document1
TRANSCRIPT
KOMPOSISI KIMIA DAN IDENTIFIKASI SENYAWA
ANTIOKSIDAN DARI EKSTRAK TAMBELO
(Bactronophorus thoracites)
JULIANA LEIWAKABESSY
Tesis
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Magister Sains pada
Program Studi Teknologi Hasil Perairan
SEKOLAH PASCASARJANA
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011
Penguji Luar Komisi pada Ujian Tesis: Dr. Dra. Purwantiningsih S,MS
Judul Tesis : Komposisi Kimia dan Identifikasi Senyawa Antioksidan dari
Ekstrak Tambelo (Bactronophorus thoracites)
Nama : Juliana Leiwakabessy
NRP : C351070051
Disetujui,
Komisi Pembimbing
Dr. Ir. Linawati Hardjito, M.Sc Dr. Ir. Sri Purwaningsih, M.Si
Ketua Anggota
Diketahui,
Ketua Program Studi Dekan Sekolah Pascasarjana
Teknologi Hasil Perairan
Dr. Tati Nurhayati, S.Pi, MSi Dr. Ir. Dahrul Syah, M.Sc. Agr
NIP: 19700807 1996 032002 NIP: 19650814 1990 021001
Tanggal Ujian: 28 September 2011 Tanggal Lulus:
KOMPOSISI KIMIA DAN IDENTIFIKASI SENYAWA
ANTIOKSIDAN DARI EKSTRAK TAMBELO
(Bactronophorus thoracites)
JULIANA LEIWAKABESSY
SEKOLAH PASCASARJANA
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011
PERNYATAAN MENGENAI TESIS DAN
SUMBER INFORMASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa tesis yang berjudul “ Komposisi
Kimia dan Identifikasi Senyawa Antioksidan dari Ekstrak Tambelo
(Bactronophorus thoracitesi)” adalah karya saya dengan arahan dari komisi
pembimbing dan belum diajukan dalam bentuk apapun kepada perguruan tinggi
manapun. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan
maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan
dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir tesis ini
Bogor, September 2011
Juliana Leiwakabessy
NRP C351070051
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Ambon pada tanggal 24 November 1969 dari ayah
Melkias Leiwakabessy dan Ibu Maria Tapilatu. Penulis merupakan putri keenam
dari tujuh bersaudara.
Tahun 1989 penulis lulus dari SMU Negeri 2 Ambon dan pada tahun 1997
penulis lulus dari Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Jurusan Pengolahan
Hasil Perikanan Universitas Pattimura. Pada tahun 2007, penulis melanjutkan
pendidikan sekolah Pascasarjana (S2) di Teknologi Hasil Perairan IPB dengan
sponsor BPPS.
Penulis bekerja sebagai staf dosen di Jurusan Perikanan, Fakultas
Peternakan Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Negeri Papua sejak tahun
2003 hingga sekarang.
@ Hak Cipta milik Institut Pertanian Bogor Tahun 2011 Hak Cipta
dilindungi Undang-Undang
1. Dilarang mengutip sebagian atau seluruh karya tulisan ini tanpa
mencantumkan atau menyebut sumber.
a. Pengutipan hanya untuk kepentingan pendidikan, penelitian,
penulisan karya ilmiah, penyusunan laporan, penulisan kritik atau
tinjauan suatu masalah.
b. Pengutipan tidak merugikan kepentingan yang wajar IPB.
2. Dilarang mengumumkan atau memperbanyak sebagian atau seluruh karya
tulis dalam bentuk apapun tanpa izin IPB.
viii
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL .............................................................................................. xii
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... xiii
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xiv
1 PENDAHULUAN .......................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ......................................................................................... 1
1,2 Perumusan Masalah ................................................................................. 2
1.3 Tujuan Penelitian ..................................................................................... 3
1.4 Manfaat Penelitian ................................................................................... 3
1.5 Kerangka Pemikiran ................................................................................ 3
2 TINJAUAN PUSTAKA ................................................................................. 5
2.1 Tambelo .................................................................................................. 5
2.2 Potensi Tambelo Bagi Masyarakat ......................................................... 6
2.3 Komposisi Kimia .................................................................................... 7
2.3.1 Asam amino .................................................................................. 9
2.3.2 Asam lemak .................................................................................. 11
2.3.3 Mineral ......................................................................................... 13
2.4 Komponen Bioakif dari Moluska ........................................................... 16
2.5 Antioksidan dan Pengukurannya ............................................................ 17
3 METODOLOGI PENELITIAN ..................................................................... 21
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian ................................................................. 21
3.2 Bahan dan Alat ........................................................................................ 22
3.3 Prosedur Penelitian .................................................................................. 22
3.3.1 Penelitian tahap pertama ................................................................ 22
3.3.3.1 Rendemen (Hustiany 2005) ............................................... 23
3.3.3.2 Uji proksimat (AOAC 2005) ............................................. 23
3.3.3.3 Analisis asam amino (AOAC 1994) ................................... 26
3.3.3.4 Analisis asam lemak (AOAC 1984) ................................... 27
3.3.3.5 Analisis mineral ................................................................. 30
3.3.2 Penelitian tahap kedua ................................................................... 32
3.3.2.1 Ekstraksi bahan aktif ......................................................... 32
3.3.2.2 Uji fitokimia (Departemen Kesehatan RI 1995)................. 34
3.3.2.3 Uji aktivitas antioksidan (Yeh dan Cen 1995).................... 35
3.3.2.4 Fraksinasi senyawa antioksidan ......................................... 35
3.3.2.5 Identifikasi senyawa antioksidan (Willard et al. 1988) ..... 38
4 HASIL DAN PEMBAHASAN ...................................................................... 39
4.1 Penelitian Tahap Pertama ........................................................................ 39
4.1.1 Rendemen daging tambelo ............................................................ 39
4.1.2 Kandungan proksimat tambelo ..................................................... 39
4.1.3 Kandungan asam amino tambelo .................................................. 42
4.1.4 Kandungan asam lemak tambelo .................................................. 47
ix
4.1.5 Kandungan mineral tambelo ......................................................... 49
4.2 Penelitian Tahap Kedua .......................................................................... 52
4.2.1 Rendemen ekstrak tambelo ........................................................... 52
4.2.2 Kandungan fitokimia ekstrak tambelo .......................................... 52
4.2.3 Aktivitas antioksidan ekstrak tambelo .......................................... 54
4.2.4 Fraksi ekstrak terpilih ................................................................... 56
4.2.5 Kandungan fitokimia fraksi tambelo ............................................ 57
4.2.6 Aktivitas antioksidan fraksi tambelo ............................................ 58
4.2.7 Identifikasi senyawa fraksi terpilih ............................................... 60
5 SIMPULAN DAN SARAN ........................................................................... 63
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 64
LAMPIRAN ....................................................................................................... 71
x
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Beberapa fungsi asam amino dalam tubuh ................................................... 11
2 Rendemen daging tambelo ............................................................................ 39
3 Kandungan proksimat daging tambelo ......................................................... 39
4 Klasifikasi asam amino berdasarkan sifat fisik dan kimia tambelo .............. 43
5 Skor kimia asam amino esensial tambelo ..................................................... 47
6 Komposisi asam lemak ekstrak kasar tambelo .............................................. 48
7 Kandungan mineral yang terdapat pada tambelo ......................................... 50
8 Kandungan fitokimia ekstrak tambelo ......................................................... 52
9 Aktivitas antioksidan ekstrak tambelo .......................................................... 55
10 Kandungan fitokimia fraksi tambelo ............................................................ 61
xi
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Kerangka pemikiran .................................................................................... 3
2 Tambelo (Bactronophorus thoracites) .......................................................... 6
3 Masyarakat Kamoro mengkonsumsi tambelo metah (Muller 2004) ............. 7
4 Mekanisme reaksi oksidasi lemak (Gordon 1990) ...................................... 18
5 Reaksi pengujian aktivitas antioksidan dengan DPPH (Munifah 2007) ....... 20
6 Diagram alir penelitian komposisi kimia dan identifikasi senyawa
antioksidan dari ekstrak tambelo (Bactronophorus thoracites) ................... 21
7 Prosedur analisis asam amino menggunakan HPLC .................................... 28
8 Diagram alir ekstraksi bahan aktif tambelo (Ebada et al. 2008) .................. 33
9 Diagram alir fraksinasi dengan menggunakan KLT ..................................... 36
10 Diagram alir fraksinasi dengan kromatografi kolom .................................... 37
11 Histogram kandungan asam amino dari tambelo ......................................... 42
12 Nilai IC50 dari ekstrak, BHT, dan vitamin super ester C .............................. 55
13 Profil pemisahan senyawa dengan eluen kloroform : metanol (9 : 1) .......... 57
14 Aktivitas antioksidan ekstrak dan fraksi-fraksi tambelo .............................. 59
15 Mekanisme penghambatan radikal DPPH ........................................................ 63
16 Komponen fraksi teraktif dari tambelo dengan mass 352 m/z
yang terdeteksi sebagai kelompok senyawa terpenoid ..................................65
xii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Nilai rata-rata hasil analisis proksimat tambelo segar
dan kering .................................................................................................... 75
2 Nilai rata-rata asam amino tambelo ............................................................. 75
3 Kromatogram standar asam amino pada HPLC ........................................... 76
4 Kromatogram asam amino daging tambelo pada HPLC .............................. 77
5 Kromatogram standar asam lemak pada GC ............................................... 78
6 Kromatogram asam lemak daging tambelo pada GC ................................... 80
7 Perubahan warna yang mengindikasikan reaksi peredaman DPPH
dari ekstrak tambelo ...................................................................................... 81
8 Perhitungan persen inhibisi dan IC50 pada BHT, vitamin super ester C
dan ekstrak kasar tambelo ............................................................................. 82
9 Profil pola pemisahan senyawa .................................................................... 87
10 Rendamen fraksi tambelo ............................................................................. 88
11 Perhitungan persen inhibisi (IC50) hasil fraksinasi tambelo ......................... 88
12 Hasil identifikasi senyawa terpenoid tambelo pada LC-MS ........................ 89
ABSTRACT
JULIANA LEIWAKABESSY. Chemical Composition and Identification
of Antioxidant Compounds from the Extracts of Tambelo
(Bactronophorus thoracites). Supervised by LINAWATI HARDJITO and
SRI PURWANINGSIH
Tambelo (Teredinidae) is consumed freshly by local people in Papua without
removing the digestive tracts. This study aimed to investigate the chemical
composition of fresh tambelo, to conduct antioxidant and phytochemistry tests,
and to identify the compound of active antioxidant obtained from selected
fractionated extract. The research consisted of two stages. The first stage
involved the analyses of proximate, fatty acid, amino acid and mineral. The
second stage was the extraction of active materials by means of maceration. The
maceration result was evaporated and partitioned with a solvent of n-hexane and
ethyl acetate. Next, the extract underwent phytochemical and antioxidant tests
(20, 40. 60, and 80 ppm) with DPPH method applying BHT and vitamin super
ester C as the standard with a concentration of 4, 6, 8 and 10 ppm. Finally, the
identification of fresh antioxidant compound was carried out using LC-MS. The
composition of fresh tambelo divided into moisture 82,72±0,01%, protein
7,21±0,31%, fat 0,28±0,04%, ash 2,07±0,27%, and carbohydrate (by difference)
7,72±0,62%. The composition of dried tambelo was moisture 6,63±0,01%, protein
42,77±2,01%, fat 14,27±0,22%, ash 5,88±1,04%, carbohydrate (by difference)
30,45±2,83%. The protein of tambelo contained nine essential amino acids and
eight non essensial amino acids. It had seven saturated fatty acids and eight
unsaturated fatty acids. It contained calcium of 3532,46 ppm and phosfor of
2363,06 ppm. The highest antioxidant activity was found in the crude extract of
ethyl acetate with IC50 of 15 ppm. The highest antioxidant activity obtained by
column fractionation was the 9th
fraction with IC50 of 8.87 ppm. Phytochemical
test, described the crude extract of tambelo contained a group of alkaloid,
flavonoid, steroid and triterpenoid. MarinLit database (Blunt and Blunt 2008), 9th
fraction was similar to farnesic acid glyceride, sesquiterpenoic acid glyceride and
labdane diterpenoid.
Keywords: Activity antioxidants, Teredinidae, shipworm, chemical, compound
RINGKASAN
JULIANA LEIWAKABESSY. Komposisi Kimia dan Identifikasi Senyawa
Antioksidan dari Ekstrak Tambelo (Bactronophorus thoracites). Dibimbing oleh
LINAWATI HARDJITO dan SRI PURWANINGSIH.
Di Papua masyarakat mengkonsumsi tambelo dalam keadaan mentah tanpa
harus dibuang isi pencernaannya terlebih dahulu. Mereka percaya bahwa isi
pencernaan tambelo berkhasiat untuk mengobati beberapa penyakit diantaranya,
flu, malaria, sakit pinggang, rematik, meningkatkan air susu ibu, nafsu makan dan
vitalitas pria. Organisme ini mempunyai potensi ekonomis yang perlu diteliti
tentang keberadaan kandungan komponen bioaktif yang terdapat di dalamnya.
Tujuan penelitian ini adalah untuk menentukan komposisi kimia tambelo segar,
mendapatkan antioksidan dan fitokimia, serta mengidentifikasi senyawa aktif
antioksidan hasil fraksinasi ekstrak terpilih. Penelitian ini terdiri dari dua tahap.
Tahap pertama adalah analisis rendemen, uji proksimat, asam lemak, asam amino,
dan mineral dalam tambelo. Tahap kedua meliputi ekstraksi bahan aktif tambelo
dengan cara maserasi, pengujian aktivitas antioksidan, analisis fitokimia, dan
identifikasi senyawa antioksidan menggunakan LC-MS.
Tambelo segar (Bactronophorus thoraites) yang berasal dari perairan
Andai, Kabupaten Manokwari memiliki kadar air 82,72±0,01%, protein
7,21±0,31% lemak 0,28±0,04%, abu 2,07±0,27%, dan karbohidrat (by difference)
7,72±0,62%. Tambelo kering memiliki kadar air 6,63±0,01%, protein
42,77±2,01%, lemak 14,27±0,22%, abu 5,88±1,04%, dan karbohidrat
30,45±2,83%. Tambelo mengandung 9 asam amino esensial dan 8 asam amino
non esensial. Asam amino esensial yang terdapat pada tambelo, yaitu treonin
0,37%, valin 1,29%, metionin 0,56%, isoleusin 0,34%, leusin 1,25%, fenilalanin
1,19%, lisin 1,81%, histidin 1,01%, arginin 1,80% dari berat protein. Asam
amino non esensial pada tambelo, yaitu asam aspartat 2,85%, asam glutamat
3,55%, serin 1,26%, glisin 1,74%, alanin 1,63%, prolin 0,41%, tirosin 0,72%, dan
sistein 0,41% dari berat protein.
Tambelo memiliki 7 asam lemak jenuh (saturated fatty acid/SAFA) yang
terdiri atas miristat (C14:0) 5,80%, pentadekanoat (C15:0) 0,10%, palmitat
(C16:0) 13,69%, heptadekanoat (C17:0) 0,66%, stearat (C18:0) 3,04%, arakidat
(C20:0) 0,22%, heneikosanoat acid (C21:0) 0,80%, dan 8 asam lemak tidak jenuh
yang terdiri dari miristoleat (C14:1) 0,33%, palmitoleat (C16:1) 14,55%, Cis-10-
Heptadekanoat (C17:1) 0,24%, EPA (C20:4ω3) 0,13%, dan arakidonat (20:4ω6)
0,29% dari berat minyak. Kandungan mineral pada tambelo yaitu kalsium
3532,46 ppm, kalium 626,4 ppm, natrium 435,42 ppm, fosfor 2363,06 ppm, dan
besi 1373,45 ppm.
Hasil uji fitokimia menunjukkan ekstrak kasar tambelo mengandung
senyawa alkaloid, flavonoid, steroid dan triterpenoid (n-heksana, etil asetat, dan
metanol). Rendemen ekstrak kasar tambelo kering yang terbesar adalah ekstrak
kasar metanol 5,72%. Ekstrak kasar etil asetat memiliki aktivitas antioksidan
dengan IC50 sebesar 15 ppm. Aktivitas antioksidan yang tertinggi hasil fraksinasi
kolom terdapat pada fraksi 9 dengan IC50 sebesar 8,87 ppm. Berdasarkan database
MarinLit (Blunt and Blunt 2008),fraksi 9 menyerupai senyawa asam gliserida
farnesik, asam gliserida sesquiterpenoid, dan diterpenoid labdan.
1 PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Indonesia sebagai negara kepulauan memiliki garis pantai lebih kurang
81000 km dan wilayah laut yang sangat luas. Hal ini menjadikan perairan
Indonesia memiliki potensi kekayaan alam laut yang besar dengan tingkat
keragaman hayati yang tinggi, dimana di dalamnya terdapat berbagai jenis
organisme laut. Pemanfaatan organisme laut ini tidak hanya terbatas sebagai
bahan makanan, tapi juga sebagai sumber bahan alami yang berpotensi sebagai
bahan baku obat (Handayani et al. 2008).
Beberapa organisme laut mampu memproduksi senyawa kimia tersebut
untuk mempertahankan dirinya dari serangan predator. Hasil penelitian
menunjukkan banyak dari senyawa kimia tersebut berpotensi menghambat
pertumbuhan bakteri dan aktif menghambat pertumbuhan sel kanker serta
bioaktivitas lainnya (Edrada et al. 2000). Senyawa kimia dengan bioaktivitas ini
diduga dapat dimanfaatkan manusia sebagai bahan obat alami. Organisme laut
yang sudah dimanfaatkan sebagai bahan obat alami diantaranya spons, rumput
laut, cacing laut, teripang, dan moluska. Salah satu moluska yang telah
dimanfaatkan selain sebagai bahan pangan juga digunakan sebagai obat alami
adalah tambelo.
Tambelo (Teredinidae) merupakan salah satu jenis hewan penggerek kayu
yang hidup di dalam batang kayu bakau yang sudah lapuk dan membusuk yang
dikelompokkan ke dalam filum bivalvia, kelas Myoida, ordo Teredinidae.
Berdasarkan literatur, tambelo dikonsumsi oleh sebagian masyarakat Bangka
yang disebut temilok brubus (Syaputra et al. 2007). Di Papua, masyarakat
menyebutnya tambelo ”koo” (Hardinsyah et al. 2006). Di Philipina masyarakat
menyebutnya tamilok (Betia 2011). Tambelo dipercaya dapat menyembuhkan
penyakit, seperti di Brasil Utara ”turu” (Teredinidae) sangat populer digunakan
dalam pengobatan penyakit menular (Trindade-Silva et al. 2009). Di Papua,
suku Kamoro Kabupaten Mimika berpendapat bahwa tambelo berkhasiat
menyembuhkan penyakit, antara lain: sakit pinggang, rematik, batuk, flu,
malaria, serta meningkatkan air susu ibu, nafsu makan, dan vitalitas pria
(Hardinsyah et al. 2006).
2
Masyarakat Kamoro menggunakan tambelo diberbagai acara pesta adat
misalnya acara pesta perkawinan, proses mengantar mas kawin, acara
peminangan dan lain – lain. Pada saat pesta adat dilaksanakan, tambelo disajikan
sebagai makanan pembuka baik dalam keadaan mentah maupun
dimasak/digoreng, karena merupakan suatu kebiasaan yang sudah turun temurun
dilakukan sejak nenek moyang mereka (Hardinsyah et al. 2006).
Informasi yang dapat diperoleh dari penelitian terdahulu seperti
Trindade-Silva et al. (2009) menunjukkan bahwa bakteri yang diisolasi dari
insang tambelo Neo teredo reynei (Teredinidae) dapat menghambat bakteri Gram
positif dan Gram negatif (Sphingomonas, Stenotrophomonas maltophilia, Bacillus
cereus dan Staphylococcus sciuri). Griffin et al. (1994) melaporkan bahwa enzim
protease yang diisolasi dari bakteri yang terdapat dalam kelenjar dari tambelo
Psiloteredo healdi (Teredinidae) bersifat sebagai deterjen pembersih lantai,
piring maupun lensa kaca. Informasi mengenai aktivitas antioksidan pada
tambelo sampai saat ini belum ada.
Organisme ini mempunyai potensi ekonomis yang perlu diteliti tentang
keberadaan kandungan komponen bioaktif yang terdapat di dalamnya. Kenyataan
bahwa tambelo mampu memberikan efek menyehatkan bila dikonsumsi,
memberikan dugaan bahwa di dalam tubuh tambelo terdapat suatu komponen
yang bersifat antioksidan.
Antioksidan adalah suatu zat yang dapat menangkal pengaruh radikal
bebas yang bila masuk ke dalam tubuh dapat menyebabkan kerusakan. Kerusakan
yang diakibatkan oleh radikal bebas di antaranya penuaan dini, jantung koroner,
kanker (Muchtadi 2000).
1.2 Perumusan Masalah
Tambelo (Bactronophorus thoracites) termasuk di dalam famili
Teredinidae dan kelas bivalvia. Tambelo adalah salah satu obat tradisional yang
telah lama digunakan oleh masyarakat Papua, namun komposisi kimia dan
senyawa antioksidan dari tambelo belum banyak diketahui, sehingga perlu
dilakukan penelitian senyawa antioksidan dari bahan tambelo (Bactronophorus
thoracites).
3
1.3 Tujuan Penelitian
Penelitian bertujuan untuk memperoleh komposisi kimia tambelo segar
dan kering, mendapatkan aktivitas antioksidan dan fitokimia ekstrak tambelo,
serta mengidentifikasi fraksi aktif senyawa antioksidan.
1.4 Manfaat Penelitian
Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi kandungan
kimia dan bahan aktif yang dikandung dalam tubuh tambelo sebagai senyawa
antioksidan sehingga dapat dimanfaatkan dalam bidang pangan fungsional atau
nutraceutical.
1.5 Kerangka Pemikiran
Berdasarkan latar belakang, perumusan masalah dan tujuan penelitian
maka kerangka pemikiran yang disajikan pada Gambar 1.
Gambar 1 Kerangka pemikiran.
Dikonsumsi oleh masyarakat Papua
Direbus dimasak Makan mentah
Obat tradisional Sakit pinggang/rematik, batuk, flu malaria,
meningkatkan air susu ibu , nafsu makan, dan
vitalis pria.
Pesta Adat
Tambelo (Bactronophorus thoracites)
Penelitian yg dilakukan oleh Hardinsyah et al. 2006
Analisis kimia :
-. analisis proksimat
-. analisis asam amino
-. analisis asam lemak
-. analisis mineral
Ekstraksi tambelo
- Uji fitokimia
- Uji aktivitas antioksidan
- Fraksinasi ekstrak terpilih
- Uji antioksidan hasil fraksinasi
Identifikasi senyawa dengan LC-MS
Penelitian yg dilakukan oleh Juliana
4
2 TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tambelo
Tambelo atau shipworm adalah hewan jenis moluska yang hidup di dalam
pohon bakau yang telah membusuk. Keberadaan dan sifat tambelo sangat
dipengaruhi oleh tipe habitat. Kepadatan tambelo tertinggi pada bulan Januari
sampai April dan kepadatannya rendah pada bulan Juli (Filho et al. 2008).
Tambelo dapat bertahan hidup antara satu hingga beberapa tahun, tergantung pada
jenisnya. Tambelo berkembang normal di air dengan salinitas antara 10-30 ppm
dan lebih banyak dijumpai di daerah tropis (Muslich et al. 1988).
Ciri-ciri fisik tambelo adalah tubuhnya lunak, memanjang seperti cacing,
kepalanya berbentuk bulan sabit yang dilengkapi dengan parut dan kikir yang
berguna untuk membuat lubang. Lubang pada kayu biasanya dibuat tegak lurus
terhadap serat kayu, kemudian membelok sejajar dengan arah serat kayu. Dinding
lubang pada kayu tersebut dilapisi dengan suatu subtansi yang mengandung kapur.
