum belum tentu
dapat dikatakan bersifat bakteriostatis karena dapat dilihat pada Gambar 17
tentang hasil uji daya hambat minyak atsiri rimpang lengkuas merah terhadap
bakteri Pseudomonas aeruginosa bahwa hampir tidak terjadi perubahan zona
hambatan dan pada bagian zona hambatan tidak terlihat adanya pertumbuhan
koloni, sehingga sifat antimikroba dapat dikatakan bersifat bakteriosida. Seperti
yang telah dijelaskan oleh Ganiswara (1995), bahwa bakteriostatik merupakan
senyawa antimikroba yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri namun, jika
pemberian senyawa ini dihentikan atau habis, maka pertumbuhan dan
perbanyakan dari bakteri akan kembali meningkat. Sedangkan, bakteriosida
merupakan senyawa antimikroba yang mampu membunuh dan menghentikan
aktivitas fisiologis dari bakteri, meskipun pemberian senyawa tersebut dihentikan.
Pada penelitian ini, uji efektivitas minyak atsiri rimpang lengkuas merah
Alpinia purpurata K. Schum dibandingkan dengan ciprofloxacin sebagai kontrol
43
(+) dan DMSO (Dimetil Sulfoksida) sebagai kontrol (-). Diameter zona hambatan
yang terbentuk pada pemberian ciprofloxacin lebih besar dibandingkan dengan
minyak atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum yaitu pada
bakteri Bacillus cereus diameter zona hambatan yang terbentuk setelah inkubasi
24 jam pada pengulangan I yaitu 27,9 mm dan mengalami penurunan setelah
inkubasi 48 jam yaitu 27,4 mm, sedangkan pada pengulangan II diameter zona
hambat yang terbentuk yaitu 26,1 mm dan mengalami penurunan setelah inkubasi
48 jam yaitu 25,6 mm. Untuk Pseudomonas aeruginosa diameter zona hambatan
setelah inkubasi 24 jam mengalami peningkatan setelah inkubasi 48 jam. Pada
pengulangan I yaitu 25,4 mm menjadi 26,2 mm. Sedangkan diameter zona
hambatan pada pengulangan II yaitu 26,7 mm menjadi 28,8 mm.
Ciprofloxacin merupakan antibiotik sintetik yang termasuk ke dalam
golongan fluoroquinolin dengan spektrum luas terhadap bakteri gram positif dan
gram negatif. Efek antibakteri ciprofloxacin disebabkan oleh gangguan terhadap
enzim DNA topoisomerase atau biasa disebut DNA-gyrase yang dibutuhkan
untuk sintesa DNA bakteri (Fauzia, dkk. 2005). Sedangkan untuk kontrol negatif
digunakan DMSO (Dimetil sulfoksida) sebagai pembanding. DMSO digunakan
sebagai pelarut ekstrak sehingga dapat terdispersi merata di seluruh medium untuk
mendapatkan hasil yang homogen. Hasil penelitian menunjukkan bahwa DMSO
tidak memberikan aktivitas pembunuhan terhadap bakteri. Hal ini ditunjukkan
dengan tidak terbentuknya zona hambatan pada bakteri Bacillus cereus dan
Pseudomonas aeruginosa.
44
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
V.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan beberapa hal sebagai
berikut :
1. Minyak atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum bersifat
bakteriostatik terhadap bakteri Bacillus cereus dan bersifat bakteriosida
terhadap Pseudomonas aeruginosa.
2. Minyak atsiri rimpang lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum efektif
dalam menghambat pertumbuhan bakteri Bacillus cereus dan Pseudomonas
aeruginosa pada konsentrasi 20%.
V.2 Saran
Perlu dilakukan penelitian lanjutan mengenai senyawa sineol, similiaritas,
dan dodekatriena yang terkandung dalam minyak atsiri rimpang lengkuas merah
Alpinia purpurata K. Schum dan uji aktivitas antibakteri dari senyawa tersebut.
45
DAFTAR PUSTAKA
Anonim. 2012. Bacillus cereus. http://microbewiki.kenyon.edu/Bacillus_cereus.
diakses tanggal 9 Oktober 2012.
