5-2-5

64

Sari Pediatri, Vol. 5, No. 2, September 2003

Uji Coba Vaksin Dengue Rekombinan pada HewanUji Coba Vaksin Dengue Rekombinan pada HewanUji Coba Vaksin Dengue Rekombinan pada HewanUji Coba Vaksin Dengue Rekombinan pada HewanUji Coba Vaksin Dengue Rekombinan pada HewanCoba Mencit,Tikus, Kelinci dan MonyetCoba Mencit,Tikus, Kelinci dan MonyetCoba Mencit,Tikus, Kelinci dan MonyetCoba Mencit,Tikus, Kelinci dan MonyetCoba Mencit,Tikus, Kelinci dan Monyet

Soegeng Soegijanto; Fedik A Rantam; Soetjipto, Ketut Sudiana, Yoes Priyatna

Sari Pediatri, Vol. 5, No. 2, September 2003: 64 - 71

Alamat korespondensi:Prof.DR.H. Soegeng Soegijanto, Dr,SpA(K),DTM&H.Bagian Ilmu Kesehatan Anak FK-TDC UNAIR RS Dr. Soetomo.Jl Prof. Dr. Moestopo 6-8, Surabaya 60132.Telepon: 031-5501680/81, Fax.: 031-5501680.

Perbedaan yang nyata demam berdarah dengue dandemam dengue adalah terjadinya proses keluarnyaplasma dari dalam pembuluh darah yang mengalir keruang intersisial yang berakibat terjadinya gangguansirkulasi vaskuler sehingga terjadi syok. Pada saat itudapat terjadi trombositopenia dan perdarahan.Penderita demam berdarah dengue dengan syokdikenal sebagai sindrom dengue syok atau DSS (dengueshock syndrome).2

Di Indonesia outbreak virus Dengue terjadi setiaplima tahun sehingga dikenal dengan kasus limatahunan3, tetapi dalam dekade terakhir ini terlihatbahwa virus ini tidak hanya terjadi setiap lima tahun

nfeksi virus Dengue dapat digambarkansebagai pola gunung es yang sebagian besartidak menunjukkan manifestasi klinik dandisebut sebagai demam dengue yang dapatsembuh sendiri. Demam berdarah dengue

secara klinis dikelompokkan DBD (Demam BerdarahDengue) tanpa syok dan DBD dengan syok.1

Pencegahan terhadap infeksi dengue dengan cara vaksinasi perlu dikembangkan; olehkarena secara epidemiologi infeksi virus dengue telah menyebar ke daratan Asia, Afrika,Amerika dan Eropa. Pendekatan pencegahan dan pemberantasan dengan melakukanpemberantasan vektor tidaklah cukup untuk menekan angka kesakitan. Pengembanganvaksin dengan menggunakan protein E dapat menginduksi produksi antibodi terhadapsemua strain (galur) virus dengue.Tujuan penelitian menentukan daya proteksi antibodi yang dipacu oleh calon vaksinpada hewan percobaan (mencit, tikus, kelinci dan monyet).Metode penelitian Isolasi virus dari pasien DBD di RS Dr. Sutomo Surabaya dan isolatstandar dari NAMRU-2 Jakarta. Dilakukan purifikasi isolat virus dengue dan purifikasiprotein E rekombinan. Selanjutnya dilakukan imunisasi pada binatang percobaan dandinilai respon imunnya.Hasil penelitian karakterisasi dan identifikasi imunoglobulin dari mencit yang diimunisasidengan protein E selain IgM, IgG ditentukan subklas IgG1a, IgG2a, IgG2b. Protein Epada hewan percobaan dapat menginduksi antibodi humoral dengan berbagai kelasimunoglobulin maupun subkelasnya dan antibodi seluler yang protektif. Analisis hasilrespon imun pada CD 4 dan CD 8 yang di isolasi dari hewan percobaan yang telahdiimunisasi, direuksikan dengan IFN-∂ ternyata menunjukkan adanya perbedaan responimun yang berbeda. Pada challenge test hanya monyet yang memberikan respons patologisyaitu terlihat adanya perdarahan pada hari ke tiga setelah infeksi. Protein E yangdiimunisasikan pada monyet dapat menginduksi antibodi humoral dengan titer cukuptinggi terutama imunoglobulin G.

