penentuan kadar protein menggunakan spektrofotometri

PENENTUAN KADAR PROTEIN MENGGUNAKAN

SPEKTROFOTOMETRIKelompok 61. Widiyanti (4301410001)2. Prita Sri Sulastri (4301410017)3. Fransisca Ditawati N.P(4301410034)

TUJUANmemahami penggunaan spektrofotometri

sebagai alat untuk menganalisis kadar protein

Menjelaskan prinsip dasar penggunaan spektrofotometri dalam analisis kadar protein

Terampil menggunakan spektrofotometri untuk menentukan kadar protein

DASAR TEORIPenentuan kadar protein secara biuret

berdasarkan atas pengukuran serapan cahaya dengan spektrofotometri oleh ikatan kompleks yang ungu warnanya. Ini terjadi apabila protein bereaksi dengan tembaga dalam lingkungan alkalis

DASAR TEORIHukum yang mendasari analisis menggunakan

alat spektrofotometri adalah hukum Lambert Beer, yaitu pengukuran serapan cahaya monokromatis yang melalui larutan berwarna akan berkurang secara eksponensial daya radiasi yang diteruskannya bila konsentrasi bertambah

ALAT DAN BAHAN Alat

1. Spektronik 202. Kuvetpipet3. Tabung reaksi4. Beker gelas5. Labu takar6. Gelas ukur

Bahan1. Sampel protein2. CuSO4.5H2O3. Natrium kalium tartrat4. Aquades NaOH 10%5. Serum albumin murni6. Kasein7. NaOH 3%

CARA KERJA

DATA PENGAMATANNo Jenis Sampel Konsentrasi (mg/mL) Absorbansi

1 Larutan blanko 0 0

2 Larutan standar protein 1 0,02

3 Larutan standar protein 3 0,07

4 Larutan standar protein 5 0,2

5 Larutan standar protein 7 0,24

6 Larutan standar protein 9 0,27

Larutan sampel, absorbansinya = 0,18

ANALISA DATA

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 100

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0

0.02

0.07

0.2

0.24

0.27f(x) = 0.032986301369863 x − 0.00410958904109593R² = 0.957461592317142

Kurva Kalibrasi

Series1Linear (Series1)

konsentrasi

abso

rban

si

ANALISA DATAy = 0,033x – 0,004A = 0,033c – 0,0040,18 = 0,033 c – 0,0040,033 c = 0,18 + 0,0040,033 c = 0,184c = 5,575Hasil perhitungan diperoleh konsentrasi sampel

sebesar 5,575 mg/mL

PEMBAHASAN• Dari data yang diperoleh, dibuat grafik

hubungan antara konsentrasi dengan absorbansi, didapatkan persamaan y = 0,033x-0,004 dengan r2 = 0,957

• Dengan menggunakan persamaan yang diperoleh, maka dapat diketahui konsentrasi sampel yaitu 5,575mg/ml dengan ketelitian sebesar 60,625%

KESIMPULAN1. Penentuan kadar protein dilakukan dengan menggunakan

spektrofotometri spektronik 20 pada panjang gelombang 540 nm dengan prinsip kerja absorbansi atom

2. Biuret digunakan sebagai indikator uji adanya protein, dimana uji positifnya ditunjukkan dengan warna biru keungunan

3. Persamaan kurva kalibrasi yang didapatkan y=0,033x – 0,004

4. Konsentrasi sampel protein secara teoritis adalah 5,575 mg/ml dengan ketelitian 60,625%

DAFTAR PUSTAKATim Dosen Biokimia. 2012. Petunjuk Praktikum

Biokimia. Semarang: Laboratorium Bioorganik Jurusan Kimia FMIPA UNNES