10 pembuatan media kultur.docx

8/10/2019 10 PEMBUATAN MEDIA KULTUR.docx

1/22

LAPORAN PRAKTIKUM BIOTEKNOLOGI PEMBUATAN MEDIA KULTUR

Disusun Oleh:

Nama : Alifia Idatama PJ

NIM : 115040201111182

Kelompok : Kamis 07.30-09.10

Asisten : Mas Sony

PROGRAM STUDI AGROEKOTEKNOLOGI

FAKULTAS PERTANIAN

MALANG

2012


2/22


3/22


4/22

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Jenis-Jenis Media pada Kultur Jaringan Serta Aplikasi

Penggunaanya

1. Media Knop digunakan untuk menumbuhkan kalus wortel.Kultur kalus, biasanya ditumbuhkan pada media dengankosentrasi garam-garam yang rendah seperti dalam kulturakar dengan penambahan suplemen seperti glukosa, gelatine,thiamine, cysteine-HCl dan IAA.

2. Media White dikembangkan oleh Hildebrant untukkeperluan kultur jaringan tumor bunga matahari, ditemukan

bahwa unsur makro yang dibutuhkan kultur tersebut, lebihtinggi dari pada yang dibutuhkan oleh kultur tembakau.Unsur F, Ca, Hg dan S pada media untuk tumor bungamatahari ini, sama dengan media untuk jaringan normal yangdikembangkan kemudian. Konsentrasi NO 3- dan K + yangdigunakan Hildebrant ini lebih tinggi dari media white, tetapi

masih lebih rendah dari pada media-media lain yang umumdigunakan sekarang.

3. Media Knudson dan media Vacin and Went , media inidikembangkan khusus untuk kultur anggrek. Tanaman yangditanam di kebun dapat tumbuh dengan baik dengan

pemupukan yang hanya mengandung N dari Nitrat. Knudson pada tahun 1922, menemukan penambahan 7.6 mM NH 4+

disamping 8.5 mM NO3-

, sangat baik untuk perkencambahandan pertumbuhan biji anggrek. Penambahan NH 4+ ternyatadibutuhkan untuk perkembangan protocorm.

4. Media Nitsch , menggunakan NO 3- dan K + dengan kadaryang cukup tinggi untuk mengkulturkan jaringan tanamanartichoke Jerussalem. Penambahan ammonium khloridasebanyak 0.1 mM, menghasilkan pertumbuhan jaringan yang


5/22

menurun. Mereka mengambil kesimpulan, bahwa NH 4+ sangat menunjang pertumbuhan kalus tembakau.

5. Media Gamborg B5 (media B5) untuk kultur kalus dansuspensi, serta sangat baik sebagai media dasar untukmeregenerasi seluruh bagian tanaman.. Pada masa ini mediaB5 juga digunakan untuk kultur-kultur lain. Media inidikembangkan dari komposisi PRL-4, media inimenggunakan konsentrasi NH 4+ yang rendah, karenakonsentrasi yang lebih tinggi dari 2 mM menghambat

pertumbuhan sel kedelai. Fosfat yang diberikan setelah 1

mM, Ca2+

antara 1-4 mM, sedangkan Mg2+

antara 0.5-3 mM.6. Media WPM (Woody Plant Medium) yang dikembangkan

oleh Lioyd & Mc Coen pada tahun 1981, merupakan mediadengan konsentrasi ion yang lebih rendah dari media MS.Media diperuntukkan khusus tanaman berkayu, dandikembangkan oleh ahli lain, tetapi sulfat yang digunakanlebih tinggi dari sulfat pada media WPM. Saat ini WPM

banyak digunakan untuk perbanyakan tanaman hias berperawakan perdu dan pohon-pohon.7. Media Schenk & Hildebrant (media SH) merupakan

media yang juga cukup terkenal, untuk kultur kalus tanamanmonokotil dan dikotil. Konsentrasi ion-ion dalam komposisimedia SH sangat mirip dengan komposisi pada mediaGamborg dengan perbedaan kecil yaitu level Ca 2+, Mg 2+, danPO4-3 yang lebih tinggi. Schenk & Hildebrant mempelajari

pertumbuhan jaringan dari 37 jenis tanaman dalam media SHdan mendapatkan bahwa: 32 % dari spesies yang dicobakan,tumbuh dengan sangat baik, 19% baik, 30% sedang, 14%kurang baik, dan 5% buruk pertumbuhannya. Tetapi karenazat tumbuh yang diberikan pada tiap jenis tanaman tersebut

berbeda. Media SH ini cukup luas penggunaannya, terutamauntuk tanaman legume.


