bidang ilmu: sains, teknologi dan olah raga penelitian...
Post on 03-Dec-2020
8 Views
Preview:
TRANSCRIPT
i
LAPORAN AKHIR
PENELITIAN KOMPETITIF FAKULTAS
AKTIVITAS ANTIOKSIDAN, ANTIMIKROBA DAN SITOTOKSISITAS
TERHADAP CELL LINE HepG2 DAN MCF7 EKSTRAK DAUN SIMPOR
(Dillenia Sufruticosa)
TIM PENELITI
Ketua Peneliti : Sri Rahayu, M. Biomed NIDN 0025097903
Anggota Peneliti 1 : Annisa Wulan Agus Utami, M. Si NIDN 0401089101
Anggota peneliti 2 : Isfi Zahara NIM 3425164093
Anggota peneliti 3 : Farid Pujiono NIM 3425164063
Berdasarkan kontrak penelitian
No 38/SPK PENELITIAN/ 5. FMIPA / 2019 tanggal 17 Mei 2019
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS NEGERI JAKARTA
NOVEMBER 2019
Bidang Ilmu: Sains, Teknologi dan Olah Raga Penelitian Kelompok
ii
HALAMAN PENGESAHAN
PENELITIAN KOMPETITIF FAKULTAS
Judul penelitian : Aktivitas Antioksidan, Antimikroba dan
Sitotoksisitas Terhadap Cell Line HepG2 dan MCF
Esktrak Daun Simpor (Dillenia sufruticosa)
Kode/Bidang ilmu : 08/Sains, Teknologi dan Olah raga
Identitas Ketua Peneliti
a. Nama Lengkap : Sri Rahayu, M.Biomed
b. NIDN : 0025097903
c. Jabatan Fungsional : Lektor
d. Program studi : Biologi
e. Nomor hp : 08161690885
f. Alamar surel/ email : srirahayu@unj.ac.id
Biaya Penelitian Tahun 1 : 41.500.000
Jakarta, 22 November 2019
Mengetahui, Peneliti
Dekan Fakultas MIPA
Dr. Adisyahputra, M. S Sri Rahayu, M. Biomed
NIP. 196011111998703003 NIP. 197909252005012002
Menyetujui,
Ketua Lembaga Penelitian dan Pengabdian Kepada Masyarakat
Universitas Negeri Jakarta
Dr. Ucu Cahyana, M. Si
NIP. 196608201994031002
iii
TIM PELAKSANA
Ketua Pelaksana : Ns. Sri Rahayu, M.Biomed
NIDN : 0025097903
Bidang keahlian : Biokimia
Anggota Penelitian :
Anggota 1
Nama : Annisa Wulan Agus Utami, M.Si
NIDN : 0401089101
Bidang Keahlian : Mikrobiologi
Anggota 2
Nama : Isfi Zahara
NIM : 3425164093
Anggota 3
Nama : Farid Pujiono
NIM : NIM 3425164063
iv
KATA PENGANTAR
Segala Puji Allah SWT yang telah melimpahkan rahtmatnya sehingga
penelitian ini dapat dilaksanakan. Meskipun hasil kegiatan penelitian ini mungkin
belum sesuai dengan yang diharapkan, namun penelitian telah memberikan pelajaran
dan informasi yang berarti bagi civitas akademik jurusan Biologi UNJ. Sehingga
kegiatan ini telah membangun atmosfir akademik yang sehat bagi kalangan sivitas
akademik dilingkungan kami, terutama atmosfer dalam penelitian.
Adapun hasil penelitian yang ada mudah- mudahan tidak mengurangi arti
pentingnya sebagai informasi ilmiah. Pelajaran kegagalan dan kesulitan pada saat
penelitian akan menjadi pengalaman yang sangat berguna untuk penelitian di
kemudian hari.
Pada kesempatan ini, saya ingin mengucapkan terima kasih kepada DIPA BLU
FMIPA UNJ atas kesempatan serta dana yang diberikan untuk penelitian ini, ketua
lembaga penelitian UNJ serta semua pihak yang membantu dalam penelitian ini.
Peneliti menyadari penelitian ini masih sangat jauh dari sempurna dan memerlukan
masukan dari berbagai pihak.
Jakarta, November 2019
PENELITI
v
DAFTAR ISI
HALAMAN PENGESAHAN.............................................................................
i
TIM PELAKSANA............................................................................................. ii
KATA PENGANTAR……………………………………................................ iii
DAFTAR ISI.......…………………………………………................................ iii
RINGKASAN..................................................................................................... iv
BAB I. PENDAHULUAN......…………………………….............................. 1
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA…………………………….......................
BAB III. TUJUAN DAN MANFAAT PENELITIAN…………....................
5
8
BAB IV. METODE PENELITIAN…………………......................................... 10
BAB V. HASIL DAN LUARAN YANG DICAPAI………………………… 13
BAB VI. KESIMPULAN DAN SARAN…………………………………….. 18
DAFTAR PUSTAKA......................................................................................... 19
LAMPIRAN ………………………………………………………….............. 22
LAMPIRAN 1. ARTIKEL PENELITIAN……………………………………. 22
LAMPIRAN 2. ACCEPTANCE LETTER PADA AIP PROCEEDING……… 31
LAMPIRAN 3. SERTIFIKAT SEMINAR INTERNASIONAL ……………… 32
LAMPIRAN 4. DRAFT HAKI……………………………………………….. 33
vi
RINGKASAN
Upaya invesitigasi sumber bahan alam sebagai antioksidan, antikanker dan
antimikroba saat ini memegang peranan yang sangat penting karena potensi yang
cukup baik dan efek yang minim. Tanaman simpor yang sudah dikenal oleh
masyarakat Belitung sebagai pembungkus makanan ternyata memiliki potensi yang
cukup baik sebagai antioksidan, antibakteri dan antimikroba. Penelitian ini merupakan
bagian dari eksplorasi potensi bahan alam sebagai agen herbal medicine yang telah
diPenelitian ini bertujuan menganalisis potensi antioksidan, antimikroba dan
antikanker terhadap karsinoma hati (HepG2) dan karsinoma mamae (MCF7) cell line
esktrak daun simpor. Penelitian dilakukan selama 3 tahun. Tahun pertama akan
dianalisis aktivitas antioksidan ekstrak daun simpor berdasarkan konten senyawa
flavonoid dan fenolik, kemampuan netralisir radikal DPPH, ABTS dan Reducing
power. Tahun kedua penelitian akan dilakukan uji uji sitotoksisitas dengan BSLT, sel
line (HepG2) dan karsinoma mamae (MCF7) cell. Tahun ketiga penelitian akan
dilakukan uji antimikroba terhadap bakteri gram positif, negatif serta jamur. Penelitian
dilakukan di laboratorium biokimia dan mikrobiologi FMIPA UNJ. Sampel daun
simpor berasal dari varietas Dillenia Suffruticosa yang diambil di Belitung. Metode
penelitian menggunakan desain Rancang Acak Lengkap (RAL) pola faktorial dengan
konsentrasi ekstrak dan jenis pelarut sebagai faktornya. Uji analisis dilakukan dengan
Anova dan dilanjutkan dengan DMRT. Berdasarkan hasil penelitian disimpulkan
bahwa ekstrak etanol dari daun simpor Dillenia sp. positif memiliki flavonoid dengan
kadar flavonoid tertinggi 0.00069 mg/QE pada maserasi 24 jam dan konsentrasi 15%.
Hasil ini membuktikan pula bahwa simpor memiliki kemampuan antioksidan dalam
menetralisir radikal bebas DPPH. Kemampuan antioksidan tertinggi adalah 97.097%
paad maserasi 24 jam dan konsentrasi 20%. Hal ini berarti bahwa simpor memiliki
kemampuan untuk menetralisir radikal DPPH hingga 97.097% dan menyisakan
radikal hanya 2.913%. Dapat disimpulkan pula bahwa konsentrasi dan lama maserasi
berpengaruh pada kadar flavonoid (α 0.003) namun tidak berpengaruh pada
kemampuan netralisir radikal DPPH (α 0.079).
1
BAB I. PENDAHULUAN
a. Latar Belakang
Berbagai kondisi dapat meningkatkan produksi radikal bebas dan pembentukan
ROS (Reactive oxygen species) seperti polutan, stress dan aktivitas fisik (1). Ros
sendiri secara fisiologis terbentuk sebagai produk samping mekanisme metabolism
tubuh (2). Senyawa biomolekul tubuh seperti protein, karbohidrat, lipid dan asam
nukelat dapat dirusak oleh aktivitas dari radikal bebas tersebut (3). Radikal bebas
bersifat sangat aktif sehingga dapat merusak struktur serta fungsi sel dan memicu
perkembangan berbagai penyakit (4). Paparan radikal bebas yang berlebihan
menyebabkan tubuh membutuhkan asupan antioksidan eksogen untuk mengatasinya
(6).
Sumber antioksidan dapat berasal dari hasil ekstraksi bahan-bahan alami maupun
dari hasil sintesa reaksi kimia. Penggunaan bahan alami sebagai sumber antioksidan
menjadi preferensi karena memiliki toksisitas yang rendah dan kaya akan senyawa
kimia penting bagi tubuh (7). Beberapa penelitian menunjukkan senyawa antioksidan
yang terkandung pada tanaman umumnya merupakan senyawa-senyawa fitokimia
seperti polifenol, tokoferol, karetenoid, asam askorbat (8). Berbagai tanaman telah
teridentifikasi memilliki senyawa aktif sebagai antioksidan diantaranya mahkota
dewa, meniran, daun papaya, daun bambu (9,10,11,12,13,14,15). Aktivitas
antioksidan tanaman umunya dipelajari berdasarkan jumlah total senyawa fenolik
yang dimiliki dan kemampuan dalam menangkal radikal bebas serta kemamuan
bioktivitas lainya (16,17,18).