Terbentuknya lapisan yang mengandung kapur dihasilkan dari mantel shipworm
(Ginuk 1987). Tambelo mampu menggali lubang sepanjang 18 cm hingga
2 m (Waterbury et al. 1983). Panjang tubuh tambelo berkisar antara 30 hingga 100
cm dengan diameter antara 1 sampai 1,5 cm. Apabila populasinya terlalu tinggi,
perkembangan tubuhnya akan terbatas, sehingga panjangnya akan beberapa
sentimeter saja dan diameternya kurang lebih dari 0,5 cm (Muslich et al. 1988).
Bentuk morfologi tambelo disajikan pada Gambar 2. Klasifikasi tambelo (Turner
1971) adalah sebagai berikut :
Filum : Mollusca
kelas : Bivalvia
Ordo : Myoida
Family : Teredinidae
Genus : Bactronophorus
Spesies : Bactronophorus thoracites
6
Gambar 2 Tambelo (Bactronophorus thoracites)
Hewan ini memanfaatkan serbuk kayu makanan. Perut tambelo terdiri
dari dua bagian usus. Bagian pertama adalah usus besar yang berfungsi untuk
menampung serbuk kayu. Bagian kedua adalah kelenjar pencernaan yang
difungsikan untuk mencerna partikel-partikel kayu (Waterbury et al. 1983).
Identifikasi tambelo didasarkan kepada bentuk cangkangnya yang berwarna putih
(panjang ± 1 cm) digunakan untuk menutup mulut terowongan. Pallet yang
terletak pada bagian tubuh depan yang digunakan untuk memarut kayu.
Menurut Mayabubun (2003), ada 4 spesies mangrove yang digunakan
sebagai habitat dari tambelo yaitu 2 spesies dari genus Rhizophora, 1 spesies
genus Sonneratia dan 1 spesies termasuk dalam genus Bruguiera. Tambelo yang
tumbuh di mangrove Sonneratia sp dan Bruguiera sp. tidak dikonsumsi oleh
masyarakat suku Kamoro, sebab rasanya pahit dan tidak enak untuk dimakan.
2.2 Potensi Tambelo Bagi Masyarakat
Tambelo yang dimakan mentah dipercaya oleh masyarakat Papua lebih
berkhasiat daripada direbus atau digoreng. Cara masyarakat Papua
mengkonsumsikan tambelo yaitu setelah tambelo diambil dari pohon bakau yang
sudah membusuk, cangkang dan giginya dilepas dan langsung dimakan
tanpa dibersihkan isi pencernaannya terlebih dahulu, seperti disajikan pada
Gambar 3. Masyarakat Papua percaya bahwa sisa pencernaan dalam perut
tambelo sangat berkhasiat untuk mengobati beberapa penyakit di antaranya sakit
pinggang, batuk, rematik flu, malaria, meningkatkan air susu ibu, nafsu makan,
dan kejantanan bagi kaum lelaki. Pada masyarakat Kamoro, tambelo dijadikan
sebagai makanan utama di berbagai acara pesta adat seperti pesta budaya Karapao
Suku Kamoro.
7
Gambar 3 Masyarakat Kamoro mengkonsumsi tambelo mentah (Sumber: Muller 2004)
2.3 Komposisi Kimia
Zat gizi dibagi menjadi 5 kelas utama, yaitu protein, lemak, karbohidrat,
mineral, dan air (Harper et al. 1988). Protein berfungsi sebagai zat pembangun
dan pengatur. Protein adalah sumber asam-asam amino yang mengandung unsur-
unsur C,H,O, dan N. Fungsi protein bagi tubuh adalah untuk membentuk jaringan
baru dan mempertahankan jaringan yang telah ada, berperan sebagai enzim, alat
pengangkut dan alat penyimpanan, pengatur pergerakan, penunjang mekanis,
pertahanan tubuh atau imunisasi, media perambatan impuls syaraf, dan
pengendalian pertumbuhan (Winarno 1992). Protein memiliki peranan penting
dalam pembentukkan biomolekul daripada sebagai sumber energi. Protein akan
dipakai sebagai sumber energi, bila organisme sedang kekurangan energi.
Kandungan energi protein rata-rata 4 kkal/g atau setara dengan kandungan energi
karbohidrat (Sudarmadji et al. 1989).
Kekurangan protein pada anak saat lahir (kwashiorkor), defisiensi energi
protein (marasmus), atau gabungan keduanya dapat mengakibatkan kegagalan
pertumbuhan ringan sampai sindrom klinis berat yang spesifik. Keadaan
tersebut tidak hanya dipengaruhi oleh asupan makanan, tetapi juga oleh keadaan
lingkungan, seperti pemukiman, sanitasi dan higiene, serta infeksi berulang yang
pernah dialami tubuh (Effendi 2002).
8
Pembatasan konsumsi protein pada penderita hati dilakukan apabila pasien
mengalami intoleransi protein. Kondisi ini biasanya ditemukan pada pasien
koma hepatik. Konsumsi sumber protein selain daging, seperti sayuran
dan produk susu, sangat dianjurkan. Sayuran dan produk susu mengandung
metionin, dan asam amino aromatik (AAA) yang lebih rendah serta asam amino
rantai cabang (BCAA) yang lebih tinggi dibandingkan dengan daging
(Nelson et al. 1994).
Karbohidrat merupakan sumber kalori utama bagi hampir seluruh
penduduk dunia, khususnya bagi penduduk negara yang sedang berkembang.
Karbohidrat mempunyai peranan penting dalam menentukan karakteristik bahan
makanan, misalnya rasa, warna, tekstur. Dalam tubuh, karbohidrat berguna
untuk mencegah timbulnya ketosisi, pemecahan protein tubuh yang berlebihan,
kehilangan mineral, dan beguna untuk membantu metabolisme lemak dan protein
(Winarno 2008).
Karbohidrat merupakan sumber kalori yang murah, selain itu beberapa
golongan karbohidrat menghasilkan serat (dietary fiber) yang berguna bagi
pencernaan. Serat pangan atau dietary fiber adalah karbohidrat yang tidak dapat
dihidrolisis (dicerna) oleh enzim pencernaan manusia, dan akan sampai di usus
besar (kolon) dalam keadaan utuh sehigga akan menjadi subtrat untuk fermentasi
bakteri yang hidup di kolon.
Serat pangan dapat diklasifikasikan berdasarkan struktur molekul dan
kelarutannya. Kebanyakan jenis karbohidrat yang sampai ke kolon tanpa
terhidrolisis, meliputi polisakarida yang bukan pati (non-starch
polysacharides/NSP), pati yang resisten (resisten starch/RS), dan karbohidrat
rantai pendek (short chain carbohydrates/SC). Serat pangan yang larut sangat
mudah difermentasikan dan mempengaruhi metabolisme karbohidrat serta lipida,
sedangkan serat pangan yang tidak larut akan memperbesar volume feses dan
akan mengurangi waktu transitnya (bersifat laksatif lemah). Monomer dari serat
pangan adalah gula netral dan gula asam. Gula yang membentuk serat pangan
adalah glukosa, galaktosa, xylosa, mannose, arabinosa, rhamnosa, dan gula asam
seperti mannurinat, galakturonat, glukoronat, serta 4-o-metil-glukoronat
(Muir 1999).
9
Minyak atau lemak berfungsi sebagai sumber energi dan pelarut vitamin
A,D,E, dan K serta merupakan sumber asam-asam lemak tak jenuh yang esensial,
yaitu linoleat dan linolenat (Sudarmadji et al. 1989). Perubahan-perubahan
kimia atau penguraian lemak dan minyak dapat mempengaruhi bau dan rasa
suatu bahan makanan, baik yang menguntungkan maupun tidak. Pada umumnya
penguraian lemak dan minyak menghasilkan zat-zat yang tidak dapat dimakan.
Kerusakan lemak dan minyak menurunkan nilai gizi serta menyebabkan
penyimpanan rasa dan bau yang bersangkutan.
Mineral digolongkan sebagai zat gizi anorganik atau disebut sebagai abu
dalam pangan karena ternyata jika bahan pangan dibakar, unsur organik akan
menghilang dan bahan anorganik (abu) yang tersisa terdiri dari unsur-unsur
mineral (Harper et al. 1988). Abu adalah zat anorganik sisa hasil pembakaran
suatu bahan organik. Kandungan abu dan komponennya tergantung pada macam
bahan dan cara pengabuannya. Kadar abu ada hubungannya dengan mineral
suatu bahan. Komponen mineral dalam suatu bahan sangat bervariasi baik
macam dan jumlahnya (Sudarmadji et al. 1989).
2.3.1 Asam amino
Protein merupakan molekul yang sangat besar, terbentuk dari asam amino
yang terikat bersama. Susunan kimia asam amino bervariasi, tetapi terdapat dua
hal yang sama, yaitu setiap asam mempunyai sedikitnya satu kelompok amino dan
satu kelompok karboksil (Sudarmadji et al. 1989).
Protein yang masuk dalam tubuh akan diubah menjadi asam amino. Asam
amino tersebut akan diabsorpsi melalui dinding usus, kemudian dilanjutkan
sampai ke dalam pembuluh darah. Proses absorpsi asam diamino lebih lambat
dari pada asam amino netral (Poedjadi dan Supriyanti 2006). Tingkat penyerapan
relatif masing-masing asam amino adalah asam amino rantai cabang (valin, leusin,
isoleusin) dan metionin lebih mudah diserap dari asam amino esensial lainnya.
Asam amino esensial lebih mudah diserap dari asam amino non esensial. Asam
amino glutamat dan aspartat paling lambat terserap (Linder 2006).
Asam amino merupakan komponen utama penyusunan protein, dan dibagi
dalam dua kelompok, yaitu asam amino esensial dan nonesensial. Asam amino
esensial tidak dapat diproduksi dalam tubuh sehingga sering harus ditambahkan
10
dalam bentuk makanan, sedangkan asam amino nonesensial dapat diproduksi
dalam tubuh. Asam amino umumnya berbentuk serbuk dan mudah larut dalam
air, namun tidak larut dalam pelarut organik nonpolar (Sitompul 2004). Asam
amino esensial merupakan pembangun protein tubuh yang harus berasal dari
makanan atau tidak dapat dibentuk di dalam tubuh. Kelengkapan komposisi asam
amino esensial merupakan parameter penting penciri kualitas protein
(Astawan 2007).
Asam amino esensial yang dibutuhkan oleh tubuh manusia ialah histidin,
isoleusin, leusin, lisin, metionin, arginin, fenilalanin, treonin, triptofan, valin.
Kebutuhan asam amino esensial bagi anak-anak relatif besar daripada orang
dewasa (Poedjiadi dan Supriyanti 2006). Kebutuhan metionin dapat disubtitusi
dengan tirosin atau gabungan sistin dan fenilalanin (Linder 2006). Beberapa
fungsi asam amino dalam tubuh disajikan pada Tabel 1.
Asam amino merupakan unit pembangun protein, di dalam tubuh, asam
amino atau protein berfungsi sebagai zat pembangun, yaitu menyediakan bahan-
bahan yang sangat berperan dalam proses pertumbuhan dan pemeliharaan jaringan
tubuh. Protein bekerja sebagai pengatur semua proses yang berlangsung di dalam
tubuh dan sebagai sumber energi jika karbohidrat dan lemak tidak dapat
mencukupi keperluan tubuh. Selain fungsi tersebut hampir semua asam amino
memiliki fungsi khusus, contohnya tirosin merupakan prekursor yang membentuk
pigmen kulit dan rambut. Arginin terlibat dalam sintesis ureum dalam hati.
Glutamin dan asparagin merupakan simpanan asam amino dalam tubuh. Metionin
dan serin merupakan prekursor sintesis dan histidin yang diperlukan untuk sintesis
histamin
11
Tabel 1 Beberapa fungsi asam amino dalam tubuh
Jenis asam amino Peranan
Triptofan Sebagai pemula vitamin niasin, dan serotonin-
metionin donor gugus metil untuk sintesis beberapa
senyawa seperti kolin dan kreatin
Fenilalanin Sebagai pemula tirosin dan keduanya membentuk
tiroksin dan epinefrin, arginin, ornitin, sitrulin yang
ikut berperan dalam sinstesis urea dalam hati serta
berfungsi sebagai prekursor tirosin katekolamin,
melanin dan tiroksin
Glisin Berperan pada sintesis profirin dari hemoglobin dan
juga merupakan konstituen asam glikolat
Histidin Bagi manusia, histidin merupakan asam amino
esesnsial bagi anak-anak.
Aspartat Berfungsi untuk biosintesis urea, prekursor
glikogenik dan pirimidin
Glutamat Sebagai produk antara dalam reaksi interkonversi
asam amino, prekusor prolin, ornitin, arginin,
poliamin, neurotransmiter α-aminobutirat (GABA),
sumber NH3
Glisin Sebagai prekusor biosintesis purin dan
neurotransmiteri
Lisin Berfungsi untuk crosslinking protein (seperti dalam
kolagen dan elastin) biosintesis karnitin
Metionin merupakan donor grup metil untuk banyak proses
sintetik
Triptofan Sebagai prekusor serotonin dan nikotinamid (vitamin
B)
Tirosin Sebagai prekusor tirosin katekolamin, melanin dan
tiroksin. Sumber: Poedjiadi dan Supriyanti (2006).
2.3.2 Asam lemak
Asam lemak merupakan komponen unit pembangunan yang sifatnya khas
untuk setiap lipid. Asam lemak adalah asam organik berantai panjang yang
mempunyai 4-24atom. Asam lemak memiliki gugus karboksil tunggal dan ujung
hidrokarbon nonpolar yang panjang, sehingga hampir semua lipid bersifat tidak
larut di dalam air dan tampak berminyak atau berlemak. Asam lemak tidak
terdapat secara bebas atau berbentuk tunggal di dalam sel atau jaringan, tetapi
terdapat dalam bentuk terikat secara kovalen pada berbagai kelas lipid berbeda,
yang dapat dibebaskan dari ikatan tersebut melalui hidrolisis kimia atau
enzimatik.
12
Asam lemak dibedakan menurut jumlah karbon yang dikandungnya, yaitu
asam lemak rantai pendek (6 atom karbon atau kurang), rantai sedang (8 hingga
12 karbon), rantai panjang (14-18 karbon), dan rantai sangat panjang (20 atom
karbon atau lebih). Semua lemak bahan makanan hewani dan sebagian besar
minyak nabati mengandung asam lemak rantai panjang, asam lemak rantai sangat
panjang terdapat dalam minyak ikan. Titik cair asam lemak meningkat dengan
bertambah panjangnya rantai karbon.
Asam lemak yang terdiri dari rantai karbon yang mengikat semua hidrogen
yang dapat diikatnya dinamakan asam lemak jenuh. Asam lemak yang
mengandung satu atau lebih ikatan rangkap di mana sebetulnya dapat diikat
tambahan atom hidrogen dinamakan asam lemak tidak jenuh. Asam lemak tidak
jenuh tunggal mengandung satu ikatan rangkap pada rantai karbonnya
(monounsaturates fatty acid=MUFA), sedangkan asam lemak tidak jenuh ganda
mengandung dua atau lebih ikatan rangkap (polyunsaturated fatty acid=PUFA).
Lemak yang tersusun oleh asam lemak tidak jenuh akan bersifat cair pada suhu
kamar, sedangkan yang tersusun oleh lemak jenuh berbentuk padat
(Almatsier 2009).
Asam lemak tak jenuh tunggal (MUFA) tergolong dalam asam lemak rantai
panjang, yang kebanyakan ditemukan dalam minyak zaitun, minyak kedelai,
minyak kacang tanah, minyak biji kapas, dan canola. Secara umum, lemak tak
jenuh tunggal memiliki efek yang mengutungkan terhadap kolesterol dalam darah,
terutama bila digunakan sebagai pengganti asam lemak jenuh. Dalam hal
penurunan kadar kolesterol darah, asam lemak tak jenuh (MUFA) lebih efektif
bila dibandingkan dengan asam lemak tak jenuh jamak (PUFA) sehingga
pemanfaatan asam oleat untuk formulasi makanan olahan menjadi populer.
Salah satu jenis MUFA adalah omega-9 (oleat) yang memilki sifat lebih
stabil dan lebih perannya dibandingkan PUFA. Polysaturated fatty acid (PUFA)
dapat menurunkan low density lipoprotein (LDL) dan juga menurunkan high
density lipoprotein (HDL). Sementara itu, MUFA mampu menurunkan LDL dan
meningkatkan HDL. Penelitian yang dilakukan Mensink (1987) menyatakan
bahwa MUFA dapat menurunkan LDL,dan meningkatkan K-HDL yang lebih
besar dibandingkan dengan omega-3 dan omega-6.
13
Polyunsaturated fatty acid (PUFA) adalah asam lemak yang mengandung
dua atau lebih ikatan rangkap, bersifat cair pada suhu kamar, bahkan tetap cair
pada suhu dingin karena titik lelehnya lebih rendah dibandingkan dengan MUFA.
Asam lemak ini banyak ditemukan pada ikan dan bahan nabati, seperti bunga
matahari, jagung, dan biji matahari. Sumber alami PUFA yang penting bagi
kesehatan adalah kacang-kacangan dan biji-bijian. Contoh PUFA adalah asam
linoleat (omega-6), dan omega-3, tergolong dalam asam lemak rantai panjang
(LCFA) yang banyak ditemukan pada minyak nabati atau sayur dan minyak ikan.
Manfaat PUFA (asam lemak arakhidonat, linoleat, dan linolenat) antara
lain berperan dalam transpor dan metabolisme lemak, fungsi imun,
mempertahankan fungsi dan integritas membran sel. Asam lemak omega-3 dapat
membersihkan plasma dari lipoprotein kilomikron serta menurunkan produksi
trigliserida dan poliprotein β (beta) di dalam hati. Selain peranannya dalam
pencegahan penyakit jantung koroner dan artritis, asam lemak omega-3 penting
untuk berfungsinya otak dan retina dengan baik.
Asam lemak esensial adalah asam lemak yang dibutuhkan oleh tubuh
untuk pertumbuhan dan fungsi normal semua jaringan, sedangkan tubuh tidak
dapat mensintesisnya. Kelompok asam lemak yang termasuk dalam jenis ini
adalah asam alfa linoleat (omega-6) dan asam alfa linolenat (omega-3). Turunan
asam lemak arakidonat dari asam linoleat, eikosapentaenoat (EPA), dan
dokosaheksaenoat (DHA) dari asam linolenat. Asam lemak esensial merupakan
prekursor sekelompok senyawa eikosanoid yang mirip hormon, yaitu
prostaglandin, prostasiklin, tromboksan, dan leukotien. Senyawa-senyawa ini
mengatur tekanan darah, denyut jantung, fungsi kekebalan, rangsangan sistem
saraf, kontraksi otot serta penyembuhan luka (Achadi 2010).
2.3.3 Mineral
Mineral termasuk ke dalam golongan nutrisi mikro dalam tubuh yang
diperlukan dalam jumlah kecil, tetapi ketersediaan mineral harus tercukupi setiap
harinya. Berdasarkan jumlahnya dalam tubuh manusia dibedakan menjadi dua,
yaitu makromineral dan mikromineral. Mineral yang terdapat dalam tubuh dalam
jumlah yang cukup banyak, sedikitnya 0,05% dari bobot tubuh dikenal sebagai
makromineral. Makromineral terdiri dari kalsium, klorin, magnesium, fosfor,
14
kalium, natrium, dan belerang. Mineral yang diketahui dibutuhkan oleh tubuh dan
terdapat dalam jumlah yang lebih sedikit dari 0,05% dari bobot tubuh disebut
sebagai mikromineral, yang terdiri dari kobalt, tembaga, flourin, besi, iodin,
mangan, dan seng (Harper et al. 1988; Winarno 1992).
Secara umum fungsi mineral bagi tubuh adalah sebagai berikut:
1) mempertahankan keseimbangan asam – basa dalam tubuh, 2) sebagai katalis
untuk reaksi biologis, 3) komponen senyawa tubuh yang esensial adalah hormon,
enzim, hemoglobin, asam lambung, 4) memelihara keseimbangan air dalam tubuh,
5) transmisi impuls saraf, 6) mengatur kontraktilitas otot, dan 7). pertumbuhan
jaringan tubuh.
a) Kalsium (Ca)
Kalsium diperlukan untuk pembentukan dan perkembangan tulang dan
gigi. Kalsium merupakan salah satu faktor yang terpenting dalam pembekuan
darah. Kalsium diperlukan untuk memelihara otot dan syaraf dalam tubuh agar
berfungsi normal dan membantu penyerapan vitamin B12 (Harper et al. 1988;
Gaman dan Sherrington 1992).
Kalsium berfungsi untuk mengatur transpor ion-ion menembus membran
seluler dan diperlukan untuk aktivitas aktomiosin dan miosin ATP-ase,
lipase, kolinesterase, dan suksinildehidrogenase. Kalsium juga berperan dalam
pembentukan tulang dan gigi, serta mengaktifkan reaksi enzim dan sekresi
hormon termasuk insulin oleh pankreas. Kalsium bersama dengan natrium,
kalium, dan magnesium berperan dalam transmisi impuls-impuls serta kontraksi
dan relaksasi otot (Muchtadi 1989).
b) Kalium (K)
Hampir seluruh kegiatan di dalam tubuh dipengaruhi oleh perubahan
kosentrasi kalium di dalam plasma. Kalium adalah basa utama yang terdapat di
dalam jaringan dan sel-sel darah yang memegang peranan penting dalam
pengaturan keseimbangan asam basa tubuh. Kalium juga berperan dalam
penyampaian impuls-impuls saraf ke serat-serat otot dan juga dalam kemampuan
otot untuk berkontraksi (Fregly 1988). Sebanyak 98% kalium dalam tubuh
berada di dalam intraseluler. Sekitar 270 mg kalium berada di dalam sel yang
15
merupakan cairan kation yang mendominasi di dalam intrseluler
(Groff dan Gropper 1990).
c) Fosfor (P)
Fosfor dan kalsium secara bersama-sama adalah penyusun tulang dan
gigi yang sangat penting. Fosfor juga terdapat dalam semua sel hidup dan
diperlukan untuk pelepasan energi. Fosfor terdapat dalam kebanyakan makanan
dan defisiensi fosfor dalam susunan makanan belum pernah terjadi
(Gaman dan Sherrington 1992).
d) Besi (Fe)
Sebagian besar besi terdapat dalam hemoglobin (pigmen darah merah yang
terdapat dalam sel darah merah). Bila sel-sel darah merah melepaskan besi, besi
tidak hilang dari tubuh, tetapi digunakan lagi untuk membuat sel-sel darah merah
yang baru, di dalam sumsum tulang. Beberapa besi juga disimpan di dalam
tubuh seperti dalam sumsum tulang, hati, dan limpa sebagai senyawa
kompleks dengan protein yang dikenal sebagai feritin (Harper et al. 1988;
Gaman dan Sherrington 1992).
e) Seng (Zn)
Seng memegang peranan esensial dalam banyak fungsi tubuh, sebagai
bagian dari enzim atau sebagai kofaktor pada kegiatan lebih dari dua ratus enzim.
Enzim superoksida dismutase di dalam sitosol semua sel, terutama eritrosit diduga
berperan dalam memusnahkan anion superoksida yang merusak. Seng juga
berperan dalam pengembangan fungsi reproduksi laki-laki dan pembentukkan
sperma serta berperan dalam fungsi kekebalan, yaitu dalam fungsi sel T dan dalam
pembentukan antibodi oleh sel B (Almatsier 2009).
f) Tembaga (Cu)
Fungsi tembaga dalam tubuh antara lain mencegah terjadinya anemia,
dengan cara membantu penyerapan Fe, menstimulir sintesis fraksi heme atau
globin, serta melepaskan Fe simpanan dari ferritin dan hati. Diperlukan untuk
sintesis fosfolipida untuk pembentukan myelin yang menyelimuti serat syaraf.