6/22

8. Media Murashige & Skoog (media MS) merupakan perbaikan komposisi media Skoog, terutama kebutuhangaram anorganik yang mendukung pertumbuhan optimum

pada kultur jaringan tembakau. Media MS mengandung 40mM N dalam bentuk NO 3 dan 29 mM N dalam bentuk NH 4+.Kandungan N ini, lima kali lebih tinggi dari N total yangterdapat pada media Miller, 15 kali lebih tinggi dari mediatembakau Hildebrant, dan 19 kali lebih tinggi dari mediaWhite. Kalium juga ditingkatkan sampai 20 mM, sedangkanP, 1.25 mM. Unsur makro lainnya konsemtrasinya dinaikkan

sedikit. Pertama kali unsur-unsur makro dalam media MSdibuat untuk kultur kalus tembakau, tetapi komposisi MS inisudah umum digunakan untuk kultur jaringan jenis tanamanlain. Media MS paling banyak digunakan untuk berbagaitujuan kultur pada tahun-tahun sesudah penemuan mediaMS.

(Anonymous a, 2012)

2.2 Komposisi dan Fungsi Unsur dalam Media MS

Dalam media MS (Murashige dan Skogg), terdiri dari beberapa macam komposisi yang terkandung di dalamnya, antaralain, makronutrien, mikronutrien, vitamin, dan zat pengatur tubuh.

VitaminVitamin yang sering digunakan dalam media kultur jaringan

antara lain Tiamin, Piridoksin, dan asam nikotonat. Fungsitiamin adalah untuk mempercepat pembelahan sel padameristem akar, juga berperan sebagai koenzim daalam reaksiyang menghasilkan energi dari karbohidrat dan memindahkanenergi. Asam nikotinat penting dalam reaksi-reaksi enzimatik,sebagai prekursor dari beberapa alkaloid. Pemberian vitamin C

bertujuan untuk mencegah terjadinya pencoklatan pada

permukaan irisan jaringan. Vitamin yang sering ditambahkan


7/22

dalam medium kultur jaringan adalah niasin, glisin, piridoksinHCl, tiamin HCl, mio-inositol, asam folat, sianokobalamin,riboflavin, iotin, kolin klorida, kalsium pentetonat, piridoksin

fosfat, nikotinamida. Zat Pengatur Tumbuh (ZPT)

Zat pengatur tumbuh pada tanaman adalah senyawa organik bukan hara, yang dalam jumlah sedikit dapat mendukung,menghambat dan dapat merubah proses fisiologi tumbuhan. Zat

pengatur tumbuh dalam tanaman terdiri dari lima kelompok,yaitu auksin, giberelin, sitokinin, etilen dan inhibitor dengan ciri

khas serta pengaruh yang berlebihan terhadap proses fisiologis.Zat pengatur tumbuh sangat diperlukan sebagai komponenmedium bagi pertumbuhan dan diferensiasi. Tanpa penambahanZPT dalam medium, pertumbuahn sangat terhambat bahkantidak tumbuh sama sekali. Pembentukan kalus dan organ-organditentukan oleh penggunaan yang tepat dari ZPT tersebut.

Jenis-jenis yang termasuk unsur makro adalah nitrogen (N),fosfor (P), kalium (K), sulfur (S), kalsium (Ca), dan magnesium(Mg). Unsur NPK tersedia. Sedangkan unsur S, Ca, dan Mg ada dantidak, tetapi baik apabila unsur-unsur tersebut juga tersedia. Unsur-unsur yang termasuk di dalam unsur mikro adalah klor (Cl), mangan(Mn), besi (Fe), tembaga (Cu), seng (Zn), bor (B), dan molibdenum(Mo).