Kata kunci: virus dengue, protein E, imunoglobulin, antibodi, vaksin dengue.

I

65


dan tidak hanya terjadi pada anak tetapi juga padaorang dewasa.4 Pendekatan pencegahan dan pem-berantasan DBD di Indonesia sampai saat ini adalahmelakukan pemberantasan vektor dengan caramembasmi nyamuk di daerah endemik. Hal ini tidakdapat menekan angka kesakitan secara tuntas olehkarena itu pendekatan dengan cara vaksinasi meru-pakan alternatif yang tepat dalam pengendalianpenyakit DBD di Indonesia

Pokok Permasalahan Penelitian

Protein E mempunyai sifat yang sempurna sebagaivaksin karena dapat mengenali semua galur virusDengue yang didukung dengan berat molekulnya,walaupun demikian masih memerlukan pembawasebagai imunomodulator yang dapat menstimulasisel B dan sel Th untuk menginduksi produksiantibodi melalui ekspresi sitokin, sehingga titerantibodi semakin tinggi. Protein E mempunyai sifathidrofobik yang tinggi, banyak mengandunghistidin dan sifatnya stabil. Oleh karena itu telahdikembangkan protein E hasil rekombinan denganbaculovirus yang kemudian digunakan sebagaibahan vaksin klon subunit. Epitop dari protein Emengandung banyak asam amino yang merangsangterbentuknya antibodi neutralisasi yang dibentukmelalui proses acidic compartments yang disekre-sikan lewat komplek golgi. Karakterisasi E proteinyang dikode DNA dari semua galur telah disekresimelalui sel jaringan dan secara invivo mempunyaisifat reaktivitas yang tinggi dan tingkat imunogenitasyang optimal sebagai vaksin klon - subunit.5 Modelekspresi dengan baculovirus akan didapatkanprotein yang stabil dan bersifat seperti partikel virus,sehingga ideal untuk dikembangkan sebagai vaksindengue yang multivalen.

Tujuan Penelitian

Tujuan umum

Memanfaatkan protein E virus Dengue secararekombinan untuk pengembangan vaksin klon subunitdengan menggunakan baculovirus yang dimodifikasi,sehingga dapat memacu antibodi protektif untuksemua galur.

Tujuan khusus

Menentukan daya proteksi antibodi yang dipacu olehcalon vaksin pada hewan percobaan (mencit, tikus,kelinci dan monyet).

Metode Penelitian

Isolasi virus didapat dari pasien DBD di RS Dr.Sutomo Surabaya dan isolat standar diperoleh dariNAMRU-2 Jakarta. Dilakukan purifikasi isolat virusdengue dan purifikasi protein E rekombinan.Selanjutnya dilakukan imunisasi pada binatangpercobaan dan dinilai respon imunnya.

Virus dan Isolasi

Sampel virus merupakan hasil isolasi dari pasien DBDyang di rawat di RS Dr. Soetomo Surabaya yangmerupakan isolat Lab. Dengue TDC-Unair dan isolatstandard dari NAMRU-2 Jakarta . Virus ini diisolasidengan menggunakan sel C6/36 p27 berasal dariNAMRU-2 Jakarta.

Serum

Koleksi sampel serum diambil dari pasien DBD denganderajat sakit yang berbeda mulai dari yang ringansampai berat. Pengumpulan sampel serum inidilakukan sejak tahun 1997. Selanjutnya dilakukanpurifikasi isolat virus dengue dan semi nested-PCR (s-n-Polymerase Chain Reaction), analisis DNA dan RNA,karakterisasi genom galur virus dengue dan genomprotein E, karakterisasi protein E, SDS-PAGE (SodiumDeodocyl Sulphat Polyacrylamid Gel-electrophoresis) danpurifikasi protein E rekombinan.