Bioaktivitas lan yang dimiliki oleh tumbuhan selain sebagai antioksidan juga
sebagai antimikroba (19,20,21). Resistensi antimikroba sintetik terhadap beberapa
bakteri dan jamur menyebabkan peningkatan upaya untuk agen antimikroba yang
efektif. Tanaman obat dan metabolitnya merupakan sumber yang dapat digunakan
sebagai antimikroba. Beberapa penelitian memperlihatkan penggunaan senyawa aktif
dari tanaman pada berbagai pathogen termasuk pathogen yang berasal dari makanan,
air dan udara (22).
Peran bioaktif tanaman yang memiliki peran sebagai antioksidan juga
dimanfaatkan secara luas pada terapi kanker dengan efek samping yang sangat minim
2
(23,24). Beberapa tanaman yang telah terbukti memiliki aktivitas antikanker antara
lain Garcinia paucinervis, Elephantopus scaber, Evodia lepta, Achras zapota,
Stephania longa, Crocosmia crocosmiflora, Pandanus tectorius, Euphorbia hirta,
Bidens biternata, Cyperus rotundus, Microsorium fortuni, Bidens pilosa, Wedelia
calendulacea, Uncaria macrophylla, Sarcandra glabra and Melaleuca leucadendra (25).
60 % dari tamanan yang teruji memiliki aktivitas antikanker mengandung taxol,
curcumin dan kanabinoid (26,27).
Tanaman yang juga diketahui memiliki bioaktivitas sebagai antibakteri, antikanker
dan antioksidan adalah tanaman simpor. Tanaman ini telah lama digunakan di
masyarakat Malaysia pada penanganan penyakit kanker (28). Meskipun investigasi
aktivitas antoksidan dan antikanker serta antimikroba dari tanaman ini sudah banyak
dilakukan (29,30), namun hingga saat ini belum ada studi mengenai aktivitas
antioksidan, antimikroba dan antikanker dari simpor asal Belitung. Tanaman simpor
diketahui telah lama digunakan masyarakat Belitung sebagai pembungkus makanan
agar dapat bertahan lama. Penelitian ini mungkin merupakan penelitian pertama yang
mengkaji korelasi teori aktivitas antioksidan, sitotoksisitas dan antimokroba dari
tanaman simpor asal Belitung. Selain Hipotesis penelitian ini diperkuat dengan ekologi
tanaman simpor asal Belitung yang memiliki kondisi lingkungan yang sangat efektif
dalam mendukung komposisi fitokimia tanaman ini sebagai antioksidan, antimikroba
maupun antikanker.
b. Rumusan Masalah Penelitian
Berdasarkan latar belakang diatas dapat ditentukan rumusan masalah pada
penilitian ini antara lain:
1. Apakah ekstrak daun simpor (Dillenia sufruticosa) memiliki potensi sebagai
antioksidan, antimikroba dan antikanker?
2. Berapakah konsentrasi optimal dari ekstrak daun simpor sebagai antioksidan,
antimikroba dan antikanker?
3. Pelarut apakah yang paling tepat digunakan pada ekstraksi daun simpor sebagai
antioksidan, antimikroba dan antikanker?
3
4. Apakah aktivitas antioksidan, antimikroba dan antikanker ekstrak daun simpor
(Dillenia sufruticosa) sama baiknya atau lebih memiliki potensi dominan sebagai
antioksidan saja, antimikroba saja atau antikanker saja?
5. Apakah potensi antioksidan, antimikroba dan antikanker tanaman simpor asal
Belitung (Dillenia sufruticosa) lebih baik dari simpor varietas lain yang berasal dari
wilayah yang berbeda?
Pembatasan masalah pada penelitian ini adalah apakah ekstrak daun simpor
(Dillenia sufruticosa) memiliki aktivitas antioksidan, antimikroba dan anti kanker?
c. Tujuan Penelitian
Tujuan umum penelitian ini adalah untuk Menganalisis potensi antioksidan,
antimikroba dan antikanker terhadap karsinoma hati (HepG2) dan karsinoma mamae
(MCF7) cell line esktrak daun simpor.
Tujuan khusus penelitian ini adalah:
1. Menentukan konsentrasi dan pelarut paling optimal dari ekstrak daun simpor
(Dillenia sufruticosa).
2. Mengidentifikasi kandungan senyawa flavonoid dari ekstrak daun simpor
(Dillenia sufruticosa).
3. Menganalisis aktivitas antioksidan ekstrak daun simpor (Dillenia sufruticosa)
berdasarkan kemampuan menetralisir radikal DPPH (1.1-difenil 2-
picrilhidrazil), ABTS (2,2′-azino-bis-(3-ethylbenzothiozoline-6-sulfonic acid
diammonium salt) dan reducing power assay.
4. Menganalisis toksisitas ektrak daun simpor (Dillenia sufruticosa) bedasarkan
metode BSLT (Brine Shrimp Lethal Test).
5. Menganalisis potensi antikanker ekstrak daun simpor (Dillenia sufruticosa)
terhadap cell line karsinoma hati (HepG2) dan karsinoma mamae (MCF7)
dengan metode MTT (3,4,5-dimetiltiazol, 2,5 difenil tetrazolium),
antiproliferasi dan apoptosis assay.
6. Menganalisis potensi antimikroba eksrak daun simpor (Dillenia sufruticosa)
terhadap bakteri gram positif (Staphylococcus aureus), gram negatif
(Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa), and jamur (Candida albicans).
4
d. Kegunaan Penelitian
Hasil penelitian ini diharapkan memberikan kontribusi mendasar bagi
pengembangan natural product dalam bentuk obat, seduhan maupun suplemen
berbahan dasar simpor sebagai sumber antioksidan, antimikroba dan antikanker.
Penelitian ini diharapkan juga memberikan informasi akan efek medikasi dari
tanaman endemik asal Belitung yang bisa dimanfaatkan masyarakat.
Temuan/inovasi yang ditargetkan dari penelitian ini adalah formulasi ekstrak daun
simpor yang paling optimal sebagai antioksidan. Selain itu juga sebagai antikanker
terhadap cell line kanker karsinoma hati (HepG2) dan karsinoma mamae (MCF7) dan
juga antimikroba terhadap bakteri dan jamur pathogen.
e. Urgensi Penelitian
Pengembangan bahan alam menjadi salah satu isu startegis dalam tema sains,
teknologi dan olahraga yang dikembangkan. Peningkatan kualitas hidup, gizi dan
kesehatan melalui pemanfaatan bahan alam menjadi konsep pemikiran dalam program
penelitian kompetitif di FMIPA Universitas Negeri Jakarta. Berbagai model,
formulasi, prototype dan pengemasan produk bahan alam menjadi inovasi yang
ditargetkan dalam mengoptimalkan gaya hidup dan kesehatan masyarakat.
Berdasarkan hal tersebut, penelitian ini dilakukan dalam rangka mendukung
pencapaian Resntra penelitian di FMIPA Universitas Negeri Jakarta. Diharapkan hasil
dari penelitian ini dapat dimanfaatkan untuk meningkatkan kualitas kesehatan
masyarakat secara luas.
5
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA
a. Peta Jalan Penelitian
Penelitian ini merupakan rangkaian upaya investigasi bahan alam yang memiliki
potensi sebagai antioksidan, antimikroba dan antikanker. Peta jalan penelitian ini
digambarkan sebagai berikut:
Gambar 1. Peta jalan penelitian
b. Kajian Hasil Penelitian
Antioksidan adalah senyawa kimia yang dapat menyumbangkan satu atau lebih
elektron kepada radikal bebas, sehingga radikal bebas tersebut dapat diredam (32).
Antioksidan juga dapat menginaktifkan radikal bebas, molekul tidak stabil yang
dihasilkan oleh berbagai jenis proses kimia normal tubuh atau oleh radiasi matahari,
asap rokok, dan pengaruh-pengaruh lingkungan lainnya (33). Senyawa antioksidan
berperan penting untuk mengurangi kerusakan oksidatif sel maupun jaringan yang
2015-2021
Investigasi potensiantioksidan, antikanker danantibakteri berbagaitanamaman (invitro daninvivo)
2022- 2025
isolasi, identifikasi dan uji stabilitas senyawa aktif berbagai ekstrak tanaman dengan potensi antioksidan, antimokroba dan antikanker
2026-2028
Pengembangan sediaan produk melalui uji sediaan, uji kinetika dan invivo sediaan
Luaran: 1.Asian Journal of Microbiology, Biotechnology and Environmental, 17(2), 2015 2. Metamorfosa, 4(1), 2017 3. Hak Cipta EC00201814618, 4 Juni 2018
6
disebabkan antara lain oleh ROS seperti radikal superoksida, radikal nitrat hidroksida,
radikal lipid peroksil, dan radikal hidroksil (1,34).
Secara alamiah semua organisme memiliki mekanisme untuk mengatasi
radikal bebas, misalnya dengan mengaktifkan antioksidan endogen. Beberapa
antioksidan endogen tubuh antara lain adalah enzim superoksida dismutase dan
katalase, senyawa asam askorbat, tokoferol, dan glutation (35). Apabila jumlah ROS
melebihi kapasitas antioksidan untuk mengatasinya, maka akan timbul
ketidakseimbangan antara ROS dengan antioksidan yang akan menyebabkan
ketidakseimbangan yang disebut dengan stress oksidatif (36). Stress oksidatif inilah
yang bertanggung jawab terhadap onset terjadinya berbagai penyakit (37). Kondisi
stress oksidatif tubuh yang tidak dapat ditangani dengan mekanisme antioksidan alami
dapat diatasi dengan pemberian antioksidan eksogen.