Anonim. 2012. Biofilm. http://id.wikipedia.org/wiki/Biofilm. diakses tanggal 9
Oktober 2012.
Bhunia, D. and A. K. Mondal. 2012. Antibacterial Activity of Alpinia L.
(Zingiberaceae) from Santal and Lodha Tribal Areas of Paschim
Medinipur District in Eastern India. Advances in Bioresearch. 3(1): 54-63.
Brooks, G. F., S. B. Janet dan A. M. Stepen. 2005. Mikrobiologi Kedokteran Edisi
Pertama. Salemba Medika, Jakarta.
Buchanan, T. D. dan N. E. Gibbons. 1974. Bergey’s Manual of Determinative
Bacteriology. The Williams and Wilkins Co Baltimore.
Darwis, S. N., M. Indo dan S. Hasiyah. 1991. Tumbuhan Obat Famili
Zingiberaceae. Pusat Penelitian dan Pengembangan Tanaman Industri,
Bogor.
Denikrisna. 2012. Ntibiotic for Bacteria. http://denikrisna.wordpress.com/
pharmaceutical-stuffs. Diakses tanggal 9 oktober 2012.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan. 1986. Sediaan Galenik.
Departemen Kesehatan RI, Jakarta.
Eigmon, I. 2010. Mikrobiologi Dasar. http://ekmon-saurus.blogspot.com. Diakses
tanggal 9 Oktober 2012.
Elgayyar, M., F.A. Draughon, D.A. Golden dan J.R. Mount. 2001. Antimicrobial
Activity of Essential Oils from Plants against Selected Pathogenic and
Saprophytic Microorganisms. J. of Food Protection. 64(7): 1019-1024.
Fauzia, Wiryanto, dan S. Lubis. 2005. Pemeriksaan Potensi Tablet Ciprofloxacin
yang Beredar Di Apotek Kota Medan dengan Metode Pengenceran.
Majalah Kedokteran Nusantara. 4(38): 302-304.
Ganiswara, S. G. 1995. Farmakologi dan Terapi, Edisi IV. Universitas Indonesia,
Jakarta.
46
Handa, S. S., S. H. Sukhadev, P. S. K. Suman, L. Gennaro, dan D. R. Dev. 2008.
Extraction Technologies for Medicinal and Aromatic Plants. International
Center for Science and High Technology.
Hembing, H. M. dan Wijakusuma. 2001. Tumbuhan Berkhasiat Obat Indonesia:
Rempah, Rimpang dan Umbi. Milenia Populer, Jakarta.
Hermanto, A. 2012. Purifikasi Isolat Patogen Tanaman.
http://ahahermanto.wordpress.com. Diakses tanggal 9 Oktober 2012.
Ismaiel, A.A and M.D. Pierson. 1990. Inhibition of Germination Outgrowth and
Vegetative growth of Clostridium botilinum 67B By Spice oils. J. Food
Protec. 53: 755.
Itokawa, H. and Takeya, K. 1993. Antitumor Subtances from Higher Plants.
Heterocycles. 35: 1467-1501.
Kainsa, S. and R. Bhoria. 2012. Medicinal plants as a source of anti-inflammatory
agent: a review. International Journal Of Ayurvedic And Herbal
Medicine. 2(3): 499-509. .
Kochuthressia, K. P., S. John Britto, M. O. Jaseentha, L. Joelri Michael Raj, and
S. R. Senthilkumar. 2010. Antimicrobial Efficacy of Extracts from Alpinia
purpurata (Vieill.) K.Schum Against Human Pathogenic Bacteria and
Fungi. Agriculture and Biology Journal of North America. 1(6): 1249-
1252.
Lancette, G. A. dan S. M. Harmon. 1980. Enumeration and Confirmation of
Bacillus cereus in Foods: Collaborative Study. J. Assoc off Anal Chem.
63: 581-586.
Lansida. 2012. Ekstraksi Bahan Alam. http://lansida.blogspot.com/ekstraksi-bahan-
alam.html. diakses tanggal 9 Oktober 2012.