Selanjutnya dilakukan perlakuan:a. Imunisasi mencit dan analisis respon imun.b. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)c. Deteksi sitokin intraselulard. Challenge test

Hasil Penelitian

Karakterisasi dan identifikasi imunoglobulin darimencit yang diimunisasi dengan protein E selain IgM,IgG ditentukan subklas IgG1a, IgG2a, IgG2b. Protein

66


E pada hewan percobaan dapat menginduksi antibodihumoral dengan berbagai kelas imunoglobulin maupunsubkelasnya dan antibodi selular yang protektif.Analisis hasil respon imun pada CD 4 dan CD 8 yangdi isolasi dari hewan percobaan yang telah diimunisasi,direaksikan dengan IFN-γ ternyata menunjukkanadanya perbedaan respon imun yang berbeda. Padachallenge test hanya monyet yang memberikan responspatologis yaitu terlihat adanya perdarahan pada harike tiga setelah infeksi. Protein E yang diimunisasikanpada monyet dapat menginduksi antibodi humoraldengan titer cukup tinggi terutama imunoglobulin G.

Analisis titer antibodi pada mencit

Pada Tabel 1 terlihat rata-rata titer antibodi dari mencityang diimunisasi dengan protein E. Imunisasi dengandoses 20 mg menghasilkan respon antibodi yang lebihtinggi dibandingkan dengan dosis 10 mg, dan stimulasiantibodi yang ditimbulkan cukup tinggi jika diban-dingkan dengan kontrol negatif dan terlihat rata-ratatiter antibodi lebih besar 5,3 sehingga presentasi

didalam tabel diatas tertulis semua 100%.Pada hewan percobaan selain dianalisis respon

imun humoral melalui titer imunoglobulin juga responimun selulernya dengan cara flowcytometri. Data dapatdilihat pada Gambar 1.

Challenge test imunisasi mencit denganprotein E (Tabel 2,3,4)

Respon antibodi pada mencit yang diimunisasi denganprotein E rekombinan dan selanjutnya diinjeksicampuran virus dengue (DEN1-4) sebagai challengetest.

Tabel 1. Analisis titer antibodi spesifik protein E rekombinan

ELISA Titer Antibodi (log 2 of dilution)

Inokulasi pertama Inokulasi ke dua

Protein E Jumlah mencit Rerata Prosentase Rerata Prosentase

10 mg 10 16.6 100 19.6 10020 mg 10 18.9 100 20.6 100

Kontrol 10 0.01 100 0.01 100

Gambar 1. Analisis CD8 spesifik epitope pada sellimfositdari darah periferKeterangan:A) Analisis CD8 dari mencit yang diimunisasi dengan

PBS hari ke 10, 21 dan 28 setelah imunisasi.B) Analisis CD8 dari mencit yang diimunisasi dengan

protein E 500 mg/mlC) Dosis imunisasi 1 mg/ml hari ke 0, 12 dan ke 28

setelah imunisasi konsentrasi CD8 positif sekitar0,27% (dosis 500mg) dan 0,65% (dosis 1 mg) yangdianalisis dengan FAC Scalibur flow cytometer.

Analisis respon imun CD4 dan CD8 sel T

Tabel 2. Titer antibodi dari mencit yang di challenge test

Resiprokal Titer Antibodi Neutralisasi

Protein E Jumlah Mencit Infeksi Infeksi Infeksi ViremiaKe 1 Ke 2 Ke 3

20 µg 10 40 200 380 010 µg 10 < 10 60 280 0

Kontrol 10 < 10 < 10 0 10

Keterangan• 0= tidak ada viremia• Titer virus pada kontrol mencit 1-10:180, 220, 200, 180, 220, 80, 80, 200, 60, 60 FFU/ml (focus forming unit).