Berbagai senyawaa antioksidan yang dihasilkan tumbuhan untuk menangkal
radikal bebas, diantaranya biflavanoid, β-karoten, vitamin C, dan E. Kemampuan
beberapa tanaman sebagai antioksidan dipengaruhi oleh senyawa metabolit sekunder
yang terkandung di dalamnya. Diantara beberapa jenis antioksidan yang dihasilkan
oleh tumbuhan tersebut, yang menunjukkan aktivitas antioksidan terbaik adalah
biflavonoid (38). Biflavonoid efektif dalam penghilangan radikal hidroksil, radikal
peroksil, dan anion superoksida (39,40). Potensi antioksidan senyawa biflavonoid
diperkirakan disebabkan oleh pelepasan atom hidrogen yang terdapat pada gugus
hidroksil (–OH).
Berbagai tanaman dilaporkan memiliki kemampuan antioksidan yang sangat baik
diantaranya mahkota dewa, meniran, daun papaya, daun bambu (9,10,11,12,13,14,15).
Daun simpor yang telah berabad lamanya dikenal masyarakat sebagai pembungkus
makanan memiliki aktivitas antioksidan yang sangat baik karena adanya kandungan
senyawa fenolik pada tanaman ini (28,29,31). Selain sebagai antioksidan, tanaman ini
juga diketahui memiliki potensi sebagai antikanker (41).
Kanker merupakan penyakit yang mematikan dan menyebabkan banyaknya kasus
kematian di sleuruh dunia. Kemoterapi telah diketahui masyarakat selama beabad
lamanya untuk penyembuhan kanker. Namun, beberapa agen kemoterapi memiliki
toksisitas yang sangat tinggi terhadap jaringan normal dan menyebabkan timbulnya
7
resistensi. Karena keterbatasa ini perlu dikembangkan agen terapi yang lebih aman
(25).
Pengembangan bahan alami sebagai sumber agen terapi kanker terus
dikembangkan karena lebih efektif dan minim efek samping (30). Berbagai penelitian
telah melakukan analisis mengenai senyawa bioaktif tanaman yang berpotensi dalam
terapi kanker. Senyawa bioaktif ini dapat membunuh sel kanker melalui beberapa
mekanisme seperti meningkatkan sistem imun, menginduksi apoptosis, mengurangi
resistensi dan menghambat angiogenesis (25). Dillenia sufruticosa yang berasal dari
Malaysia telah terbukti memiliki potensi pada terapi kanker dengan memodulasi
mitogen activated protein kinase (MAPKS) pada level gen dan protein (28).
Selain potensi sebagai antioksidan dan antikanker, tanaman simpor juga memiliki
potensi sebagai antibakteri (25). Varietas dari Dillenia indica pada pelarut methanol
dan n-heksan pada fraksi kloroform diketahui dapat menghambat pertumbuhan 13
bakteri (Bacillus cereus, B. megaterium, B. subtilis, Staphylococcus aureus, Sarcina
lutea, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella paratyphi, S. typhi,
Shigella boydii, S. dysenteriae, Vibrio mimicus, V. parahemolyticus) dan 3 jamur
(Candida albicans, Aspergillus niger, Sacharomyces cerevacae) (29).
8
BAB III. TUJUAN DAN MANFAAT PENELITIAN
a. Tujuan Penelitian
Tujuan umum penelitian ini adalah untuk Menganalisis potensi antioksidan,
antimikroba dan antikanker terhadap karsinoma hati (HepG2) dan karsinoma mamae
(MCF7) cell line esktrak daun simpor.
Tujuan khusus penelitian ini adalah:
7. Menentukan konsentrasi dan pelarut paling optimal dari ekstrak daun simpor
(Dillenia sufruticosa).
8. Mengidentifikasi kandungan senyawa flavonoid dari ekstrak daun simpor
(Dillenia sufruticosa).
9. Menganalisis aktivitas antioksidan ekstrak daun simpor (Dillenia sufruticosa)
berdasarkan kemampuan menetralisir radikal DPPH (1.1-difenil 2-
picrilhidrazil), ABTS (2,2′-azino-bis-(3-ethylbenzothiozoline-6-sulfonic acid
diammonium salt) dan reducing power assay.
10. Menganalisis toksisitas ektrak daun simpor (Dillenia sufruticosa) bedasarkan
metode BSLT (Brine Shrimp Lethal Test).
11. Menganalisis potensi antikanker ekstrak daun simpor (Dillenia sufruticosa)
terhadap cell line karsinoma hati (HepG2) dan karsinoma mamae (MCF7)
dengan metode MTT (3,4,5-dimetiltiazol, 2,5 difenil tetrazolium),
antiproliferasi dan apoptosis assay.
12. Menganalisis potensi antimikroba eksrak daun simpor (Dillenia sufruticosa)
terhadap bakteri gram positif (Staphylococcus aureus), gram negatif
(Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa), and jamur (Candida albicans).
b. Manfaat Penelitian
Hasil penelitian ini diharapkan memberikan kontribusi mendasar bagi
pengembangan natural product dalam bentuk obat, seduhan maupun suplemen
berbahan dasar simpor sebagai sumber antioksidan, antimikroba dan antikanker.
Penelitian ini diharapkan juga memberikan informasi akan efek medikasi dari
tanaman endemik asal Belitung yang bisa dimanfaatkan masyarakat.
9
Temuan/inovasi yang ditargetkan dari penelitian ini adalah formulasi ekstrak daun
simpor yang paling optimal sebagai antioksidan. Selain itu juga sebagai antikanker
terhadap cell line kanker karsinoma hati (HepG2) dan karsinoma mamae (MCF7) dan
juga antimikroba terhadap bakteri dan jamur pathogen.
10
BAB IV. METODE PENELITIAN
a. Diagram Alur Penelitian
Alur penelitian digambarkan dalam diagram dibawah ini:
.
Gambar 2. Diagram Alur Penelitian
Skrining awal komposisi
fitokimia ekstrak daun simpor
Premilinary
Tahun 1
Analisis
senyawa
antioksidan
daun simpor
Tahun 2
Analisis
sitotoksisitas
ekstrak daun
simpor
Tahun 3
Analisis
aktivitas
antimikroba
Hasil
Komposisi seny. Fitokimia
simpor
Determinasi total senyawa
flavonoid dan fenolik.
Indikator: Informasi jumlah
kandungan seny. Fenolik dan
flavonoid
Analisis aktivitas antioksidan
berdasarkan metode ABTS, DPPH dan
Reducing power assay.
Indikator: IC50 DPPH, ABTS dan
absorbansi reducing power
Target Luaran
1. 2 prosiding terindeks
scopus
2. HKI dalam bentuk
hak cipta
toksisitas dengan metode BSLT.
Indikator: info toksisitas simpor
Analisis sitotoksistas simpor
terhadap cell line kanker
karsinoma hati (HepG2) dan
karsinoma mamae (MCF7)
melalui MTT,
antiploriferation dan
apoptosis assay.
Indikator: IC50 sitotoksisitas
thdp HepG2 dan MCF7
Target Luaran
1. 1 jurnal terindeks
scopus
3. HKI dalam bentuk
hak cipta
2. HKI dalam bentuk
paten sederhana
Analisis terhadap bakteri gram positif
(Staphylococcus aureus), gram negatif
(Escherichia coli, Pseudomonas
aeruginosa), and jamur (Candida
albicans). Indikator: aktivitas
antimikroba terhadap jamur dan
bakteri.
Target Luaran
1. 1 jurnal terindeks
scopus
2. HKI dalam bentuk
hak cipta
11
b. Metodologi penelitian
Penelitian dilakukan di laboratorium biokimia dan mikrobiologi FMIPA, UNJ
pada bulan April sampai November 2019. Sampel yang digunakan adalah daun simpor
(Dillenia sufruticosa) yang diambil dari Belitung. Metode penelitian menggunakan
desain eksperimen rancang acak lengkap (RAL) dengan 2 faktor. Faktor yang diujikan
adalah konsentrasi ekstrak (25,50,75 ppm) dan jenis pelarut (metanol, etilasetat dan
air). Setiap perlakuan diuji secara duplo.
Determinasi total senyawa fenolik ditentukan secara spektrofotometri dengan
Folinciocalteu assay. 30 µl ekstrak pada konsentrasi berbeda dicampur dengan 150 µl
reagen Folin (1:10 v/v dalam air), didiamkan suhu 25◦C selama 5 min, kemudian 120
µl sodium bicarbonate (75 gm/L) larutan ditambahkan. Diadiamkan 90 min dan
absorbansi diukur pada 725 nm. Asam galat (0–500 mg/L) digunakan dalam
pembuatan kurva stanndar. Determinasi total flavonoid ditentukan dengan metode
kolorimetri. Kuersetin digunakan pada pembuatan kurva standar dan absorbansi
diukur pada 420 nm.
Kapasitas scavenging radikal dilakukan dengan metode ABTS dan DPPH. Asam
askorbat digunakan sebagai kontrol positif dan pelarut tanpa ekstrak sebagai kontrol
negatif. Larutan ekstrak dicampur dengan 2 ml larutan 0.16nM DPPH dalam pelarut.
Didiamkan selama 30 menit dalam kondisi gelap. Absorbasi diukur pada 517 nm.
