bab iii
DESCRIPTION
bab 3TRANSCRIPT
BAB III
PROSEDUR PERCOBAAN
A. Perhitungan ALT Koloni Bakteri Air
Disiapkan 4 tabung reaksi yang steril. 5 cawan petri steril, 1 pipet steril 1 mL,
1 pipet media steril, 40 mL air steril, 75 mL NA steril, 10 mL air limbah / pangan uji.
Diisikan 9 mL air steril ke dalam 4 tabung dan disiapkan 5 cawan petri. Disiapkan
pipet 1 mL dan dilakukan pengenceran terhadap bahan uji air. Dikerjakan dengan
mekanisme aseptis.
Dipipet 1 mL bahan uji dari botolnya, dimasukkan ke dalam cawan-1 dan
tabung-1 (P-1). Diaduk homogen campuran P-1, kemudian dipipet masing masing 1
mL dan dimasukkan ke cawan-2 dan tabung-2 (P-2). Diaduk homogen campuran P-2,
dipipet masing masing 1 mL dan dimasukkan ke cawan-3 dan tabung-3 (P-3). ).
Diaduk homogen campuran P-3, dipipet masing masing 1 mL dan dimasukkan ke
cawan-4 dan tabung-4 (P-4). Diaduk homogen campuran P-4, dipipet masing masing
1 mL dan dimasukkan ke cawan-5. Kelima cawan ditambahkan masing masing 15 mL
NA yang telah bersuhu 45 derajat celcius dan geser diatas meja sekitar 30 kali untuk
menghomogenkan campuran didalamnya. Dilakukan pra-inkubasi selama 15 menit
pada suhu ruang, kemudian diinkubasi semua cawan pada suhu 35-37 derajat celcius
selama 24 jam.
Tabung Reaksi dan pipet didestruksi pada 121 derajat celcius selama 30 menit,
kemudian dicuci bersih dan ditiriskan agar kering. Dicatat dan dihitung jumlah koloni
yang tumbuh pada media pelat NA setelah 24 jam. Dilakukan pengamatan dan
perhitungan populasi pada kelima cawan. Cawan yang mengandung 25-250 koloni
adalah yang terbaik. Populasi bakteri dihitung berdasarkan atas julah koloni yang
telah memenuhi syarat dikali jumlah pengenceran yang terlibat.
B. Perhitungan APM Koloni Bakteri
Disiapkan 4 tabung reaksi steril, 15 tabung reaksi steril yang berisi tabung
durham, 1 pipet 1 mL steril, 1 pipet 10 mL steril, 40 mL air steril, 150 mL LB steril,
10 mL air selokan atau limbah. Diisikan 9 mL air steril ke dalam 4 tabung reaksi.
Dengan pipet yang sama, diisikan 15 tabung reaksi dengn 9 mL LB steril. Dilakukan
pengenceran bahan uji dengan mekanisme aseptis.
Dipipet masing masing 1 mL bahan uji dari botolnya, dimasukkan dalam
tabung LB-1 dan P-1, diaduk homogen dan diusahakan agar cairan dapat mengisi
tabung durham sehingga tidak ada gas yang terperangkap darinya.
Dipipet masing masing 1 mL campuran dalam P-1 dan dimasukkan ke LB-2
dan tabung P-2. Dikocok hati-hati, diusahakan agar campuran cairan tadi dapat secara
penuh mengisi tabung durham.
Dikocok tabung P-2 dengan menggunakan pipet. Pekerjaan yang sama
dilakukan terhadap tabung P-3, LB-3, P-4, LB-4, dan LB-5. Semua tabung durham
harus penuh dan tidak boleh ada gelembung udara.
Semua tabung LB di pra-inkubasi pada suhu kamar selama 15 menit,
kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35-37 derajat celcius. Diamati seluruh
tabung durham yang berada dalam tabung LB. Dicatat jumlah tabung, durham yang
berisi gas. Koloni bakteri dihitung dengan menggunakan tabel APM setelah inkubasi
24 jam. Dibandingkan dengan hasil percobaan ALT. Tabung air dan pipet didestruksi
pada suhu 121 derajat celcius selama 30 menit, kemudian dicuci bersih dan ditiriskan
hingga kering.
C. Diagram Alir (ALT)
Tabung 1
+ 9 mL Air Steril
+ 1 mL Bahan Uji- diaduk sampai homogen
Campuran P1
+ 9 mL Air Steril
+ 1 mL Campuran P1
- diaduk sampai homogen
Tabung 2
Campuran P2
+ 9 mL Air Steril
+ 1 mL Campuran P2
- diaduk sampai homogen
+ 9 mL Air Steril
+ 1 mL Campuran P3
- diaduk sampai homogen
Tabung 4
Campuran P4
Tabung 3
Campuran P3
+ 15 mL NA
+ 1 mL Bahan Uji
Cawan 1
Hasil Cawan 1
+ 15 mL NA
+ 1 mL Campuran P1
Cawan 2
Hasil Cawan 2
+ 15 mL NA
+ 1 mL Campuran P2
Cawan 3
Hasil Cawan 3
+ 15 mL NA
+ 1 mL Campuran P3
Cawan 4
Hasil Cawan 4
+ 15 mL NA
+ 1 mL Campuran P4
- dihomogenkan, diinkubasi
Cawan 5
Hasil Cawan 5
- dihomogenkan, diinkubasi- dihomogenkan, diinkubasi
- dihomogenkan, diinkubasi- dihomogenkan, diinkubasi
D. Diagram Alir (APM)
Tabung 1
+ 9 mL Air Steril
+ 1 mL Bahan Uji- diaduk sampai homogen
Campuran P1
+ 9 mL Air Steril
+ 1 mL Campuran P1
- diaduk sampai homogen
Tabung 2
Campuran P2
+ 9 mL Air Steril
+ 1 mL Campuran P2
- diaduk sampai homogen
+ 9 mL Air Steril
+ 1 mL Campuran P3
- diaduk sampai homogen
Tabung 4
Campuran P4
Tabung 3
Campuran P3
+ 15 mL LB
+ 1 mL Bahan Uji
Cawan 1
Hasil Cawan 1
+ 15 mL LB
+ 1 mL Campuran P1
Cawan 2
Hasil Cawan 2
+ 15 mL LB
+ 1 mL Campuran P2
Cawan 3
Hasil Cawan 3
+ 15 mL LB
+ 1 mL Campuran P3
Cawan 4
Hasil Cawan 4
+ 15 mL LB
+ 1 mL Campuran P4
- dihomogenkan, diinkubasi
Cawan 5
Hasil Cawan 5
- dihomogenkan, diinkubasi- dihomogenkan, diinkubasi
- dihomogenkan, diinkubasi- dihomogenkan, diinkubasi