percobaan uji toksisitas ld50

5/19/2018 Percobaan Uji Toksisitas Ld50

1/14

PERCOBAAN

UJI TOKSISITAS AKUT (LD 50)

Tujuan :

1. Untuk mengetahui dosis suatu obat yang menimbulkan kematian 50% dari hewan

percobaan.

2. Untuk melihat tingkat klasifikasi toksisitas suatu obat.

Landasan teori

Dalamtoksikologi (ilmu tentangracun), median dosis letal adalahbilangan yang biasa

dipakai untuk menggambarkan derajattoksisitas suatu bahan. Bilangan LD50, LC50, atau LCt50

menunjukkan banyak bahan,konsentrasi,atau waktu yang diperlukan untuk mematikan 50%

organisme target.

Uji toksisitas akut merupakan uji tunggal yang dilakukan terhadap zat kimia yang ada

kaitannya dengan kepentingan biologi.uji ini adalah untuk menentukan gejala-gejala yang timbul

sebagai akibat pemberian suatu senyawa pada hewan percobaan dan untuk menentukan tingkat

toksisitas senyawa tersebut.

Uji toksisitas akut

Toksisitas adalah suatu keadaan yang menandakan adanya efek toksik/racun yang

terdapat pada bahan sebagai sediaan single dose atau campuran.toksisitas akut ini diteliti pada

hewan percobaan yang menunjukkan evaluasi keamanan dari kandungan kimia untukpenggunaan produk rumah tangga, bahan tambahan makanan, kosmetik, obat-obatan, dan

sediaan biologi.

Uji toksisitas dilakukan untuk mendapatkan informasi atau data tentang toksisitas suatu

bahan (kimia) pada hewan uji. secara umum uji toksisitas dapat dikelompokkan menjadi uji

5/19/2018 Percobaan Uji Toksisitas Ld50

2/14

toksisitas jangka pendek/akut, dan uji toksisitas jangka panjang. uji toksisitas akut dimaksudkan

untuk mendapatkan informasi tentang gejala keracunan, penyebab kematian. urutan proses

kematian dan rentang dosis yang mematikan hewan uji (lethal dose atau disingkat ld50) suatu

bahan. uji toksisitas akut merupakan efek yang merugikan yang timbul segera sesudah

pemberian suatu bahan sebagai dosis tunggal, atau berulang yang diberikan dalam 24 jam.

Uji toksisitas akut dirancang untuk menentukan atau menunjukkan secara kasar median

lethal dose (ld50) dari toksikan.LD50 ditetapkan sebagai tanda statistik pada pemberian suatu

bahan sebagai dosis tunggal yang dapat menyebabkan kematian 50% hewan uji.jumlah kematian

hewan uji dipakai sebagai ukuran untuk efek toksik suatu bahan (kimia) pada seke lompok

hewan uji. jika dalam hal ini hewan uji dipandang sebagai subjek, respon berupa kematian

tersebut merupakan suatu respon diskretik. ini berarti hanya ada dua macam respon yaitu ada

atau tidak ada kematian.

Guantal respon , yaitu jumlah respon pada sekelompok hewan uji terhadap dosis tertentu

suatu obat atau bahan. pengamatan terhadap efek ini dilakukan untuk menentukan jumlah respon

dari suatu respon diskretik (all or none response) pada suatu kelompok hewan uji. jumlah respon

tersebut dapatn100%, 99%, 50%, 20%, 10%, atau 1%. respon yang bersifat diskret itu dapat

berupa kematian, aksi potensial, dan sebagainya.

Uji toksisitas akut ini biasanya menggunakan hewan uji mencit dari kedua jenis

kelamin.hewan uji harus sehat dan berasal dari satu galur yang jelas. menurut weil penelitian uji

toksisitas akut ini paling tidak menggunakan 4 peringkat dosis yang masing-masing peringkat

dosis menggunakan paling sedikit 4 hewan uji. dosis dibuat sebagai suatu peringkat dengan

kelipatan logaritmik yang tetap. dosis terendah merupakan dosis yang tidak menyebabkan

timbulnya efek atau gejala keracunan, dan dosis tertinggi merupakan dosis yang menyebabkan

kematian semua (100%) hewan uji. cara pemberian obat atau bahan yang diteliti harus

disesuaikan pada pemberiannya pada manusia, sehingga dapat mempermudah dalam melakukanekstrapolasi dari hewan ke manusia.