ABTS dilarutkan dalam air dengan hingga konsentrasi 7Mm/ Kalium persulfate
(K2S2O8) ditambahkan hingga konsentrasi 2.45mM. Didiamkan dalam temperature
ruang selama 1 malam. Absorbasi diukur pada 734 nm.
Reducing power dievaluasi dengan menggunakan asam askorbat. Asam askorbat
dan pelarut dicampur dengan buffer fosfat (500 µl, 0.2 M, pH 6.6) dan potassium
ferrisianida [K3Fe (CN)6] (500 µl, 10 mg/mL). Campuran kemudian diinkubasi suhu
50◦C selama 20 min. Setelah itu 500 µl TCA ditambahkan dan disentrifugasi pada
8000 rpm selama 10 min. Supernatan yang jernih (100 µl) dicampur dengan air dan
ditambahkan 20 µl ferri klorida (0.1% w/v) . Absorbansi diukur pada 700 nm. Buffer
posfat digunakan sebagai kontrol.
Uji toksisitas ditentukan dengan metode BSLT, MTT, antiproliferasi dan apoptosis
assay terhadap sel line HepG2 dan MCF. Sebagai standar digunakan sel line normal
HPL1A (human peripheral lung epithelial cells). Uji sitotoksisitass dengan BSLT
12
menggunakan Artemia salinas usia 1 hari. 4 mg ekstrak di larutkan pada reagen DMSO
pada berbagai konsentrasi. Lc50 sampel setelah 24 jam didapatkan dalam persentase
udang yang mati pada konsentrasi sample tertentu. MTT assay dilakukan dengan
menggunakan sel line yang di tumbuhkan pada 96-well microtiter plates dengan
kerapatan sel 10 × 10−4 cells per 100 µl setiap sumur. Plate kemudian diinkubasi pada
suhu 37◦C selama 24 h dalam 5% CO2. Setelah inkubasi, sel diberikan ekstrak simpor.
Diinkubasi kembali selama 72 jam dan digunakan pelarut saja yang ditentukan sebagai
blanko serta sel line normal sebagai kontrol. Setelah itu medium kultur di bersihkan
dengan aspirasi dan ditambahkan 20 µl MTT pada setiap well. Setelah itu diinkubasi
4 jam dan ditambahkan DMSO. Absorbansi siukur pada panjang gelombang 570 nm.
Uji Antiproliferasi dilakukan dengan menempatkan 4,000 sel per well dalam 96-
well microplate dan diinkubasi selama 1 malam. 100 µg/mL Ekstrak di berikan pada
setiap well dan diinkubasi selama 38 jam pada suhu 37°C. Setelah itu sel diwarnai
dengan resazurin reduction reagent Alarma Blue (Invitrogen, Frederick, MD, USA)
untuk menentukan sitotoksisitas eksrak. Intensitas flurosen kemudian di ukur dengan
microplate reader. Inhibisi (%) dikalkulasi dengan persamaan regresi linear.
Pewarnaan fluorosen dilakukan dengan Arrayscan VTI high-content screening reader
(Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Intensitas fluorescent dianalisis dengan
vHCS Scan software (Thermo Scientific).
Uji antimikroba dilakukan terhadap bakteri gram positif (Staphylococcus aureus)
gram negatif (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa), dan jamur (Candida
albicans) dengan metode difusi agar. Organisme pathogen diperoleh dari UNJCC
(Universitas Negeri Jakarta Culture Collection). Inokulum bakteri dibuat dengan
konsentrasi 1.0 × 104 CFU/mL dan di tambahkan saline steril. Suspensi disiapkan
segar dan tempatkan pada 4◦C hingga digunakan untuk pengujian. Suspensi kemudian
sebar pada medium solid untuk memferivikasi kontaminasi dan viabilitas inoculum.
Tiga antiobiotik (ampisilin, streptomoisin dan tetrasiklin) digunakan sebagai kontrol
positif. Pelarut tanpa ekstrak digunakan sebagai kontrol negatif. Plat agar kemudian
diinkubasi pada suhu 37◦C selama 24h dan inhibisi zona bening dalam nm digunakan
sebagai acuan sensitivitas antimokroba ekstrak simpor.
13
BAB V. HASIL DAN LUARAN YANG DICAPAI
a. Hasil Penelitian dan Pembahasan
Water content
Moisture content of sample used was the leaves of Dillenia sp. which had been
dried in the sun for two days. The results of the analysis of Dillenia sp. leaves obtained
water content of 73.65%. Decrease in water content occurs due to the evaporation
process. Water and compounds found in leaves easily evaporate so that the levels
decrease and affect the weight of the leaves. The reduction in water content in the
leaves aims to be easily stored and inhibit the enzymatic process. Large water levels
allow the simplicia to become a growth medium for microorganisms (42,43).
Qualitative Flavonoid Assay
Table 1. Prelimary qualitative flavonoid analysis of ethanolic leaf extract of Dillenia
Treatment Inferences
24 hours
10% +
15% ++
20% +++
48 hours
10% +++
15% ++
20% +
Note : (+) present
Qualitative test results of flavonoids on leaf extract of Dillenia sp. positively
contains flavonoids. Indications that the extract is positive for flavonoids will change
colour after adding magnesium and HCl reagents to yellow. The addition of
magnesium and HCl reagent in the extract aims to reduce the nucleus of benzopirone
in flavonoid compounds. Addition of HCl causes a reduction between magnesium and
flavonoid compounds (44).
Quantitative Flavonoid Assay
Determination of flavonoid content aims to determine the flavonoid compounds
contained in the leaf of Dillenia sp. Levels of flavonoid compounds were expressed in
14
mg QE / mg. Determination of flavonoid levels uses the AlCl3 colony method with the
principle of complex formation. This principle forms a shift in the wavelength of the
visible direction so that the color of the solution turns yellow. AlCl3 will form complex
and stable compounds (45) after reacting with C4 ketone groups and hydroxyl groups
on C3 or C5 from flavone and flavonol compounds. The formation reaction of the
Flavonoid-AlCl3 complex can be show in Figure 3 and 4.
Figure 3. The formation reaction of the
Flavonoid-AlCl3 complex.
Figure 4. Complex formation reaction
between AlCl3 and flavone [13]
Quesertin was used in designing flavonoid standard curves since it belongs to the
flavonoid group (46) which have ketone groups on C4 atoms and hydroxyl groups on
C3 or C5 atoms. In addition, quesertin easily reacts with AlCl3 (47). The flavonoids
have chelating properties so they can bind to metals and prevent increased oxidation
and gives positive effect (48).
The absorbance of the questionnaire was plotted against the concentration so that it
gets the calibration curve equation. From the graph obtained the regression equation y
= 0,0007x - 0,0007; with a correlation coefficient (R²) = 0.9396. The correlation
coefficient (R2) value close to 1 indicates regression analysis can be trusted ( Figure
5)
15
Figure 5. Quercetin standard curve
The results of the research in Table 2 shows that the highest concentration of
flavonoid compounds were at 24 hours maceration time with a concentration of 10%
(2.904 mg QE / mg. The lowest was at the maceration time of 48 hours with a
concentration of 20% (2.875 mg QE / mg). Statistical analysis showed that data was
homogenous and normally distributed (ᾳ> 0.005). ANOVA results obtained
maceration time and concentration significantly affect flavonoid content (ᾳ= 0.003)
[15]. Duncan Pos Hoc test showed that almost all group were not different unless the 24
hours x 15% one.
Table 2. Flavonoid content of ethanolic leaf extract of Dillenia sp.
Time
maceration
(hours)
Concentation
(%)
Flavonoid content
(mg QE/mg)
24
10 2.904
15 2.953
20 2.877
48
10 2.893
15 2.887
20 2.875
DPPH Radical Scavenging Assay
Free radicals are relatively unstable because they have unpaired electrons in the outer
orbit. These electrons are very reactive if they are compounded with other molecules.
Substances able to prevent and protect from the side effects of free radicals are
antioxidants. Antioxidants can to subvert one molecule and stabilize it.
DPPH is a free radical compound that is often used to measure antioxidant activity
from various compounds or extracts of natural ingredients. This method is easy to use
y = 0.0007x - 0.002R² = 0.9689
0
0.005
0.01
0.015
0.02
0.025
0.03
0.035
0.04
0.045
0 10 20 30 40 50 60 70
Ab
sorb
ance
(n
m)
Concentration (ppm)
16
to measure antioxidant activity in extracts. DPPH which was reacted with ethanolic
leaf extract of Dillenia sp., caused the intensity of purple to decrease and turn yellow
(Figure 6,7.). This color change occurs because of the transfer of electrons from
certain compounds in the ethanolic extract of Dillenia sp. on DPPH so that it becomes
stable.
Figure 6. Results of a qualitative
flavonoid analysis of ethanolic leaf
extract of Dillenia sp. in maceration
time 24 and 24 hours and series
consentration of 10%, 15%, and 20%
(left to right).
Figure 7. DPPH scavenging of
ethanolic leaf extract of Dillenia sp.
the 24 hour in series concentration (10,
50, 100, 150, and 200) ppm shows the
change in color of DPPH after being
given Dillenia sp. ethanolic leaf
extract from purple to yellow.
The method used to measure activity is expressed by the value of DPPH
reduction. DPPH reduction in ethanolic leaf extract of Dillenia sp. in maseration 24
was highest at extract concentrations of 20% (97.097%) while the extracts in
maseration 48 hours were highest at extract concentrations of 10% (95.095%) (Table
3)
Table 3. DPPH scavenging of ethanolic leaf extract of Dillenia sp. in maceration time
24 and 48 hours (values represent means±SE).
