Uji Kadar Rhodamin B yang Terdapat dalam Terasi dengan metode

Spektrofotodensitometri

Rhodamin B• Rhodamin B (C28H31N2O3Cl) adalah pewarna sintetis

yang digunakan pada industri tekstil dan kertas. Rhodamin B berbentuk serbuk kristal merah keunguan dan dalam larutan akan berwarna merah terang berpendar

• Rhodamin B sangat berbahaya jika terhirup, mengenai kulit, mengenai mata dan tertelan. Dampak yang terjadi dapat berupa iritasi pada saluran pernafasan, iritasi pada kulit, iritasi pada mata, iritasi saluran pencernaan dan bahaya kanker hati.

Struktur rhodamin B

Terasi

• Terasi adalah bumbu masak yang dibuat dari ikan dan atau udang yang di fermentasikan, berbentuk seperti pasta dan berwarna hitam-coklat, kadang ditambahi bahan pewarna sehingga menjadi kemerahan. Terasi memiliki bau yang tajam dan biasanya digunakan untuk membuat sambal terasi, tapi juga ditemukan dalam berbagai resep tradisional Indonesia.

• Beberapa produsen menambahkan rhodamin B pada terasi untuk memberi warna merah segar pada terasinya.

KLT-Spektrofotodensitometri

• Kromatografi lapis tipis merupakan bentuk kromatografi planar selain kromatografi kertas, dengan fase diam berupa lapisan yang seragam (uniform) pada permukaan bidang datar yang didukung oleh lempeng kaca, plat aluminium, atau plat plastik.

• Fase gerak dikenal sebagai pelarut pengembang akan bergerak disepanjang fase diam karena pengaruh kapiler pada pengembangan secara menaik (ascending) atau karena pengaruh gravitasi pada pengembangan secara menurun (descending).

• Pemilihan fase gerak didasarkan pada keterpisahan senyawa-senyawa .dalam analit yang didasarkan pada nilai Rf atau hRf.

Analisis kualitatif dan Kuantitatif

• Kualitatif

Nilai Rf yang sama pada kondisi yang sama menunjukkan senyawa yang identik

• Kuantitatif

1. Pengukuran luas bercak

2. Densitometri, mengerok dan mengidentifikasi dengan analisis yang lain, misal spektrofotometri

Densitometer

• Densitometer dapat bekerja secara serapan atau flouresensi

Skema Instrumen SpektrofotodensitometerKeterangan: L (light); SL (slit); MC (monokromator); PM (photomultiplier); FF (filter fluorescens); P (plat); SCS (sistem for circular scanning).

Con’d

• Prinsip kerja spektrofotodensitometri berdasarkan interaksi antara radiasi elektromagnetik dari sinar UV-Vis dengan analit yang merupakan noda pada plat.

• Radiasi elektromagnetik yang datang pada plat diabsorpsi oleh analit, ditransmisi atau diteruskan. Jika plat yang digunakan transparan, radiasi elektromagnetik yang diabsorpsi oleh analit atau indikator plat dapat diemisikan berupa flouresensi dan fosforesensi

Con’d

• Analisis kuantitatif dari suatu senyawa yang telah dipisahkan dengan KLT dapat dilakukan dengan densitometri langsung pada plat KLT untuk menentukan kadar suatu senyawa sampel

• Noda-noda yang telah terpisah pada plat KLT dimasukkan ke dalam alat ini, kemudian ditentukan kadarnya berdasarkan hubungan antara Area Under Curve (AUC) noda dengan konsentrasi senyawa dalam noda

Analisis senyawa pada sampel

1. Pembuatan larutan baku rhodamin-B konsentrasi 1 mg/mL---Diencerkan menjadi 50 ng/μL.

2. Pembuatan larutan baku standar rhodamin-B dengan 5 gradien konsentrasi 100 ng/μL, 200 ng/μL, 400 ng/μL, dan 800 ng/μL.

3. Pembuatan 5 buah sampel dengan menggunakan 5 buah terasi dengan merek berbeda.

KLT

1. Preparasi Plat : Pemotongan plat dan pencucian plat

2. Pembuatan Fase Gerak (Isopropanol : amonium hidroksida = 8 : 2 v/v)

3. Penjenuhan Chamber

4. Penotolan Sampel

5. Elusi

6. Spektrofotodensito

Hasil dan Pembahasan

1. Hasil• Rhodamin dielusi dengan fase gerak isopropanol dan

ammonium hidroksida memberikan harga faktor retensi (Rf) sebesar 0,66, Batas deteksi (LOD) dan Batas kuantisasi (LOQ) penetapan Rhodamin B pada (λ) sebesar 533 nm adalah LOD sebesar 50,0542 ng dan LOQ sebesar 166,847 ng.

• Penetapan kadar Rhodamin pada sampel terasi ditampilkan pada tabel 2. Dari 5 sampel dideteksi 2 sampel mengandung Rhodamin, (1 sampel terukur sedangkan 1 sampel hanya terdeteksi).

2. Pembahasan

• Hasil identifikasi pada 5 (lima) sampel terasi yang beredar di pasaran ditemukan 2 (dua) sampel terasi yang mengandung pewarna merah Rhodamin B

• Sampel yang mengandung Rhodamin B dapat dilihat pada gambar 1 dan 2

Gambar 1

• Pada gambar (sampel 1) diatas dapat dilihat bahwa semyawa rhodamin B terdeteksi pada alat walaupun konsentrasinya sangat kecil

Gambar 2

• Pada sampel 5 kadar senyawa rhodamin B dalam sampel sangatlah tinggi.

Con’d

• Kurva baku standar yang didapat adalah

y = 8.0675x + 907.93R 2 = 0.9993

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

0 200 400 600 800 1000

S eries 1

R entang A UCs tandar

• Sehingga dapat dihitung konsentrasi Rhodamin B dalam sampel adalah berdasarkan tabel di samping.

Nama Konsentrasi

(ng)

AUC Nilai y’(ng)

Nilai (y-y’)2

Sampel I -41,1925 575,6 - -

Sampel V 1240,746 10917 - -

Standar I 100 1777,3 1714,3 1714,3

Standar II 200 2426,4 2521 2521

Standar III

400 4167,9 4134,4 4134,4

Standar IV

800 7361,4 7361,2 7361,2

Kesimpulan

• Dari lima buah sampel terasi dua diantaranya mengandung pewarna Rhodamin-B

• Rhodamin-B sangat berbahaya bagi tubuh, sehingga sekecil apapun jumlahnya, keberadaan senyawa ini dalam makanan sangat dilarang.