Sebagai bagian dari enzim-enzim pernafasan misalnya sitokrom oksidase, dan
untuk proses pelepasan energi. Bersama vitamin C dapat mempertahankan
aktivitas enzim-enzim yang tersangkut dalam sintesis elastin (protein dinding
16
aorta) dan kolagen, sebagai bagian dari enzim tirosinase yang mengkatalisis
konversi tirosin menjadi melanin.
Tembaga bersifat toksik bila terdapat sebagai ion bebas. Konsumsi garam
Cu dalam jumlah sepuluh kali lebih besar daripada yang terdapat dalam bahan
pangan secara normal, dapat menyebabkan pusing dan muntah (Muchtadi 2009).
g) Selenium (Se)
Selenium adalah mineral penting yang sangat dibutuhkan oleh tubuh
sebagai antioksidan untuk meredam aktivitas radikal bebas. Selenium tidak
diproduksi oleh tubuh, tetapi diperoleh dari konsumsi makanan sehari-hari.
Orang dewasa dianjurkan untuk mengkonsumsi sebanyak 55 µg per berat
badan selenium setiap hari, namun perempuan dewasa yang sedang hamil
dianjurkan meningkatkan asupan selenium menjadi 60 µg per berat badan setiap
hari. Kebutuhan tersebut akan meningkat saat seorang ibu harus menyusui, yaitu
70 µg per berat badan setiap hari.
Tubuh setiap orang memiliki kemampuan untuk melawan radikal bebas
yang bisa menghancurkan sel dan menimbulkan berbagai penyakit kronis, seperti
kanker, penyakit jantung, dan penuaan dini. Di dalam tubuh, selenium bekerja
sama dengan vitamin E sebagai zat antioksidan untuk memperlambat oksidasi
asam lemak tak jenuh. Selenium diketahui memperbaiki sistem imunitas
(kekebalan tubuh) dan fungsi kelenjar tiroid. Hasil penelitian belakangan ini yang
memastikan bahwa selenium dapat mencegah kanker (termasuk kanker kulit
akibat paparan matahari), menambah pamornya sebagai mineral yang bermanfaat
besar untuk meningkatkan fungsi kekebalan tubuh manusia. Bersama vitamin E,
selenium berfungsi mempertahankan elastisitas jaringan dan bila kadar selenium
berkurang maka tubuh akan mengalami penuaan dini, yaitu kondisi sel yang rusak
sebelum waktunya. Sumber utama selenium adalah tumbuh-tumbuhan
dan makanan laut (Conectique 2011).
2.4 Komponen Bioaktif dari Moluska
Invertebrata laut merupakan produsen senyawa bioaktif terbesar di antara
biota lainnya. Beberapa metabolit sekunder yang diproduksi oleh invertebrata laut
dan mikroorganisme simbion, mempunyai prospek sebagai zat aktif dalam obat
17
untuk pengobatan penyakit, seperti infeksi, neurologi (parkinson, alzheimer’s),
penyakit jantung, immunologi, anti-inflammatory, antivirus, dan antikanker.
Moluska merupakan salah satu dari invertebrata laut yang diketahui
menghasilkan metabolit sekunder dan sekaligus mempunyai peranan penting
dalam ekologinya sehingga menjadi target bagi sumber senyawa bioaktif yang
bermanfaat dalam dunia farmasi bahari. Penelitian mengenai metabolit sekunder
dari moluska telah banyak dilakukan. Hamman et al. (1996) melaporkan telah
mengisolasi kahalaide F dari kerang jenis Elysia rubefescens yang memiliki
aktivitas sebagai antikanker usus dan prostat. Hasil penelitian Salamah et al.
(2008) diketahui bahwa ekstrak metanol kijing Taiwan yang berpotensi sebagai
antioksidan, yaitu nilai IC50 sebesar 201,52 ppm. Senyawa aktif yang terkandung
dalam ekstrak kijing Taiwan adalah kelompok alkaloid dan flavonoid.
2.5 Antioksidan dan Metode Pengukurannya
Senyawa antioksidan secara umum didefinisikan oleh Schuler (1990)
sebagai suatu senyawa kimia yang dapat menunda, memperlambat atau mencegah
terjadinya proses oksidasi. Proses oksidasi tersebut biasanya terjadi dalam produk
terutama yang berlemak dengan kandungan asam lemak tidak jenuh sehingga
dapat menyebabkan kerusakan produk atau ketengikan.
Mekanisme oksidasi asam lemak tidak jenuh menurut Hamilton (1983) dan
Gordon (1990) terdiri dari 3 tahap, yaitu : a) inisiasi, b) propagasi dan c)
terminasi. Pada tahap inisiasi terjadi pembentukan radikal bebas (R●) akibat
reaksi antara asam lemak (RH) dengan beberapa katalisator, misalnya oksigen,
panas, ion logam, dan cahaya. Tahap propagasi terjadi akibat reaksi antara radikal
bebas (R●) yang terbentuk pada tahap inisiasi dengan oksigen menghasilkan
radikal peroksida (ROO●). Radikal peroksida yang terbentuk akan mengikat ion
hidrogen dari molekul lemak yang lain membentuk hidroperoksida (ROOH) dan
radikal lemak lain (R1), selanjutnya tahap terakhir adalah tahap terminasi ditandai
dengan terbentuknya produk-produk non radikal seperti aldehida, keton, alkohol
dan asam-asam dengan karakteristik dan cita rasa tengik (Winarno 1984).
Ranney (1979) mengklasifikasikan antioksidan atas tiga golongan
berdasarkan prinsip kerjanya dalam mencegah terjadinya proses oksidasi.
Pertama adalah antioksidan yang mempunyai gugus fenol dan amina aromatik
18
seperti butylated hydroxyanisole (BHA), butylated hydroxytoluene (BHT), metilen
bisfenol dan difenilamin. Antioksidan-antioksidan tersebut bekerja dengan cara
berinteraksi dengan radikal bebas yang terdapat di dalam sistem dan membentuk
produk subtrat non radikal dan suatu radikal antioksidan. Jika radikal antioksidan
yang dihasilkan cukup stabil mencegah reaksi berikutnya, maka radikal
antioksidan tersebut tidak akan berperan sebagai inisiator dari berikutnya. Kedua
produk yang dihasilkan pada kenyataannya mungkin bereaksi dengan radikal
bebas kedua dalam sistem
Mekanisme reaksi oksidasi lemak dapat dilihat sebagai berikut :
Tahap inisiasi : ROOH ROO● + H
●
ROOH RO● + OH
2ROOH RO●
+ OH
Tahap propagasi : R● + O2 ROO
●
ROO● + R
1 H R
1● + ROOH
Tahap terminasi : ROO● + R
1 OO
● ROOH
1 + O2
R● + RO
● ROR
1
Gambar 4 Mekanisme reaksi oksidasi lemak (Gordon 1990).
Kedua adalah antioksidan yang berfungsi dengan cara menghilangkan
molekul-molekul hidroperoksida dari sistem, tetapi tanpa melibatkan radikal
bebas. Contoh antioksidan ini adalah dilauril tiodipropionat (DLTP). Molekul ini
mengandung atom sulfur teroksidasi yang mampu bereaksi dengan molekul
hidroperoksida berikutnya. Ketiga adalah antioksidan yang dapat menginaktivasi
logam yang bisa mempercepat terjadinya oksidasi. Penggolongan ketiga ini sama
dengan antioksidan sekunder menurut Winarno (1984) dan Gordon (1990).
Jenis penggolongan antioksidan yang lain berdasarkan sumber
diperolehnya senyawa tersebut. Penggolongan ini terdiri atas dua yaitu
antioksidan sintetik dan antioksidan alami. Beberapa antioksidan sintetik yang
sering digunakan dalam industri pangan antara lain butylated hydroxytoluene
(BHT), butylated hydroxyanisole (BHA), Propil galat, tertiarybutyl hydroquinon
(TBHQ) dan tokoferol (Buck 1991). Antioksidan sintetik sangat efektif dalam
menghambat reaksi oksidasi lemak akan, tetapi penggunaan antioksidan sintetik
banyak menimbulkan kekuatiran akan efek sampingnya karena telah banyak
19
penelitian tentang efek patologis yang ditimbulkannya. Antioksidan alami
diperoleh dari hasil ekstrak bahan alami. Antioksidan alami dalam bahan pangan
diperoleh dari: a) antioksidan berupa senyawa endogen yang terdiri dari satu atau
lebih senyawa yang terdapat dalam bahan pangan, b) antioksidan yang terbentuk
akibat reaksi selama pengolahan, c) antioksidan yang merupakan senyawa
eksogen yaitu dengan penambahan antioksidan yang diisolasi dari sumber alami
(Pratt 1992). Adapun antioksidan yang terdapat di dalam bahan alami meliputi
golongan senyawa turunan fenolat, turunan senyawa hidroksinat, kumarin,
tokoferol (Sidik 1997). Penggunaan bahan antioksidan baik alami maupun
sintetik dalam bahan pangan, harus memenuhi persyaratan tertentu yaitu: a) tidak
beracun dan tidak mempunyai efek fisiologis, b) tidak menimbulkan flavor yang
tidak enak, rasa dan warna pada lemak atau bahan pangan, c) larut sempurna
dalam lemak dan minyak, d) efektif dalam jumlah yang relatif kecil menurut
rekomendasi Food and Drug Administration dosis yang diizinkan dalam bahan
pangan adalah 0,01-0,1% dan e) tidak mahal serta selalu tersedia (Coppen 1983;
Ketaren 1986).
Ada beberapa metode pengukuran aktivitas antioksidan yang dapat
digunakan salah satunya adalah metode 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil (DPPH).
Senyawa DPPH dalam metode ini digunakan sebagai model radikal bebas, yang
memiliki rumus molekul C18H12N5O6 dan Mr=394,33 (Molyneux 2004;
Vattem dan Shetty 2006). Jika senyawa ini masuk dalam tubuh manusia dan tidak
terkendalikan dapat menyebabkan kerusakan fungsi sel. Pada uji ini metanol
digunakan sebagai pelarut, dan inkubasi pada suhu kamar dimaksudkan untuk
mengoptimumkan aktivitas DPPH. Radial bebas DPPH merupakan radikal
sintetik yang stabil pada suhu kamar dan larut dalam pelarut seperti metanol atau
etanol (Molyneux 2004; Suratmo 2009). Ketika sebuah antioksidan mampu
mendonorkan hidrogen yang beraksi dengan radikal DPPH, reaksi ini akan
memberikan peningkatan kompleks non radikal dan menurunkan radikal DPPH
yang ditandai dengan terbentuknya warna kuning. Penurunan pada absorbsi dapat
diukur secara spektrofotometrikal dan dibandingkan dengan sebuah kontrol etanol
atau metanol untuk mengkakulasikan aktivitas scavenging radikal DPPH
(Vattem dan Shetty 2006).
20
Ketika DPPH menerima elektron atau radikal hidrogen, maka akan
terbentuk molekul diamagnetik yang stabil. Interaksi antioksidan dengan DPPH
baik secara transfer elektron atau radikal hidrogen, akan menetralkan karakter
radikal bebas dari DPPH, jika semua elektron pada radikal bebas DPPH
berpasangan, maka warna larutan berubah dari ungu tua menjadi kuning terang
dan absorbansi pada panjang gelombang 517 nm akan hilang. Reaksi pengujian
aktivitas antioksidan dengan DPPH disajikan pada Gambar 5.
DPPH* + AH DPPH-H + A*
Free radical antioksidan neutral new radical
Puplish color Yellowish color
Gambar 5 Reaksi pengujian aktivitas antioksidan dengan DPPH (Munifah 2007).
Parameter yang digunakan untuk menginterpretasikan hasil pengujian
dengan metode DPPH adalah EC50 (efficient concentration) atau biasa disebut
IC50 (inhibition concentration). Inhibition concentration (IC50) dapat
didefinisikan sebagai kosentrasi larutan sampel yang akan menyebabkan reduksi
terhadap aktivitas DPPH sebesar 50%. Semakin kecil nilai IC50 berarti aktivitas
antioksidannya semakin tinggi. Suatu senyawa dikatakan sebagai antioksidan
sangat kuat apabila nilai IC50 kurang dari 0,05 mg/mL, kuat apabila nilai IC50
antara 0,05-0,10 mg/mL, sedang apabila nilai IC50 berkisar antara
0,10-0,15 mg/mL, dan lemah apabila nilai IC50 berkisar antara 0,15-0,20 mg/mL
(Blois 1958 diacu dalam Molyneux 2004).
21
3 METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian
Sampel diambil dari perairan Andai, Kabupaten Manokwari, Provinsi
Papua Barat. Ekstraksi dan uji aktivitas antioksidan dilakukan di Laboratorium
Bioteknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan,
Laboratorium Kimia Analitik, FMIPA, Institut Pertanian Bogor, dan Pusat
Laboratorium Terpadu IPB-Bogor. Identifikasi senyawa antioksidan dilakukan di
Balai Pengkajian Bioteknologi (Biotech Center-BPPT), Serpong. Penelitian
dilaksanakan dari bulan Agustus 2010 – Maret 2011. Gambar 6 menunjukkan
diagram alir penelitian komposisi kimia dan senyawa antiokksidan dari ekstrak
tambelo (Bactronophorus thoracites).
Gambar 6 Diagram alir penelitian komposisi kimia dan senyawa antioksidan
dari ekstrak tambelo (Bactronophorus thoracites).
Tambelo kering
Maserasi dengan MeOH
Ekstraksi dengan MeOH
Partisi dengan pelarut n-heksan,
dan etil asetat
Ekstrak n-heksan, ekstrak etil asetat,
dan ekstrak metanol
Uji antioksidan Ekstrak terplilih KLT
Eluen terbaik Kromatografi kolom
Uji Fitokima Uji antioksidan
Fraksi terpilih
Identifikasi dengan
LC-MC
Uji Fitokima
Analisis kimia :
- uji proksimat
- uji asam amino
- uji asam lemak
- uji mineral
22
3.2 Bahan dan Alat
Bahan baku yang digunakan dalam penelitian ini adalah tambelo yang
berasal dari perairan Andai, Kabupaten Manokwari, Propinsi Papua Barat.
Tambelo diperoleh dari batang pohon mangrove Rhizopora yang sudah lapuk.
Tambelo dibersihkan dengan melepaskan cangkang dan pallet kemudian
dikeringkan dengan menggunakan freezer dry. Tambelo kering selanjutnya
digiling dengan menggunakan mortar dan disimpan pada suhu rendah (5-10 oC)
sampai siap untuk dianalisis.
Bahan kimia yang digunakan untuk ekstraksi adalah n-heksana, etil asetat,
metanol, dan kertas saring Whatman 40. Bahan kimia yang digunakan untuk uji
antioksidan adalah DPPH (1,1-diphenyl-2-picrlhylhydrazyl), BHT dan vitamin
super ester C sebagai standar. Bahan untuk uji fitokimia adalah H2SO4, akuades,
kloroform p.a (pengenceran), anhidra asetat, asam sulfat pekat, HCl 2N, pereaksi
Dregendorff, pereaksi Wagner, pereaksi Meyer, serbuk magnesium, alkohol,
HCl 37%, etanol 70%, FeCl3 5%, pereaksi Molish, pereaksi benedict, pereaksi
biuret, dan larutan ninhidrin 0,1%.
Peralatan utama yang digunakan adalah kromatografi lapis tipis (KLT),
kromatografi kolom (KK), spektrofotometer UV-Vis JENWAY 6305,
kromatografi cair (LC-MS) AGILENT TECHNOLOGIES, vacum rotary
evaporator Buchi Rotavapor R-205, dan Spektrofotometer serapan atom (SSA)
Shimazu-7000.
3.3 Prosedur Penelitian
Penelitian ini terbagi atas dua tahap, yaitu 1) analisis komponen kimia
tambelo, dan 2) Ekstraksi bahan aktif tambelo. Penelitian tahap pertama meliputi
analisis rendemen, uji proksimat, asam lemak, asam amino, dan mineral. Tahap
kedua meliputi ekstraksi bahan aktif dengan metode maserasi, partisi cair-cair, uji
fitokimia, uji antioksidan dengan metode DPPH, dan identifikasi senyawa
antioksidan dari bahan aktif yang dihasilkan.
3.3.1 Penelitian tahap pertama
Penelitian tahap pertama ini bertujuan untuk mendapatkan presentase
bagian tubuh yang dapat dimanfaatkan dan memperoleh nilai kandungan gizi atau
komposisi kimia dari tambelo. Analisis kandungan gizi terdiri dari analisis
23
proksimat yang meliputi kadar air, kadar abu, kadar protein, kadar lemak, dan
karbohidrat, analisis asam amino, serta asam lemak.
3.3.1.1 Rendemen (Hustiany 2005)
Tambelo dikeluarkan dari freezer, dicairkan kemudian ditimbang beratnya
selanjutnya dikeringkan dengan menggunakan freezer dry. Daging tembelo yang
sudah kering ditimbang kembali untuk mengetahui penurunan berat setelah
dikeringkan. Rendemen merupakan presentase perbandingan antara bagian yang
digunakan dengan berat utuh tambelo segar, dengan rumus :
3.3.1.2 Uji proksimat (AOAC 2005)
Analisis proksimat yang dilakukan meliputi uji kadar air dan abu dengan
metode oven, uji kadar lemak menggunakan metode sokhlet, dan uji kadar protein
menggunakan metode kjedahl.
a) Analisis kadar air (AOAC 2005)
Tahap pertama yang dilakukan untuk menganalisis kadar air adalah
mengeringkan cawan porselen dalam oven pada suhu 102-105 oC selama
30 menit. Cawan tersebut diletakkan dalam desikator (kurang lebih 30 menit)
hingga dingin kemudian ditimbang hingga beratnya konstan (A). Tambelo
ditimbang sebanyak 1-2 g (B), kemudian dimasukan kedalam cawan. Cawan
tersebut dimasukkan ke dalam oven dengan suhu 102-105 oC selama 6 jam.
Cawan tersebut kemudian didinginkan dalam desikator dan ditimbang bobotnya
(C). Kadar air ditentukan dengan rumus:
Keterangan:
A = berat cawan kosong (gram)
B = berat sampel sebelum dioven (gram)
C = berat cawan berisi sampel setelah dioven (gram)
b) Analisis kadar abu (AOAC 2005)
Analisis kadar abu dilakukan menggunakan metode oven. Prinsipnya
adalah pembakaran atau pengabuan bahan-bahan organik yang diuraikan menjadi
24
air (H2O) dan karbondioksida (CO2) tetapi zat anorganik tidak terbakar. Zat
anorganik ini disebut abu. Prosedur analisis kadar abu dalam bahan pangan
adalah sebagai berikut: cawan abu porselin yang kosong dimasukkan ke dalam
oven. Cawan abu porselin dikeluarkan dan didinginkan dalam desikator selama
30 menit, kemudian cawan abu porselin kosong ditimbang untuk mengetahui
bobot cawan kosong (A). Sampel yang telah dihomogenkan ditimbang 2 gram
dan dimasukan ke dalam cawan abu porselin ditimbang (B), kemudian masukan
ke dalam oven bersuhu 550-600 oC selama 24 jam atau sampai pengabuan
sempurna, sehingga diperoleh abu berwarna putih, setelah selesai, suhu tungku
pengabuan diturunkan hingga suhu 40 oC. Cawan porselin dikeluarkan dengan
menggunakan penjepit dan masukan ke dalam desikator selama 30 menit.
Apabila abu belum putih benar harus dilakukan pengabuan kembali. Abu
dibasahi (dilembabkan) dengan akuades secara bertahap, kemudian dikeringkan
menggunakan hot plate dan diabukan kembali pada suhu 550-600 oC sampai
diperoleh berat yang konstan. Suhu pengabuan diturunkan sampai ± 40 oC lalu
dipindahkan cawan abu porselin ke dalam desikator selama 30 menit kemudian
ditimbang bobotnya (C) segera setelah dingin. Kadar abu dalam bahan pangan
dapat dihitung berdasarkan persamaan berikut :
Keterangan:
A = Berat cawan kosong (gram)
B = Berat sampel sebelum pengabuan (gram)
C = Berat cawan berisi sample setelah pengabuan (gram)
c) Analisis kadar protein (AOAC 2005)
Penentuan kadar protein dilakukan dengan metode total nitrogen yang
didasarkan pada reaksi penetralan asam basa. Kadar protein dihitung berdasarkan
kesetimbangan reaksi kimia. Tahap-tahap yang dilakukan dalam analisis protein
terdiri dari tiga tahap, yaitu destruksi, destilasi, dan titrasi.
Tahapan destruksi adalah sebagai berikut: sampel dilumatkan dengan
blender hingga partikelnya dapat melewati saringan 20 mesh. Sampel dimasukan
dalam kantong plastik atau gelas yang bersih dan bertutup. Homogenat sampel
ditimbang 2 gram pada kertas timbang, kemudian dimasukan ke dalam labu
25
destruksi. Sampel tersebut selanjutnya ditambahkan dua tablet katalis serta
beberapa butir batu didih. Sampel ditambahkan 15 mL asam sulfat pekat
(95-97%) dan 3 mL hidrogen peroksida secara perlahan dan didiamkan 10 menit
dalam ruang asam. Destruksi dilakukan pada suhu 410 oC selama 2 jam atau
sampai larutan jernih. Sampel hasil destruksi didiamkan hingga mencapai suhu
kamar dan tambahkan 50-75 mL akuades.
Tahap kedua adalah distilasi, posedur tahapan ini sebagai berikut:
sebanyak 25 mL larutan H3BO3 4% yang mengandung indikator sebagai
penampung destilat dimasukan dalam erlenmeyer. Labu yang berisi hasil
destruksi dipasang pada rangkaian alat destilasi uap, kemudian ditambahkan
50-75 mL larutan natrium hidroksida dan natrium thiosulfat dan dilakukan
destilasi, selanjutnya destilat ditampung ke dalam erlenmeyer tersebut hingga
volume mencapai minimal 150 mL (hasil destilasi akan berubah menjadi kuning).
Tahap ketiga adalah titrasi hasil destilat dengan HCl 0.2 N, yang sudah
dibakukan sampai warna berubah dari hijau menjadi abu-abu netral. Analisis
standar blanko dilakukan seperti tahapan sampel. Kadar protein dapat dihitung
dengan persamaan berikut :
Keterangan :
KP = Kadar Protein
Va = mL HCl untuk titrasi sampel
Vb = mL HCl untuk titrasi blanko
N = Normalitas HCl yang digunakan
W = berat sampel
c) Analisis kadar lemak (AOAC 2005).
Prinsip analisis kadar lemak diawali dengan melakukan pengekstrakan
sampel dengan pelarut organik untuk mengeluarkan lemak dengan bantuan
pemanasan pada suhu titik didih pelarut selama 8 jam. Pelarut organik yang
mengikat lemak selanjutnya dipisahkan dengan proses penguapan (evaporasi),
sehingga hasil lemak tertinggal dalam labu. Penetapan bobot lemak dihitung
secara gravimetri.
Sampel dilumatkan hingga homogen dan dimasukan ke dalam wadah
plastik atau gelas yang bersih dan bertutup. Apabila sampel tidak langsung
26
dianalisis, maka disimpan dalam refrigerator sampai saatnya akan dianalisis.
