aplikasi labeling

7/30/2019 Aplikasi Labeling

1/28

PENGGUNAAN LABELING


2/28

Visualisasi Sel

Makhluk kecil seukuran sel :

Disaksikan pertama kali oleh Antonie van

Leeuwenhoek (Delft, Nederland, 1632 1732)

Tahun 1673, Leeuwenhoek membuat alatmikroskop sederhana

Ia menemukan Protista (1674), Bacteria

(1676), spermatozoa (1677) dan serat otot(1682)

Ia menyebut semua itu viva animalcula

(makhluk hidup kecil)


3/28

Sejak itu, mikroskop berkembang dan

mencapai bentuknya yang seperti sekarang

ini di abad ke 18-19 Louis Pasteur (1822-1895) memastikan di

bawah mikroskop keberadaan berbagai

mikroba yang menimbulkan penyakit. Pasteur juga membuktikan dengan

menggunakan mikroskop, bahwa pembusukan

makanan disebabkan oleh mikroba yangtumbuh dan berkembang biak di makanan

tersebut.

Pengamatan Pasteur germ theory


4/28

Gagasan tentang Sel

Semua itu pengamatan yang dilakukan

terutama terhadap makhluk sel tunggal

Robert Hook (1635-1703) menggunakan

mikroskop untuk melihat sayatan tipis gabus

Hook melihat satuan struktur rongga yang

seragam, mengingatkan kpd ruang-ruang kecil

di biara yang masing-masing didiami seorang

rahib & dinamai sel (cell)


5/28

Sejak itu istilah sel dipakai untuk gambarkansatuan terkecil, baik secara struktur mau

pun fungsi, dari makhluk hidup

Sel sebagai makhluk hidup dapat berdiri

sendiri makhluk sel tunggal (diamati

pertama kali oleh Leeuwenhoek)

Bagian dari makhluk banyak sel (pertama kali

dilaporkan Hook)

Tetapi penampilan sel makhluk sel tunggal

sel dari makhluk sel banyak

Pada yang terakhir, sel terikat satu sama lain

dg suatu cara & dg suatu bahan


6/28


7/28

Makhluk Sel Tunggal

Hidup sendiri-sendiri. Kelompok hanya

koloni : sel-sel bebas satu sama lain

Seragam hanya perlu dibedakan dengan

latar 2 cara pewarnaan :

Pewarnaan negatif : cukup mewarnai latar

belakang, sel sendiri tidak ditembus zat warna

pewarnaan dengan suspensi karbon (tinta

Cina / tinta India) atau pewarna nigrosin (zat

warna sintetis berwarna hitam)


8/28

Pewarnaan badan sel : pada bakteri yangterpenting pewarnaan Gram yang bertujuan

mewarnai dinding bakteri.

Dinding bakteri kaya peptidoglikan dan

berwarna biru oleh pewarna kristal ungu

sesudah bereaksi dengan I2 Gram (+):

dinding sel menahan pewarna

Bila ada dinding kedua lipopolisakarida (LPS),

larut o/ alkohol pelarut, pewarna kristal ungu+ I2 masuk sel warna merah Gram (-) :

dinding sel tidak menahan pewarna


9/28

Organisme Banyak Sel

Pewarnaan Haematoxylin-Eosin (HE)

Melihat struktur sel dan bagian-bagiannya

Melihat bagaimana sel dihubungkan satu dglain oleh jaringan ikat

inti dan sitoplasma harus terlihat

Jaringan ikat yang menghubungkan sel harustampak

Inti berwarna biru oleh haematoxylin

Sitoplasma & jar ikat merah oleh eosin


10/28

Pewarna H-E

Haematoxylin Eosin


11/28

Pewarnaan H-E dan yang serupa hanya

memperlihatkan inti, sitoplasma dan jaringan

ikat

Bagian lain dalam sel, apa lagi distribusi

protein tertentu seperti enzim dan berbagai

regulator tidak terlihat

Fisiologi sel yang lebih rinci tidak diketahui

Status metabolisme sel juga tidak difahami


12/28

Berbagai Cara untuk Mengatasi

Memperbesar daya pisah dengan mengatur

cahaya yang masuk :

- Mikroskop elektron

- Sinar elektron mudah diarahkan intensitasnya

- Mudah difokuskan dengan lensa

elektromagnetik dan elektrostatik

- Benturan elektron ke permukaan suatu

molekul akan hasilkan pendaran


13/28

Pendaran tersebut akan diproyeksikan ke layarmonitor yang berpendar

pembesaran dapat mencapai 1.1054.105 x

Dapat memperlihatkan berbagai struktur

subseluler lain selain inti

Dapat perlihatkan arsitektur dan anatomi

berbagai sel yang berbeda

Ada 2 jenis : transmission electron microscop

(TEM) & scanning electron microscop (SEM)

TEM : 2D, tembus ke dalam sel

SEM: 3D, terbatas permukaan


14/28

Perbandingan Gambar Lekosit PMN

secara TEM dan SEM

TEM SEM


15/28

Distribusi Senyawa dalam Sel

Apakah sel merupakan suatu kantong denganisi campur aduk tidak tertata ?