Concentration
(ppm)
Concentration extract
24 hours 48 hours
10% 15% 20% 10% 15% 20%
10 88,69 ±
0,01
65,47 ±
0,01
91,89 ±
0,00
94,39 ±
0,00
85,09 ±
0,01
91,39 ±
0,00
50 91,79 ±
0,01
89,29 ±
0,01
91,89 ±
0,00
91,49 ±
0,01
78,58 ±
0,01
89,89 ±
0,00
100 89,79 ±
0,01
95,20 ±
0,01
96,70 ±
0,00
97,10 ±
0,01
88,69 ±
0,01
91,99 ±
0,01
150 95,70 ±
0,01
92,59 ±
0,01
96,30 ±
0,00
91,69 ±
0,01
88,59 ±
0,01
89,79 ±
0,01
200 90,59 ±
0,01
84,58 ±
0,01
97,10 ±
0,00
95,10 ±
0,01
94,19 ±
0,00
92,49 ±
0,01
17
Antioxidant properties can be found in extracts with different concentrations.
Ethanolic extracts are polar solvents and are very effective for extracting antioxidant
compounds in the leaves of Dillenia sp. This study provides evidence that the leaf of
Dillenia sp. from Belitung contains flavonoid compounds and has the potential as a
source of antioxidants. Antioxidant activity is influenced by time and concentration
during extraction. Statistical analysis showed that concentration and maceration didn’t
affect DPPH scavenging ability Dillenia (ᾳ 0.079).
b. Luaran yang dicapai
Luaran yang telah dicapai pada penelitian ini antara lain :
1. Publikasi dalam prosiding terindeks scopus (Accepted) AIP Conference
Proceeding.
2. Seminar Internasional pada Annual Applied Sciences Education Conference, 24
April 2019
3. HAKI berupa kumpulan foto dokumentasi penelitian (Draft)
18
BAB VI. KESIMPULAN DAN SARAN
a. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian disimpulkan bahwa ekstrak etanol dari daun simpor
Dillenia sp. positif memiliki flavonoid dengan kadar flavonoid tertinggi 0.00069
mg/QE pada maserasi 24 jam dan konsentrasi 15%. Hasil ini membuktikan pula bahwa
simpor memiliki kemampuan antioksidan dalam menetralisir radikal bebas DPPH.
Kemampuan antioksidan tertinggi adalah 97.097% paad maserasi 24 jam dan
konsentrasi 20%. Hal ini berarti bahwa simpor memiliki kemampuan untuk
menetralisir radikal DPPH hingga 97.097% dan menyisakan radikal hanya 2.913%.
Dapat disimpulkan pula bahwa konsentrasi dan lama maserasi berpengaruh pada kadar
flavonoid (α 0.003) namun tidak berpengaruh pada kemampuan netralisir radikal
DPPH (α 0.079).
b.Saran
Sebaiknya diujikan pula kemampuan antioksidan berdasarkan jenis
antioksidan dari simpor apakah sebagai pemutus rantai, atau pengkelat besi atau jenis
antioksidan lain. Bisa juga dicek apakah simpor tergolong kedalam antioksidan primer
maupun sekunder. Sehingga mekanisme kerja terhadap sel dapat dirprediksi.
19
Daftar Pustaka
1. Blokhina et al. 2003. Antioxidant, oxidative stress and oxygen deprivation
stress. Annals of Botany. 91, 179- 194
2. Al-Ghubory, K.H., Fowler, P.A., Garrel, C. 2010. The Role of cellular oxygen
species, oxidative stress and antioxidant in pregnancy woman. The
International Journal of Biochemsitry and Cell Biologi.42, 1634-1650.
3. Suirta, I.W., Puspawati, N.M., & Gumiati, N.K..2007, Isolasi dan Identifikasi
Senyawa Aktif Larvasida dari Biji Mimba (Azadirachta indika A. Juss)
Terhadap Larva Nyamuk Demam Berdarah (Aedes Aegypti). Jurnal Kimia. 1
(1), 47-54.
4. Halliwell, B. andGutteridge, J.M.C.2006. Free Radicals in Biology and
Medicine. 4th Ed. Oxford: Clarendon Press.
5. Tuminah. 2009. Efek Asam Lemak Jenuh dan Asam Lemak Tak Jenuh
Terhadap Kesehatan. J Media Peneliti dan Pengembangan Kesehatan. 19(1),
13-20
6. Mau JL, Lin HC, Song SF. 2002. Antioxidant properties of several specialty
mushrooms. Food Res Int. 35, 519–526.
7. Carocho, M., and Ferreira, I. C. 2013. A review on antioxidants, prooxidants
and related controversy: natural and synthetic compounds, screening and
analysis methodologies and future perspectives. Food Chem. Toxicol. 51, 15–
25. doi: 10.1016/j.fct.2012.09.021
8. Wojcik, M., Burzynska-Pedziwiatr, I., and Wozniak, L. A. 2010. A review of
natural and synthetic antioxidants important for health and longevity. Curr.
Med. Chem. 17, 3262–3288. doi: 10.2174/092986710792231950.
9. Hasnirwan, Ibrahim S, Yanti, M. 2013. Isolasi Dan Karakterisasi Flavonoid
Pada Fraksi Aktif Antioksidan Dari Daging Buah Mahkota Dewa (Phaleria
macrocarpa (Scheff Boerl). Prosiding Semirata FMIPA Universitas Lampung,
2013
10. Maisarah, et al. 2013. Antioxidant analysis of different parts of Carica papaya.
International Food Research Journal. 20(3), 1043-1048.
11. Kweon, M, Hwang H,Sung H. 2001. Identification and Antioxidant Activity
of Novel Chlorogenic Acid Derivatives from Bamboo (Phyllostatchys edulis).
J. Aric Food Chem. 49(10), 4645-55.
12. Vardar-Unlü, G.; Candan, F.; Sökmen, A.; Daferera, D.; Polissiou, M.;
Sökmen, M.; Dönmez, E. 2003. Type, B. Antimicrobial and antioxidant
activity of the essential oil and methanol extracts ofThymus pectinatus Fisch.
et Mey.Var. Pectinatus (Lamiaceae). J. Agric. Food Chem.51, 63-67.
13. Govindan, B et al. 2018. Secondary metabolites from the unique bamboo,
Melocanna baccifera. Natural Product Research. 1478, 6419-27.
14. Supriyatin, Rahayu, S, Sukmawati, D. 2015. Phytochemical Composition,
Antimicrobial and Antioxidant Activity of Manggong Bamboo (Gigantochloa
20
Manggong) Leaf Extract. Asian Journal of Microbiology, Biotechnology and
Environmental Sciences. 17(2), 443-450.
15. Supriyatin, Rahayu, S, Apriana, R. 2017. The Effect of Maximum Physical
Activity and Manggong Bamboo (Gigantochoa Manggong) Leaves Extract in
Liver Organ of Rats (Rattus norvegicus). Metamorfosa. 4(1), 8-12
16. Farhat, M. B., Landoulsi, A., Chaouch-Hamada, R., Sotomayor, J. A., and
María, J. J. 2013. Characterization and quantification of phenolic compounds
and antioxidant properties of Salvia species growing in different habitats.
Indus. Crops Prod. 49, 904–914. doi: 10.1016/j.indcrop.2013.06.047
17. Navas-Lopez,J.F.,Ostos-Garrido,F.J.,Castillo,A.,Martín,A.,Gimenez,M.J.,and
Pistón, F. 2014. Phenolic content variability and its chromosome location in
tritordeum. Front. Plant Sci. 5:10. doi: 10.3389/fpls.2014.00010
18. Iqbal, E., Salim, K. A., and Lim, L. B. L. 015. Phytochemical screening, total
phenolics and antioxidant activities of bark and leaf extracts of Goniothalamus
velutinus (Airy Shaw) from Brunei Darussalam. J. King Saud Univ. Sci. 27,
224–232. doi: 10.1016/j.jksus.2015.02.003.
19. Malla, S., Shrotri, C. K., and Jain, R. 2014. Antimicrobial, phytochemical and
antioxidant screening of leaves and stem bark from Albizia lebbeck (l.). Int. J.
Pharm. Bio. Sci. 5, 259–270.
20. Mahomoodally, M. F., Gurib-Fakim, A., and Subratty, A. H. (2010). Screening
for alternative antibiotics: an investigation into the antimicrobial activities of
medicinal food plants of Mauritius. J. Food Sci. 75, M173–M177. doi:
10.1111/j.1750-3841.2010.01555.x
21. Mandal, N., Das, A., Chaudhuri, D., Ghate, N. B., and Chatterjee, A. (2013).
Comparative assessment of phytochemicals and antioxidant potential of
methanolic and aqueous extracts of Clerodendrum colebrookianum walp. leaf
from North-East India. Int. J. Pharm. Pharm. Sci. 5, 420–427.