Lay, B.W., 1994. Analisis Mikrobiologi Di Laboratorium. P.T. Raja Grafindo
Persada. Jakarta. Hal: 31-44.
Mahsunah. 2011. Antibiotik. http://suna-mahsunah.blogspot.com. Diakses tanggal
9 Oktober 2012.
Mulyaningsih, S. 1996. Uji Daya Anti Fungi dan Analisa Kromatografi Gas
Spektroskopi Massa Minyak Atsiri Laos Merah. Famipa-UGM,
Jogyakarta.
47
Parwata, I M. O. A. dan P. F. S. Dewi. 2008. Isolasi dan Uji Aktivitas Antibakteri
Minyak Atsiri dari Rimpang Lengkuas (Alpinia galanga L.). Jurnal Kimia.
2(2): 100-104.
Pelczar, M. J. dan E. C. S. Chan. 1988. Dasar-Dasar Mikrobiologi I. UI-Press,
Jakarta.
Purwanti, M., M. Sudarwanto, W. P. Rahayu dan A. W. Sanjaya. 2009. Pengaruh
Berbagai Kondisi Preparasi dan penyimpanan Susu Formula pada
Pertumbuhan Spora Bacillus cereus dan Clostridium perfringens. J.
Teknol. dan Industri Pangan. 20(1): 1-8.
Puspita, M. 2011. Ekstraksi dengan Metode Maserasi. http://
wordpress.com/ekstraksi-dengan-metode-maserasi. Diakses tanggal 9 Oktober
2012.
Rahayu, W. P. 2000. Aktivitas Antimikroba Bumbu Masakan Tradisional Hasil
Olahan Industri terhadap Bakteri Patogen dan Perusak. Bul. Teknol. dan
Industri Pangan. 11(2): 42-48.
Rahmaningsih, S., S. Wilis, A. Mulyana. 2010. Bakteri patogen dari Perairan
Pantai dan Kawasan Tambak di Kecamatan Jenu Kabupaten Tuban.
Ekologia. 12(1): 1-5.
Robinson, T. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. K. Padmawinata
(Penerjemah). Penerbit ITB, Bandung.
Rosyidah, K. 2009. Dua senyawa Terpenoid Alkohol dari Rimpang Lengkuas
Merah. Sains dan Terapan Kimia. 2(1): 42-47.
Sectiocadavires. 2012. Antimikroba. http://sectiocadavires.wordpress.com.
Diakses tanggal 6 Oktober 2012.
Sinaga, E. 2000. Alpinia Galanga (L.) Wild. Pusat Penelitian dan Pengembangan
Tumbuhan Obat UNAS/P3TO UNAS.
Soenanto, H. dan S. Kuncoro. 2009. Obat Tradisional. PT. Elex Media
Komputindo, Jakarta.
Sukandar, D., N. Radiastuti, S. Utami. 2009. Aktivitas Minyak Atsiri Rimpang
Lengkuas Merah (Alpinia purpurata) Hasil Distalasi. Jurnal Biologi
Lingkungan. 3(2): 94-100.
Tjitrosoepomo, G. 1994. Taksonomi Tumbuhan Obat-Obatan. Gadjah Mada
University Press, Yogyakarta.
48
Victorio, C.P., R.M. Kuster, and C.L.S. Lage. 2009. Detection of flavonoids in
Alpinia purpurata (Vieil) Schum. leaves using high performance
liquchromatography. Rev. Bras. Pl. Med. Botuca(2):147-153.
Vlaemynck, G. dan A. Van Heddeghem. 1992. Factors Affecting the Growth of
Bacillus cereus, in Bacillus cereus in Milk and Milk Products.
International Dairy Federation, Brussel.
Wardana, H.D., N. S. Barwa, A. Kongsjahju, M. A. Iqbal, M. Khalid, dan R. R.
Taryadi. 2002. Budi Daya Secara Organik Tanaman Obat Rimpang.
Penebar Swadaya, Jakarta.