Kegunaan tiap-tiap unsur tersebut adalah sebagai berikut:

Unsur Nitrogen (N)Kegunaan Nitrogen bagi tanaman adalah untukmenyuburkan tanaman, pembentukan hijau daun, dan

pertumbuhan vegetatif tanaman sebab unsur N dapatmembentuk protein, lemak, dan berbagai persenyawaanorganik yang lain.

Unsur Fosfor (P)


8/22

Unsur P terutama dibutuhkan tanaman untuk pembentukankarbohidrat. Maka, unsur P dibutuhkan secara besar-besaran

pada waktu pertumbuhan benih, pembungaan, pemasakan

buah dan biji. Unsur Kalium (K)

Unsur K berfungsi untuk memperkuat tubuh tanaman, karenadapat menguatkan serabut-serabut akar sehingga daun,

bunga, dan buah tidak mudah gugur. Di samping itu, unsur K juga berfungsi memperlancar metabolisme danmempengaruhi penyerapan makanan.

Unsur Sulfur (S)Unsur S merupakan unsur yang penting untuk pembentukan

beberapa jenis protein, seperti asam amino dan vitamin B1.Unsur S juga berperan dalam pembentukan bintil-bintil akar,membantu pembentukan anakan sehingga pertumbuhan danketahanan tanaman terjamin.

Unsur Kalsium (Ca)

Unsur Ca terdapat pada batang dan daun tanaman yang berfungsi merangsang pembentukan bulu-bulu akar,mengeraskan batang dan merasang pembentukan biji karenaunsur Ca bersama Mg akan memproduksi cadanganmakanan.

Unsur Magnesium (Mg)Dengan menambahkan unsur Mg maka kandungan fosfat

dalam tanaman meningkat. Kegunaan fosfat sebagai bahanmentah untuk pembentukan sejumlah protein, maka

pertumbuhan daun menjadi hijau sempurna dan terbentukkarbohidat, lemak serta minyak.

Unsur Besi (Fe)Pemberian unsur Fe juga berfungsi sebagai penyangga yang

sangat penting untuk menyangga kestabilan pH media


9/22

selama digunakan untuk menumbuhkan jaringan tanaman, pernafasan dan pembentukan hijau daun.

(Sriyanti, 1994)

2.3 Teknik-teknik Aseptik dalam Pembuatan Media

Mikroorganisme terdapat dimana-mana, oleh karena itumikroorganisme lain yang tidak dikehendaki dapat masuk kedalam

biakan murni melalui aliran udara, kontak tangan yang tercemar, ataumelalui tersentuhnya media atau permukaan tabung bagian dalamoleh benda yang belum disterilkan.

Biakan murni adalah biakan yang hanya terdiri dari satuspesies tunggal sehingga untuk mencegah mikroorganisme lain yangtidak dikehendaki perlu digunakan teknik aseptik, dimana semua

peralatan maupun media pertumbuhan yang akan digunakan padateknik ini harus dalam keadaan steril/aseptik.

Beberapa metode untuk memindahkan biakan murni dari satuwadahke wadah yang lain secara aseptik:

a. Metode streak/gores adalah metode memindahkanmikroorganisme dengan cara menggoreskan ujung jarumoseloop pada permukaan media.

b. Metode spread/sebar adalah metode memindahkanmikroorganisme dengan cara meneteskan biakan bakteri laludisebarkan dengan alat spread dari gelas bentuk Lsecaramerata.

c. Metode pour plate/cawan tuang adalah metodememindahkan mikroorganisme dengan cara meneteskan

biakan bakteri kemudian menuangkan larutan nutrient.(Suryowinoto, M. 1991)


10/22

2.4 Rumus Perhitungan Larutan Stok

Larutan stok adalah larutan berisi satu ataulebih komponen

media yang konsentrasinya lebih besar dari konsentrasikomponentersebut dalam formulasi media akan dibuat. Rumus

perhitungan larutan stok yang dibutuhkan, dapat menggunakanrumus :

V1 x M 1 = V 2 x M 2

Keterangan:

V1 = volume yang akan dibuat

M1 = banyaknya kebutuhan senyawa dalam media MS

V2 = volume larutan stok yang akan diambil

M2 = banyaknya senyawa dalam larutan stok

(Hemawan dan Nia m, 2006)


11/22

BAB III METODOLOGI

3.1 Alat dan Bahan Alat :

1. 420 botol kultur (@15/kelompok praktikum)2. Dua pak karet gelang3. Plastik tahan tanas (untuk 8 botol, dengan ukuran

pxl; 15 x 12 cm)4. Gelas ukur5. Mikro pipet6. Beaker glass7. Timbang analitik8. pH universal9. Stirer10. Microwave11. Alumanium foil (untuk 7 botol, dengan ukuran p x l;

24 x 15, kertas di lipat/rangkap)12. Autoclave

Bahan :1. unsur makro 10x

NH 4 NO 3 : 14,85 gram KNO 3 : 17,1 gram MgSO 4.7H 2O : 3,33 gram KH 2PO 4 : 1,53 gram

2. Unsur Ca CaCl 2.2H 2O : 3,98 gram

3. Unsur Mikro A H3BO 3 : 0,0558 gram MnSO 4.4H 2O : 0,2007 gram ZnSO 4.7H 2O : 0,0774 gram


12/22

4. Unsur Mikro B Kl : 0,083 gram Na 2MoO 4.7H 2O : 0,025 gram CuSO 4.5H 2O : 0,0025 gram CoCl 4.7H 2O : 0,0025 gram

5. FeEDTA FeSO 4.7H 2O : 2,503 gram Na 2 EDTA : 3,357 gram

6. Vitamin Tiamin HCl : 0,001 gram Peridoksin HCl : 0,005 gram Asam Nikotinat : 0,005 gram Olycine : 0,02 gram

7. Sukrosa : untuk 300 ml.Larutan media digunakan 9 gram gula.

8. Agar-agar : untuk 300 ml.Larutan media digunakan 2,1 gram agar


13/22

3.2. Cara Kerja Pembuatan Media

Timbang

agar-agar2,1 gram

Timbang

sukrosa 9gram

Pada labu erlenmeyer (diisi dengan :

- makro: 30 mL, CaCl 2: 3 mL, -mikro A: 3 mL, - mikro B: 0,3 mL, -FeEDTA: 3 mL, - Vitamin: 0,3 mL.

Ditambahkan aquades (H 2O) hingga

300 mL.

Ukuran pH larutan stock sampai 5,5-5,8

NB:

NaOH : apabila terlalu asam HCL : apabila terlalu basa

Campur dan stiter (tanpadipanaskan) sampai nampak pusaran.

Masukan microwave selama 7 menit

Masukkan ke botol kultur @20 mL.

Di atucolave dengan tekanan 1,5 atm, suhu 121C selama 15menit


14/22


15/22


16/22

Oktober2012)

2345678

Tidak adaTidak adaTidak adaTidak adaTidak adaTidak adaTidak ada

kontaminandengan warnayang masih

putih dan sudahmengental

5 Hari ke 10(25 Oktober2012)

123

45678

Tidak adaTidak adaTidak ada

Tidak adaTidak adaTidak adaTidak adaTidak ada

Tidak terjadikontaminandengan warna

yang masih putih dan sudahmengental

6 Hari ke 12(29 Oktober

2012)

12

345678

Tidak adaTidak ada

Tidak adaTidak adaTidak adaTidak adaTidak adaTidak ada

Tidak terjadikontaminan

dengan warnayang masih


b.

Tabel Media Kultur dengan Penutup Alumunium Foil

NoHari

PengamatanKe-

BotolKe-

JenisKontaminan

Ket

1 Hari ke-2 (17Oktober2012)

1234

Tidak adaTidak adaTidak adaTidak ada

Tidak terjadikontaminandengan warnayang masih


17/22

567

Tidak adaTidak adaTidak ada


2 Hari ke 4 (19Oktober2012)

1234567





1234567





1234567




5 Hari ke 10*(25 Oktober2012)

1234567




6 Hari ke 12 1 Tidak ada Tidak terjadi


18/22

(29 Oktober2012)

234567

Tidak adaTidak adaTidak adaTidak adaTidak adaTidak ada

kontaminandengan warnayang masih


4.2 Pembahasan

Dari data hasil praktikum yang telah didapat, diketahui bahwa pembuatan media kultur yang telah dilakukan pada praktikumkali ini berhasil. Hal ini diketahui dari pengamatan yang telahdilaksanakan selama 2 minggu dengan selang waktu 2 hari sekali,diperoleh yaitu warna dari larutan yang berada di dalam botol kulturtutup plastik maupun tutup alumunium berwarna putih dan sudahmengental.