22. Kuki´c, J., Popovi´c, V., Petrovi´c, S., Mucaji, P., ´Ciric, A., and Stojkovi´c,
D. (2008). Antioxidant and antimicrobial activity of Cynara cardunculus
extracts. Food Chem. 107, 861–868. doi: 10.1016/j.foodchem.2007.09.005
23. DeSantis, C. E., Lin, C. C., Mariotto, A. B., Siegel, R. L., Stein, K. D., and
Kramer, J. L. 2014. Cancer treatment and survivor ship statistics. CA Cancer
J. Clin. 64, 252–271. doi: 10.3322/caac.21235.
24. Fridlender, M., Kapulnik, Y., and Koltai, H. 2015. Plant derived substances
with anti-cancer activity: from folklore to practice. Front. Plant Sci. 6:799. doi:
10.3389/fpls.2015.00799
25. Almosnid, N, et al. 2017. Evaluation of extracts prepared from 16 plants used
in Yao ethnomedicine as potential anticancer agents. Journal of
Ethnopharmacology. https://doi.org/10.1016/j.jep.2017.09.032
26. Gordaliza, M. 2007. Natural products as leads to anticancer drugs. Clin. Transl.
Oncol. 9, 767–776. doi: 10.1007/s12094-007-0138-9
21
27. Carocho, M., and Ferreira, I. C. 2013. A review on antioxidants, prooxidants
and related controversy: natural and synthetic compounds, screening and
analysis methodologies and future perspectives. Food Chem. Toxicol. 51, 15–
25. doi: 10.1016/j.fct.2012.09.021
28. Foo et al., 2016. Dillenia sufruticosa dichloromethane induced apoptosis
toward MDA-MB-231 Triple Negative Breast Cancer Cells. Journal of
Ethnopharmacology. 187, 195-204.
29. Parvin, M.S, Rahmab, M,S. Islam, S, Rashid, M, A. 2009. Chemical and
biological investigations of Dillenia indica Linn. Bangladesh J Pharmacol. 4,
122-25. doi: 10.3329/bjp.v4i2.2758
30. Armania, N, et Al., 2013. Dillenia sufruticosa exhibit Antioxidant and
Cytotoxic Activity Trough Induction of Apoptosis and G2/M Cell Cycle
Arrest. Journal of Ethnopharmacology. 146, 525-535.
31. Abdile, H, Singh, R.P, Jayaprakasha, G.K, Jena, B.S. 2005. Antioxidant
Activity of Dillenia Indica Fruit. Food Chemsitry. 90, 891-896.
32. Sunarni, T. 2005. Aktivitas Antioksidan Penangkap Radikal Bebas Beberapa
kecambah Dari Biji Tanaman Familia Papilionaceae. Jurnal Farmasi
Indonesia 2 (2), 2001, 53-61.
33. Rohman, Abdul. 2006. Aktivitas antioksidan, kandungan fenolik total dan
flavonoid total serta esktrak etil asetat buah mengkudu serta fraksinya.
Majalah Farmasi Indonesia. 13(3).136.
34. Ayoola, P.B. & Adeyeye, A. 2010. Effect of Heating on the Chemical
Composition and Physico - Chemical Properties of Arachis hypogea
(Groundnut) Seed Flour and Oil. Pakistan Journal of Nutrition 9 (8). 751-754
35. Mau JL, Lin HC, Song SF. 2002. Antio Oxidant properties of several specialty
mushrooms. Food Res Int 35:519–526.
36. Ichiisi, E, Li, X, Iorio E. 2016. Oxidative Stress and Diseases: Clinical Trials
and Approaches. Oxid. Med. Cell.Longev. 2016.1-3.
37. Andrade et al. 2018. Imvitro Antioxidant Property of Biflavonoid
Agathisflavone. Chemistry Central Journal. 12: 75
38. Cadenas, E. and Packer, L. 2002. Handbook of Antioxidants. 2nd Edition,
Marcel Dekker, Inc. New York.
39. Wardani, R. 2014. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Aktif Antioksidan dari
Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Herba Meniran (Phyllantus niruri L.). Skripsi.
Fakultas Farmasi. Universitas Muhammadiyah Surakarta.
40. Farah SH, Wende L, Trust B 2008. Measurement of anthocyanins and other
phytochemicals in purple wheat. Food Chem.109. 916-924.
41. G. Eswaraiah, K.A. Peele, S. Krupanidhi, R.B. Kumar, T.C. Venkateswarulu.
2018. Identification of Bioactive Compounds in Leaf Extract of Avicennia alba
by GC-MS Analysis and Evaluation of Its In-vitro Anticancer Potential
Against MCF7 and HeLa cell lines. Journal of King Saud University - Science
(2018), doi: https://doi.org/10.1016/j.jksus.2018.12.010
22
42. Voight, R. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi. Diterjemahkan oleh Soendani
N.S. Yogyakart; UGM Press. 1995.
43. Supriningrum R. Penetapan Kadar Flavonoid Ekstrak Etanol Daun Pacar Kuku
(Lawsonia inermis L.) Berdasarkan Perbedaan Cara Pengeringan. Jurnal
Ilmiah Manutung. 2018; 4(2): 156-161.
44. Gandhi, Dipal, and Priti. Mehta. Dillenia Indica Linn. and Dillenia Pentagyna
Roxb.: Pharmacognostic, Phytochemical and Therapeutic Aspects. Journal of
Applied Pharmaceutical Science. 2013; 3(11): 134-142
45. Kanta RS, Kar M, Roiutray R. DPPH Free Radical Scavenging Activity of
Some Leafy Vegetable used by Tribals of Odisha, India. Journal of Medicinal
Plants Studies. 2013; 1(4):21-27.
46. Ifeanyi OE. A Review on Free Radicals and Antioxidants. Int. J. Curr. Res.
Med. Sci. 2018; 4(2): 123-133.
47. Blessy BM, Archana T, Suresh K J. Free Radicals and Antioxidants : A
Review. Journal of Pharmacy Research 2011; 4(12): 4340-4343.
48. Abdille Md H, R P Singh, G K Jayaprakasha, and B S Jena. Antioxidant
Activity of the Extracts from Dillenia Indica Fruits. Food Chemistry. 2005; 90:
891-896.
23
Lampiran 1. Artikel penelitian
Antioxidant Capacity of Dillenia sp. Leaf Extract Against DPPH (1,1-Diphenyl-
2picryl Hidrazil) Radical
S Rahayu1*, I Zahara1, Afifah1, K Arya P1, Supriyatin2
1 Department of Biology, Faculty of Mathematics and Natural Sciences,
Universitas Negeri Jakarta, Indonesia 2 Department of Biology Education, Faculty of Mathematics and Natural
Sciences, Universitas Negeri Jakarta, Indonesia
Corresponding author: srirahayu@unj.ac.id
Abstract. Some plants have capacity as exogenous antioxidant. Simpor (Dillenia sp.)
is plant of the Dilleniaceae family which may have the property of antioxidant. The
purpose of this study was to measure the antioxidant capacity of the 96% ethanolic
simpor leaf extract. Factorial design was applied with 2x3 factors of maseration time
(24 and 48 hours) and concentration series of (10, 15, 20%). Normality was done by
Kolmogorov-Smirnov and homogeneity by Levine. Data was analysed by ANOVA
(ᾳ= 0.05). Post Hoc was analysed by Duncan. Antioxidant property was analysed
qualitatively and quantitatively on flavonoid and also leaves water content. The
antioxidant capacity assay was measured using DPPH (1,1-Diphenyl-2picryl Hidrazil)
scavenging ability at 517 nm with ascorbic acid as control. The result showed that
water content of the plant was 73.65%. Simpor contain flavonoids with highest
flavonoid content (2.953 mg QE / mg) in 24-hour maceration time at 10%
concentration. Furthermore, it also has ability to scavenge DPPH (1,1-Diphenyl-
2picryl Hidrazil) radical with the highest value (97,10 ± 0,01%) in 24 hours maceration
at 20% extract concentration. Statistical analysis on flavonoid content showed that
time and concentration gave significant effect on flavonoid content (ᾳ =0.003).
Duncan result revealed that almost all groups didn’t significantly different only the 24
hours x 15% concentration was. DPPH inhibition based on statistic proved that both
factors didn’t affect scavenging ability of Dillenia (ᾳ =0.079). It can be concluded that
simpor leaves has antioxidant capacity against DPPH radical due to its flavonoid
content. Furthermore, concentration and maceration time significantly affect
flavonoid content and didn’t affect DPPH radical scavenging ability of Dillenia plant.
Keywords: antioxidant capacity, DPPH, leaves simpor, (Dillenia sp.)
1. Introduction
Antioxidants are compounds that can fight free radicals. Free radicals are obtained from the
rest of the results of body metabolism, cigarette smoke, chemicals in food, air pollution,
sunlight, and so forth [1]. Antioxidants collect in balancing free radical molecules in the
metabolic process [8]. The mechanism of antioxidants is to make redox and absorb free radicals
quickly inside the membrane [3]. The need for sources of antioxidants from plants needs to be
optimized because they have no side effects and prices are relatively affordable. Naturally the
body is able to produce antioxidants, but the amount of free radicals is excessive so the
antioxidants are no longer able to overcome them. Another alternative to fight free radicals is
consuming antioxidants from outside the body to help endogenous antioxidant to cope with it
One source of antioxidants can come from plants. These sources of antioxidants can be
obtained from stems, leaves, fruits and seeds. Many plants have been widely known contain
antioxidant. One of the plants which has an antioxidant source is the simpor.
Simpor (Dillenia sp.) is a plant species from the Dilleniacea tribe. These plants are spread
in various Asian regions including Bhutan, India, Laos, Nepal, Philipines, Sri Lanka, Thailand,
Vietnam, Myanmar Malaysia and Indonesia [6]. In India there are only two types of
symposiums that pose as medicinal plants, namely Dillenia indica Linn. and Dillenia
24
penagyana Roxb [5]. In the Belitung area the community uses simpor leaves as a fish wrap,
rice cake wrappers and vegetable wrappers in traditional markets.