67


Profil imunoglobulin pada tikus

Profil antibodi pada kelinci

Tabel 3. Titer antibodi dari tikus yang di challenge test

Group Imunisasi Klas dan subklas n Hari ke 14 Hari ke 28imunoglobulin

1 i.m IgM 10 + -(20 mg) IgG 10 + +++

IgG1a 10 + +IgG2a 10 + +IgG2b 10 + ++

2 i.m IgM 10 + -(40 mg) IgG 10 + +++

IgG1a 10 + +IgG2a 10 + +IgG2b 10 + +++

3 i.m IgGM 10 - -(1 ml PBS) IgG 10 - -

IgG1a 10 - -IgG2a 10 - -IgG2b 10 - --

Tabel 4. Titer antibodi dari kelinci yang di challenge test

Group Imunisasi Klas dan subklas n Hari ke 14 Hari ke 28imunoglobulin

1 i.m IgM 7 + -(40 mg) IgG 7 + +++

IgG1a 7 + ++IgG2a 7 + +IgG2b 7 + ++

2 i.m IgM 7 + -(50 mg) IgG 7 + +++

IgG1a 7 + +++IgG2a 7 + ++IgG2b 7 + +++

3 i.m IgM 7 - -(1 ml PBS) IgG 7 - -

IgG1a 7 - -IgG2a 7 - -IgG2b 7 - -

68


Pembahasan

Karakterisasi dan identifikasi imunoglobulin darimencit yang diimunisasi dengan protein E selain IgM,IgG ditemukan beberapa subklas imunoglobulin Gantara lain IgG1a, IgG2a, IgG2b. Hal ini seperti vaksinenvelope dari dengue yang dikembangkan oleh Smucnyet.al. (1995) yang disuntikkan pada anjing laut, danmenemukan imunoglobulin subklase. Imunoglobulinyang ditimbulkan oleh stimulasi protein E yangdiimunisasikan menghasilkan titer yang berbedadiantara subklas imunoglobulin G. IgG1a dan IgG2b.Analisa dengan ELISA menunjukkan titer antibodiyang cukup tinggi dan bila dibandingkan dengansubklas lainnya terdapat perbedaan yang signifikan. Halini menunjukkan bahwa yang berperan sebagai

antibodi yang protektif terhadap infeksi virus dengueadalah IgG1a dan IgG2b6,7 dan juga protein E yangmempunyai korelasi dengan kepekaan sel pada awalinfeksi (Anderson, dkk, 1992). Hal ini seperti juga padavaksin DNA yang dikembangkan oleh Korchel danRaviprakash.17

Profil respon imun humoral secara keseluruhanpada hewan percobaan dapat dilihat pada Gambar1,2,3. Respon terhadap stimulasi imunoglobulin padaawalnya rendah, namun setelah beberapa hari kadarantibodi semakin meningkat sesuai dengan dosis yangdiberikan. Hal ini mungkin karena proses stimulasisel B untuk produksi imunoglobulin melalui beberapaproses internalisasi pada sel asesoris. Proses inimemerlukan waktu untuk dikomunikasikan dengansel B dan sel Th dengan cara mengaktifkan sel Th untuk

Tabel 5. Titer antibody dari monyet yang di challenge test

Resiprokal titer Antibodi Neutralisasi

Protein E (dosis) Monyet Imunisasi 1 Imunisasi 2 Imunisasi 3

Kontrol 2(PBS 1 ml) MF 1 < 10 < 10 < 10

MF 2 < 10 < 10 < 10Perlakuan 4(1 mg) MF 3 40 280 460

MF 4 40 280 460MF 5 20 180 280MF 6 40 280 480

Tabel 6. Titer antibodi dan viremia virus DEN dari monyet yang di challenge test

Resiprokal Titer Antibodi Neutralisasi

Protein E Monyet Infeksi Infeksi Infeksi Infeksi Viremia(dosis) 1 DEN-1 DEN-2 DEN-3 DEN-4