Gambaran yang diperoleh dari pewarnaan H-E

menunjukkan struktur umum yang khas bagisel

Struktur yang selalu ada dan muncul suatu

keteraturan

ada tatanan tertentu

bukansuatu campur aduk yang acak

Gambaran TEM sel menunjukkan tingkat

struktur (=organisasi) yang canggih


16/28

Struktur / organisasi yang canggih pastimempunyai komponen yang tersusun rapi di

tempat masing-masing

Berbagai senyawa dalam sel selalu ditemukan

sama / mirip, baik makromolekul mau pun

mikromolekul

Senyawa tersebut niscaya berada pd tmpt

tertentu dan muncul /mengalir menurut

cara-cara tertentu

Teknik mikroskopi biasa, meski pun dengan

resolusi dan pembesaran yg , tdk dapat

menentukan


17/28

Salah satu aplikasi awaldari penggunaan teknikialah untuk melihat,bagaimana nukleotida

digunakan dalamreplikasi DNA

gambaran garpureplikasi DNA (DNAreplication fork)

Sekaligus jelaskanmekanisme replikasi


18/28

Alternatif senyawa radioaktif untuk

penanda

Penggunaan senyawa radioaktif, walau pun

sangat canggih dan akurat, mempunyai

banyak masalah (T1/2, pembuangan, harga

yang mahal, peralatan, perlindungan dan SDMkhusus) harus ada alternatif lain

1. penggunaan senyawa berfluoresensi yang

diikatkan ke antibodi anti dari zat yangdipelajari

2. penggunaan enzim yang diikatkan ke

antibodi anti zat yang dipelajari

P b fl i


19/28

Penggunaan senyawa berfluoresensi

sebagai penanda

Fluoresensi : pemancaran cahaya oleh suatusenyawa, bila senyawa tersebut disinari oleh

suatu cahaya dengan < sinar yang

dipancarkan senyawa tsb (Stokes 1852)

Teknik pelacakan keberadaan suatu molekul

dalam sel menggunakan antibodi thd molekul

tersebut dan yang sudah ditandai dengan

suatu fluoresens dan dilihat dengan mikroskop

fluoresens dikembangkan o/ Albert Coon

(1912 1978)

Fluoresens paling umum FITC & rhodamin


20/28

Fluoresence Iso Thio Cyanate(FITC) Rhodamin


21/28

Imunofluoresensi Sel Otot PolosImunofluoresensi jaringan

glomerulus


22/28


23/28

Dikembangkan oleh Stratis Avrameas (1966),

Pierce (1967) dan Wide (1967)

Enzim yang digunakan :

Sedapat mungkin tidak ada dalam bahan yang

diperiksa

Dapat diarahkan untuk memberi reaksi warnayang langsung dapat dilihat dengan mikroskop

biasa : peroksidase dan fosfatase

Dapat diamplifikasi : sistem avidin-biotin

Menghasilkan kuantitatif ELISA dan teknik

visualiasi sel immunohistochemistry (IHC)

keduanya atas prinsip yang sama


24/28

Imunohistokimia (IHC) Imunoenzimatik kuantitatif (ELISA)


25/28

IHC untuk melacak antigen kanker

pada Ca-mammae


26/28

Aplikasi

RIA : Radioimmunoassay

menentukan ab at ag menggunakan reagen

bertanda zat radioaktif RAST : Radioallergosorbent test

RIA yg khusus digunkan utk menentukan

antibodi spesifik IgE


27/28

IRMA : Immunoradiometric assay

periksa ag dg cara menambahkan ab yg

bertanda zat radioaktif ELISA : utk menentukan ab

- antigen ikatkan zat padat

- + ab yg akan diperiksa- + ag yg bertanda enz (ex

peroksidase, fosfatase)

- substrat kromogenik yg bila brx dgenz terjadi perub warna

- perub warna sesuai dg jmlh enz yg

diikat


28/28

Tiamin

bebas

Tiamin

avidin

Biotin +

peroksidase

warna

Konsentrasi,

20, 30, 40, 50

Konsentrasi tetap

mis, 50

Intensitas warna ~ biotin-peroksidase ~ avidin

aplikasi labeling

Documents