The content of secondary metabolites in D.indica leaves is flavonoids, triterpenoids,
steroids, tannins [14] while those in fruits contain 34% phenolics [1]. In D. indica seeds, there
are fixed oil, color matter, sterols, glycosides, saponins, proteins, free amino acids, sugars, free
acids and tannins [19]. Different types of plants contain different secondary metabolites. D.
penagyana contains 6% tanins. The stem contains naringenin-41-O-b-D-xylopyranoside,
flavonoid glycosides, 7-galactosyl glucoside naringenin and dihydroquercetin 5-galactoside
along with rhamnetin-3-glucoside [19], saponins [18]. Both plants have betalin, betulinic acid,
and β-sitosterol [6].
Research on secondary metabolites in D. indica and D. penagyana has been studied
extensively, ranging from isolation, separation and quantification. Nevertheless, no report
dealing with the Dillenia sp. leaves from Belitung has been informed. This study has been
carried out to analyze the ability of Dillenia sp. leaf extract as antioxidant in reducing DPPH
(1,1-Diphenyl-2picryl Hidrazil) free radicals. DPPH was applied in the study as free radicals
model to be scavenged by antioxidant from simpor.
2. Material and Method
2.1. Place and time The research was conducted at the Biochemical Laboratory Biology Faculty of Mathematics
and Natural Sciences, Universitas Negeri Jakarta on February-April 2019.
2.2. Plant Material Leafy Dillenia sp. were collected from Belitung. Dillenia sp. leaves are cut into small pieces,
weighed as much as 100 grams and dried in direct sunlight for 2 days to reduce water
content. Calculation of water content [16].
𝑾𝒂𝒕𝒆𝒓 𝒄𝒐𝒏𝒕𝒆𝒏𝒕 % = (𝒘𝟏 − 𝒘𝟐)/𝒘𝟏 × 𝟏𝟎𝟎
W1: initial weight; W2: final weight.
2.3. Extraction The leaves powdered was weighed and extracted with ethanol 96% with variations in
maceration time 24 and 48 hours and concentration series of (10%, 15%, and 20%). The
solvent was removed by using rotary evaporator at temperature 45℃ [12,21].
2.4. Qualitative Flavonoid Assay 30 mg of extraction was put into a test tube. Magnesium powder and a few drops of
concentrated HCl was added. Positive flavonoids were seen as yellow orange [7] color
formation.
2.5. Flavonoid
2.5.1. Configuring Standard Quercetin Solution
A total of 2.5 mg of quercetin was weighed and dissolved in 25 ml of ethanol as standard, 100
ppm. A series of standard concentrations of 20, 30, 40, 50 and 60 ppm is made. 0.5 mL of
standard liquid solution added 0.1 mL aluminum (III) chloride 10%, 0.1 mL sodium acetate 1
25
M and 2.8 mL distilled water. Taken one of the concentrations of a standard solution, the
absorbance is measured at a wavelength of 400-800 nm.
2.5.2. Setting a Standard Quercetin Curve
The standard curve is made by connecting the concentration of the standard quercetin solution
with the absorbed results obtained by measurement using a UV-Vis spectrophotometer at a
wavelength of 437.55 nm [7].
2.6. Determination of Total Flavonoid Levels in Extracts A total of 20 mg samples were weighed and dissolved in 10 mL pa ethanol and then
centrifuged to obtain a concentration of 2000 ppm. 0.5 mL of the test sample was added with
0.1 mL aluminum (III) chloride 10%, 0.1 mL sodium acetate 1 M and 2.8 mL distilled water.
After incubation for 30 minutes, the absorbance was measured using a UV-Vis
spectrophotometer at the maximum wavelength of quercetin 437.55 nm. The total
flavonoids from the ethanol extract of the leaves of Dillenia sp. were calculated using a linear
regression equation from the quercetin calibration curve that had been previously measured.
Total flavonoid content is expressed as the number of mg quasertin equivalent to each mg
of extract [7].
2.7. DPPH Radical Scavenging Assay Referring to the study of [10], the modified antioxidant capacity of the extract was measured
DPPH (1,1-Diphenyl-2picryl Hidrazil), free radical 1ml 0.1mM of DPPH solution in ethanol was
mixed with 1ml of leaf solution extract of variying concentration (10, 50, 100, 150 and 200)
ppm. Corresponding blank samples were prepared and ascorbic acid was used as a standard
reference. As control as used 1ml ethanol and 1ml DPPH solution. The DPPH measured
absorption at 517 nm after 30 minutes in dark using UV-Vis spectrophotometer. The%
inhibition was measured using the following formula.
𝑰𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒕𝒊𝒐𝒏 % = (𝑨𝒄 − 𝑨𝒔)/𝑨𝒄 × 𝟏𝟎𝟎
Where Ac is the absorbance of the control and As is the absorbance of the sample.
3. Results and Discussion
3.1. Water content Moisture content of sample used was the leaves of Dillenia sp. which had been dried in the
sun for two days. The results of the analysis of Dillenia sp. leaves obtained water content of
73.65%. Decrease in water content occurs due to the evaporation process. Water and
compounds found in leaves easily evaporate so that the levels decrease and affect the weight
of the leaves. The reduction in water content in the leaves aims to be easily stored and inhibit
the enzymatic process. Large water levels allow the simplicia to become a growth medium
for microorganisms [20,17].
3.2. Qualitative Flavonoid Assay
26
Table 1. Prelimary qualitative flavonoid analysis
of ethanolic leaf extract of Dillenia sp.
Treatment Inferences
24 hours
10% +
15% ++
20% +++
48 hours
10% +++
15% ++
20% +
(+) present
Qualitative test results of flavonoids on leaf extract of Dillenia sp. positively contains
flavonoids. Indications that the extract is positive for flavonoids will change colour after
adding magnesium and HCl reagents to yellow. The addition of magnesium and HCl reagent
in the extract aims to reduce the nucleus of benzopirone in flavonoid compounds. Addition
of HCl causes a reduction between magnesium and flavonoid compounds [7].
3.3. Quantitative Flavonoid Assay Determination of flavonoid content aims to determine the flavonoid compounds contained
in the leaf of Dillenia sp. Levels of flavonoid compounds were expressed in mg QE / mg.
Determination of flavonoid levels uses the AlCl3 colony method with the principle of complex
formation. This principle forms a shift in the wavelength of the visible direction so that the
color of the solution turns yellow. AlCl3 will form complex and stable compounds [11] after
reacting with C4 ketone groups and hydroxyl groups on C3 or C5 from flavone and flavonol
compounds. The formation reaction of the Flavonoid-AlCl3 complex can be show in Figure 1
and 2.
Figure 1. The formation reaction of the
Flavonoid-AlCl3 complex.
Figure 2. Complex formation reaction
between AlCl3 and flavone [13]
27
Quesertin was used in designing flavonoid standard curves since it belongs to the
flavonoid group [9] which have ketone groups on C4 atoms and hydroxyl groups on C3 or C5
atoms. In addition, quesertin easily reacts with AlCl3 [4]. The flavonoids have chelating
properties so they can bind to metals and prevent increased oxidation and gives positive
effect [2].
The absorbance of the questionnaire was plotted against the concentration so that it gets
the calibration curve equation. From the graph obtained the regression equation y = 0,0007x
- 0,0007; with a correlation coefficient (R²) = 0.9396. The correlation coefficient (R2) value
close to 1 indicates regression analysis can be trusted ( Figure 3).
Figure 3. Standard quecertin curve
The results of the research in Table 2 shows that the highest concentration of flavonoid
compounds were at 24 hours maceration time with a concentration of 10% (2.904 mg QE /
mg. The lowest was at the maceration time of 48 hours with a concentration of 20% (2.875
mg QE / mg). Statistical analysis showed that data was homogenous and normally distributed
(ᾳ> 0.005). ANOVA results obtained maceration time and concentration significantly affect
flavonoid content (ᾳ= 0.003) [15].. Duncan Pos Hoc test showed that almost all group were not
different unless the 24 hours x 15% one.
Tabel 2. Flavonoid content of ethanolic leaf extract of Dillenia sp.
Time maceration
(hours)
Concentation
(%)
Flavonoid content
(mg QE/mg)
24
10 2.904
15 2.953
20 2.877
y = 0.0007x - 0.002R² = 0.9689
0
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0 20 40 60 80
Ab
sorb
ance
(n
m)
Concentration (ppm)
Chart Title
28
48
10 2.893
15 2.887
20 2.875
3.4. DPPH Radical Scavenging Assay Free radicals are relatively unstable because they have unpaired electrons in the outer orbit.
These electrons are very reactive if they are compounded with other molecules. Substances
that are able to prevent and protect from the side effects of free radicals are antioxidants.
Antioxidants can to subvert one molecule and stabilize it.
DPPH is a free radical compound that is often used to measure antioxidant activity from
various compounds or extracts of natural ingredients. This method is easy to use to measure
antioxidant activity in extracts. DPPH which was reacted with ethanolic leaf extract of Dillenia
sp., caused the intensity of purple to decrease and turn yellow (Figure 4,5.). This color change
occurs because of the transfer of electrons from certain compounds in the ethanolic extract of
Dillenia sp. on DPPH so that it becomes stable.
Figure 4. Results of a qualitative flavonoid
analysis of ethanolic leaf extract of Dillenia
sp. in maceration time 24 and 24 hours and
series consentration of 10%, 15%, and 20%
(left to right).
Figure 5. DPPH scavenging of ethanolic
leaf extract of Dillenia sp. the 24 hour in
series concentration (10, 50, 100, 150, and
200) ppm shows the change in color of
DPPH after being given Dillenia sp.
ethanolic leaf extract from purple to
yellow.
The method used to measure activity is expressed by the value of DPPH reduction.
DPPH reduction in ethanolic leaf extract of Dillenia sp. in maseration 24 was highest at extract
concentrations of 20% (97.097%) while the extracts in maseration 48 hours were highest at
extract concentrations of 10% (95.095%) (Table 3)
Table 3. DPPH scavenging of ethanolic leaf extract of Dillenia sp. in maceration time 24 and
48 hours (values represent means±SE).