Sampel dikondisikan pada suhu ruang dan pastikan sampel masih homogen
sebelum ditimbang. Apabila terjadi pemisahan cairan dan sampel, maka dilakukan
pengadukan ulangan dengan blender sebelum dilakukan pengamatan. Prosedur
analisis lemak adalah sebagai berikut : labu alas bulat ditimbang dalam keadaan
kosong (A). Homogenat sampel ditimbang sebanyak 2 gram (B) dan masukan ke
dalam selongsong lemak (ekstraction timbles). Berturut-turut dimasukan 150 mL
n-heksana ke dalam labu alas bulat, selongsong lemak ke dalam ekstractor
soxhlet, dan pasang rangkaian sokhlet dipasang dengan benar. Ekstraksi
dilakukan pada suhu 60 oC selama 8 jam. Campuran lemak dan heksana dalam
labu alas bulat dievaporasi sampai kering. Labu alas bulat yang berisi lemak
dimasukan ke dalam oven bersuhu 105 oC selama ± 2 jam untuk menghilangkan
sisa n-heksana dan air. Labu dan lemak didinginkan dalam desikator selama
30 menit. Labu alas bulat yang berisi lemak ditimbang (C) sampai berat konstan.
Kadar lemak dalam bahan pangan dapat dihitung berdasarkan persamaan berikut :
Keterangan:
KL = kadar lemak
A = bobot contoh
B = bobot labu lemak dan labu didih
C = bobot labu lemak, batu didih dan lemak
d) Analisis kadar karbohidrat (AOAC 2005)
Perhitungan kadar karbohidrat dilakukan menggunakan metode by
difference yaitu pengurangan 100 % dengan jumlah dari hasil empat komponen
yaitu kadar air, protein, lemak dan abu. Perhitungannya sebagai berikut:
% Karbohidrat = 100 % - ( % air + % lemak + % protein + % abu )
3.3.1.3 Analisis asam amino (AOAC 1994)
Komposisi asam amino ditentukan dengan High Performance Liquid
Chromatography (HPLC). Perangkat HPLC sebelum digunakan harus dibilas
dengan eluen yang akan digunakan selama 2-3 jam. Begitu pula dengan syringe
yang akan digunakan juga harus dibilas dengan akuades. Prosedur analisis asam
27
amino menggunakan HPLC disajikan Gambar 7. Kondisi alat HPLC saat
berlangsungnya analisis asam amino:
Temperatur : 27 oC (suhu ruang)
Jenis kolom : pico tag 3,9x150 μm
Kecepatan alir eluen : 1 ml/menit
Tekanan : 3000 psi
Fasa gerak : - Asetoniril 60%
- Buffer fosfat 0,1 M
Detektor : UV
Panjang gelombang : 256 nm
Derivatisasi : derivatisasi pre-kolom
Tipe injeksi : on column injection tanpa septum
Program : isokratik (kecepatan aliran eluen konstan)
Kandungan masing-masing asam amino pada bahan dapat dihitung dengan rumus:
Keterangan : C = konsentrasi standar asam amino (2,5 μg)
FB = faktor pengenceran ( 133,1 mL)
BM = bobot molekul dari masing-masing asam amino (g/mol)
3.3.1.4 Analisis asam lemak (AOAC 1984)
Kandungan asam lemak dapat ditentukan dengan metode gas kromatografi
didasarkan pada partisi komponen-komponen dari suatu cairan di antara fasa
gerak berupa gas dan fasa diam berupa zat padat atau cairan yang tidak mudah
menguap yang melekat pada bahan pendukung inert. Komponen-komponen yang
dipisahkan harus mudah menguap pada suhu pemisahan yang dilakukan, sehingga
suhu operasi biasanya lebih tinggi dari suhu kamar dan biasanya dilakukan
derivatisasi untuk contoh yang sulit menguap. Tahapan analisis asam lemak
diawali dengan menghidrolisis lemak/minyak dalam sampel menjadi asam lemak,
kemudian ditransformasi menjadi bentuk esternya yang bersifat lebih mudah
menguap. Transformasi dilakukan dengan cara metilasi sehingga diperoleh metil
ester asam lemak (FAME). Metil ester asam lemak (FAME) ini dianalisis dengan
alat kromatografi gas. Identifikasi tiap komponen dilakukan dengan
28
membandingkan waktu retensinya dengan standar pada kondisi analisis yang
sama. Waktu retensi dihitung pada kertas rekorder sebagai jarak dari garis pada
saat muncul puncak pelarut sampai ke tengah puncak komponen yang
dipertimbangkan.
Gambar 7 Prosedur analisis asam amino menggunakan HPLC.
Tambelo kering 0,75
g
0,75 g Penambahan 5-10 ml HCl 6N
Pemanasan dalam oven pada
suhu 100 oC selama 24 jam
Hidrolisat Protein
Penyaringan dengan milipore
berukuran 45 mikron
Filtrat hidrolisat
Penambahan 30 μL larutan pengering
(campuran antara metanol, natrium asetat, dan
trietilamim dengan perbandingan 2:2:1)
Pengeringan dengan gas N2
Hidrolisat protein kering
Penambahan 30 μL larutan derivatisasi
( campuran antara metanol, pikoiotisianat,
dan trietilamin dengan perbandingan 3:3:4)
Pengenceran dengan buffer asetat sebanyak
200 μL lalu dibiarkan selama 20 menit
Penyaringan dengan milipore
berukuran 0,45 mikron
Injeksi ke alat HPLC
Kromatogram
29
a. Preparasi contohd (hidrolisis dan esterifikasi)
Contoh lemak ditimbang sebanyak 20-30 mg, kemudia ditambahkan 1 mL
larutan NaOH 0,5 N ke dalam metanol dan dipanaskan dalam penangas air selama
20 menit. Sebanyak 2 mL BF3 16% dan 5 mg/mL standar internal ditambahkan
pada sampel tersebut, lalu dipanaskan lagi selama 20 menit dan selanjutnya
didinginkan. Sampel kemudian ditambahkan 2 mL NaCl jenuh dan 1 mL
n-heksana, lalu dikocok dengan baik. Lapisan heksana dipindahkan dengan
bantuan pipet tetes ke dalam tabung yang berisi 0,1 gram Na2SO4 anhidrat,
dibiarkan 15 menit. Fasa cair dipisahkan dan selanjutnya diinjeksikan ke
kromatografi gas.
b. Analisis komponen asam lemak dengan kromatografi gas
Pelarut sebanyak 1 µL diinjeksikan ke dalam kolom. Bila aliran gas
pembawa dan sistem pemanasan sempurna, puncak pelarut akan nampak dalam
kurang dari 1 menit. Sebanyak 5 µL campuran standar FAME diinjeksikan
setelah pena kembali ke nol (baseline). Jika semua puncak sudah keluar,
diinjeksikan 5 µL sampel yang telah dipreparasi (A). Waktu retensi dan puncak
masing-masing komponen tersebut kemudian diukur. Jika rekorder dilengkapi
dengan integrator, waktu retensi dan luas puncak langsung diperoleh dari
integrator dan membandingkan waktu retensinya dengan standar untuk
mendapatkan informasi mengenai jenis dari komponen-komponen dalam contoh.
Jumlah dari masing-masing komponen dalam sampel dihitung menggunakan
metode internal standar, dengan cara sebagai berikut :
Keterangan : Cx = kosentrasi komponen x
Cs = kosentrasi standar internal
Ax = luas puncak komponen x
As = luas puncak standar internal
R = respon detektor terhadap komponen x relatif terhadap standar
30
Kondisi alat kromatografi gas pada saat dilakukan analisis :
1. Kolom : cyanopropil methylsil (kolom kapiler)
2. Dimensi kolom : p=60m,ø dalam = 0.25 mm, 025 µm film tickness
3. Laju alir n2 : 20 ml/menit
4. Laju alir h2 : 30 ml/menit
5. Laju alir udara : 200 – 250 ml/menit
6. Suhu injektor : 200 oc
7. Suhu detektor : 230 oc
8. Suhu kolom : program temperatur
- Kolom temperatur : awal 190 oC diam 15 menit
akhir 230 oC diam 20 menit
9. Ratio : 1 : 8
10. Injeksi volum : 1 µl
11. Linier velocity : 20 cm.sec
3.3.1.5 Analisis mineral
Mineral yang dianalisis pada sampel tambelo meliputi mineral kalsium
(Ca), kalium (K), magnesium (Mg), besi, (Fe), natrium (Na), mangan (Mn),
klorida (Cl), seng (Zn), fospat, dan tembaga (Cu), dianalisis dengan metode
spektrofotometer serapan atom (SSA).
a. Analisis mineral kalsium (Ca), kalium (K), dan seng (Zn) (Yosida et al. 1972).
Prinsip penentuan kadar kalsium, kalium dan seng adalah proses pelarutan
sampel dengan asam klorida, kemudian absorbansinya diukur dengan
menggunakan SSA. Prosedur analisis mineral kalsium, kalium dan seng adalah
sebagai berikut: Sampel yang telah kering ditimbang sebanyak 1-2 gram,
kemudian dihancurkan dan dimasukkan ke dalam gelas piala yang telah dibilas
dengan HCl 1 N. Sampel ditambahkan dengan 25 mL HCl 1 N dan disimpan
selama 24 jam. Setelah penyimpanan, sampel dikocok dengan shaker dan
disaring dengan kertas Whatman No.1.
1). Analisis mineral kalsium (Ca)
Ekstrak sampel dipipet sebanyak 1 mL, ditambahkan 2 mL larutan
lantanum oksida dan ditambahkan HCl 1 N sampai volume menjadi 10 mL,
kemudian ditera dengan penambahan akuades sampai volume menjadi 50 mL.
31
Larutan diukur absorbansi dengan SSA pada panjang gelombang 285,2 nm untuk
magnesium dan 422,7 nm untuk kalsium.
2). Analisis mineral kalium (K) dan seng (Zn)
Ekstrak sampel dipipet sebanyak 2 mL dan ditambahkan HCl 1 N sampai
volume menjadi 40 mL, kemudian ditera dengan penambahan akuades sampai
volume menjadi 50 mL. Larutan diukur absorbansi dengan AAS pada panjang
gelombang 766,5 nm untuk kalium dan 213,9 nm untuk seng.
b. Analisis mineral besi (Fe)
Prinsip penentuan kadar besi adalah proses pelarutan bahan dengan larutan
asam campur yang terdiri dari asam nitrat, asam sulfat dan asam perklorat,
kemudian dilanjutkan dengan proses pemanasan. Prosedur analisis mineral besi
adalah sebagai berikut: sampel yang telah kering ditimbang sebanyak 1-2 gram,
kemudian dihancurkan. Larutan asam campuran disiapkan yang dibuat dari
HNO3, H2SO4, dan HClO4 dengan perbandingan 5:1:2. Sampel yang telah
hancur ditambah 10 mL larutan asam campur lalu dipanaskan di dalam ruang
asam menggunakan api kecil selama 2 jam. Api dibesarkan sampai larutan
menjadi jernih. Kemudian didinginkan. Larutan ditambahkan akuades sampai
volume 50 mL dan disaring dengan kertas saring pencucian asam Whatman No.1
(acid-washed filter paper whatman No.1).
Sebanyak 10 mL ekstrak sampel ditambahkan 1 mL hidroquinon dan 1 mL
orto-fenantrolin, kemudian ditambahkan sodium sitrat sampai pH menjadi 3,5.
Larutan diencerkan dengan akuades sampai volume 50 mL dan dipanaskan dalam
water bath selama 1 jam. Larutan deret standar diperlakukan dengan pereaksi
yang sama dengan ekstrak sampel. Absorbansi diukur dengan SSA pada panjang
gelombang 248,3 nm.
c. Analisis mineral tembaga (Cu) dan mangan (Mn) (SNI 01-2362-1991)
Prinsip dari penentuan kadar tembaga dan mangan adalah proses
pengabuan dengan suhu 450 oC dengan penambahan asam nitrat (HNO3).
Prosedur analisis sebagai berikut: sampel ditimbang sebanyak 25 gram dalam
gelas piala 250 mL yang terdahulu dicuci dengan HNO3 6N. Sampel dikeringkan
di dalam oven pengering pada suhu 110-125 oC selama 8-24 jam. Sample kering
kemudian dipindahkan ke dalam tungku, dan atur suhu pada 250 oC. Suhu tunggu
32
dinaikkan secara bertahap hingga mencapai 350 oC selama periode 1-2 jam. Hal
ini bertujuan untuk mencegah terjadinya proses pembakaran secara cepat yang
menyebabkan contoh dapat terhambur keluar. Kondisi pada suhu ini dibiarkan
sesaat untuk memberikan kesempatan sebagian besar lemak terbakar habis.
Kenaikkan suhu kemudian dilanjutkan hingga 450 oC, dan dibiarkan selama
semalam (16-24 jam). Jika proses sampel abu belum putih sempurna, sampel
dikeluarkan dari tungku dan dinginkan. Sampel tersebut kemudian ditambahkan
0,25-1 mL HNO3 pekat. Sampel diletakkan diatas hot plate untuk menguapkan
HNO3. Sampel kemudian dipanaskan kembali pada suhu 450 oC di dalam tungku
selama 30-60 menit. Abu yang dihasilkan harus benar-benar putih, apabila tidak
proses penambahan asam nitrat harus diulangi.
Abu dilarutkan ke dalam 2 mL HNO3 pekat, kemudian diencerkan dengan
akuades hingga 25 mL dan didihkan di atas hot plate. Larutan disaring dengan
kertas saring Whatman No.42 yang sebelumnya telah dicuci dengan HNO3 10%
dan akuades. Filtrat yang diperoleh kemudian diencerkan dengan akuades hingga
50 mL. Larutan standar, blanko dan contoh dialirkan ke dalam SSA. Absorbansi
mineral Cu dan Mn masing-masing diukur dengan SSA pada panjang gelombang
324,7 nm dan Mn 285,2 nm.
3.3.2 Penelitian tahap kedua
Penelitian yang dilakukan pada penelitian tahap kedua adalah ekstraksi
bahan aktif, uji fitokimia, uji aktivitas antioksidan, serta uji fraksinasi dan
identifikasi senyawa antioksidan.
3.3.2.1 Ekstraksi bahan aktif
Pelarut yang digunakan untuk ekstraksi tambelo yaitu tiga macam
pelarut berdasarkan tingkat kepolarannya, yaitu heksana (non polar), etil asetat
(semi polar), dan metanol (polar). Tahapan proses ekstraksi tambelo meliputi
penghancuran sampel, maserasi, partisi, dan evaporasi. Sampel kering ditimbang
sebanyak 500 gram, kemudian dimaserasi dengan pelarut metanol (MeOH)
sebanyak 2500 mL, perbandingan 1:5 pada suhu ruang selama 3x24 jam. Setiap
1 x 24 jam dilakukan penyaringan, kemudian filtrat yang dihasilkan digabungkan
dan dipekat dengan menggunakan rotary evaporator. Ekstrak MeOH pekat
dipartisi dengan n-heksana menggunakan corong pisah diulang sebanyak 3 kali.
33
Sampel (500 g)
Fase n-heksana dikumpulkan dan dipekatkan dan dihitung rendemennya. Ekstrak
MeOH setelah partisi n-heksana dipartisi kembali dengan etil asetat, diulang
sebanyak 3 kali. Fase etil asetat dikumpulkan dan dipekatkan, lalu dihitung
rendemennya. Ekstrak metanol sisa partisi dipekatkan kembali dan dihitung
rendemen. Semua ekstrak diuji fitokimia dan uji antioksidan
(Miyaoka et al. 1998; Ebada et al. 2008). Diagram alir proses ekstraksi bahan
aktif tambelo disajikan pada Gambar 8.
Gambar 8 Diagram alir proses ekstraksi bahan aktif tambelo (Ebada et al. 2008).
Ekstrak
MeOH
Fase n-heksana
Ekstrak
n-Heksana
Dipartisi dengan n-Heksana
Fase MeOH
Fase MeOH
Maserasi 3x24 jam dengan MeOH perbandingan 1:5
Penyaringan
Residu
Filtrat
Evaporasi
Ekstrak MeOH
Dipartisi dengan etil asetat
Fase etil asetat
Evaporasi
Evaporasi
Ekstrak
etil asetat
Evaporasi
34
3.3.2.2 Uji fitokimia (Departemen Kesehatan RI 1995)
a) Uji alkaloid
Sampel sebanyak 1 gram ekstrak ditambahkan 10 mL metanol dan beberapa tetes
amoniak. Fraksi metanol dipisahkan dan diasamkan dengan 10 tetes H2SO4 2M.
Fraksi asam diambil kemudian ditambahkan pereaksi Dragendrof, Meyer, dan
Wagner.
b) Uji saponin
Sebanyak 50 mg sampel ditambah dietil eter. Residu yang tidak larut
dalam dietil eter diambil, dipisahkan dan ditambahkan 5 ml air kemudian dikocok
sampai timbul busa yang stabil.
c) Uji steroid/Triterpenoid
Sampel sebanyak 1 gram ditambahkan 25 mL etanol 30% dipanaskan
(50 oC) dan disaring. Filtratnya diuapkan kemudian ditambahkan eter. Lapisan
eter yang terbentuk dipipet dan diletakkan papan uji (spot plate) dengan
menambahkan pereaksi Liebermen Buchard (3 tetes asam asetat anhidrin dan
1 tetes H2SO4 pekat), selanjutnya diamati warna yang terbentuk, jika terbentuk
warna hijau adalah steroid dan warna merah adalah triterpenoid.
d) Uji Flavonoid
Sebanyak 1 gram sampel ditambah metanol 30% sampai terendam
kemudian dipanaskan. Filtratnya ditaruh ke dalam spot plate (papan uji)
kemudian ditambahkan H2SO4 pekat, adanya flavonoid ditunjukkan oleh
terbentuknya warna merah akibat penambahan H2SO4.
e) Uji Tanin
Sebanyak 50 mg sampel dilarutkan dalam 5 ml etanol ditambah dengan
beberapa tetes pereaksi FeCl3 1 %. Adanya tannin ditunjukan dengan
terbentuknya warna hijau, biru atau ungu.
f) Fenol hidrokuinon (pereaksi FeCl3)
Sebanyak 1 g sampel diekstrak dengan 20 ml etanol 70%. Larutan yang
dihasilkan diambil sebanyak 1 ml kemudian ditambahkan 2 tetes
larutan FeCl3 5%. Terbentuknya warna hijau atau hijau biru menunjukkan adanya
senyawa fenol dalam bahan.
35
3.3.2.3 Uji aktivitas antioksidan (Yeh dan Cen 1995)
Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan menggunakan metode
perendaman radikal bebas DPPH (1,1-diphenyl-2-picrlhylhydrazyl)
(Yeh dan Cen 1995). Prinsip kerjanya pada sampel (mengandung senyawa
bersifat antioksidan) yang dapat meredam radikal bebas DPPH. Uji ini dilakukan
terhadap ekstrak tambelo. Ekstrak dilarutkan dalam metanol dan dibuat dalam
berbagai konsentrasi ( 20, 40, 60, dan 80 ppm), kemudian dimasukkan ke dalam
tabung reaksi. Ekstrak tersebut masing-masing ditambahkan 200 μl larutan DPPH
1mM dalam metanol. Volume dicukupkan sampai 5 mL, kemudian diinkubasi
pada suhu kamar selama 30 menit. Serapan sampel tersebut diukur pada panjang
gelombang 515 nm. Butylated hydroxytoluene (BHT) dan vitamin super ester C
digunakan sebagai kontrol positif, dan untuk pembanding dengan masing-masing
kosentrasi 4, 6, 8, dan 10 ppm. Hambatan dihitung dengan rumus.
Nilai absorbansi sampel diperoleh persentase penghambatan aktivitas
radikal bebas. Persamaan regresi diperoleh dari hubungan antara kosentrasi
sampel dan persentase penghambatan aktivitas radikal bebas. Nilai kosentrasi dan
hambatan ekstrak diplotkan masing-masing pada sumbu x dan y. Persamaan
regresi yang diperoleh dalam bentuk y = bx + a. Persamaan ini digunakan untuk
mencari Inhibition Concentration 50 % (IC50) dengan memasukkan angka 50
sebagai y sehingga didapatkan nilai x sebagai IC50. Pengujian ini dilakukan
sebanyak tiga kali ulangan.
3.3.2.4 Fraksinasi senyawa antioksidan
Fraksinasi terhadap ekstrak kasar tambelo dilakukan pada ekstrak yang
memiliki aktivitas antioksidan tertinggi (ekstrak terpilih). Metode yang
digunakan ada dua macam, yaitu kromatografi lapis tipis (KLT) dan kromatografi
kolom (KK).
a) Kromatografi lapis tipis (KLT)
Pada penelitian ini, pemilihan pelarut untuk fraksinasi dilakukan dengan
mencoba beberapa kombinasi untuk mengembangkan spot ekstrak terpilih pada
36
kromatografi lapis tipis (KLT). Kombinasi yang digunakan adalah pelarut
kloroform:metanol dengan perbandingan 9:1 mL, pelarut heksan : etil asetat
dengan perbandingan 1:1 mL dan pelarut kloroform : metanol dengan
perbandingan 17:3 mL, pelarut heksan:etil asetat dengan perbandingan 8:2 dan
n-heksana:kloroform (3:2), untuk memilih eluen terbaik dicoba dengan berbagai
eluen n-heksana, kloroform, etil asetat, dan metanol. Ekstrak terpilih sebanyak
0,02 gram dilarutkan dalam 0,5 mL pelarutnya. Larutan ekstrak tersebut
kemudian ditotolkan pada plat silika gel 60 F254 dengan panjang l0 cm.
Kombinasi pelarut yang menghasilkan pengembangan spot terbaik digunakan
sebagai eluen untuk memfraksinasi ekstrak terpilih dengan kromatografi lapis
tipis maupun kromatografi kolom. Diagram alir fraksinasi dengan metode KLT
dapat disajikan pada Gambar 9.
Gambar 9 Diagram alir fraksinasi dengan metode KLT.
b) Kromatografi kolom (KK) (Gritter et al. l99l)
Pelaksanaan kromatografi kolom dilakukan dengan memasang kolom pada
statif secara tegak lurus. Kolom diberi glasswool pada bagian bawahnya.
Diagram alir fraksinasi dengan metode kromatografi kolom dapat dilihat pada
Gambar 10. Pencucian kolom dilakukan dan pembuatan larutan silika gel (silika
gel G40-63) yang akan dimasukkan ke dalam kolom sebelum ekstrak dimasukkan
ke dalam kolom. Silika gel sebanyak 13-15 gram dilarutkan pada eluenn
kloroform : metanol = 9:1 sehingga diperoleh larutan silika gel. Semua larutan
silika gel masuk ke dalam kolom, lalu dilakukan penjenuhan silika gel dalam
kolom selama 30-60 menit. Pada proses penjenuhan, bagian atas kolom ditutup
Ekstrak aktif
CHCl3:MeOH
9:1ml
CHCl3:MeOH
17:3 ml
terbentuknya spot terbanyak
Heksan:EtOH
1:1ml
Heksan:EtOH
8:2ml Heksan :CHCl3
3:2 ml
KLT (silika gel)
37
dengan aluminium foil untuk mencegah penguapan eluen yang terdapat dalam
kolom sehingga silika gel tetap dalam kondisi basah.
Ekstrak yang akan difraksinasi adalah ekstrak terpilih sebesar 1 gram dan
dilarutkan pada pelarut asal sebanyak 3 mL. Silika gel harus jenuh sebelum
ekstrak dimasukkan dan setelah silika gel jenuh maka kran kolom dibagian bawah
kolom dibuka kembali setelah semua ekstrak masuk ke dalam kolom. Ekstrak
dibiarkan mengalir ke bagian penjerap kolom dan kolom terus diisi agar silika gel
tidak kering.
Larutan yang keluar dari kolom ditampung pada tabung reaksi dengan
masing-masing tabung reaksi berisi ± 3 mL. Larutan dalam tabung reaksi
kemudian dikeringkan untuk menghasilkan residu ekstrak. Fraksi hasil
kromatografi Kolom (KK) dilakukan pengujian KLT untuk penggabungan fraksi
dengan mengacu pada kesamaan pola kromatogram, dan setiap fraksi
penggabungan yang terbentuk dikeringkan dengan aerator di ruang asam, dihitung
rendamennya, serta diuji aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode
DPPH (Yeh dan Cen 1995).
