7/26/2019 Uji Imunohistokimia Tunel

1/2

UJI IMUNOHISTOKIMIA TUNEL

Metode untuk mendeteksi sel yang mengalami apoptosis dapat

berdasarkan pada karakteristik apoptosis yang salah satunya adalah terjadinya

fragmentasi DNA. Metode yang umum digunakan untuk mendeteksi fragmentasi

DNA secara enzimatis adalah dengan menggunakan metode TUNE !Terminal

deo"ynucleotidyl Transferase#mediated dUT$ Nick End abeling%. &eagen

TUNE terdiri dari enzim terminal transferase yang berperan mengenali ujung#

ujung '()* !nick end% yang dihasilkan oleh adanya fragmentasi DNA dan

fluorescein#dUT$ untuk mem+isualisasikan ujung '()* tersebut yang dapat

diamati menggunakan mikroskop fluoresensi, flo- cytometry, ataupun mikroskop

cahaya.

$ada penelitian ini akan dilakukan pengamatan dengan mikroskop cahaya

dan untuk mem+isualisasikan perbandingan sel apoptosis dengan sel non#

apoptosis dalam satu lapang pandang pengamatan, digunakan metoda double

staining menggunakan reagen TUNE dan propidium iodida. TUNE hanya akan

mendeteksi sel apoptosis dan memberikan fluoresensi hijau, sedangkan propidium

iodida akan mendeteksi sel nonapoptosis dan memberikan fluoresensi merah.

$rosedur kerja

1. akukan deparafinasi preparat !blok parafin% dengan "ylene sebanyak ' kali

masing#masing ' menit.

2. $reparat di#rehidrasi dengan menggunakan etanol /001, etanol 231, dan

etanol 40 masing # masing selama dua menit, dua menit, satu menit danterakhir dengan air selama satu menit.

3. &ehidrasi preparat dengan a5uades steril.

4. Tetesi preparat dengan 30 6l TUNE labeling mix !terdiri dari 3 6l enzim

terminal deo"ynucleotydil transferase dan 73 6l fluorescein#dUT$.

5. Tutup preparat dengansiliconize cover slip.

6. 8nkubasi preparat pada suhu '49 : selama '0 menit di dalam moist chamber.

7. :uci preparat dengan $;< !$hosphate ;uffer

7/26/2019 Uji Imunohistokimia Tunel

2/2

10. 8nkubasi preparat dengan larutan propidium iodide pada suhu ruang

selama /0 menit.

11.:uci preparat dengan $;< sebanyak ' kali.

12. Tutup preparat dengan cover slidediameter /= mm.

13. Amati sel apoptosis !fluoresensi hijau% menggunakan mikroskop

fluoresensi dengan perbesaran /000".

arasati. $rosedur Tetap $engecatan Tunel