Concentration
(ppm)
Concentration extract
24 hours 48 hours
10% 15% 20% 10% 15% 20%
10 88,69 ± 0,01 65,47 ± 0,01 91,89 ± 0,00 94,39 ± 0,00 85,09 ± 0,01 91,39 ± 0,00
50 91,79 ± 0,01 89,29 ± 0,01 91,89 ± 0,00 91,49 ± 0,01 78,58 ± 0,01 89,89 ± 0,00
29
100 89,79 ± 0,01 95,20 ± 0,01 96,70 ± 0,00 97,10 ± 0,01 88,69 ± 0,01 91,99 ± 0,01
150 95,70 ± 0,01 92,59 ± 0,01 96,30 ± 0,00 91,69 ± 0,01 88,59 ± 0,01 89,79 ± 0,01
200 90,59 ± 0,01 84,58 ± 0,01 97,10 ± 0,00 95,10 ± 0,01 94,19 ± 0,00 92,49 ± 0,01
Antioxidant properties can be found in extracts with different concentrations. Ethanolic
extracts are polar solvents and are very effective for extracting antioxidant compounds in the
leaves of Dillenia sp. This study provides evidence that the leaf of Dillenia sp. from Belitung
contains flavonoid compounds and has the potential as a source of antioxidants. Antioxidant
activity is influenced by time and concentration during extraction. Statistical analysis showed
that concentration and maceration didn’t affect DPPH scavenging ability Dillenia (ᾳ 0.079).
4. Conclusion
Based on the results of research and data analysis that has been carried out that ethanolic leaf
extract of Dillenia sp. have flavonoid levels of 0.0069 mg QE / mg with a 24 hour maceration
time at a concentration of 15%. Ethanol leaf extract Dillenia sp. also has antioxidant activity
with the DPPH method. The highest ability to scavenge radicals on DPPH was 97.097% at
maceration 24 hours at 20% extract concentration.
5. Acknowledgment
Gratitude is firstly address to Allah SWT. Thanks to head of Biology Department, head
of laboratory and laboratory asisstant of Biology Department Universitas Negeri
Jakarta for help and support. Special thanks also mentioned for NOBI team for
psychological support. And also thank you to Belitung tourism guide who dedicatively
helping on samples preparation.
References
[1] Blokhina et al. Antioxidant, oxidative stress and oxygen deprivation stress.
Annals of Botany. 2003; 91, 179- 194 [2] Abdille Md H, R P Singh, G K Jayaprakasha, and B S Jena. Antioxidant Activity of the
Extracts from Dillenia Indica Fruits. Food Chemistry. 2005; 90: 891-896.
[3] Banjarnahor Sofna DS, Artanti N. Antioxidant properties of flavonoids. Med J Indones.
2014;23:239-44.
[4] Blessy BM, Archana T, Suresh K J. Free Radicals and Antioxidants : A Review. Journal
of Pharmacy Research 2011; 4(12): 4340-4343.
[5] Chang CM, When HJ. Estimation of Total Flavonoid content in propolis by two
complentary spektometer UV-Vis Methods. J. Food Drugs. Annal England. 2002.
[6] Dickison WC. A note on the wood anatomy of Dillenia (Dilleniaceae), IAWA bulletin
1979; 2-3.
[7] Gandhi, Dipal, and Priti. Mehta. Dillenia Indica Linn. and Dillenia Pentagyna Roxb.:
Pharmacognostic, Phytochemical and Therapeutic Aspects. Journal of Applied
Pharmaceutical Science. 2013; 3(11): 134-142.
[8] Haeria, Hermawati, Pine Tenri A Ugi Dg.. Penentuan Kadar Flavonoi Total dan
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Sbidara (Ziziphus spina-christi L.).
Journal of Pharmaceutical and Medicinal Science.2016;1(2):57-61.
[9] Ifeanyi OE. A Review on Free Radicals and Antioxidants. Int. J. Curr. Res. Med. Sci.
2018; 4(2): 123-133.
[10] Justesen U, and Knuthsen P. Composition of flavonoids in fresh herbs and calculation
of flavonoid intake by use of herbs in traditional Danish dishes. Food Chemistry.
2001;73(2), 245–250.
30
[11] Kanta RS, Kar M, Roiutray R. DPPH Free Radical Scavenging Activity of Some Leafy
Vegetable used by Tribals of Odisha, India. Journal of Medicinal Plants Studies.
2013; 1(4):21-27.
[12] Mabry TJ, Markham KR, dan Thomas MB. The Systemic Identification of Flavonoid.
Berlin: Springer-Verlag.1970. 50-52.
[13] Manarim, GR dan De Agular. Removal of Pigments from Sugarcane Cells by Adsorbent
Chromatographic Column. Ann Chromatogr Sep Tech. 2016; 2(1): 1015.
[14] Mukherjee KS, Badruddoza S. Chemical constituents of Dillenia indica Linn. and Vitex
negundo Linn. J Indian Chem Soc 1981; 58:97–98.
[15] Predescu NC, Papuc C Nicorescu V, Gajaila I, Goran GV, Petcu CD, Stefan G. The
Influence of Solid-to-Solvent Ratio and Extraction Method on Total Phenolic
Content, Flavonoid Content and Antioxidant Properties of Some Ethanolic Plant
Extracts. REV.CHIM.(Bucharest). 2016 67(10). 1922-1927.
[16] Setyaji H, Suwita V, and Rahimsyah A. Sifat Kimia dan Fisika Kerupuk Opak
Penambahan Daging Ikan Gabus (Ophiochephalus striatus). Jurnal Penelitian
Universitas Jambi Seri Sains.2012; 14(1): 17-22.
[17] Supriningrum R. Penetapan Kadar Flavonoid Ekstrak Etanol Daun Pacar Kuku
(Lawsonia inermis L.) Berdasarkan Perbedaan Cara Pengeringan. Jurnal Ilmiah
Manutung. 2018; 4(2): 156-161.
[18] Tiwari KP, Srivastava SD, Srivastava SK. Alpha- Lrhamnopyranosyl- 3 beta- hydroxyl-
lup20(29)-en-28-oic acid from stem of Dillenia pentagyna. Phytochemistry. 1980;
19(5): 980-1.
[19] Uppalapati L, Rao JT. Antimicrobial efficiency of fixed oil and unsaponifiable matter
of Dillenia indica Linn. Indian Drugs Pharm Ind. 1980; 15(3): 35-38.
[20] Voight, R. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi. Diterjemahkan oleh Soendani N.S.
Yogyakart; UGM Press. 1995.
[21] Zahid K, Ahmed M and Khan F. Evaluation of Phytochemical Compounds in Stem and
Leaf Extract of Artocarpus integrifolia L. F. Pakistan Journal of Science. 2017;
69(3): 304-309.
[22] Malik, S. K., Z.U. Khan and M. Ajaib. Investigation of in-vitro antioxidant potential of
ethnobotanically important tree, Pterospermum acerifolium L. Pak J Bot. 2012; 44:
105 -109.
[23] Supriyatin, Rahayu S, Sukmawati, D 2015 Phytochemical composition, antimicrobial
and antioxidant activity of Manggong Bamboo (Gigantochloa Manggong) leaves
extract. Asian Jr. of Microbiol. Biotech. Env. Sc. 17 (2) : 2015 : 443-450
[24] Supriyatin Rahayu S Apriana R 2017 The Effet of Maximum Physical Activity and
Manggong Bamboo (Gigantochloa manggong) Leaf Extract on Catalase Activity in
Liver Organ of Rats (Rattus norvegicus) Metamorfosa iv(1) 8-12
31
Lampiran 2. Acceptance pada AIP Conference Proceeding
32
Lampiran 3. Sertifikat seminar AASEC
33
Lampiran 4. Draft HAKI
PERMOHONAN PENDAFTARAN CIPTAAN
I. Pencipta : 1. Nama : Sri Rahayu, M.Biomed, Isfi Zahara, M. Farid 2. Kewarganegaraan : Indonesia
3. Alamat : Cluster Hidayah no A.4 Jalan Hidayah 2 rt02/02 Pondok Gede Jati Bening, Bekasi
4. Telepon : - 5. No. HP & E-mail : 08161690885
II. Pemegang Hak Cipta : 1.Nama : LPPM Universitas Negeri Jakarta
2. Kewarganegaraan : Indonesia 3. Alamat : Gd. Ki Hajar Dewantara Lt 6-7 Kampus A,
Universitas Negeri Jakarta , Jalan Rawamangun Muka, Jakarta Timur. Kode
Pos 13220 4. Telepon : (021) 489-0856 5. No. HP & E-mail : lppm@unj.ac.id
III. Kuasa : 1. Nama : - 2. Kewarganegaraan : - 3. Alamat - 4. Telepon : - 5. No. HP & E-mail : -
IV. Jenis dari judul ciptaan yang dimohonkan : Kumpulan dokumentasi “Mencari
fakta dibalik Dillenia” V. Tanggal dan tempat di-
umumkan untuk pertama kali di wilayah Indonesia atau di luar wilayah Indo- nesia : November 2019
VI Uraian ciptaan : Kumpulan dokumentasi foto beserta insert caption penelitian simpor berisi informasi tahapan pelaksanaan penelitian dan hasil yang didapat dalam ukuran kertas a4 lux.
Jakarta, 19 November 2019
Tnda Tangan : Nama Lengkap : Dr. Ucu Cahyana, M.Si NIP :196608201994031002
34
top related