Gambar 10 Diagram alir fraksinasi dengan kromatografi kolom.
Larutan silika gel dimasukkan ke dalam kolom
Dijenuhkan selama 30-60 menit
Larutan ektrak terpilih dimasukkan ke dalam kolom
Kran dibuka
Kolom terus dialiri eluen
Ekstrak aktif
Eluen dikeluarkan (silica gel tidak boleh kering)
Larutan ditampung pada tabung reaksi (±10 ml)
Pembuatan larutan ekstrak terpilih
1 g ekstrak terpilih + 3 ml eluen
Larutan silica gel + eluen 1: 1 (w/v)
38
3.3.2.5 Identifikasi senyawa antioksidan (Willard et al. 1988)
Fraksi terpilih dengan nilai aktivitas antioksidan yang tertinggi
dilanjutkan dengan mengidentifikasi senyawa antioksidan menggunakan
Liquid chromatography mass spectrometry (LC-MS) Agilent Technologies
dilakukan untuk mendapatkan bobot molekul dan rumus molekul yang sangat
membantu dalam elusidasi struktur molekul. Analisis yang dilakukan pada tahap
identifikasi senyawa aktif, yaitu memilih senyawa yang memiliki puncak tinggi,
kemudian dicocokkan dengan senyawa yang ada pada database MarinLit
(Blunt and Blunt 2008).
4 HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Penelitian Tahap Pertama
4.1.1 Rendemen daging tambelo
Hasil pengukuran rendemen daging tambelo pada Tabel 2 menunjukkan
bahwa tambelo segar setelah preparasi 40,00% dan setelah dikeringkan rendemen
berubah menjadi semakin kecil yang disebabkan banyaknya kandungan air
yang menguap. Jumlah rendemen setelah dikeringkan sebesar 22,73%.
Penurunan rendemen tambelo disebabkan penguapan kandungan air akibat
bahan mengalami tekanan vakum yang sangat tinggi setelah dibekukan, air akan
tersublimasi dan bahan yang tidak tersublimasi berubah menjadi padat atau
kering. Hal ini juga menunjukkan bahwa organisme perairan termasuk tambelo
dan ikan ini memiliki kandungan air yang tinggi sehingga diperlukan penanganan
yang bagus untuk mengurangi kerusakan pada bahan beku. Semakin tinggi
rendemen maka semakin tinggi nilai ekonomisnya sehingga lebih efektif.
Tabel 2 Rendemen daging tambelo
Sampel Berat segar Berat kering
Tambelo utuh 2200 gram
Daging tambelo 40,00 % 22,73 %
4.1.2 Kandungan proksimat tambelo
Hasil analisis proksimat dari daging segar tambelo dan serbuk kering
tambelo, meliputi kadar air, protein, lemak, abu, dan karbohidrat. Kandungan
proksimat daging tambelo dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3 Kandungan proksimat daging tambelo
Proksimat (%)
Segar Kering Tambelo
Temilok
a
Tambelo
Kerang mas
ngur b
Kadar air 82,72±0,01 73,60 6,63±0,01 7,8 Protein 7,21±0,31 1,04 42,77±2,01 56,08 Lemak 0,28±0,04 4,29 14,27±0,22 5,95 Abu 2,07±0,27 4,05 5,88±1,04 7,88 Karbohidrat 7,72±0,62 17,02 30,45±2,83 21
Sumber : a Syaputra (2007) ,
b Waranmaselembun (2007)
Kadar air merupakan jumlah air yang terkandung di dalam bahan pangan
dan ikut menentukan kesegaran dan daya awet bahan pangan tersebut. Kadar air
40
yang tinggi mengakibatkan mudahnya bakteri, kapang dan khamir untuk
berkembang biak sehingga akan terjadi perubahan pada bahan pangan yang dapat
mempercepat pembusukkan (Winarno 1997).
Hasil analisis proksimat kadar air tambelo segar adalah 82,72%, setelah
mengalami pengeringan dengan freeze dry, kadar air tambelo kering menjadi
6,63%. Hal ini karena air yang terdapat pada tambelo segar tersublimasi akibat
adanya tekanan vakum, sehingga tambelo segar menjadi kering. Hal ini sesuai
dengan hasil penelitian Syahputra (2007) yang menunjukkan bahwa kadar air
temilok segar sebesar 73,60%, sedangkan kadar air tambelo setelah dikeringkan
sebesar 6,63%. Hasil perhitungan nilai rata-rata proksimat dapat dilihat pada
Lampiran 1.
Kadar air yang bahan untuk ekstraksi diisyaratkan sebesar 11%. Hal ini
bertujuan agar proses ekstraksi dapat berjalan lancar (Setyowati 2009). Kadar air
tambelo kering pada hasil penelitian ini memiliki kadar air dibawah kadar air
maksimum yang diisyaratkan untuk proses ekstraksi. Hal ini menunjukkan bahwa
sampel kering memiliki kadar air yang cukup baik untuk dilakukan proses
ekstraksi karena semakin rendah nilai kadar air bahan maka semakin
memudahkan pelarut untuk mengekstrak komponen senyawa aktif yang
diinginkan.
Protein merupakan zat gizi yang sangat penting bagi tubuh, karena selain
sebagai sumber energi, protein berfungsi sebagai zat pembangun tubuh dan zat
pengatur di dalam tubuh. Fungsi utama protein bagi tubuh adalah untuk
pertumbuhan dan pemeliharaan jaringan, pembentukan senyawa esensial
(hormon, enzim, hemoglobin, bahan pengumpal darah), regulasi keseimbangan air
dalam tubuh, mempertahankan netralitas tubuh, pembentukan antibodi dan proses
detoksifikasi, dan transpor zat gizi dalam tubuh. Protein dalam plasma (serum)
darah dapat juga berfungsi sebagai antioksidan (Mucthadi 2009).
Kadar protein pada tambelo segar adalah 7,31%, sedangkan kadar protein
tambelo kering sebesar 42,77%. Kandungan protein pada tambelo kering berasal
dari plankton yang merupakan salah satu makanan bagi tambelo. Plankton
diketahui sebagai sumber protein sekaligus simbion dalam sistem pencernaan
pada tambelo.
41
Hasil analisis kadar lemak dari tambelo segar adalah 0,28%, sedangkan
kadar lemak pada tambelo kering sebesar 14,26%. Jika dibandingkan dengan
hasil penelitian yang dilakukan oleh Syahputra (2007), kadar lemak tambelo lebih
rendah dibandingkan dengan kadar lemak temilok segar (4,29%). Peranan lemak
dalam bahan pangan yang utama adalah sebagai sumber energi. Lemak
merupakan sumber yang dapat menyediakan energi sekitar 2,25 kali lebih banyak
daripada yang diberikan oleh karbohidrat atau protein. Lemak adalah bentuk
energi berlebih yang disimpan oleh hewan sehingga jumlah lemak dalam hewan
yang dijadikan bahan pangan ditentukan oleh keseimbangan energi hewan
tersebut.
Ikan menyimpan cadangan energi dalam bentuk lemak di dalam hatinya
(lebih dari 50% berat hatinya). Peranan lemak ikan dalam mencegah timbulnya
penyakit jantung koroner telah dibuktikan. Hal ini terutama karena peranan asam
lemak eikosapentaenoat (EPA) dan dokosaheksaenoat (DHA), yang terkenal
dengan sebutan asam lemak omega 3, dalam menurunkan kadar LDL dan
meningkatkan kadar HDL (Muchtadi 2009).
Abu adalah zat anorganik, sisa hasil pembakaran suatu bahan organik.
Sebagian besar bahan makanan, yaitu sekitar 96% terdiri dari bahan organik dan
air, sisanya terdiri dari unsur- unsur mineral. Unsur mineral juga dikenal sebagai
zat organik atau kadar abu. Pada proses pembakaran, bahan-bahan organik
terbakar tetapi zat anorganiknya tidak, karena itulah disebut abu. Elemen-elemen
mineral telah jelas diketahui fungsinya pada makanan ternak, belum banyak
penelitian sejenis dilakukan pada manusia. Peranan berbagai unsur mineral bagi
manusia masih belum sepenuhnya diketahui (Winarno,1997). Tabel 3
menunjukkan bahwa kandungan abu dalam tambelo segar 2,07%, lebih kecil dari
temilok 4.05% dan kandungan abu pada tambelo kering 5,88% lebih kecil dari
kerang mas ngur 7,88%, jika dibandingkan dengan literatur yang ada maka nilai
hasil analisis memiliki nilai yang tidak jauh berbeda.
Karbohidrat merupakan bagian terbesar dari senyawa organik, hal ini
disebabkan karbohidrat merupakan bahan pembentukan tumbuh-tumbuhan dan
juga terdapat pada hewan dalam jumlah tertentu. Berdasarkan hasil analisis
proksimat pada tambelo kering memiliki karbohidrat yang relatif lebih tinggi
42
30,44%. Hal ini diduga bahwa tambelo menyimpan hasil pencernaan dalam
bentuk glikogen, karena sebagian besar juga makanan yang diperolehnya berasal
dari kayu bakau sehingga sistem pencernaannya dapat memanfaatkan selulosa dan
lignin pada kayu bakau. Hal ini diperkuat oleh Purchon (1968) yang mengatakan
bahwa sistem pencernaan yang dimiliki oleh shipworm atau tambelo mampu
mencerna selulosa 80% dan lignin 45 dan pada umumnya kerang-kerangan
menyimpan hasil pencernaannya dalam bentuk glikogen (gula otot) dan lemak.
4.1.3 Kandungan asam amino tambelo
Mutu protein dinilai dari perbandingan asam-asam amino yang terkandung
di dalam protein tersebut. Pada prinsipnya suatu protein yang dapat menyediakan
asam amino esensial dalam suatu perbandingan yang dapat menyamai kebutuhan
manusia dikatakan mempunyai mutu yang tinggi, sebaliknya protein yang kurang
satu atau lebih asam-asam amino esensial mempunyai mutu yang rendah
(Winarno 2008). Asam amino merupakan monomolekul dari protein yang
memiliki fungsi penting bagi organisme hidup.
Tambelo mengandung 17 jenis asam amino. Jenis asam amino yang
tertinggi dalam tambelo adalah asam glutamat (3,55%), sedangkan asam amino
isoleusin yang terendah (0,34%). Kandungan asam amino dari tambelo disajikan
dalam Gambar 10, sedangkan kromatogram standar asam amino dapat dilihat
pada Lampiran 3 dan kromatogram asam amino tambelo pada lampiran 4.
Gambar 11 Histogram kandungan asam amino dari tambelo.
1,74 1,631,29 1,25
0,34 0,56
1,190,72
1,26
0,37 0,41 0,41
1,81 1,80
1,01
2,85
3,55
0,000,501,001,502,002,503,003,504,00
Kad
ar A
sam
Am
ino
(%
)
Jenis Asam Amino
43
Kandungan asam amino yang terdapat di dalam tambelo diklasifikasikan
menjadi sembilan jenis asam amino yang terdiri dari asam amino esensial, asam
amino non esensial, asam amino asam, asam amino basa, asam amio netral, asam
amino aromatik, asam amino sulfur, asam amino hidrofilik, dan asam amino
hidrofobik, dapat disajikan pada Tabel 4.
Tabel 4 Klasifikasi asam amino berdasarkan sifat fisik dan kimia dari tambelo
Jenis asam
amino Klasifikasi asam amino (% berat protein)
AAE AANE AAA AAB AAN AAR AAS AAHi AAHb Aspartat 2,85 2,85 2,85 Glutamat 3,55 3,55 3,55 Serin 1,26 1,26 1,26 Glisin 1,74 1,74 1,74 Alanin 1,63 1,63 1,63
Prolin 0,41 Tirosin 0,72 0,72 0,72 0,72 Sistein 0,41 Histidin 1,01 1,01 1,01 Treonin 0,37 Ariginin 1,80 1,80 1,80 Valin 1,29 1,29 1,29 Metionin 0,56 0,56 0,56 0,56 Isoleusin 0,34 Leusin 1,25 1,25 1,25 Fenilalanin 1,19 1,19 1,19 1,19 Lisin 1,81 1,81 1,81 TOTAL 8,97 13,58 6,4 4,62 9,64 1,91 0,56 14,74 5,92 % dalam
total asam
amino
40,42 61,20 28,84 20,82 43,44 8,61 2,52 66,43 26,68
AANE = asam amino non esensial; AAE = asam amino esensial; AAA = asam amino asam;
AAB = asam amino basa; AAN = asam amino netral; AAR= asam amino aromatik; AAS =
Asam amino sulfur; AAHi = asam amino hidrofilik; AAHb = asam amino hidrofobik.
Asam glutamat adalah asam amino non esensial yang dapat disintesis dari
gugus amida pada molekul glutamin yang diubah menjadi karboksilat melalui
proses hidrolisis asam atau basa. Asam glutamat bermanfaat untuk menahan
konsumsi alkohol berlebih, mempercepat penyembuhan luka pada usus,
meningkatkan kesehatan mental dan meredam depresi (Linder 1992). Menurut
the international glutamate information service (IGIS), glutamat yang berasal dari
makanan merupakan sumber energi utama bagi usus. Kajian-kajian menggunakan
isotop-isotop stabil menunjukkan bahwa usus mendapatkan sebagian besar energi
44
dari metabolisme asam amino. Usus sangat membutuhkan glutamat, dan telah
diperlihatkan bahwa semua glutamat yang dimakan dari bahan makanan hanya
4 % yang keluar dari tubuh.
Glutamat yang berasal dari makanan diperlukan bersama dengan sistin dan
glisin untuk produksi glutathion, suatu molekul antioksidan yang memainkan
peranan penting dalam mekanisme daya tahan tubuh serta perbaikan kerusakan sel
dan jaringan tubuh. Glutamat bersama dengan glutamin merupakan asam amino
yang paling berlimpah dari 20 jenis asam amino yang mencapai 20 persen dari
asam-asam amino pada usus (the international glutamate information service).
Sistin merupakan penghasil taurin yaitu suatu komponen gliutathion.
Glutathion merupakan pelindung otak dan hati dari kerusakan akibat obat atau
racun, alkohol dan unsur-unsur lain yang dapat membahayakan tubuh. Sistin juga
diperlukan untuk kesehatan kulit, detoksifikasi dari tubuh (dalam kaitannya
dengan sulfur) serta penghasil kolagen yang digunakan untuk kekenyalan kulit
dan tekstur. Secara medis, sistin digunakan untuk memperoduksi hati dan
mencegah atau meredakan penyakit yang berbahaya (Cat 2000). Asam-asam
amino hasil pemecahan protein sebelum ditransportasikan ke hati terlebih dahulu
diabsorbsi melalui sel-sel mukosa usus dan selanjutnya di serap oleh vena untuk
kemudian ditranspor ke hati. Usus merupakan garis pertahanan pertama tubuh
karena dari semua organ pencernaan, usus mempunyai kontak terbesar dengan
lingkungan eksternal dalam bentuk makanan.
Keterkaitan dengan pengunaan tambelo sebagai obat tradisional maka
ditinjau dari komposisi asam amino yang diperoleh dapat dijelaskan bahwa
umumnya asam-asam amino ini mempunyai kegunaan besar bagi kesehatan
manusia. Beberapa asam amino ini secara umum mempunyai kegunaan besar
untuk kesehatan manusia, baik secara langsung maupun tidak langsung di
antaranya adalah metionin, isoleusin, leusin, histidin, lisin, phenilalanin, asam
aspartat, asam glutamat, valin, glisin, alanin, prolin, sistin, dan treonin.
Metionin merupakan suatu antioksidan yang baik karena dapat mensuplai
belerang, menginaktifkan radikal bebas, dan membantu meningkatkan daya ingat.
Metionin juga merupakan prekusor sistin yang merupakan asam amino penghasil
glutathion untuk detoksifikasi di hati, dan juga merupakan salah satu amino yang
45
diperlukan untuk pembuatan creatine monohydrate di dalam tubuh, yaitu suatu
campuran yang penting untuk menghasilkan energi dan pertumbuhan otot dan
pergerakan tubuh. Metionin juga dapat berperan dalam menstabilkan lemak,
membuat pencernaan menjadi lebih baik, dan sebagai antioksidan. Kekurangan
metionin dapat menyebabkan akumulasi lemak di hati, pertumbuhan yang lambat,
lemah, luka mengkerut, dan edema. Secara medis, metionin digunakan untuk
gangguan depresi, radang sendi, dan penyakit hati atau liver (Cat 2006).
Valin bermanfaat dalam pertumbuhan dan perbaikan jaringan otot serta
menjaga keseimbangan nitrogen dan mengatur penggunaan glukosa. Valin
merupakan salah satu dari tiga asam amino rantai cabang (yang lain adalah leusin
dan isoleusin) yang meningkatkan energi, meningkatkan daya tahan tubuh,
membantu proses pemulihan, memperbaiki jaringan otot, menurunkan kadar gula
darah, dan meningkatkan produksi hormon pertumbuhan. Penambahan valin harus
selalu dikombinasikan dengan isoleusin dan leusin pada rasio miligram
(Bonderud 2011).
Isoleusin bermanfaat dalam mempercepat penyembuhan luka, mengatur
gula darah, dan membantu dalam pembentukan hemoglobin serta merupakan
pertahanan utama tubuh untuk melawan infeksi akibat luka. Leusin bermanfaat
dalam pengaturan gula darah, pertumbuhan dan perbaikan jaringan kulit, tulang
dan otot serta membantu dalam penyembuhan luka, mengatur energi, dan
membantu penguraian di dalam otot (Cat 2006).
Histidin di dalam tubuh diperlukan untuk pertumbuhan dan perbaikan dari
semua jenis jaringan. Histidin berperan penting dalam pemeliharaan dan
pembuatan glial sel saraf yang disebut oligo-dendrocytes (selendang atau
pembungkus) dan mencegah kerusakan otak dan jaringan saraf dalam tulang
punggung. Histidin merupakan suatu prekusor asam amino non esensial, yang
mana histidin akan membentuk sistem imun sebagai respon terhadap suatu reaksi
alergi. Secara medis, histidin digunakan dalam mengobati radang sendi dan
ketulian saraf.
Alanin merupakan sebuah sumber penting energi untuk jaringan otot, otak
dan sistem saraf pusat, memperkuat sistem kekebalan tubuh dengan memproduksi
antibodi, membantu dalam metabolisme gula dan asam organi. Leusin bermanfaat
46
dalam pengaturan gula darah, pertumbuhan dan perbaikan jaringan kulit, tulang
dan otot , membantu dalam penyembuhan luka, mengatur energi serta membantu
penguraian di dalam otot (Cat 2006).
Arginin penting untuk kesehatan reproduksi pria karena 80% cairan semen
terdiri dari arginin. Arginin berperan dalam membantu detoksiifikasi hati pada
sirosis hati dan fatty liver, meningkatkan sistem imun, menghambat pertumbuhan
sel tumor dan kanker serta membantu pelepasan hormon pertumbuhan
(Supamas 2011).
Fenilalanin secara medis digunakan untuk perawatan radang sendi dan
depresi. Kekurangan phenilalanin akan menyebabkan tubuh lemah, lesu,
kerusakan hati dan pertumbuhan terhambat. Lisin digunakan di dalam tubuh
untuk penyerapan kalsium serta pembentukan tulang dan pertumbuhan otot seperti
mobilisasi lemak untuk digunakan sebagai energi. Lisin juga bermanfaat dalam
menjaga keseimbangan nitrogen serta membantu menjaga badan pada saat stress
berat dan kondisi yang melelahkan. Lisin juga diperlukan dalam membentuk
antibody, hormone (GH, testosteron, hormon insulin), enzim, kolagen dan untuk
memperbaiki jaringan yang rusak dan juga membantu dalam membangun protein
otot yang baru, dan manfaatnya untuk cardiovascular meliputi pemeliharaan
kesehatan pembuluh darah. Kekurangan lisin akan menyebabkan kekacauan
enzim, kehilangan energi, kerontokan rambut, berat badan menurun, tidak
berselera dan hilang kosentrasi (Cat 2006).
Treonin bermanfaat dalam mencegah penumpukan lemak di hati,
membantu kerja hati dan fungsi lipotropiknya. Kekurangan treonin akan
menyebabkan warna kulit menjadi tidak normal. Hati mempunyai fungsi untuk
melakukan metabolisme protein, lemak, dan karbohidrat. Apabila fungsi hati
terganggu maka akan berdampak pada terganggunya proses metabolisme tersebut.
Penderita gangguan hati, seperti sakit liver membutuhkan makanan yang tinggi
protein dan karbohidrat serta lemak dengan kadar yang sedang karena hal ini akan
meringankan kerja hati untuk memperoleh energi yang besar untuk aktivitasnya
(Carroli et al. 2006).
Tabel 5 menunjukkan skor kimia asam amino esensial tambelo dengan
cara melakukan perbandingan antara asam amino protein esensial tambelo dengan
47
referensi dari FAO/WHO (1991). Berdasarkan hasil pengamatan, diketahui bahwa
angka terendah ditunjukkan oleh asam amino isoleusin dan treonin masing-
masing sebesar 19,87% dan 21,63% sehingga diperoleh skor kimia protein
tambelo sebesar 19,87% dengan asam amino pembatas yang utama berada pada
isoleusin. Hal ini berarti bahwa protein yang terkadung dalam tambelo dapat
dimanfaatkan oleh tubuh hanya sekitar 19,87%, sehingga asam amino esensial
perlu difortifikasi untuk meningkatkan nilai gizi protein tambelo.
Tabel 5 Skor kimia asam amino esensial tambelo
Asam amino Kadar dalam
tambelo
(mg/g prot)
Referesi FAO
(1991) (mg/g prot)
Skor kimia amino
esensial (%)
Isoleusin 7,95 40 19,87
Leusin 29,23 70 41,75
Lisin 42,32 55 76,94
Metionin 13,09 35 37,41
Fenilalanin + tirosin 22,33 60 37,22
Treonin 8,65 40 21,63
Valin 30,16 50 60,32
Keterangan : tritofan bukan asam amino pembatas sehingga tidak dilakukan analisis
4.1.4 Kandungan asam lemak tambelo
Asam lemak adalah asam organik yang terdapat sebagai ester trigliserida
atau lemak, baik yang berasal dari hewan atau tumbuhan. Analisis asam lemak
dilakukan dengan menggunakan alat kromatografi gas untuk mengetahui
komposisi asam lemak yang terdapat pada tambelo. Berdasarkan analisis
kualitatif, keragaman asam lemak pada serbuk tambelo dapat teridentifikasi
15 jenis asam lemak, yang terdiri dari 7 jenis asam lemak jenuh (SFA), 5 jenis
asam lemak tidak jenuh tunggal atau monounsaturated fatty acid (MUFA) dan 3
jenis asam lemak jenuh ganda atau polyunsaturated fatty acid (PUFA).
Kromatogram standar asam lemak disajikan pada Lampiran 5, sedangkan
kromatogram asam lemak daging tambelo disajikan pada Lampiran 6. Komposisi
asam lemak dalam tambelo dapat dilihat pada Tabel 6.
Jenis asam lemak yang banyak terkandung di dalam serbuk tambelo adalah
asam palmitoleat (C16:1) (14,55 %). Asam palmitoleat adalah salah satu jenis
48
asam lemak tak jenuh tunggal (MUFA) yang merupakan jenis asam lemak yang
memiliki satu ikatan rangkap pada rantai karbonnya. Asam lemak ini tergolong
dalam asam lemak rantai panjang (LCFA), yang kebanyakan ditemukan dalam
minyak zaitun, minyak kedelai, minyak kacang tanah, minyak biji kapas,
dan canola. Asam lemak tak jenuh tunggal secara umum memiliki efek yang
menguntungkan terhadap kadar kolesterol dalam darah, terutama bila digunakan
sebagai pengganti asam lemak jenuh. Dalam hal penurunan kadar kolesterol
darah, asam lemak tak jenuh tak tunggal (MUFA) lebih efektif bila dibandingkan
dengan asam lemak tak jenuh jamak (PUFA) sehingga pemanfaatan asam oleat
untuk formulasi makanan olahan menjadi popular (Achadi 2010).