Pada botol kultur dengan tutup plastik, dilakukan percobaansebanyak 8 botol. Pada pengamatan pertama, 8 botol tersebut tidakmenunjukkan gejala-gejala terkontaminasi. Hal ini berlanjut ke

pengamatan-pengamatan selanjutnya, dengan selang waktu 2minggu, 8 botol kultur masih menunjukkan hasil yang baik dan tidakterkontaminasi.

Sedangkan untuk botol dengan penutup alumunium foil,menunjukkan hasil yang sama dengan botol yang di tutup denganmenggunkan plastik. Pada saat praktikum, di lakukan percobaandengan 7 botol yang di tutup dengan menggunakan alumunium.Selang jangka waktu 2 minggu setelah praktikum, botol kulturtersebut tidak terkontaminasi, dengan ciri-ciri larutan tetap berwarna

putih dan sudah mengental.


19/22

Menurut literatur, ciri-ciri eksplan yang terkontaminasi adalah :

1. Apabila kontaminan berupa jamur, akan terlihat koloni

jamur, biasanya berwarna putih, abu-abu atau hitam, berbentuk seperti serabut, benang, atau kapas.

2. Apabila kontaminan berupa bakteri, terlihat cairan berupalendir berwarna putih atau merah (Anonymous b, 2012).

Pada pembuatan media ini tidak terkontaminan dikarenakan kondisilingkungannya dari segi suhu dan lembab tidaknya lingkungan

disekitarnya. Untuk itu, dapat diketahui bahwasanya praktikum pembuatan media kultur ini berhasil.


20/22

BAB V PENUTUP

5.1 Kesimpulan

Dari data hasil praktikum yang telah didapatkan, diketahui bahwa pembuatan media kultur yang telah dilakukan dapat dikatakan berhasil. Hal ini diketahui dari pengamatan yang telah dilaksanakanselama 2 minggu pengamatan (dengan selang waktu 2 hari sekali),yaitu warna dari larutan yang berada di dalam botol kultur tutup

plastik maupun tutup alumunium berwarna putih dan sudahmengental.

5.2 Saran

Pada bab tiga dijelaskan lagi mengapa larutannya diberikadarnya harus seperti itu. Terima kasih.


21/22

DAFTAR PUSTAKA

Anonymousa

, 2012. Pembuatan Media Kulur Jaringan. http://sterili-sasi mediakulturjaringaninvitro.blogspot.com. Di-

akses tanggal 05 November 2012.

Anonymous b, 2012. Ciri Eksplan Terkontaminan. http://mediaperba-nyakansecarakulturjaringan.blogspot.com/2010/08/mengatur-tata-letak-dalam-pemeliharaan.html. Di-akses tanggal 05 November 2012.

Herawan, T dan M. Naiem. 2006. Pengaruh Jenis Media danKonsentrasi Zat Pengatur Tumbuh TerhadapPerakaran pada Kultur Jaringan Cendana (Santalumalbum Linn.). Jurnal Agrosains 19(2) : 103-109.

Sriyanti, Daisy P. 1994. Teknik Kultur Jaringan. Kanisius. Yogya.

Suryowinoto, M. 1991. Budidaya Jaringan dan Manfaatnya. FakultasBiologi. Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta.
http://sterilisasi/http://mediaperba-/http://mediaperba-/http://sterilisasi/


22/22

LAMPIRAN

Pada media kultur dengan penutup alumunium foil yang tidakterkontaminasi.

Pada media kultur dengan penutup plastik yang tidak terkontamina-si.

10 pembuatan media kultur.docx

Documents