Dalam uji toksisitas akut, penentuan LD 50 dilakukan dengan cara menghitung jumlah

kematian hewan uji yang terjadi dalam 24 jam pertama sesudah pemberian dosis tunggal bahan

yang diteliti menurut cara yang ditunjukkan oleh para ahli. namun demikian, kematian dapat

5/19/2018 Percobaan Uji Toksisitas Ld50

3/14

terjadi sesudah 24 jam pertama karena proses keracunan dapat berjalan lambat. gejala keracunan

yang muncul sesudah 24 jam menunjukkan bahwa bahan obat atau bahan itu mempunyai titik

tangkap kerja pada tingkat yang lebih bawah sehingga gejala keracunan dan kematian seolah-

olah tertunda (delayed toxicity). oleh karena itu banyak ahli berpendapat bahwa gejala keracunan

perlu diamati sampai 7 hari, bahkan juga sampai 2 minggu.

Sediaan yang akan diuji dipersiapkan menurut cara yang sesuai dengan karakteristik

bahan kimia tersebut, dan tidak diperbolehkan adanya perubahan selama waktu pemberian. untuk

pemberian per oral ditentukan standar volume yangsesuai dengan hewan uji.

Lethal Dose 50 adalah suatu besaran yang diturunkan secara statistik, guna menyatakan

dosis tunggal sesuatu senyawa yang diperkirakan dapat mematikan atau menimbulkan efek

toksik yang berarti pada 50% hewan coba setelah perlakuan.LD50 merupakan tolak ukur

kuantitatif yang sering digunakan untuk menyatakan kisaran dosis letal.Beberapa pendapat

menyatakan tidak setuju, bahwa LD50 masih dapat digunakan untuk uji toksisitas akut. Namun

demikian, ada juga beberapa kalangan

yang masih setuju,bahwa LD50 masih dapat digunakan untuk uji toksisitas akut dengan

pertimbangan antara lain :

1. Jika lakukan dengan baik, uji toksisitas akut tidak hanya mengukur LD50, tetapi juga

memberikan informasi tentang waktu kematian, penyebab kematian, gejalagejala

sebelum kematian, organ yang terkena efek, dan kemampuan pemulihan dari efek

nonlethal.

2. Hasil uji ini dapat digunakan untuk pertimbangan pemilihan design

penelitian subakut.

3. Hasil uji ini dapat langsung digunakan sebagai perkiraan risiko

suatu senyawa terhadap konsumen atau pasien.

4.

Uji LD50 tidak membutuhkan waktu yang lama.Hasil dari uji LD50 yang harus dilaporkan selain jumlah hewan yang mati,juga harus

disebutkandurasi pengamatan. Bila pengamatan dilakukan dalam 24 jam setelah

perlakuan, maka hasilnya tertulis LD50 24 jam. Namun seiring perkembangan, hal ini

sudah tidak diperhatikan lagi, karena pada umumnya tes LD50 dilakukan dalam 24 jam

pertama sehingga penulisan hasil tes LD50 saja sudah cukup untuk mewakili tes LD50

5/19/2018 Percobaan Uji Toksisitas Ld50

4/14

yang diamati dalam 24 jam. Bila dibutuhkan, tes ini dapat dilakukan lebih dari 14 hari.

Contohnya, pada tricresyl phosphat, akan memberikan pengaruh secara neurogik pada

hari 1014, sehingga bila diamati pada 24 jam pertama tidak akan menemukan hasil

yang berarti. Dan apabila demikian maka penulisan hasil harus disertai dengan durasi

pengamatan.14 Pada umumnya, semakin kecil nilai LD50, semakin toksik senyawa

tersebut. Demikian juga sebaliknya, semakin besar nilai LD50, semakin rendah

toksisitasnya. Potensi ketoksikan akut senyawa pada hewan coba dibagi menjadi

beberapa kelas, adalah sebagai berikut :

Kelas LD50 (mg/KgBB)

1. Luar biasa toksik 1 atau kurang

2.Sangat toksik 150

3.Cukup toksik 50500

4.Sedikit toksik 5005000

5. Praktis tidak toksik 500015000

6 .Relatif kurang berbahaya lebih dari 15000

Loomis (1978)14

Beberapa hal yang dapat mempengaruhi nilai LD50 antara lain spesies,strain,jenis kelamin, umur, berat badan, gender, kesehatan nutrisi, dan isi peruthewan coba.