Kontrol MF 1 20 40 40 20 220(PBS 1 ml) MF 2 20 20 40 20 220Perlakuan MF 3 460 460 480 520 0(1 mg) MF 4 460 460 480 520 0

MF 5 280 240 460 480 0MF 6 480 480 500 540 0

Imunisasi monyet (macaca fasicularis) dengan protein E

Uji tantang (Challenge test) macaca fasicularis dengan virus DEN-1, 2, 3, 4

69


sekresi IL-4, 5, 6 dan secara langsung pada sel B karenaprotein E rekombinan dapat bertindak sebagai nativeantigen, sehingga sel B sangat mudah mengadakanendositosis dan selanjutnya dipresentasikan dalambentuk peptid antigen melalui MHC II; dan diakhiridengan produksi imunoglobulin protektif yang tinggi.

Analisis respon imun pada CD4 dan CD8 yangdiisolasi dari darah hewan percobaan yang telahdiimunisasi, direaksikan dengan IFN-α ternyatamenunjukkan adanya perbedaan respon imun yangberbeda. Dengan dosis vaksin (konsentrasi protein E/ml) yang berbeda yaitu dosis 1 mg pada monyetmenunjukkan daya stimulator terhadap antibodi lebihtinggi dibandingkan dengan dosis vaksin yangmengandung 500 µg/ml. Data ini juga didukung olehtiter antibodi pada mencit, tikus dan kelinci, responantibodi yang terbentuk tergantung dosis yangdiimunisasikan, walupun respon imun sedikit berbeda.Hasil ini menunjukkan persamaan dengan vaksin peptidsintetik virus dengue yang dikembangkan oleh Huang,dkk (1999).18 Selain itu sitokin yang diekspresi padadosis 1 mg/ml lebih tinggi konsentrasinya dibandingkan

dengan dosis 500 mg/ml. Adanya perbedaan ekspresiini karena berkaitan dengan fungsi sitokin, selain sebagaipemicu reaksi imun terhadap infeksi juga berfungsisebagai anti infeksi8. Walaupun sitokin secara vasoaktifjuga di lepas oleh sel mas dan basophil, namun ekspresisitokin ini merupakan rangkaian dari innate immunitydan adaptive immunity.9,10

Pada tahap challenge test semua hewan percobaansecara klinis tidak menunjukkan gejala yangpatognomonis terhadap adanya infeksi dengue tetapipada hewan percobaan monyet memberikan responpatologis yang cukup patognomonis yaitu terlihatadanya perdarahan di daerah yang tidak berbulu 3hari setelah infeksi. Hal ini terjadi pada kontrol(MF1), sedang pada perlakuan (MF3, MF4, MF5,MF6) tidak tampak gejala spesifik infeksi virusdengue. Hasil ini sesuai dengan fungsi protein Esebagai imun induksi yang spesifik terhadap responimun humoral. Pada kelompok hewan percobaanlainnya menunjukkan hasil yang cukup baikwalaupun gejala yang spesifik tidak tampak, tetapisecara umum mengalami penurunan. Data inididukung dengan adanya viremia. Pada kelompokperlakuan yang diimunisasi dengan protein Erekombinan dan selanjutnya diinfeksi dengan viruscampuran virus dengue menunjukkan titer antibodiyang tinggi 1820. Tingginya titer antibodi ini karenaadanya dua sifat dari protein E yaitu sebagai linearepitope juga discontinous epitope 11 sehingga antibodiyang timbul dimungkinkan sebagai antibodineutralisasi, 12,13 selain itu protein E juga menginduksisistem imun pada mencit melalui sel asesoris dan lebihterfokus pada proses induksi sel B untuk mem-produksi antibodi humoral.