Tabel 6 Komposisi asam lemak dalam tambelo
No Asam lemak Hasil (%berat minyak)
Asam Lemak Jenuh
1 Miristat (C14:0) 5,80
2 Pentadekanoat (C15:0) 0,10
3 Palmitat (C16:0) 13,69
4 Heptadekanoat (C17:0) 0,66
5 Stearat (C18:0) 3,04
6 Arakidat (C20:0) 0,22
7 Heneikosanoat acid (C21:0) 0,80
Asam Lemak Tak Jenuh
8 Miristoleat (C14:1) 0,33
9 Palmitoleat (C16:1) 14,55
10 Cis-10-Heptadekanoat (C17:1) 0,24
11 Oleat (C18:1ω9) 1,94
12 Linolenat (C18:3ω3) 0,10
13 Cis-8,11,14-Eikosatrienoat (C20:3ω6) 0,13
14 EPA (C20:4ω3) 0,13
15 Arakidonat (20:4ω6) 0,29
Asam oleat (omega-9) yang terkandung di dalam tambelo kering sebesar
1,94%. Asam oleat memiliki sifat lebih stabil dan lebih baik perannya
dibandingkan PUFA (PolyUnsaturated Fatty Acid), meskipun PUFA dapat
menurunkan kolesterol LDL. Asam lemak tak jenuh ganda (PUFA) memiliki
49
kelemahan, yaitu dapat menurunkan HDL, sedangkan MUFA mampu
menurunkan LDL dan meningkatkan HDL. Hasil penelitian yang dilakukan oleh
Mensink (1987) diacu dalam Achadi (2010) menunjukkan bahwa MUFA mampu
menurunkan LDL dan meningkatkan HDL yang lebih besar dibandingkan dengan
omega-3 dan omega-6.
Jenis-jenis asam lemak tak jenuh ganda (PUFA) yang terkandung dalam
tambelu kering, yaitu asam linoleat (C18:3ω3), asam eikosatrienoat (C20:3ω6),
asam arakhidonat (C20:4 ω6), dan asam eikosapentanoat/EPA (C20:4ω3). Asam
lemak tak jenuh ganda berperan penting dalam transpor dan metabolisme lemak,
fungsi imun, mempertahankan fungsi, dan integritas membran sel. Asam lemak
omega-3 dapat membersihkan plasma dari lipoprotein kilomikron dan
kemungkinan juga dari VLDL (Very Low Density Lipoprotein) serta dapat
menurunkan produksi trigliserida dan apolipoprotein beta di dalam hati
(Achadi 2010).
4.1.5 Kandungan mineral tambelo
Sekitar 96% bahan makanan terdiri dari bahan organik dan air. Sisanya
terdiri dari unsur-unsur mineral. Sampai sekarang telah diketahui ada empat belas
unsur mineral yang berbeda jenisnya diperlukan manusia agar memiliki kesehatan
dan pertumbuhan yang baik. Unsur-unsur ini terdapat dalam tubuh dalam jumlah
yang cukup besar dan karenanya disebut unsur mineral makro. Unsur mineral
lain, seperti besi, iodium, mangan, tembaga, zink, kobalt, dan fluor hanya terdapat
dalam tubuh dalam jumlah kecil saja, karena itu disebut trace element atau
mineral mikro. Di dalam tubuh unsur mineral berfungsi sebagai zat pembangun
dan pengatur. Kandungan mineral yang terdapat pada tambelo disajikan pada
Tabel 7. Kandungan mineral pada tambelo diuji karena peranannya sebagai
antioksidan dalam sistem pertahanan tubuh terhadap reaksi oksidasi radikal bebas
dan mineral ini tergabung dalam enzim antioksidan yang berperan melindungi
membran sel dan komponen dalam sitosol.
Unsur kalsium (Ca) juga dianalisis bukan karena sebagai antioksidan,
tetapi karena perannya yang sangat penting untuk pembentukan tulang dan gigi
terutama pada masa pertumbuhan dan ibu hamil. Kadar Kalsium dari tambelo
adalah 3532,46 ppm. Kekurangan Kalsium akan menyebabkan osteoporosis dan
50
akan mempengaruhi mental dan juga menyebabkan osteomalasia. Penyerapan Ca
akan dipermudah dengan adanya vitamin D (Muchtadi 2009).
Tabel 7 Kandungan mineral yang terdapat pada tambelo
No Parameter Hasil (ppm)
Mineral Makro
1. Kalsium (Ca) 3532,46
2. Klorida (Cl 5,41
3. Kalium (K) 626,40
4. Magnesium (Mg) 3,05
5. Mangan (Mn) <0,02
6. Natrium (Na) 435,42
Mineral Mikro
7. Besi (Fe) 1373,45
8. Seng (Zn) 12,30
9. Tembaga (Cu) 0,98
10. Fosfor (P) 2363,06
11. Selenium (Se) 0,18
Peranan zat besi (Fe) berhubungan dengan kemampuannya dalam reaksi
oksidasi dan reduksi. Secara kimia, zat besi merupakan unsur yang sangat reaktif
sehingga mampu berinteraksi dengan oksigen. Dalam keadaan tereduksi, besi
kehilangan dua elektron sehingga memiliki dua sisa muatan positif (Fe2+
/fero),
dalam keadaan teroksidasi, besi kehilangan tiga elektron sehingga memiliki tiga
sisa muatan positif (Fe3+
/feri) karena dapat berada dalam dua bentuk ion ini, besi
berperan dalam respirasi sel, yaitu sebagai kofaktor bagi enzim-enzim yang
terlibat dalam reaksi oksidasi reduksi (FAO/WHO 2001; Almatsier 2006).
Aktivitas superoksida dismutase (SOD) dan katalase tergantung pada zat
besi. Antioksidan enzimatis bekerja dengan cara mencegah terbentuknya senyawa
radikal baru (Marks et al. 2000; Winarsi 2007). Zat besi sebagian besar berada
dalam hemoglobin. Zat besi juga berperan dalam imunitas dalam pembentukkan
sel-sel limfosit.
Kandungan seng (Zn) pada tambelo segar adalah 12,30 ppm. Seng
merupakan mineral penting pada berbagai sistem enzim dan hormon. Sebagai
51
salah satu mineral imunitas yang berfungsi untuk maturasi, diferensiasi,
proliferasi, dan aktivasi sel T. Kemampuan tubuh seseorang untuk menyerap seng
menurun sesuai dengan pertambahan usia sehingga penting untuk meningkatkan
intake mineral seng ketika usia 40-an. Keadaan tubuh yang mengalami stres
karena trauma, terkena polusi lingkungan, dan luka dapat menghabiskan suplai
seng dalam tubuh (Wirahadikusumah 1985).
Hasil penelitian Winarsi (2004) yang memberikan minuman susu skim
yang diperkaya dengan isoflavon kedelai sebesar 100 mg dan 8 mg ZnSO4 yang
diberikan setiap hari selama 2 bulan pada wanita premenopause diketahui dapat
menurunkan sindrom premenopause, meningkatkan aktivitas enzim antioksidan,
kadar IgG antiTT, dan hormon timulin 1. Seng (Zn) berperan dalam sistem
pertahanan tubuh dengan cara berkonjugasi dengan thiol sehingga menghambat
pembentukan ion superoksida. Mineral Zn sebagai komponen protein yang
mempunyai gugus SH-(metallothionine) berperan sebagai pembersih radikal
bebas. Mineral Zn juga merupakan komponen enzim yang berperan dalam
perbaikan asam nukleat (Harris diacu dalam Ridwan 1997).
Mineral Cu berperan melalui aktivitas enzim superoksida dismutase
(SOD). Enzim superoksida dismutase mempunyai substrat spesifik, yaitu ion
superoksida. Peran tembaga sebagai kofaktor maupun sebagai pengatur enzim
SOD cukup besar. Jika tubuh kekurangan tembaga maka akan terjadi peningkatan
peroksida lipid (Harris diacu dalam Ridwan 1997). Hasil analisis diketahui bahwa
kandungan tembaga (Cu) yang terdapat pada tambelo nilainya kecil, yaitu
0,98 ppm.
Selenium (Se) adalah mineral penting yang sangat dibutuhkan oleh tubuh
sebagai antioksidan untuk meredam aktivitas radikal bebas dan merupakan bagian
penting enzim glutation peroksidase, yang dapat menghancurkan peroksida yang
terbentuk dari hasil oksidasi lemak di dalam tubuh (Mucthadi D 2009). Selenium
tidak diproduksi oleh tubuh, tetapi diperoleh dari konsumsi makanan sehari-hari.
Angka kecukupan Se per hari yang dianjurkan oleh Widya Nasional Pangan dan
Gizi (2004) adalah 5-20 µg untuk bayi dan anak di bawah 10 tahun dan 20-30 µg
untuk pria dan wanita berumur di atas 10 tahun sebesar. Khusus ibu hamil dan
52
menyusui mendapat tambahan, masing-masing sebanyak 5 dan 10 µg/orang/hari
(Winarno 2008). Kadar Selenium di dalam tambelo adalah 0,18 ppm.
4.2 Penelitian Tahap Kedua
4.2.1 Rendemen ekstrak tambelo
Ekstraksi merupakan salah satu cara pemisahan satu atau lebih komponen
dari suatu bahan. Penelitian ini dilakukan proses ekstraksi dengan metode
maserasi yang dilanjutkan dengan partisi cair-cair. Rendemen ekstrak tambelo
yang terbesar adalah ekstrak kasar metanol 5,72%, sedangkan ekstrak tambelo
yang mengandung rendamen relatif kecil adalah ekstrak n-heksana (2,19% ) dan
etil asetat (2,86%). Berdasarkan hasil rendemen ekstrak tambelo tersebut,
terbukti bahwa tambelo mengandung berbagai senyawa dengan tingkat kepolaran
yang berbeda-beda. Besarnya rendemen ekstrak metanol diduga berkaitan dengan
sifat pelarut metanol yang memiliki kemampuan pemisahan komponen dari bahan
yang lebih baik. Hal ini sesuai dengan pernyataan Heath dan Reineccius (1986)
bahwa metanol mampu mengekstrak senyawa organik, sebagian lemak serta tanin
yang menyebabkan hasil ekstraksi metanol cukup kuat. Selain itu, pelarut metanol
memiliki nilai kostanta dielektrik tinggi jika dibandingkan dengan pelarut yang
lain sehingga pelarut metanol dapat membuka dinding sel yang mengakibatkan
hampir semua senyawa dapat tertarik keluar dari dalam sel.
4.2.2 Kandungan fitokimia ekstrak tambelo
Analisis fitokimia adalah salah satu cara untuk mengetahui kandungan
metabolit sekunder pada suatu tanaman atau hewan. Kandungan fitokimia ekstrak
tambelo dapat dilihat pada Tabel 8.
Tabel 8 Kandungan fitokimia ekstrak tambelo
Uji Fitokimia Jenis Pelarut
n-Heksana Etil Asetat Metanol Alkaloid + + + Flavonoid + + + Phenol Hidroquinon - - - Steroid + + + Triterpenoid + + + Saponin + + + Tanin - - -
53
Berdasarkan hasil uji fitokimia ekstrak kasar tambelo, bahwa ekstrak
metanol memiliki senyawa alkaloid yang sangat tinggi. Hal ini diduga senyawa
alkaloid merupakan senyawa polar, karena senyawa yang terbawa pada proses
ekstraksi adalah senyawa yang mempunyai polaritas sesuai dengan pelarutnya
yaitu pelarut metanol. Khopkar (2003) berpendapat bahwa bahan dan senyawa
kimia akan mudah larut pada pelarut yang relatif sama kepolarannya. Pelarut
yang bersifat polar mampu mengekstrak senyawa alkaloid kuartener, komponen
fenolik, karotenoid, tanin, gula, asam amino, dan glikosida (Harborne 1987).
Alkaloid adalah senyawa alami amina, baik pada tanaman, hewan, ataupun
jamur dan merupakan produk yang dihasilkan dari proses metabolisme sekunder,
saat ini diketahui sebanyak 5.500 jenis alkaloid (Harborne 1987). Pada umumnya,
alkaloid bebas basa hanya larut dalam pelarut organic, meskipun beberapa
pseudoalkaloida dan protoalkaloida yang larut dalam air. Garam alkaloida
kuarterner sangat larut dalam air (Sastrohamidjojo 1996).
Ekstrak etil asetat tambelo (Tabel 8) diketahui mengandung senyawa
flavonoid yang tinggi. Hal ini karena pelarut etil asetat bersifat semi polar
sehingga memiliki kemampuan melarutkan senyawa polar dan non polar.
Flavonoid merupakan senyawa polar yang mempunyai sejumlah gugus hidroksil
yang tak tersulih atau suatu gula sehingga akan larut dalam pelarut polar seperti
etanol, metanol, butanol, aseton, dimetilsulfoksida, dimetilformamida, dan air
(Harborne 1987).
Flavonoid merupakan golongan senyawa polifenol yang terdiri atas
15 karbon sebagai kerangka dasarnya. Kelima belas atom karbon tersebut
membentuk dua cincin aromatik (C6) yang terikat pada rantai propana (C3)
sehingga membentuk susunan C6-C3-C6. Berdasarkan susunan ini dapat
dihasilkan 3 jenis struktur, yaitu flavonoid (1’B-2C), isoflavonoid (1’B-3C), dan
1 neoflavonoid (1’B-4C). Menurut Pratt dan Hudson (1990), polifenolik yang
dapat berupa golongan flavonoid, turunan asam sinamat, yang memiliki aktivitas
antioksidan meliputi flavon, flavonol, isoflavon, katekin, dan kalkon.
Cos et al. (1998) melaporkan bahwa beberapa senyawa flavonoid bersifat
antioksidan dan dapat menghambat kerja enzim xantin oksidase maupun reaksi
superoksida. Kemudian dilaporkan juga senyawa flavonoid dari stereospermum
54
personatum selain bersifat antioksidan, senyawa tersebut juga dapat menghambat
kerja enzim xantin oksidase (Kumar et al. 2006).
Berdasarkan hasil uji fitokimia, ekstrak n-heksana tambelo mengandung
senyawa steroid yang tinggi. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa yang terdapat
pada ekstrak n-heksana bersifat non polar. Steroid merupakan golongan senyawa
triterpenoid yang dapat diklasifikasikan menjadi steroid dengan atom karbon tidak
lebih dari 21 yaitu sterol, sapogenin, glikosida jantung dan vitamin D. Steroid
alami berasal dari berbagai transformasi kimia dua triterpena yaitu lanosterol dan
sikloartenol. Senyawa steroid dapat digunakan sebagai bahan dasar pembuatan
obat (Harbone 1987). Ada beberapa steroid seperti, fukosterol, diisolasi dari
sumber daya hayati laut bersifat non toksik dan mempunyai khasiat menurunkan
kolesterol dalam darah dan mendorong aktivitas antidiabetes
(Bhakuni et al. 2005).
4.2.3 Aktivitas antioksidan ekstrak tambelo
Pengujian aktivitas antioksidan dalam penelitian ini menggunakan metode
DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) (Molyneux 2004; Vattem dan Shetty
2006). Senyawa DDPH adalah suatu radikal bebas stabil yang dapat bereaksi
dengan radikal lain membentuk senyawa yang lebih stabil dan dapat bereaksi
dengan atom hidrogen membentuk DPPH tereduksi (diphenylpicrylhydrazine)
yang stabil. Suatu senyawa dapat dikatakan memiliki aktivitas antioksidan
apabila senyawa tersebut mampu mendonorkan atom hidrogennya ditandai
dengan perubahan warna ungu menjadi kuning pucat (Molyneux 2004).
Perubahan warna yang mengindikasikan adanya reaksi peredaman radikal
bebas DPPH oleh senyawa antioksidan baik pada larutan ekstrak tambelo maupun
pada larutan BHT dan vitamin super ester C. Perubahan warna pada ekstrak
tambelo dapat dilihat pada Lampiran 7. Besarnya daya peredaman radikal bebas
DPPH maka dilakukan pengukuran absorbansi dengan spektrofotometer pada
panjang gelombang 515 nm. Pengukuran absorbansi dilakukan pada setiap
sampel antioksidan yang dibuat dengan berbagai konsentrasi. Secara teoritis,
semakin tinggi kosentrasi antioksidan yang ditambahkan pada larutan DPPH,
maka nilai absorbansi akan semakin turun karena warna larutan bertambah
kuning. Peredaman (inhibisi) terhadap radikal bebas dinyatakan dalam persen,
55
dan aktivitas antioksidan dinyatakan dengan IC50 (Inhibition Concentration) yang
menunjukkan kosentrasi sampel antioksidan yang dapat menghambat atau
meredam aktivitas antioksidan yang semakin tinggi atau dengan kata lain IC50
sebagai kosentrasi senyawa antioksidan yang menyebabkan hilangnya 50%
aktivitas DPPH. Semakin kecil nilai IC50 berarti aktivitas antioksidannya semakin
tinggi (Molyneux 2004). Nilai IC50 dari ekstrak tambelo, BHT, dan vitamin super
ester C disajikan pada Gambar 12.
Gambar 12 Nilai IC50 dari ekstrak tambelo, BHT, dan vitamin super ester C.
Tabel 9 memperlihatkan bahwa nilai aktivitas antioksidan pada BHT
dengan nilai IC50 3,35 ppm dan vitamin super ester C yaitu 8,27 ppm jauh leih
ebih kecil dibandingkan dengan ketiga ekstrak kasar tambelo
Tabel 9 Aktivitas antioksidan ekstrak tambelo
Sampel % Inhibisi IC50
(ppm) 4 ppm 6 ppm 8 ppm 10 ppm
BHT 55,56 65,51 81,02 94,44 3,35
Vitamin super ester C
15,74 27,78 51,16 63,19 8,27
Berdasarkan Gambar 12, menunjukkan ekstrak etil asetat tambelo
memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat dari kedua ekstrak yang lainnya,
dengan nilai rata-rata IC50 sebesar 15.00 ppm. Ekstrak metanol tambelo memiliki
aktivitas antioksidan yang kuat dengan nilai IC50 sebesar 85,86 ppm, sedangkan
3,35 8,27
262,77 29,53
15 3,83
84,01 4,21
0
50
100
150
200
250
300
BHT Vitamin
ester super C
n-heksana Etil asetat Metanol
Rata
-rata
IC
50
(p
pm
)
Sampel
56
ekstrak n-heksana tambelo memiliki aktivitas antioksidan yang lemah dengan
nilai IC50 sebesar 262,77 ppm. Rendahnya aktivitas antioksidan ekstrak n-
heksana diduga karena pelarut yang digunakan untuk melarutkan ekstrak n-
heksana tambelo dan kristal DPPH pada penelitian ini adalah metanol yang
bersifat polar. Hal ini menyebabkan komponen bioaktif yang bersifat non polar
pada ekstrak n-heksana tidak terlarut sepenuhnya pada pelarut tersebut sehingga
berpengaruh pada nilai IC50.
Bois (1958) diacu dalam Molyneux (2004) menyatakan bahwa suatu
senyawa dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat apabila nilai IC50 kurang dari
50 ppm, kuat apabila nilai IC50 antara 50-100 ppm, sedang apabila nilai IC50
berkisar antara 100-150 ppm, dan lemah apabila nilai IC50 berkisar antara
150-210 ppm.
Pengujian aktivitas antioksidan dari masing-masing ekstrak kasar tambelo
memiliki kekuatan penghambatan yang berbeda-berbeda antara yang satu dengan
yang lainnya dan menghasilkan hubungan antara kosentrasi ekstrak kasar yang
digunakan dengan persen inhibisinya. Hanani et al. (2005) menyatakan bahwa
presentase penghambatan (% inhibisi) terhadap aktivitas radikal bebas akan ikut
meningkat seiring dengan meningkatnya kosentrasi, baik pada kosentrasi ekstrak
maupun pada kosentrasi standar (BHT dan vitamin super ester C). Perhitungan
persen inhibisi IC50 dan grafik regresi linear pada BHT, vitamin super ester C dan
ekstrak kasar tambelo dapat disajikan pada Lampiran 8.
4.2.4 Fraksi ekstrak terpilih
Fraksinasi terhadap ekstrak kasar tambelo dilakukan pada ekstrak yang
memiliki aktivitas antioksidan tertinggi, yaitu etil asetat. Sebelum dilakukan
fraksinasi terhadap ekstrak kasar etil asetat, dilakukan pencarian eluen terlebih
dahulu dengan menggunakan KLT. Eluen ini berfungsi sebagai fase gerak saat
fraksinasi. Eluen yang digunakan adalah n-heksana, kloroform, etil asetat,
metanol, dan etanol. Eluen dengan pemisahan terbaik kemudian dikombinasikan
satu dengan yang lainnya dengan berbagai perbandingan, dilakukan dengan
mencoba beberapa kombinasi untuk mengembangkan spot ekstrak terpilih pada
kromatografi lapis tipis (KLT). Kombinasi yang digunakan adalah yang terdiri
dari pelarut kloroform : metanol (9:1), n-heksana : etil asetat (1:1),
57
kloroform : metanol (17:3), dan n-heksana : etil asetat (8:2). Profil pola
pemisahan senyawa dengan eluen tersebut disajikan pada Lampiran 9a.
Berdasarkan analisis dengan menggunakan KLT, diperoleh eluen terbaik
yang terdiri dari campuran kloroform : metanol (9 : 1). Profil pemisahan
senyawa dengan eluen kloroform : metanol (9 : 1) disajikan pada Gambar 12.
Menurut Markam (1988), penggunaan kloroform : metanol sebagai eluen pada
perbandingan 15 : 1 sampai 3 : 1 dapat memisahkan senyawa flavonoid dengan
baik. Berdasarkan hasil fraksinasi tersebut (Gambar 12), diduga terdapat
sembilan jenis senyawa pada ekstrak etil asetat tambelo.
Hasil pengecekan terhadap fraksi tersebut, diduga bahwa masing-masing
fraksi telah menunjukkan adanya 1 spot dengan Rf yang berbeda. Berdasarkan
hasil fraksinasi kolom, diperoleh 10 fraksinasi gabungan yang disajikan pada
Lampiran 9b. Rendamen fraksi terbesar terdapat pada fraksi 1 (0,15748%) dan
rendamen terkecil pada fraksi 6 (0,00156%). Data rendamen hasil kolom disajikan
pada Lampiran 10. Kesepuluh fraksi tersebut kemudian dilakukan uji aktivitas
antioksidan dan uji fitokimia.
Gambar 12 Profil pemisahan senyawa dengan eluen kloroform : metanol (9 : 1)
4.2.5 Kandungan fitokimia fraksi tambelo
Berdasarkan hasil fraksinasi kolom, diperoleh 10 fraksinasi gabungan
yang kemudian dilakukan pengujian fitokimia. Berdasarkan analisis fitokimia
yang dilakukan, diketahui bahwa pada fraksi 9 dan fraksi 10 mengandung
senyawa triterpenoid, flavonoid, steroid, alkaloid dan fenol hidrokuinon. Hal ini
menunjukkan bahwa dalam fraksi tersebut mengandung senyawa yang
Rf1 = 0,5/8,5 = 0,06
Rf2 = 2,1/8,5 = 0,25
Rf3 = 3,4/8,5 = 0,4
Rf4 = 4,1/8,5 = 0,48
Rf5 = 5,5/8,5 = 0,65
Rf6 = 6,3/8,5 = 0,74
Rf7 = 7/8,5 = 0,82
Rf8 = 7,1/8,5 = 0,84
Rf9 = 8,2/8,5 = 0,97
58
memungkinkan dapat menghambat radikal bebas. Kandungan fitokimia fraksi
tambelo disajikan pada Tabel 10.