Teknis pemberian juga mempengaruhi hasil, yaitu meliputi waktu pemberian, suhu

lingkungan, kelembaban dan sirkulasi udara.Selain itu, kesalahan manusia juga dapat

mempengaruhi hasil ini.Oleh karena itu, sebelum melakukan penelitian, kita harus

memperhatikan faktorfaktor yang mempengaruhi hasil ini.

Dalam uji toksisitas akut diperlukan rute pemberian, penyiapan senyawa dalam

bentuk sediaan yang sesuai dengan rute pemberian yang dipilih dan pemilihan spesies

hewan uji yang cocok.

Secara umum senyawa uji diberikan melalui rute pemberian obat yang biasa

digunakan pada manusia.Rute oral paling banyak digunakan dibandingkan dengan rute-

rute lainnya.

5/19/2018 Percobaan Uji Toksisitas Ld50

5/14

Menurut farmakope Indonesia persyaratan yang harus dipenuhi agar dapat

menggunakan metode farmakologi Indonesia ini adalah :

1. Menggunakan seri dosis dengan pengenceran berkelipatan tetap.

2. Jumlah hewan percobaan / jumlah biakan jaringan tiap kelompok harus sama.

3. Dosis diatur sedemikian rupa sehingga memberikan efek dari 0-100% dan

perhitungan dibatasi pada kelompok percobaan yang memberikan efek dari 0-100%.

LD50 biasanya dinyatakan sebagai massa zat diberikan per satuan massa dari

subjek tes , biasanya sebagai miligram zat per kilogram massa tubuh , tetapi dinyatakan

sebagai nanogram ( cocok untuk botulinum ) , mikrogram , miligram , atau gram ( cocok

untuk parasetamol ) per kilogram sebagai toksisitas berkurang . Menyatakan dengan cara

ini memungkinkan toksisitas relatif dari zat yang berbeda untuk dibandingkan , dan

menormalkan untuk variasi dalam ukuran hewan yang terpajan ( meskipun toksisitas

tidak selalu skala hanya dengan massa tubuh ) .

Pilihan 50 % lethality sebagai patokan menghindari potensi ambiguitas

melakukan pengukuran dalam ekstrem dan mengurangi jumlah pengujian yang

diperlukan . Namun, ini juga berarti bahwa LD50 bukan dosis yang mematikan untuk

semua mata pelajaran , beberapa mungkin dibunuh dengan jauh lebih sedikit , sementara

yang lain bertahan dosis jauh lebih tinggi daripada LD50 . Tindakan seperti " LD1 " dan "

LD99 " ( dosis yang diperlukan untuk membunuh 1 % atau 99 % , masing-masing , dari

populasi test) kadang-kadang digunakan untuk tujuan tertentu .

Dosis mematikan sering bervariasi tergantung pada metode administrasi ,

misalnya: banyak zat yang kurang beracun bila diberikan secara oral daripada ketika

intravena . Untuk alasan ini , angka LD50 sering lolos dengan cara pemberian , misalnya

, " LD50 iv "

Kuantitas LD50/30 atau LD50/60 terkait digunakan untuk merujuk kepada dosis

yang tanpa pengobatan akan mematikan untuk 50 % dari populasi dalam ( masing-

5/19/2018 Percobaan Uji Toksisitas Ld50

6/14

masing) 30 atau 60 hari . Langkah-langkah ini digunakan lebih sering dalam Radiasi

Kesehatan Fisika , sebagai kelangsungan hidup melampaui 60 hari biasanya

menghasilkan pemulihan .

Sebuah pengukuran sebanding adalah LCt50 , yang berhubungan dengan dosis

mematikan dari paparan , di mana C adalah konsentrasi dan t adalah waktu. Hal ini sering

dinyatakan dalam mg - min / m . LCt50 adalah dosis yang akan menyebabkan menderita

cacat daripada kematian. Langkah-langkah ini biasanya digunakan untuk menunjukkan

kemanjuran komparatif agen senjata kimia , dan dosis biasanya memenuhi syarat oleh

tingkat pernapasan ( misalnya , istirahat = 10 l / min ) untuk inhalasi , atau derajat

pakaian untuk penetrasi kulit . Konsep Ct pertama kali diusulkan oleh Fritz Haber dan

kadang-kadang disebut sebagai Haber Hukum , yang mengasumsikan bahwa paparan 1

menit 100 mg / m setara dengan 10 menit dari 10 mg / m ( 1 100 = 100 , seperti

halnya 10 10 = 100 ) .

