kartuti 04025130 49

Kartuti 0402513049 DNA SEQUENCING

LATAR BELAKANG

Untuk mengetahui informasi genetik yang terdapat dalam

DNA digunakan teknik DNA Sequencing, yaitu metode yang

digunakan untuk menentukan urutan basa nukleotida

(adenine, guanine, cytosine dan thymine) pada molekul

DNA. Saat ini teknik DNA Sequencing sudah memasuki

tahap baru yang mengarah pada large scale atau high-

throughput sequencing, jutaan bahkan miliaran basa

nukleotida DNA dapat ditentukan urutannya dalam sekali

putaran saja

RUMUSAN MASALAH

1. Apakah pengertian sequensing DNA ?

2. Bagaimana prinsip dasar sequensing DNA?

3. Bagaimanakah metode Sanger tentang sequensing DNA

TUJUAN

1. Untuk mengetahui pengertian sequensing DNA.

2. Untuk mengetahui prinsip dasar sequensing DNA.

3. Untuk mengetahui metode sanger tentang sequensing

DNA

DNA SEQUENCING

Sekuensing DNA atau pengurutan DNA adalah

proses atau teknik penentuan urutan basa

nukleotida pada suatu molekul DNA. Urutan

tersebut dikenal sebagai sekuens DNA, yang

merupakan informasi paling mendasar suatu gen

atau genom karena mengandung instruksi yang

dibutuhkan untuk pembentukan tubuh makhluk

hidup.

PRINSIP DASAR DNA SEQUENCING ( proses cycle sequensing)

Menggunakan metode PCR (Polymerase Chain

Reaction) .

DNA akan ditentukan urutan basa AGGT

dijadikan sebagai cetakan (template).

kemudian diamplifikasi menggunakan enzim dan

bahan – bahan yang mirip dengan reaksi PCR dan

ada penambahan reaksi tertentu.

Proses Cycle Sequencing

Perbedaan cycle sequensing dengan PCR biasa

Primer yang digunakan hanya satu untuk satu arah pembacaan, tidak dua (sepasang) seperti PCR. ddNTPs (dideoxy-Nucleotide Triphosphate) adalah modifikasi dari dNTPs dengan menghilangkan gugus 3′-OH pada ribosa.

GAMBAR Struktur molekul DNTP dan ddNTP

METODE SANGER TENTANG SEqUENSING DNA

Komponen sekuensing DNA

1.DNA rantai tunggal.

2.Primer.

3.DNA polimerase

4.dATP, dCTP, dTTP, dan d GTP

Gambar Deoxy method of DNA sequencing

Proses DNA sequensing

1. Penyiapan Yaitu penyiapan salah satu untai

fragmen DNA yang dibagi dalam 4 bagian,

kemudian setiap bagian diinkubasi dengan semua

bahan yang diperlukan untuk sintesis untas

komplementer (primer, DNA polimerase, dan

keempat deoksiribonukleotida triphospat)

2. Sintesis untai DNA baru

Dimulai pada primer dan berlanjut hingga

dideoksiribonukleotida dimasukkan yang mencegah

sintesis lebih lanjut. Dideoksiribonukleotida

diselipkan begitu sering secara random sebagai

ganti ekuivalensi normalnya. Pada akhirnya

dihasilkan serangkaian untai radioaktif yang

mempunyai panjang yang berbeda-beda.

3. Elektroforesis Gel

Untai DNA baru dalam setiap campuran,

reaksi dipisahkan dengan cara

elektroforesis pada gel poliakrilamid yang

dapat memisahkan untai-untainya, bahkan

yang hanya mempunyai perbedaan sekecil

nukleotida panjangnya.

CARA KLASIK

Metode sequensing Dye Primers dengan Label Berbeda

Metode sequensing Dye-Terminator

KESIMPULAN

1. Sequencing DNA adalah penentuan urutan  basa DNA dalam segmen molekul DNA yang relatif pendek yang memungkinkan kita mengetahui kode genetic dari molekul DNA.

2. Metode Sanger pada dasarnyas memanfaatkan dua sifat salah satu subunit enzim DNA polimerase yang disebut fragmen klenow.

3. Hasil dari skuencing adalah fragmen-fragmen DNA dengan panjang bervariasi, yang satu sama lain berbeda sebanyak satu basa tunggal.

4. Dalam ilmu pengobatan, sekuensing DNA dapat digunakan untuk mengidentifikasi, mendiagnosis, dan mengembangkan pengobatan penyakit genetik

TERIMA KASIH