Tabel 10 Kandungan fitokimia fraksi tambelo
Nama
Kelompok Senyawa
Alkaloid Flavonoid Phenol
Hidroquinon Steroid Triterpenoid Saponin Tanin
Fraksi
1
+ + - + + - -
Fraksi
2
+ + + + + + -
Fraksi
3
+ + + + + - -
Fraksi
4
+ + - + + + -
Fraksi
5
+ + - + + - -
Fraksi
6
+ + + + + + -
Fraksi
7
+ + - + + + -
Fraksi
8
+ + + + + + -
Fraksi
9
+
+
+ + + + -
Fraksi
10
+ + + + + + -
4.2.6 Aktivitas antioksidan fraksi tambelo
Aktivitas antioksidan ekstrak dan fraksi-faraksi tambelo disajikan pada
Gambar 13. Berdasarkan hasil pengujian, diketahui bahwa aktivitas antioksidan
fraksi kesembilan mempunyai aktivitas antioksidan yang sangat kuat, terbukti
terjadi perubahan warna dari ungu menjadi kuning cerah dengan nilai IC50 8,87
ppm, disusul dengan fraksi 10 dengan nilai IC50 28,91 ppm. Perhitungan persen
inhibisi dari hasil fraksinasi dapat lihat pada Lampiran 12.
Gambar 14 memperlihatkan bahwa fraksi 9 memiliki daya inhibisi yang
setara dengan vitamin super ester C. Hal ini memungkinkan adanya senyawa
aktif dalam faksi 9 yang berpotensi sebagai obat antioksidan. Aktivitas
antioksidan pada fraksi tambelo lebih tinggi dibandingkan dengan ekstrak
tambelo. Hal ini berkaitan dengan fungsi proses fraksinasi yang bertujuan untuk
memperoleh pola pemisahan yang sempurna, fraksi yang didapat lebih murni
senyawa aktif dan lebih banyak terisolasi.
59
Gambar 14 Aktivitas antioksidan ekstrak dan fraksi-faraksi tambelo
Sebuah senyawa dapat disebut sebagai antioksidan bila senyawa tersebut
dapat mendonorkan atom hidrogennya dengan cepat sehingga dapat menghambat
terjadinya pembentukan radikal bebas (Sauriasari 2006). Pengujian dengan
menggunakan DPPH merupakan salah satu metode yang sederhana. Senyawa
DPPH merupakan radikal bebas yang bersifat stabil sehingga dapat bereaksi
dengan atom hidrogen yang berasal dari suatu senyawa antioksidan. Hasil reaksi
tersebut berupa DPPH tereduksi (yang tidak reaktif lagi karena telah mendapatkan
donor hidrogen (Molyneux 2004). Ketika DPPH menerima elektron atau radikal
hidrogen, maka akan terbentuk molekul diamagnetik yang stabil. Interaksi
antioksidan dengan DPPH baik secara transfer elektron atau radikal hidrogen,
akan menetralkan karakter radikal bebas dari DPPH. Jika semua elektron pada
radikal bebas DPPH menjadi berpasangan. Mekanisme penghambatan radikal
DPPH dapat dilihat pada Gambar 15.
Gambar 15 Mekanisme penghambatan radikal DPPH’ Keterangan: RH = asam lemak tidak jenuh
R = radikal bebas
15
103,514,63
63,502,43
61,642,68
76,875,94
5,2186,04 74,49
3,40 58,324,29 43,17
2,06
8,871,90
28,914,69
0
20
40
60
80
100
120
Ekstrak etil
asetat
Fraksi 1
Fraksi 2
Fraksi 3
Fraksi 4
Fraksi 5
Fraksi 6
Fraksi 7
Fraksi 8
Fraksi 9
Fraksi 10
Rat
a-ra
ta IC
50
Estrak kasar dan Hasil Fraksi
60
4.2.7 Identifikasi senyawa fraksi teraktif
Liquid chromatography mass spectrofotometer (LC-MS) merupakan
metode analisis kuantitatif yang merupakan kombinasi antara kromatografi cair
dengan spektroskopi massa, Instrumentasi LC-MS terdiri atas inlet-LC, sumber
ion, tekanan permukaan, massa analyzer, detektor, instrumen kontrol dan proses
data.Analisis senyawa menggunakan LC-MS dilakukan pada fraksi terbaik
(fraksi 9). Analisi LC/MS yang dilakukan secara electrospray ionisation.
Berdasarkan analisis LC-MS sampel fraksi 9 dengan berat molekul 352.
Data spektrum sampel fraksi 9 dapat dilihat pada Lampiran 11. Berdasarkan
database MarinLit (Blunt and Blunt 2008), terdapat empat struktur senyawa yang
terbagi atas tiga komponen, yaitu farnesic acid glyceride, sesquiterpenoic acid
glyceride, dan labdane diterpenoid. Ketiga komponen tersebut tergolong dalam
kelompok senyawa terpenoid. Struktur senyawa tersebut disajikan pada Gambar
16.
(a) (b)
Komponen 1 Farnesic acid glyceride
(c) (d)
Komponen 2 sesquiterpenoic acid glyceride Komponen 3 Labdane diterpenoid
Gambar 16 Komponen fraksi teraktif dari tambelo dengan massa 352 m/z
yang terdeteksi sebagai kelompok senyawa terpenoid.
61
Terpenoid adalah senyawa alam yang terbentuk dengan proses biosintetis,
terdistribusi luas dalam dunia tumbuhan dan hewan. Terpenoid yang disebut juga
isoprenoid, yang dapat dikelompokkan menjadi monoterpen (C10), seskuiterpen
(C15), diterpen (C20), triterpen (C30), tetraterpen (40), dan politerpen (≥ 40)
(Sirait 2007). Berdasarkan pengelompokan dari senyawa terpenoid tersebut,
komponen 1 farnesic acid glyceride dan komponen 2 sesquiterpenoic acid
glyceride termasuk di dalam kelompok senyawa seskuiterpenoid. Seskuiterpenoid
merupakan senyawa terpenoid yang dibangun oleh 3 unit isoprena yang terdiri
dari kerangka asiklik dan bisiklik dengan kerangka dasar naftalen. Secara umum
senyawa seskuiterpenoid ini mempunyai bioaktifitas yang cukup besar, di
antaranya adalah sebagai antifeedant, hormon, antimikroba, antibiotik dan toksin
serta regulator pertumbuhan tanaman dan pemanis. Senyawa-senyawa
seskuiterpenoid tersebut diturunkan dari cis farnesil pirofosfat dan trans farnesil
pirofosfat melalui reaksi siklisasi dan reaksi sekunder lainnya.
Beberapa publikasi tentang ketiga komponen seperti yang dilaporkan
oleh Gustafson et al. (1983) bahwa di dalam ekstrak nudibranch Archidoris
montereyensis mengandung senyawa-senyawa diterpenoic acid glyceride,
drimane sesquiterpenoic acid glyceride, monocyclofarnesic acid glyceride, dan
glyceryl ether. Andersen et al. (1980) juga melaporkan bahwa nudibranch jenis
A. odheri menghasilkan senyawa 2,3-dihydroxypropilfarnesate dan memiliki dua
turunan monoasetoksi. Kedua komponen tersebut memiliki aktivitas sebagai
antibiotik dan antifeedant. Pendapat ini juga didukung oleh Marero et al. (2003)
yang melaporkan bahwa hasil isolasi dari pulmonate Trimusculus peruvianus
menghasilkan empat senyawa labdane diterpens melalui jalur oksidasi. Senyawa-
senyawa tersebut memiliki aktivitas sitotoksik yang menghambat sel kanker usus
besar pada manusia.
Labdane merupakan diterpen bisiklik alami yang membentuk inti
struktural untuk berbagai macam produk alami yang dikenal sebagai labdanes
atau diterpenes labdane. Diterpenoid merupakan senyawa yang mempunyai
20 atom karbon dan dibangun oleh 4 unit isoprena. Senyawa ini mempunyai
bioaktivitas yang cukup luas yaitu sebagai hormon pertumbuhan tanaman,
podolakton inhibitor pertumbuhan tanaman, antifeedant serangga, inhibitor tumor,
62
senyawa pemanis, antifouling, dan anti karsinogen. Senyawa diterpenoid dapat
berbentuk asiklik, bisiklik, trisiklik, dan tetrasiklik. Tata nama yang digunakan
lebih banyak adalah nama trivial (Sirait 2007).
Berdasarkan hasil analisis LC-MS, senyawa flavonoid, tidak terdeteksi,
hal ini diduga bahwa senyawa flavonoid yang terkandung di dalam ekstrak
tambelo termasuk dalam kelompok senyawa volatil sehingga ada kemungkinan
bahwa senyawa flavonoid yang berperan sebagai senyawa antioksidan di dalam
ekstrak tambelo adalah kelompok senyawa volatil.
63
5 SIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kandungan kimia tambelo segar
terdiri dari air 82,72%, protein 7,21%, lemak 0,28%, abu 2,07%, dan karbohidrat
7,71%. Komposisi kimia tambelo kering adalah kadar air 6,63%, protein 42,77%,
lemak 14,27%, abu 5,88%, dan karbohidrat 30,45%. Daging tambelo
mengandung 17 jenis asam amino dan 15 jenis asam lemak. Rendemen tertinggi
terdapat pada ekstrak metanol yaitu 5,72%. Pada ke tiga ekstrak (n-heksana, etil
asetat, metanol) mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, steroid, triterpenoid
dan saponin. Ekstrak kasar etil asetat memiliki aktivitas antioksidan dengan IC50
sebesar 15 ppm. Fraksi 9 dari ekstrak etil asetat menunjukkan aktivitas
antioksidan sebesar 8,87 ppm yang setara dengan vitamin super ester C
(8,27ppm). Fraksi 9 menyerupai salah satu dari empat struktur senyawa yang
dikelompokkan ke dalam tiga komponen, yaitu farnesic acid glyceride,
sesquiterpenoic acid glyceride dan labdane diterpenoid.
5.2 Saran
Perlu dilakukan pemurnian lagi dengan menggunakan kromatografi kolom
dan untuk memperoleh satu struktur senyawa aktif digunakan nuclear magnetik
resonance (NMR).
DAFTAR PUSTAKA
Achadi EL. 2010. Gizi dan kesehatan Masyarakat. Jakarta: PT. Rajagrafindo
Persada. Hlm. 20-319
Almatsier S. 2002. Pelayanan gizi rumah sakit dan perkembangan ilmu serta
teknologi. Gizi Indonesia, 17:97-104.
Almatsier S. 2006. Prinsip dasar ilmu Gizi. Jakarta: PT Gramedia Pustaka
Utama. hlm. 14-104.
_________. 2009. Prinsip Dasar Ilmu Gizi. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
hlm. 50-279.
American Association of Cereal Chemist [AACC]. 1994. Approved Methods of
The American Association of Cereal Chemist. Ed ke-9. Vol 1. USA
:American Association of Cereal Chemist.
Andersen RJ, Sum FW. 1980. Farnesic acid glycerides from the nudibranch
Archidoris odhneri. J. Tetrahedron Lett, 21:797-800.
Association of Official Analytical Chemist [AOAC]. 1984. Official Methods of
Analysis of Association of official Analytical Chemical. Associaton of
Official Analytic Chemist Inc. Virginia.
____________. 2005. Official Methods of Analysis (18 Edn). Association of
Official Analytical Chemist Inc. Mayland. USA.
____________. 2005. Official Methods of Analysis (18 Edn). Association of
Official Analytical Chemist Inc. Mayland. USA.
Betia J. Ed. 2011. Palawan’s Kinilaw na Tamilok. [kaset audio].
Journeyingjames, produsen. Palawan. 1 video kaset: 2:50 menit, bersuara,
berwarna. Dilengkapi: 4 gambar foto berwarna 10 x 12 inci.
http://journeyingjames.com/2011/01/palawans-kinilaw-na-tamilok/.
[02 Sept 2011].
Bhakuni DS, Awat DS. 2005. Bioactive marine natural Product. New Delhi:
Anamaya Publisher. hlm. 302-308
Blunt JW, Blunt DA. 2008. MarinLit-Marine Literature Database. Version #
vpcl 13.5. Christchurch: Marine Chemistry Group, Department of
Chemistry-University of Caterbury.
Bonderud D. 2011. Amino acid: What is Valine. http://www.wisegeek.com
[08 Maret 2011].
65
Carroli C, Arata D, Dena CC. 2006. Effect of threonine deficiency on changes in
enzyme activity and liver fat deposition with time. J.Nutrition 1:502-506.
Cat B. 2006. Amino acid protein suplemen. Dietary Amino Acids Benefits. www.
[email protected] [06 Maret 2011].
Coppen PP. 1983. The use of antioxidants. Di dalam: Allen JC, Hamilton RJ.
Editor. Rancidity in Foods. New York: Science Publishers. hlm. 67-90.
Conectique. Selenium untuk kekebalan tubuh. Reduce-it weight management
program Diet and Nutrition (2011). http://www/conectique.co/tip-
soz_solution/diet_utrition/nutrition/article.php?article_id=3160.
[29 Sept 2011].
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1995. Material Medika Indonesia.
Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
[DSN], Dewan Standarisasi Nasional. 1991. Metode Pengujian Kimia Produk
Perikanan. Penentuan Logam Berat. SNI 01-2362-1991. Jakarta:
Departemen Perindustrian RI.
Ebada SS, Edrada RA, Lin W, Proksch P. 2008. Protocols: methods for
isolation, purification and structural elucidation of bioactive secondary
metabolites from marine invertebrataes. Nature 3-12.
Edrada RA, Wray V, Handayani D, Schupp P, Balbin-Oliveros M, Proksch P.
2000. Structure activity relationship of bioactive metabolites from some
Indo-Pasific marine invertebrates. Nat. Prod. Chem., 21: 251- 254.
Effendi YH. 2002. Pengantar gizi kesehatan. Diktat. Bogor: Fakultas Pertanian,
Institut Pertanian Bogor.
FAO/WHO. 2001. Human Vitamin and Mineral Requirement. Report of a joint
FAO/WHO xpert consultation. Bangkok, Thailand. Roma: Food and
Nutrition Division.
Filho CS, Tagliaro CH, Beasley CR. 2008. Seasonal abundance of the shipworm
Neoteredo reynei (Bivalvia, Teredinidae) in mangrove driftwood from a
northern Brazilian beach. Iheringia, Sér. Zool. Porto Alegre, 98:17-23.
Griffin et al. Penemu: The United States of America as represented by the
Secretary of Agriculture. 17 Mei 1994. Industrial alkaline protease from
shipworm bacterium. US Paten. Paten 5 512 749.
Gritter JR, Bobbitt JM, Arthur, E Schwarting. 1991. Pengantar Kromatografi. Ed
ke-2. Padmawinata K, penerjemah. Bandung: ITB press. hlm. 27-36.
66
Gustafson K, Andersen RJ 1985. Chemical studies of British Colombia
Nudibranchs. J. Tetrahedron, 41:1101-1108.
Hamilton RJ. 1983. The chemistry of ranciditry in food. Di dalam: Allen JC.
Hamilton RJ, editor. Rancidity in Food. New York: Applied Science
Publisher. hlm 1-20.
Hamman MT, Otto CS, Scheuer PJ, Dunbar DC. 1996. Kahalalides : bioactive
peptides from marine mollusk Elysia rufescens and its algal diet
Bryopsis sp. J. Org. Chem, 61: 6594.
Hanani E, Mun’im A, Sekarini R. 2005. Identifikasi senyawa antioksidan dalam
spons Callyspongia sp. dari Kepulauan Seribu. Majalah Ilmu
Kefarmasian, 2:127-133.
Handayani D, Sayuti N, Dachriyanus. 2008. Isolasi dan karakteristik senyawa
antibakteri epidioksi sterol dari spon laut Petroia Nigrans, Asal Sumatera
Barat. Prosiding Seminar Nasional Sains dan Teknologi-II 2008;
Lampung, 17-18 November 2008. http://lemlit.unila.ac.id/file/arsip
[12 April 2009].
Hardinsyah, Sumule A, Letsoin J. 2006. Jenis dan jumlah konsumsi tambelo,
siput dan kerang oleh penduduk di kawasan Muara Mimika, Papua.
J. Gizi dan Pangan 1:1-12.
Harper LJ, Deaton BJ, Driskel JA. 1988. Pangan Gizi dan Pertanian. Suhardjo,
penerjemah. Jakarta: Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi. Terjemahan
dari: Food Nutrition and Agriculture. hlm. 30-69.
Hatano TH, Kagawa H, Yasuhara TT, Okuda. 1988. Two new flavonoids and
other constituents in licorice roots: their relative astringency and radical
scavenging effect. Chem. Pharm. Bull, 36:3090-2097.
Heath, HB, Reineccius, G. 1986. Flavor Chemistry and Technology. New York:
Van Nostrand Reinhold Comp. Publ.
Harbone JB. 1987. Metode Fitokimia; Penuntun Cara Modern Menaganalisis
Tumbuhan. Ed. Ke-2. Padmawinata K, Soediro S, penerjemah. Bandung:
ITB. Terjemahan dari Phytochemical method.
Ketaren S. 1986. Lemak dan Minyak Pangan. Jakarta: UI Press.
Kumar US, Tiwari AK, Reddy SV, Apama P, Rao RJ, Ali AZ, Rao JM. 2006.
Free radical scavanging and xanthine oksidase inhibitory constituens from
Stereospermum personatun. J Nat Prod 68:1611-1621.
*
Khopkar SM. 2003. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta: UI-Press.
67
Linder MC. 1992. Biokimia nutrisi dan metabolisme. Cetakan I. Parakkasi A,
penerjemah; Linder MC, editor. Jakarta: UI Press. Terjemahan dari:
Nutritional biochemistry and metabolism.
Linder CM. 2006. Biokimia nutrisi dan metabolisme dengan pemakaian secara
klinis. Parakkasi A, penerjemah; Linder MC, editor. Jakarta: UI Press.
Terjemahan dari: Nutritional biochemistry and metabolism.
Mayabubun 2003. Persepsi Masyarakat Suku Kamoro terhadap tambelo
Bactronophorus thoracites di Kabupaten Mimika [skripsi]. Jayapura:
Fakultas Keguruan dan ilmu Pendidikan, Universitas Cenderawasih
Jayapura.
Miyaoka H, Shimomura M, Kimura H, Yamada Y. 1998. Antimalarial activity
of kalihinol a and realtive diterpenoids from the okinawan sponge,
Acanthrlla sp. J. Tetrahedron 13467-13474
Molyneux P. 2004. The use of the stable free radicals diphenylpicrylhydrazyl
(DPPH) for estimating antioxidant activity. Songklanakarin J. Sci.
Technol 2004, 26:211-219.
Morrero D et al. 2003. Labdane diterpenoid with a new oxidation pattern from
the marine pulmonate Trimusculus peruvianus. Tetrahedron, 59:48-55
Muchtadi D. 1989. Evaluasi Nilai Gizi Pangan. Bogor: IPB Press. 14-55 hlm.
Muchtadi TRM. 2000. Asam Lemak Omega 9 dan Manfaatnya bagi Kesehatan.
http://www.intiboga.com/omega9b.htm. [12 April 2009]
Muchtadi D. 2009. Gizi Anti Penuaan Dini. Bandung: CV. Alfabet. hlm 45-67.
Muchtadi D. 2009. Pengantar Ilmu Gizi. Bandung: CV. Alfabeta. hlm.20-56.
Muller K. 2004. Ekologi Kamoro-Bab IX. PapuaWeb. Galeri-Galery.
http://www.papuaweb.org/gb/foto/muller/ecology/09/index.html
[16 Juli 2009].
Munifah I, Krisnawang H. 2007. Isolation and antioxidative assay of several
marine macroalgae components within ethyl-acetate fraction.
http://www.scribd.com/doc/isolation-seminternationalUGM/2558795
[ 02 Maret 2011].
Nair NB, Saraswathy M. 1971. The biology of wood-boring teredinid mollusca.
Di dalam: Russell FS, Yonge M. Editor. Advance in marne biology.
Vol ke-9. New York: Academic Press Inc. hlm. 335-344.
68
Nelson JK, Moxness KE, Jensen MD, Gastineau CF. 1994. Mayor clinic diet
manual : A Handbook of Nutrition Practices. Ed ke-7. Philadelphia :
Mosby. hlm. 67-78
Nurjanah, Imran Z, Kustiariyah. 2005. Kandungan mineral dan proksimat
kerang darah (Anadara granosa) yang diambil dari Kabupaten Boalemo,
Gorontalo. Buletin THP, 8(2):12-25.
Poedjiadi A, Supriyanti FMT. 2006. Dasar-dasar biokimia. Edisi revisi. Jakarta:
UI Press. 8-389 hlm
Pratt DE. 1992. Natural antioxidant from plant material. Di dalam: Huang MT,
Ho CT, Lee CY, editor. Phenolic Compound in Food and Their Effect on
Health. Washington DC: American Society.
Pratt DE, Hudson BJF. 1990. Natural antioxidant not exploited comercially. Di
dalam: Hudson BJF, editor. Food Antioxidant. London: Elsevier
Applied Science. hlm. 230-429.
Purchon RD. 1968. The Biology of The Mollusca. Pergamon Press.
Hungary.Supamas. 2011. Asam amino non esensial. Jakarta: Surya
Pagoda Mas http://www.supamas.com [07 Maret 2011].
Ranney MW. 1979. Antioxidant Recent Development. Noyes Data Co. Park
Ridge, USA. hlm. 87-121.
Ridwan E. 1997. Tempe mampu menghambat proses ketuaan. Cermin Dunia
Kedokteran, 120(1):7-13.
Robinson T. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Kosasih
Padmawinata, penerjemah. Bandung: ITB. Terjemahan dari: The
organic constiuteuns of higher plants. Edisi ke-6.
Salamah E, Ayuningrat E, Purwaningsih S. 2008. Penapisan awal komponen
bioaktif dari kijing Taiwan (Anadonta woodiana Lea) sebagai senyawa
antioksidan. Buletin TeknologiHasil Perikanan, 11:119-132.
Schuler P. 1990. Natural antioxidant exploited commercially. Di dalam: Food
Antioxidant. Hudson BJF, editor. London and New York: Elsevier
Applied Science. hlm. 123-280.
Setyowati, Suparni. 2009. Unit Corn Mill. www.chem-is-try.org. [7 Mei 2011]
Sidik. 1997. Antioksidan Alami Asal Tumbuhan. Makalah dalam Seminar
Nasional Tumbuhan Obat Indonesia XII. Institut Teknologi Bandung
26-27 Juni 1997.
Sirait M. 2007. Penuntun fitokimia dalam farmasi. Bandung: ITB. 191-246 hlm
69
Sitompul S. 2004. Analisis asam amino dalam tepung ikan dan bungkil kedelai.
Buletin Teknik Pertanian, 9(1): 33-37.
Suariasari R. 2006. Mengenal dan menangkal radikal bebas.
http://www.beritaiptek.com [ 8 Juni 2011]
Sudarmadji S, Haryono B, Suhardi. 1989. Analisa Bahan Makanan dan
Pertanian. Yogyakarta: Liberty. hlm. 57-158.
Suharsono. 1970. Biokimia. Jakarta: Erlangga. hlm. 12-34.
Supamas. 2011. Asam amino non esensial. Jakarta: Surya Pagoda Mas
http://www.supamas.com [07 Maret 2011].
Suratmo. 2009. Potensi ekstrak daun sirih merah (Piper crocatum) sebagai
antioksidan. http://fisika.brawijaya.ac.id/bssub/PDF%20FILES/BSS_
205_I.pdf. [3 februari 2011]
Syaputra D, Ibrahim B, Poernomo D. 2007. Produk Fermentasi Ikan Dari Cacing
Kapal Bactronophorus sp. Segar. Jurnal Sumberdaya Perairan, 1:12-14.