Beberapa bahan kimia , seperti hidrogen sianida , dengan cepat didetoksifikasi

oleh tubuh manusia , dan tidak mengikuti Hukum Haber . Jadi , dalam kasus ini ,

konsentrasi mematikan dapat diberikan hanya sebagai LC50 dan kualifikasi oleh durasi

paparan ( misalnya , 10 menit ) . The Material Safety Data Sheets untuk zat beracun

sering menggunakan bentuk istilah bahkan jika zat tersebut tidak mengikuti HukumHaber .

Untuk organisme penyebab penyakit , ada juga ukuran yang dikenal sebagai dosis

infektif median dan dosis . Median dosis infektif ( ID50 ) adalah jumlah organisme yang

diterima oleh seseorang atau hewan uji kualifikasi oleh rute administrasi ( misalnya ,

1.200 org / man per oral). Karena kesulitan dalam menghitung organisme aktual dalam

dosis , dosis infektif dapat dinyatakan dalam uji biologis , seperti jumlah LD50 untukbeberapa hewan uji. Dalam perang biologis dosis infektif adalah jumlah dosis infektif per

menit untuk satu meter kubik ( misalnya , ICt50 adalah 100 dosis menengah - min / m ) .

pembatasan

5/19/2018 Percobaan Uji Toksisitas Ld50

7/14

Sebagai ukuran toksisitas , LD50 agak tidak dapat diandalkan dan hasilnya

mungkin sangat bervariasi antara fasilitas pengujian karena faktor-faktor seperti

karakteristik genetik dari populasi sampel , spesies hewan yang diuji , faktor lingkungan

dan cara pemberian .

Ada dapat variabilitas lebar antara spesies juga, apa yang relatif aman bagi tikus

mungkin sangat baik menjadi sangat beracun bagi manusia ( lih. toksisitas parasetamol ) ,

dan sebaliknya . Misalnya, cokelat , tidak berbahaya bagi manusia , diketahui menjadi

racun bagi banyak hewan . Ketika digunakan untuk menguji racun dari makhluk berbisa ,

seperti ular , hasil LD50 mungkin menyesatkan karena perbedaan fisiologis antara tikus ,

tikus , dan manusia . Banyak ular berbisa yang predator khusus pada tikus , dan racun

mereka dapat disesuaikan secara khusus untuk melumpuhkan tikus , dan mongooses

mungkin sangat resisten . Sementara sebagian besar mamalia memiliki fisiologi yang

sangat mirip , hasil LD50 mungkin atau mungkin tidak memiliki bantalan yang sama

pada setiap spesies mamalia , seperti manusia , dll.

Secara umum, semakin kecil nilai LD50, semakin toksik senyawa tersebut.Begitu pula

sebaliknya, semakin besar nilai LD50, semakin rendah toksisitasnya.Hasil yang diperoleh (dalam

mg/kgBB) dapat digolongkan menurut potensi ketoksikan akut senyawa uji menjadi beberapa

kelas.

Fenol atau asam karbolat atau benzenol adalah zat kristal tak berwarna yang memiliki

bau khas. Rumus kimianya adalah C6H5OH dan strukturnya memiliki gugus hidroksil (-OH)

yang berikatan dengan cincin fenil.Fenol memiliki kelarutan terbatas dalam air, yakni 8,3

gram/100 ml. Fenol memiliki sifat yang cenderung asam, artinya ia dapat melepaskan ion H+dari

gugus hidroksilnya. Pengeluaran ion tersebut menjadikan anion fenoksida C6H5O yang dapat

dilarutkan dalam air.

Dibandingkan dengan alcohol alifatik lainnya, fenol bersifat lebih asam. Hal ini

dibuktikan dengan mereaksikan fenol dengan NaOH, di mana fenol dapat melepaskan H+. Pada

keadaan yang sama, alkohol alifatik lainnya tidak dapat bereaksi seperti itu. Pelepasan ini

diakibatkan pelengkapan orbital antara satu-satunya pasangan oksigen dan sistem aromatik, yang

mendelokalisasi beban negatif melalui cincin tersebut dan menstabilkan anionnya.