Walaupun tidak semua individu menghasilkan titerantibodi yang sama dan dengan melihat sifat protein

Gambar 2: A) Kontrol negatif dari deteksi spesifikepitope

B) Analisis CD8 dan CD4 sel T superfisial yang direaksikan dengan IFN- α

C) Analisis CD8 dan CD4 sel T intra selularyang direaksikan dengan IFN-α

Gambar 3. Reaksi CD8 dan CD4 sel T pada sel otakdari mencit yang diimunisasi dengan protein E dansetelah dilakukan challenge test. Menunjukkan bahwarespon imun akibat dari stimulasi protein E sangat berartipada infeksi virus dengue.

70


E yang imunogen, maka hasil ini sangat sesuai untukmenghambat transmisi virus dengue akibat antibody-dependent enhancment.14 Hal ini karena setiapindividu mempunyai respon imun yang berbeda, akibatdari variabel yang bermacam-macam tingkatannya.Pada hewan percobaan tikus respon imun yang timbulakibat vaksinasi dengan protein E rekombinanmenunjukkan titer antibodi yang cukup tinggi danditemukan beberapa klas dan subklas imunoglobulin.(Tabel 3). Kelas imunoglobulin yang mempunyai titerantibodi tinggi adalah IgG; sedangkan IgM, IgG1,IgG2a dan IgG2b tidak terlalu tinggi. Hal ini sedikitberbeda dengan mencit IgG2b dan IgG1 mempunyaititer tinggi.15 Model hewan percobaan ini seringdigunakan eksperimen sebagai kandidat vaksin,walaupun sedikit kurang peka dalam memproduksiantibodi khususnya respon akibat dari infeksi virusdengue.

Respon imun terhadap infeksi virus dengue padamencit lebih baik dibandingkan dengan tikus.15,16 Padahewan percobaan khususnya untuk eksperimen virusdengue, sampai sekarang belum ditemukan modelhewan percobaan yang sesuai. Untuk itu pada tahapanini dilakukan beberapa model hewan percobaan antaralain kelinci. Respon imun yang timbul pada kelinciyang telah diimunisasi dengan protein E rekombinanvirus dengue dan baculovirus tidak ditemukan semuajenis atau klas dan subklas imunoglobulin (Tabel 4);walaupun titer antibodi dari imunoglobulin G lebihdominan dibandingkan dengan subklas lainnya sepertiIgG1a, IgG2a dan IgG2b.

Protein E rekombinan yang diimunisasikan padamonyet dapat menginduksi antibodi humoral yangmempunyai titer cukup tinggi terutama imunoglobulinG (Tabel 5). Dari hasil titer antibodi dapat diprediksirespon imun monyet terhadap protein E terbentukdengan baik yaitu dalam proses terbentuknya selmemori dari sel B yang memproduksi antibodi.17 Halini sesuai dengan sifat protein E rekombinan yangmempunyai ikatan kovalen dan bersifat hidrofobikyang diregulasikan dalam tubuh melalui sistem imunyang berawal dari fragmen antigen yang diekspresikanoleh MHC II dari sel asesoris atau langsung peda selB. Dengan demikian antibodi yang terinduksi olehprotein E mempunyai titer tinggi.

Tingginya titer antibodi dari hewan percobaanyang diimunisasi dengan protein E rekombinan cukuppositif hal ini sebagai dasar untuk proses pencariankandidat vaksin dengan hasil yang optimal, dan

antibodi yang ditimbulkan bersifat protektif.18 Padatahapan selanjutnya masih diperlukan tes protektifitaspada hewan percobaan dengan challenge test.