Yuharmen, Y., Y. Eryanti, dan Nurbalatif. 2002. Uji Aktivitas Antimikrobia
Minyak Atsiri dan Ekstrak Metanol Lengkuas Alpinia galanga. Jurnal
Nature Indonesia. 4(2): 178-183.
Zabadi, F. 2010. Uji Aktivitas Antibakteri. http://fairuzzabadi.blogspot.com/uji-
aktivitas-antibakteri.html. Diakses tanggal 8 Oktober 2012.
49
LAMPIRAN
Lampiran 1. Skema Kerja Penelitian
Kontrol (+)
ciprofloxacin
Sterilisasi alat
Pengambilan sampel
Pengolahan sampel
Destilasi sampel
Ditambahkan
kloroform
Evaporasi
Minyak atsiri
Pembuatan medium
NA
(Nutrient Agar)
MHA (Muller
Hinton Agar)
Based
layer
Seed
layer
Peremajaan
bakteri
Pembuatan
suspensi
Bakteri uji
Bakteri uji
Dituang pada
cawan petri
Pembuatan sumur
Pembuatan konsentrasi
10%, 20%, 40% dan 80%
Pembuatan
larutan
pembanding Kontrol (-)
DMSO
Diteteskan sebanyak 0,25 µl
Inkubasi selama 24 dan 48 jam
Pengukuran zona hambat Analisis
data
Kuantitatif : mengukur
Diameter zona hambat
Kualitatif :
- Bakteriostatik
- Bakteriosida
50
Lampiran 2. Skema Penyiapan Bahan Rimpang Lengkuas Merah Alpinia
purpurata K. Schum untuk Ekstraksi
Dibersihkan
Rimpang Lengkuas Merah
Alpinia purpurata K. Schum
Ditimbang
Diblender
Rimpang Lengkuas Merah
Alpinia purpurata K. Schum yang telah diolah
51
Lampiran 3. Skema Destilasi Rimpang Lengkuas Merah Alpinia purpurata
K. Schum
Didestilasi
menggunakan
destilasi uap
Rimpang Lengkuas Merah
Alpinia purpurata K. Schum
yang telah diolah
Ditambahkan
Kloroform
Dipisahkan
Dievaporasi menggunakan rotavapor menggunakan corong pisah
52
Lampiran 4. Skema Pembuatan Variasi Konsentrasi
Minyak atsiri
Rimpang Lengkuas Merah
Alpinia purpurata K. Schum
Ditambahkan
NaCMC 0,5% DMSO (Dimetil sulfoksida)
Konsentrasi Minyak atsiri Rimpang Lengkuas Merah
Alpinia purpurata K. Schum (10%, 20%, 40% dan 80% b/v)
53
Lampiran 5. Skema Pembuatan Medium
MHA (Muller Hinton Agar) NA (Nutrient Agar)
Sintetik sintetik
Ditambahkan 1000 ml
aquades
38 Gram 20 Gram
Ditimbang menggunakan
Neraca Ohaus
Disterilkan di dalam
otoklaf pada suhu
121oC dengan
tekanan 2 atm selama
15 menit.
54
Lampiran 6. Skema Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Disuspensikan ke dalam
larutan NaCl
fisiologis 0,9% steril.
Bakteri uji yang telah
diremajakan
Diukur serapan suspensi biakan
dengan Mc. Farland 0,5 yang
setara dengan 1,5 x 108 CFU/ml.
55
Lampiran 7. Skema Uji Daya Hambat
Dituang
Lapisan dasar
medium MHA
(Muller Hinton Agar)
Pelepasan pencadang
Diinkubasi pada suhu 37ºC
Memasukkan suspensi
Bakteri uji yang sebelumnya
sudah dicampur dengan 15
ml Medium MHA (Lapisan
Pembenihan)
Memasukkan minyak
atsiri 10%, 20%, 40%
dan 80%,
ciprofloxacin dan
DMSO pada masing-
masing sumur
sebanyak 0,25 µl
Mengukur zona hambatan
pada 24 jam dan 48 jam
Analisis data secara
kuantitatif dan kualitatif