5/19/2018 Percobaan Uji Toksisitas Ld50

8/14

Fenol dapat digunakan sebagai antiseptik seperti yang digunakan Sir Joseph Lister saat

mempraktikkan pembedahan antiseptik. Fenol merupakan komponen utama pada anstiseptik

dagang, triklorofenol atau dikenal sebagai TCP (trichlorophenol). Fenol juga merupakan bagian

komposisi beberapa anestitika oral, misalnya semprotan kloraseptik.

Fenol berfungsi dalam pembuatan obat-obatan (bagian dari produksi aspirin, pembasmi

rumput liar, dan lainnya. Selain itu fenol juga berfungsi dalam sintesis senyawa aromatis yang

terdapat dalam batu bara. Turunan senyawa fenol (fenolat) banyak terjadi secara alami sebagai

flavonoid alkaloid dan senyawa fenolat yang lain. Contoh dari senyawa fenol adalah eugenol

yang merupakan minyak pada cengkeh.

5/19/2018 Percobaan Uji Toksisitas Ld50

9/14

Bahan dan Alat

a. Bahan

- Fenol dengan berbagai konsentrasi ( 0,02%, 0,01%, 0,005%, 0,0025%, 0,001250%,

0,000625% )

- Anak ikan lele 10 ekor

b. Alat

- Beker gelas

- Stopwatch

Prosedur kerja :

1. Siapkan fenol dengan berbagai konsentrasi didalam beker gelas.

2. Siapkan anak ikan @10 ekor, masukkan kedalam masing-masing beker gelas, dan mulai

hitung waktunya.

3. Lakukan pengamatan selama 60menit.

4.

Hitung beberapa jumah ikan yang hidup dan jumlah ikan yang mati.

5. Tabelkan dan LD50 nya

5/19/2018 Percobaan Uji Toksisitas Ld50

10/14

Hasil & Pembahasan

a. Hasil

No. Dosis Jumlah hewan

perkelompok

Jumlah hewan

yang mati

Jumlah hewan

yang hidup

1. 0.02% 10 10 0 1

2. 0,01% 10 10 0 1

3. 0,005% 10 3 7 0,3

4. 0,0025% 10 0 10 0

5. 0,001250% 10 0 10 0

6. 0,000625% 10 0 10 0

Rata-rata

Perhitungan LD50 :

Rumus LD50 :

m = ab (0,5 )

keterangan :

m = log LD50

a = log dosis terendah yang menyebabkan kematian 100% tiap kelompok

b = beda log dosis berurutan

Pi = jumlah hewan yang mati yang menerima dosis sebanyak I dibagi jumlah

hewan seluruhnya yang menerima dosis a

hasil perhitungan LD50

m = ab (0,5 )

= -0,20,301 ( 1,30,5 )

= -2,2408

= 5,74 X 10-3

5/19/2018 Percobaan Uji Toksisitas Ld50

11/14

b. Pembahasan

Pada praktikum kali ini dilakukan uji toksisitas akut. Uji toksisitas akut merupakan uji

tunggal yang dilakukan terhadap zat kimia yang ada kaitannya dengan kepentingan biologi.uji ini

adalah untuk menentukan gejala-gejala yang timbul sebagai akibat pemberian suatu senyawa

pada hewan percobaan dan untuk menentukan tingkat toksisitas senyawa tersebut.

Tujuan dilakukannya uji toksisitas akut adalah untuk menentukan potensi ketoksikan

dari suatu senyawa dan untuk menentukan gejala yang timbul pada hewan percobaan. Data yang

dikumpulkan pada uji toksisitas akut ini adalah data kuantitatif yang berupa kisaran dosis letal

atau toksik, data kualitatif yang berupa gejala klinis.

Lethal Dose 50 adalah suatu besaran yang diturunkan secara statistik, guna menyatakan

dosis tunggal sesuatu senyawa yang diperkirakan dapat mematikanatau menimbulkan efek toksik

yang berarti pada 50% hewan coba setelah perlakuan.LD50 merupakan tolak ukur kuantitatif

yang sering digunakan untukmenyatakan kisaran dosis letal.Ada beberapa pendapat yang

menyatakan tidak setuju, bahwa LD50 masih dapat digunakan untuk uji toksisitas akut.