Trindade-Silva E, Machado-Ferreira E, Senra MVX, Vizzon VF, Yparraguirre
LA, Leoncini O and Amaro CSAG. 2009. Physiological traits of the
symbiotic bacterium Teredinibacter turnerae isolated from the mangrove
shipworm Neoteredo reynei. Genetics and Molecular Biology Online
Ahead of Print. Sociedade Brasileira de Genética. Printed in Brazil.
Genet. Mol. Biol.
Waranmaselembun C. 2007. Komposisi kimia dan aktivitas inhibitor
topoimerase I dari kerang mas ngur (Attactodea striata), [Tesis]. Bogor:
Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Waterbury JB, Calloway CB, Turner RD. 1983. A cellulolytic nitrogen fixing
bacterium cultured from the gland of deshayes in shipworms. Science,
221:1401-1403.
Winarno FG. 1984. Kimia Pangan. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
hlm. 92-128
__________. 1992. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta : Gramedia Pustaka Utama.
hlm.145-167.
__________.1997. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
hlm. 3-14
__________. 2008. Kimia Pangan dan Gizi. Bogor: M-Brio Press. hlm.14-55.
70
Winarsi H. 2004. Efek Minuman Fungsional yang Disuplementasi Isoflavon
Kedelai dan Zn terhadap Profil Lipiddan Produk MDA Plasma Wanita
Premenopause. Dalam: Peran Biokimia dan Biologi Molekuler dalam
Eksplorasi dan Pemanfaatan Sumberdaya Hayati Berkelanjutan.
Prosiding Seminar Nasional PBBMI. Yogyakarta .
Winarsi H. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Jakarta: Kanisius.
hlm. 86-105.
Yen GC, Chen HY. 1995. Antioxidant activity of various tea extracts in relation
to their antimutagenicity. J. of Agricultural and Food Chemistry, 43:27-32
71
72
LAMPIRAN
73
74
Lampiran 1. Nilai rata-rata hasil analisis proksimat tambelo segar dan kering
a. Kandungan proksimat tambelo segar
Nutrisi Tambelo
Rata-rata Standar
deviasi I II
Kadar air 82,71 82,72 82,72 0,01
Protein 7,43 6.99 7,21 0,31
Lemak 0,31 0,26 0,28 0,04
Abu 2,27 1,88 2,07 0,28
Karbohidrat 7,28 8,15 7,72 0,62
b. Kandungan proksimat tambelo kering
Nutrisi Tambelo
Rata-rata Standar
deviasi I II
Kadar air 6,62 6,63 6,63 0,01
Protein 44,20 41,35 42,77 2,02
Lemak 14,11 14,42 14,27 0,22
Abu 6,62 5,15 5,88 1,04
Karbohidrat 28,45 32,45 30,45 2,83
Lampiran 2. Nilai rata-rata asam amino tambelo
No Jenis asam amino
Hasil (% berat
Protein) Rata-rata
Standar
deviasi
I II
1 Treonin 0,387 0,360 0,37 0,019
2 Valin 1,293 1,287 1,29 0,004
3 Metionin 0.596 0,518 0,56 0,055
4 Isoleusin 0,337 0,349 0,34 0,008
5 Leusin 1,251 1,243 1,25 0,006
6 Phenilalanin 1,195 1,179 1,19 0,011
7 Lisin 1,821 1,795 1,81 0,018
8 Histidin 1,005 1,016 1,01 0,008
9 Arginin 1,839 1,761 1,80 0,055
10 Asam aspartat 2,854 2,841 2,85 0,009
11 Asam glutamate 3,663 3,432 3,55 0,163
12 Serin 1,285 1,236 1,26 0,035
13 Glisin 1,662 1,820 1,74 0,112
14 Alanin 1,651 1,618 1,63 0,023
15 Prolin 0,418 0,403 0,41 0,011
16 Tirosin 0,719 0,729 0,72 0,007
17 Sistein 0,423 0,402 0,41 0,015
TOTAL 22,399 21,989 22,19 0,290
75
Lampiran 3 Kromatografi standar asam amino pada HPLC
76
Lampiran 4 kromatogram asam amino daging tambelo pada HPLC
a. Kromatografi asam amino ulangan I
77
b. Kromatografi asam amino ulangan II
78
Lampiran 5 Kromatogram standar asam lemak pada GC
79
Lampiran 6 Kromatogram asam lemak daging tambelo pada GC
80
Lampiran 7 Perubahan warna yang mengindikasikan reaksi peredaman DPPH
81
Dari ekstrak tambelo
BHT + DPPH (4,6,8,10 ppm) Vitamin super ester C + DDPH
(4,6,8, 10 ppm)
Ekstrak n-Heksan + DPPH Ekstrak Metanol + DPPH
(20,40,60,80 ppm) (20,40,60,80 ppm)
Ekstrak Etil Asetat + DPPH Fraksi 9 Etil Asetat + DPPH
(20,40,60,80 ppm) (20,40,60,80 ppm)
Lampiran 8 Perhitungan persen inhibisi dan IC50 pada BHT, vitamin super ester
Blanko 4 6 8 10 4 6 8 10
20 40 60 80 20 40 60 80
20 40 60 80 20 40 60 80
82
C dan ekstrak kasar tambelo
a. Persen inhibisi dan IC50 pada BHT dan vitamin super ester C
Sampel % Inhibisi IC50
(ppm) 4 ppm 6 ppm 8 ppm 10 ppm
BHT 55,56 65,51 81,02 94,44 3,35
Vitamin super ester C
15,74 27,78 51,16 63,19 8,27
b. Persen inhibisi dan IC50 pada ekstrak n-heksana
y = 6,608x + 27,87
R² = 0,993
0,0
10,0
20,0
30,0
40,0
50,0
60,0
70,0
80,0
90,0
100,0
0 2 4 6 8 10 12
% I
nh
ibis
i
Kosentrasi BHT (ppm)
y = 8,287x - 18,54
R² = 0,981
0
10
20
30
40
50
60
70
0 2 4 6 8 10 12
Axis
Tit
le
Kosentrasi vitamin super ester C (ppm)
83
Ulangan Kosent Absorb %
inhibisi
Pers.regresi
linear IC50
Rata-rata
IC50
Standar
deviasi
Blanko 432 0
29,531
1 20 0,449 -3,94
40 0,421 2,55 y=0,255x – 9,143 231,93
60 0,419 3,01
80 0,376 12,96
20 0,462 -6,94
2 40 0,423 2,08 y=0,224x – 9,490 265,58 262,77
60 0,412 4,63
80 0,401 7,18
3 20 0,454 -5,09
40 0,434 -0,46 y=0,201x – 8,449 290,79
60 0,407 5,79
80 0,405 6,25
y = 0,255x - 9,143
R² = 0,896
-6
-4
-2
0
2
4
6
8
10
12
14
0 20 40 60 80 100
% i
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm) ulangan 1
y = 0,224x - 9,490
R² = 0,888
-8
-6
-4
-2
0
2
4
6
8
10
0 20 40 60 80 100
% I
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm) ulangan 2
84
c. Persen inhibisi dan IC50 pada ekstrak etil asetat
Ulangan Kosent Absorb %
inhibisi
Pers. Regresi
linear
IC50
(ppm
Rataan
IC50
(ppm
Standar
deviasi
Blanko
0,432
y=0,604x + 43,51 10,75
15,00 4,211
1
20 0,205 52,55
40 0,119 72,45
60 0,089 79,40
80 0,041 90,51
2
20 0,231 46,53
y=0,64x + 37,73
19,17
40 0,142 67,13
60 0,084 80,56
80 0,066 84,72
3
20 0,225 47,92
y=0,660x + 40,04 15,09 40 0,123 71,53
60 0,062 85,65
80 0,055 87,27
y = 0,201x - 8,449
R² = 0,919
-6
-4
-2
0
2
4
6
8
10
0 20 40 60 80 100
% i
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm) ulangan 3
y = 0,604x + 43,51
R² = 0,955
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 20 40 60 80 100
% i
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm) ulangan 1
85
d. Persen inhibisi dan IC50 pada ekstrak metanol
Ulangan Kosent Absorb % inhib Pers. Regresi
linear
IC50
(ppm
Rataan
IC50
(ppm
Standar
deviasi
Blanko
0,432
y=0,641x + 2,777 82,34
84,01 3,829
1
20 0,371 14,12
40 0,347 19,68
60 0,303 29,86
80 0,201 53,47
2
20 0,391 9,49
y=0,689x – 6,018
81,30
40 0,337 21,99
60 0,305 29,40
80 0,203 53,01
3
20 0,392 9,30
y=0,656x – 7,986 88,39 40 0,372 13,89
60 0,312 27,78
80 0,223 48,38
y = 0,64x + 37,73
R² = 0,923
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 20 40 60 80 100
% i
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm) ulangan 2
y = 0,660x + 40,04
R² = 0,878
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 20 40 60 80 100
% I
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm) ulangan 3
86
y = 0,641x - 2,777
R² = 0,905
0
10
20
30
40
50
60
0 20 40 60 80 100
% I
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm)
y = 0,689x - 6,018
R² = 0,946
0
10
20
30
40
50
60
0 20 40 60 80 100
% I
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm)
y = 0,656x - 7,986
R² = 0,930
0
10
20
30
40
50
60
0 20 40 60 80 100
% I
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm)
87
e. Nilai deviasi ekstrak kasar tambelo
Ekstrak Ulangan Rata-
rata
Standart
devisiasi I II III
n-Heksana 231,93 265,58 290,79 788,3 29,53
Etil asetat 10,75 19,17 15,09 45,01 4,21
Metanol 82,34 81,30 88,39 252,03 3,83
Lampiran 9 Profil pola pemisahan senyawa
a. Profil pola pemisahan ekstrak etil esetat tambelo pada berbagai eluen
1 2 3 4 5
Keterangan : Ekstrak Etil asetat
1. n-Heksana : Etil asetat = 1:1
2. n-Heksana : Etil asetat = 8:2
3. Kloroform : Metanol = 9:1
4. Kloroform : Metanol = 17:3
5. N-Heksana : Kloroform = 3:2
88
b. Profil Spesifikasi dan pola pemisahan hasil kromatografi
Lampiran 10 Rendamen fraksi tambelo
No Nama Fraksi Rendamen (%)
1 Fraksi 1 0,15748 2 Fraksi 2 0,03492 3 Fraksi 3 0,00732 4 Fraksi 4 0,00506 5 Fraksi 5 0,00710 6 Fraksi 6 0,00156 7 Fraksi 7 0,0028 8 Fraksi 8 0,0152 9 Fraksi 9 0,00482 10 Fraksi 10 0,0025
Lampiran 11 Perhitungan persen inhibisi (IC50) hasil fraksinasi tambelo
a. Nilai standart deviasi hasil fraksinasi
Fraksi Ulangan
Rata-rata Standart
deviasi I II III
Fraksi 1 108,76 100,03 101,74 103,51 4,63
Fraksi 2 60,78 64,27 65,46 63,50 2,43
Fraksi 3 58,37 62,86 63,14 61,46 2,68
Fraksi 4 73,41 73,47 83,72 76,87 5,94
Fraksi 5 91,36 80,95 85,82 86,04 5,21
Fraksi 6 70,83 75,07 77,56 74,49 3,40
Fraksi 7 62,85 57,80 54,32 174,97 4,29
Fraksi 8 44,97 43,61 40,92 129,5 2,06
Fraksi 9 8,77 7,03 10,82 26,62 1,90
Fraksi 10 24,37 33,13 25,85 83,35 4,69
89
b. Perhitungan persen inhibisi dan IC50 pada fraksi 9 dan fraksi 10
Sampel Ulangan Kosentrasi Abs %
Inhibisi
Pers. regresi
linear
IC50
(ppm)
Rataan
IC50
(ppm)
Blanko
0,425 0
1,90 Fraksi
9
1
20 0,193 54,59
y=0,497x + 45,64
8,77
8,87
40 0,149 64,94
60 0,086 79,76
80 0,073 82.82
2
20 0,179 57,88
y=0,536x + 46,23
7,03
40 0,148 65,18
60 0,082 80,71
80 0,049 88,47
3
20 0,187 56
y=0,62x + 43,29
10,82
40 0,136 68
60 0,086 79,76
80 0,028 93,41
Fraksi
10
1
20 0,255 40,00
4,69
40 0,127 70,12 y=0,647x + 34,23 24,37
60 0.108 74,59
80 0,078 81,65
2
20 0,277 34,82
40 0,164 61,41 y=0,689x + 27,17 33,13
27,78
60 0,112 73,65
80 0,099 76,71
3
20 0.246 42.12
40 0.155 63.53 y=0,651x + 33,17 25,85
60 0.102 76.00
80 0.079 81.41
Lampiran 12 Hasil identifikasi senyawa terpenoid tambelo pada LC-MS
LAMPIRAN
74
75
Lampiran 1. Nilai rata-rata hasil analisis proksimat tambelo segar dan kering
a. Kandungan proksimat tambelo segar
Nutrisi Tambelo
Rata-rata Standar
deviasi I II
Kadar air 82,71 82,72 82,72 0,01
Protein 7,43 6.99 7,21 0,31
Lemak 0,31 0,26 0,28 0,04
Abu 2,27 1,88 2,07 0,28
Karbohidrat 7,28 8,15 7,72 0,62
b. Kandungan proksimat tambelo kering
Nutrisi Tambelo
Rata-rata Standar
deviasi I II
Kadar air 6,62 6,63 6,63 0,01
Protein 44,20 41,35 42,77 2,02
Lemak 14,11 14,42 14,27 0,22
Abu 6,62 5,15 5,88 1,04
Karbohidrat 28,45 32,45 30,45 2,83
Lampiran 2. Nilai rata-rata asam amino tambelo
No Jenis asam amino
Hasil (% berat
Protein) Rata-rata
Standar
deviasi
I II
1 Treonin 0,387 0,360 0,37 0,019
2 Valin 1,293 1,287 1,29 0,004
3 Metionin 0.596 0,518 0,56 0,055
4 Isoleusin 0,337 0,349 0,34 0,008
5 Leusin 1,251 1,243 1,25 0,006
6 Phenilalanin 1,195 1,179 1,19 0,011
7 Lisin 1,821 1,795 1,81 0,018
8 Histidin 1,005 1,016 1,01 0,008
9 Arginin 1,839 1,761 1,80 0,055
10 Asam aspartat 2,854 2,841 2,85 0,009
11 Asam glutamate 3,663 3,432 3,55 0,163
12 Serin 1,285 1,236 1,26 0,035
13 Glisin 1,662 1,820 1,74 0,112
14 Alanin 1,651 1,618 1,63 0,023
15 Prolin 0,418 0,403 0,41 0,011
16 Tirosin 0,719 0,729 0,72 0,007
17 Sistein 0,423 0,402 0,41 0,015
TOTAL 22,399 21,989 22,19 0,290
76
Lampiran 3 Kromatografi standar asam amino pada HPLC
77
Lampiran 4 kromatogram asam amino daging tambelo pada HPLC
a. Kromatografi asam amino ulangan I
78
b. Kromatografi asam amino ulangan II
79
Lampiran 5 Kromatogram standar asam lemak pada GC
80
Lampiran 6 Kromatogram asam lemak daging tambelo pada GC
81
Lampiran 7 Perubahan warna yang mengindikasikan reaksi peredaman DPPH
Dari ekstrak tambelo
BHT + DPPH (4,6,8,10 ppm) Vitamin super ester C + DDPH
(4,6,8, 10 ppm)
Ekstrak n-Heksan + DPPH Ekstrak Metanol + DPPH
(20,40,60,80 ppm) (20,40,60,80 ppm)
Ekstrak Etil Asetat + DPPH Fraksi 9 Etil Asetat + DPPH
(20,40,60,80 ppm) (20,40,60,80 ppm)
Blanko 4 6 8 10 4 6 8 10
20 40 60 80 20 40 60 80
20 40 60 80 20 40 60 80
82
Lampiran 8 Perhitungan persen inhibisi dan IC50 pada BHT, vitamin super ester
C dan ekstrak kasar tambelo
a. Persen inhibisi dan IC50 pada BHT dan vitamin super ester C
Sampel % Inhibisi IC50
(ppm) 4 ppm 6 ppm 8 ppm 10 ppm
BHT 55,56 65,51 81,02 94,44 3,35
Vitamin super ester C
15,74 27,78 51,16 63,19 8,27
y = 6,608x + 27,87
R² = 0,993
0,0
10,0
20,0
30,0
40,0
50,0
60,0
70,0
80,0
90,0
100,0
0 2 4 6 8 10 12
% I
nh
ibis
i
Kosentrasi BHT (ppm)
y = 8,287x - 18,54
R² = 0,981
0
10
20
30
40
50
60
70
0 2 4 6 8 10 12
Axis
Tit
le
Kosentrasi vitamin super ester C (ppm)
83
b. Persen inhibisi dan IC50 pada ekstrak n-heksana
Ulangan Kosent Absorb %
inhibisi
Pers.regresi
linear IC50
Rata-rata
IC50
Standar
deviasi
Blanko 432 0
29,531
1 20 0,449 -3,94
40 0,421 2,55 y=0,255x – 9,143 231,93
60 0,419 3,01
80 0,376 12,96
20 0,462 -6,94
2 40 0,423 2,08 y=0,224x – 9,490 265,58 262,77
60 0,412 4,63
80 0,401 7,18
3 20 0,454 -5,09
40 0,434 -0,46 y=0,201x – 8,449 290,79
60 0,407 5,79
80 0,405 6,25
y = 0,255x - 9,143
R² = 0,896
-6
-4
-2
0
2
4
6
8
10
12
14
0 20 40 60 80 100
% i
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm) ulangan 1
y = 0,224x - 9,490
R² = 0,888
-8
-6
-4
-2
0
2
4
6
8
10
0 20 40 60 80 100
% I
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm) ulangan 2
84
c. Persen inhibisi dan IC50 pada ekstrak etil asetat
Ulangan Kosent Absorb %
inhibisi
Pers. Regresi
linear
IC50
(ppm
Rataan
IC50
(ppm
Standar
deviasi
Blanko
0,432
y=0,604x + 43,51 10,75
15,00 4,211
1
20 0,205 52,55
40 0,119 72,45
60 0,089 79,40
80 0,041 90,51
2
20 0,231 46,53
y=0,64x + 37,73
19,17
40 0,142 67,13
60 0,084 80,56
80 0,066 84,72
3
20 0,225 47,92
y=0,660x + 40,04 15,09 40 0,123 71,53
60 0,062 85,65
80 0,055 87,27
y = 0,201x - 8,449
R² = 0,919
-6
-4
-2
0
2
4
6
8
10
0 20 40 60 80 100
% i
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm) ulangan 3
y = 0,604x + 43,51
R² = 0,955
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 20 40 60 80 100
% i
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm) ulangan 1
85
d. Persen inhibisi dan IC50 pada ekstrak metanol
Ulangan Kosent Absorb % inhib Pers. Regresi
linear
IC50
(ppm
Rataan
IC50
(ppm
Standar
deviasi
Blanko
0,432
y=0,641x + 2,777 82,34
84,01 3,829
1
20 0,371 14,12
40 0,347 19,68
60 0,303 29,86
80 0,201 53,47
2
20 0,391 9,49
y=0,689x – 6,018
81,30
40 0,337 21,99
60 0,305 29,40
80 0,203 53,01
3
20 0,392 9,30
y=0,656x – 7,986 88,39 40 0,372 13,89
60 0,312 27,78
80 0,223 48,38
y = 0,64x + 37,73
R² = 0,923
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 20 40 60 80 100
% i
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm) ulangan 2
y = 0,660x + 40,04
R² = 0,878
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 20 40 60 80 100
% I
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm) ulangan 3
86
y = 0,641x - 2,777
R² = 0,905
0
10
20
30
40
50
60
0 20 40 60 80 100
% I
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm)
y = 0,689x - 6,018
R² = 0,946
0
10
20
30
40
50
60
0 20 40 60 80 100
% I
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm)
y = 0,656x - 7,986
R² = 0,930
0
10
20
30
40
50
60
0 20 40 60 80 100
% I
nh
ibis
i
Kosentrasi (ppm)
87
e. Nilai deviasi ekstrak kasar tambelo
Ekstrak Ulangan Rata-
rata
Standart
devisiasi I II III
n-Heksana 231,93 265,58 290,79 788,3 29,53
Etil asetat 10,75 19,17 15,09 45,01 4,21
Metanol 82,34 81,30 88,39 252,03 3,83
Lampiran 9 Profil pola pemisahan senyawa
a. Profil pola pemisahan ekstrak etil esetat tambelo pada berbagai eluen
1 2 3 4 5
Keterangan : Ekstrak Etil asetat
1. n-Heksana : Etil asetat = 1:1
2. n-Heksana : Etil asetat = 8:2
3. Kloroform : Metanol = 9:1
4. Kloroform : Metanol = 17:3
5. N-Heksana : Kloroform = 3:2
88
b. Profil Spesifikasi dan pola pemisahan hasil kromatografi
Lampiran 10 Rendamen fraksi tambelo
No Nama Fraksi Rendamen (%)
1 Fraksi 1 0,15748 2 Fraksi 2 0,03492 3 Fraksi 3 0,00732 4 Fraksi 4 0,00506 5 Fraksi 5 0,00710 6 Fraksi 6 0,00156 7 Fraksi 7 0,0028 8 Fraksi 8 0,0152 9 Fraksi 9 0,00482 10 Fraksi 10 0,0025
Lampiran 11 Perhitungan persen inhibisi (IC50) hasil fraksinasi tambelo
a. Nilai standart deviasi hasil fraksinasi
Fraksi Ulangan
Rata-rata Standart
deviasi I II III
Fraksi 1 108,76 100,03 101,74 103,51 4,63
Fraksi 2 60,78 64,27 65,46 63,50 2,43
Fraksi 3 58,37 62,86 63,14 61,46 2,68
Fraksi 4 73,41 73,47 83,72 76,87 5,94
Fraksi 5 91,36 80,95 85,82 86,04 5,21
Fraksi 6 70,83 75,07 77,56 74,49 3,40
Fraksi 7 62,85 57,80 54,32 174,97 4,29
Fraksi 8 44,97 43,61 40,92 129,5 2,06
Fraksi 9 8,77 7,03 10,82 26,62 1,90
Fraksi 10 24,37 33,13 25,85 83,35 4,69
89
b. Perhitungan persen inhibisi dan IC50 pada fraksi 9 dan fraksi 10
Sampel Ulangan Kosentrasi Abs %
Inhibisi
Pers. regresi
linear
IC50
(ppm)
Rataan
IC50
(ppm)
Blanko
0,425 0
1,90 Fraksi
9
1
20 0,193 54,59
y=0,497x + 45,64
8,77
8,87
40 0,149 64,94
60 0,086 79,76
80 0,073 82.82
2
20 0,179 57,88
y=0,536x + 46,23
7,03
40 0,148 65,18
60 0,082 80,71
80 0,049 88,47
3
20 0,187 56
y=0,62x + 43,29
10,82
40 0,136 68
60 0,086 79,76
80 0,028 93,41
Fraksi
10
1
20 0,255 40,00
4,69
40 0,127 70,12 y=0,647x + 34,23 24,37
60 0.108 74,59
80 0,078 81,65
2
20 0,277 34,82
40 0,164 61,41 y=0,689x + 27,17 33,13
27,78
60 0,112 73,65
80 0,099 76,71
3
20 0.246 42.12
40 0.155 63.53 y=0,651x + 33,17 25,85
60 0.102 76.00
80 0.079 81.41
Lampiran 12 Hasil identifikasi senyawa terpenoid tambelo pada LC-MS