Pada penelitian ini penggunaan protein E rekombinansebagai kandidat vaksin sangat representatif karena proteinE merupakan soluble antigen, untuk stimulasi sel Tmelalui sel asesori sebagai antigen sel presenting yangmengekspresikan antigen peptida dari protein E melaluiMHC II, selain itu antigen sel presenting ikut bertanggungjawab dalam produksi antibodi spesifik dengue melaluinative antigen maupun melalui Th2 dengan caramensekresi interleukin 4 atau CD40 dan ligan. Dan yangteristimewa adalah tidak diperlukan dosis yang tinggi. Halini didukung oleh Reviprakash dkk.5 (2000). Walaupunprotein E menginduksi kedua sistem imun humoral danseluler, namun target utamanya adalah respon imunhumoral. Sehingga kemungkinan terjadinya reaksihipersentivitas dapat dikesampingkan.

Pada tahap challenge test yang yang dilakukan padamonyet sedikit berbeda dengan kelompok lainnya. Halini bertujuan agar didapatkan model yang kom-prehensif, sehingga dapat menampakkan gejala yangsimptomatis seperti yang terjadi infeksi dengue padamanusia. Tahap awal kelompok perlakuan diimunisasidengan protein E rekombinan, 28 hari setelah boosterdiinfeksi campuran virus dengue DEN 1-4, yangmempunyai titer rendah. Kemudian setelah 21 hari diinfeksi dengan DEN-1. Sedang pada kelompok kontroltanpa diberi imunisasi, ternyata gejala yang timbulsangat signifikan dan patognomonis. Hasil inikemungkinan berkaitan dengan reaksi respon imunyang abnormal yang sesuai dengan teori dependentenhancement yang memberikan peluang virus untukmenginfeksi sel mono-nuklear melalui komplek imunantara virus, antibodi yang tidak protektif dan selmonosit.

Kesimpulan

Hasil penelitian ini, maka dapat disimpulkan bahwa,1. Telah didapatkan protein E rekombinan murni

yang mempunyai reaktivitas yang tinggi terhadapantibodi poliklonal. Protein E yang didapatmempunyai daya imunogenik yang cukup tinggidan mampu menetralisasi infeksi virus denguepada hewan percobaan, mencit, tikus, kelinci danmonyet.

2. Protein E pada hewan percobaan dapat meng-

71


induksi antibodi humoral dengan berbagai kelas(IgM, IgG) imunoglobulin maupun subkelas (IgG,IgG1a, IgG2a, IgG2b) dan selular yang protektif.

3. Protein E rekombinan tidak menginduksi adanyareaksi hipersensivitas pada semua tipe.

4. Gejala DBD yang patognomonis ditemukan padamonyet kelompok kontrol yang disuntik denganvirus dengue dari semua galur yang dapat diisolasidi Indonesia.

5. Protein E rekombinan mempunyai sifat yang stabildan imunogen yang dapat menginduksi antibodihumoral dengan titer yang tinggi dan protektif.

Saran

Perlu dikaji terjadinya kekebalan jangka panjang lebihdari 10-15 tahun, yang ditimbulkan oleh protein Erekombinan dengan dosis yang optimal.

Daftar Pustaka

1. Sumarmo. Penatalaksanaan Demam Berdarah Dengue.Medika Jakarta.1989; 2:16.

2. Suchitra Nimmanitya. Management of Dengue andHaemorrhagic Fever. Monograph on Dengue/DengueHaemorrhagic Fever. WHO. Regional Publication Searo.New Delhi No. 22;1993.

3. Thomas Suroso. Perkembangan demam berdarah den-gue di Indonesia. Disampaikan pada Seminar DemamBerdarah Dengue. Jakarta, 8 Juni 1991.

4. Rigau-Perez, J.G; Clark, G.G; Dubler, D.J; Reiter, P;Sanders, E.J; Vorndam, A.V. dengue and denguehaemorrhagic fever. Lancet 1998; 352:971-77.