Untuk menentukan uji toksisitas yang akan dilakukan pada praktikum kali ini bahan

yang digunakan adalah fenol. Fenol merupakan salah satu anti septik yang banyak digunakan

dikalangan masyarakat luas.Antiseptik adalah zat yang dapat menghambat atau menghancurkan

mikroorganisme pada jaringanhidup. Beberapa sifat-sifat penting antiseptika, antara lain :

Harus memiliki sifat antibakterial yang luas.

Tidak mengiritasi jaringan hewan atau manusia.

Memiliki sifat racun yang rendah, tidak berbahaya bagi manusia maupun ternak.

Memiliki daya tembus yang tinggi.

Tetap aktif meskipun terdapat cairan tubuh, darah, nanah dan jaringan yang mati.

Tidak mengganggu proses kesembuhan.

Tidak merusak alat-alat operasi, lantai kandang dan dinding.

Tidak menimbulkan warna yang mengganggu pada jaringan yang dioperasi.

Harga murah, karena biasanya diperlukan dalam jumlah yang besar.

5/19/2018 Percobaan Uji Toksisitas Ld50

12/14

Dalam praktikum kali ini, digunakan beberapa ekor anak ikan yang akan diberi beberapa

konsentrasi fenol. Ikan-ikan tersebut di masukkan ka dalam beker gelas yang telah diisi dengan

berbagai konsentrasi fenol. Fenol yang telah di encerkan menjadi beberapa konsentrasi.

Konsentrasi fenol berkisar antara 0,02%, 0,01%, 0,005%, 0,0025%, 0,00125% dan 0,000625%.

Kemudian pengamatan dilanjutkan dengan melihat berapa jumlah ikan yang mati dan jumlah

ikan yang hidup pada setiap konsentrasi. Pengamatan dilakukan selama 1,5 jam. Dari hasil

pengamatan tersebut dapat diketahui dosis berapakah yang dapat menimbulkan efek toksik dari

fenol yang diberikan.

Dari hasil yang di dapat, dosis yang dapat membunuh 50% hewan percobaan adalah pada

dosis 0,02% dan 0,01% sedangkan pada konsentrasi 0.005% ikan yang hidup hanya 7 ekor dan

pada konsentrasi 0.0025%, 0,00125%, dan konsentrasi 0,000625% semua ikan hidup. Hal ini

terjadi karena secara umum, semakin kecil nilai LD50, semakin toksik senyawa tersebut.Begitu

pula sebaliknya, semakin besar nilai LD50, semakin rendah toksisitasnya.Hasil yang diperoleh

(dalam mg/kgBB) dapat digolongkan menurut potensi ketoksikan akut senyawa uji menjadi

beberapa kelas.

5/19/2018 Percobaan Uji Toksisitas Ld50

13/14

Kesimpulan

Dosis efektif 50% adalah dosis suatu obat yang dapat berpengaruh terhadap 50% dari

jumlah hewan yang diuji, sedangkan dosis lethal 50% adalah dosis suatu obat atau bahan

kimia yang dapat menyebabkan kematian sampai 50% dari jumlah hewan percobaan.

Semakin kecil nilai LD50, semakin toksik senyawa tersebut. Begitu pula sebaliknya,

semakin besar nilai LD50, semakin rendah toksisitasnya.

Dari percobaan dapat dilihat tingkat toksisitas akut LD50 yang terjadi pada ikan lele yang

dicelupkan pada larutan fenol konsentrasi 0.02 % lebih cepat terjadi. Hal ini dipengaruhi

oleh senyawa fenol yang bersifat racun (toksik) pada konsentrasi rendah..

Semakin banyak larutan fenol yang diberikan, atau semakin besar konsentrasi fenol yang

diberikan maka akan semakin cepat dan tinggi tingkat toksisitas yang terjadi pada

organisme tersebut.

5/19/2018 Percobaan Uji Toksisitas Ld50

14/14

DAFTAR PUSTAKA

http://ebookbrowse.com/uii-skripsi-uji-toksisitas-akut-01613017-maya-widyasari-9746170530-

preliminari-pdf-d333279494

http://lansida.blogspot.com/2011/06/cara-uji-toksisitas-akut-produk-obat.html

http://eprints.undip.ac.id/8080/1/Rika_Jenova.pdf

www.geocities.ws/kuliah_farm/praktkum.../praktikum_toksi.doc