5. Raviprakash, K; Porter, K.R; Kochel, T.J; Ewing, D;Simmons, M; Phillips, I; Murphy, G.S; Weiss, W.R andHayes, C.G. Dengue virus type 1 DNA vaccine inducesprotective immune responses in rhesus macaques. Virol2000; 81:1659-67.

6. Men, R; Wyatt, L; Tokimatsu, I; Arakaki, S; Shameem,G; Elkins, R; Chanock, R; Moss, B and Lai, C.J. Immu-nization of rhesus monkeys with a recombinant of modi-fied vaccinia virus Ankara expressing a truncated enve-lope glycoprotein of dengue type 2 virus induced resis-tance to dengue type 2 virus challenge. Vaccine 2000;18:3113-3122.

7. Most, R.G; Krisnha, K.M; Ahmed, R; Strauss, J.H.Chimeric yellow fever/dengue virus as a candidate den-gue vaccine: quantitation of the dengue virus-specificCD8 T-cell response. Virol 2000; 74:8094-8101.

8. Guidotti, L.G and Chisari, F.V. Cytokine-Mediated con-trol of viral infections. Virology, 2000; 273:221-7.

9. Estcourt, M.J; Ramshaw, I.A; Ramsay, A.J. Cytokineresponse in virus infections effect on pathogenesis, re-covery and persistence. Curr. Opin. Microbiol 1998;4:411-18.

10. Karupiah, G; Blanden, R.V; Ramshaw, I.A. Interferongamma is involved in the recovery of athymic nude micefrom recombinant vaccinia virus/interleukin 2 infection.J. Exp. Med. 1990; 172:1495-502.

11. Megret, F; Hugnot, P.J, Falconar, A; Gentry, M.K, Morens,D.M; Regenmortel, M.H.V; Deuble, V. Use of recombi-nant fusion proteins and monoclonal antibodies to difinelinear and discontinous antigenic site on the dengue en-velope glycoprotein. Virology 1992; 187:480-91.

12. Sataropoli, I; Clement, J.M; Frenkiel, M.P; Hofnung,M and Deuble, V. Dengue-1 virus envelope glycopro-tein gene expressed in recombinant baculovirus elicitsvirus neutralization antibody in mice and protects themfrom virus challenge. Am. J. Trop. Med. Hyg 1996;45:159-67.

13. Sataropoli, I; Frenkiel, M-P; Mergret, F and Deuble, V.Affinity-purified dengue-2 virus envelope glycoproteininduces neutralizing antibodies and protective immu-nity in mice. Vaccine 1997; 15:1-9.

14. Ferguson, N; Anderson, R and Gupta, S. The effect ofantibody-dependent enhancement on the transmissiondynamics and persistence of multiple-strain pathogens.Issue 1999; 2:790-4.

15. Pletnev, A.G; Karganova, G.G; Dzhivanyan, T.I;Lashkevich, V.A and Micheal Bray. Chimeric Langat/Dengue Viruses protect mice from heterologous chal-lenge with the highly virulent strains of tick-born en-cephalitis virus. Virology 2000; 274:26-31.

16. Rantam, F.A; Soetjipto; Sudiana, I.K. Profil antibodihumoral dan seluler pada tikus yang diimunisasi pro-tein E rekombinan, J. Vet. Med. 2001; 17:89-94.

17. Kochel, T.J; Raviprakash, K; Hayes, C.G; Watts, D.M;Russell, K.L; Gozalo, A.S; Phillips, I.A; Ewing, D.F;Murphy, G.S and Porter, K.R. A dengue virus serotype-1 DNA vaccine induces virus neutralizing antibodies andprovides protection from viral challenge in Aotus mon-keys. Vaccine 2000; 18:3166-73.

18. Huang, JH, Wey, JJ, Sun, J.C, Chin, C, Chien, LJ, Wu,YC. Antibody response to an immunodominant nonstructural 1 synthetic peptide in patients with denguefever and dengue haemorrhagic fever. Med Virology1999; 57:1-8.

5-2-5

Documents