UJI ANTIKANKER EKSTRAK METANOL JAMUR

YANG DIISOLASI DARI TANAH DAERAH WONOGIRI

TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA MCF-7

SECARA IN VITRO

SKRIPSI

Oleh :

RATNA LESTARI

K100130073

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA

SURAKARTA

2017

ii

UJI ANTIKANKER EKSTRAK METANOL JAMUR

YANG DIISOLASI DARI TANAH DAERAH WONOGIRI

TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA MCF-7

SECARA IN VITRO

SKRIPSI

Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai

derajat Sarjana Farmasi (S. Farm) pada Fakultas Farmasi

Universitas Muhammadiyah Surakarta

di Surakarta

Oleh :

Ratna Lestari

K100130073

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA

SURAKARTA

2017

v

KATA PENGANTAR

Assalamu’alaikum Wr. Wb

Dengan memanjatkan puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah

memberikan nikmah dan hidayah-Nya, sehingga penulis mampu menyelesaikan

penulisan skripsi dengan judul : “UJI ANTIKANKER EKSTRAK

METANOL JAMUR YANG DIISOLASI DARI TANAH DAERAH

WONOGIRI TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA MCF-7

SECARA IN VITRO”, sebagai prasyarat untuk memperoleh gelar strata satu

farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.

Terselesainya penulisan skripsi ini, tak luput dari bantuan dan dukungan

dari berbagai pihak. Oleh karena itu penulis ingin mengucapkan terimakasih

kepada :

1. Azis Saifudin, M.Sc., PH.D., Apt., selaku dekan Fakultas Farmasi Universitas

Muhammadiyah Surakarta dan selaku dosen pembimbing.

2. Bu Maryati, Ph.D., Apt. selaku penguji skripsi

3. Bu Ratna Yuliani, M.Biotech.St. selaku penguji skripsi

4. Ayah dan Ibu tercinta yang selalu memberikan dukungan baik mental,

spriritual dan finansial untuk kelancaran studi penulis.

5. Safira Sarah Rosita dan Nina Sri Wulan selaku tim peneliti.

Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna, saran dan

kritik yang membangun sangat penulis harapkan. Penulis berharap semoga skripsi

ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang memerlukan dan bagi pembaca.

Wassalamu’alaikum Wr.Wb.

Surakarta, 23 Januari 2017

Penulis

vi

DAFTAR ISI

Halaman

JUDUL SKRIPSI .................................................................................................... ii

PENGESAHAN SKRIPSI ..................................................................................... iii

KATA PENGANTAR ............................................................................................ v

DAFTAR ISI .......................................................................................................... vi

DAFTAR TABEL ................................................................................................ viii

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. ix

DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... xi

DAFTAR SINGKATAN ...................................................................................... xii

ABSTRAK ........................................................................................................... xiii

ABSTRACT ........................................................................................................... xiv

BAB I. PENDAHULUAN ...................................................................................... 1

A. Latar Belakang Masalah ....................................................................1

B. Rumusan Masalah .............................................................................3

C. Tujuan Penelitian ...............................................................................3

D. Tinjauan Pustaka ...............................................................................3

1. Tanah ........................................................................................3

2. Jamur ........................................................................................4

3. Kanker ......................................................................................4

4. Sel Kanker MCF-7 ...................................................................7

5. Uji Sitotoksisitas .......................................................................7

6. MTT assay ................................................................................7

E. Keterangan Empiris..........................................................................8

vii

BAB II. METODE PENELITIAN .......................................................................... 9

A. Kategori Penelitian dan Rancangan Penelitian ................................9

1. Kategori Penelitian ...................................................................9

B. Variabel Penelitian ...........................................................................9

C. Alat dan Bahan .................................................................................9

D. Tempat Penelitian ..........................................................................10

E. Jalannya Penelitian .........................................................................10

F. Analisis Data ..................................................................................18

G. Kromatografi Lapis Tipis ...............................................................18

BAB III. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN ..................................... 20

A. Pengambilan Sampel ......................................................................20

B. Skrining Primer ..............................................................................21

C. Ekstraksi .........................................................................................25

D. Uji Sitotoksik Terhadap Sel Kanker Payudara MCF 7 ..................26

1. Pemeliharaan sel MCF 7 dan metode uji MTT assay ............26

2. Uji sitotoksik terhadap sel kanker payudara MCF-7 ..............29

E. Uji Kualitatif ..................................................................................32

BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 34

A. Kesimpulan ....................................................................................34

B. Saran...............................................................................................34

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 35

LAMPIRAN .......................................................................................................... 35

viii

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1. Letak geografis di setiap lokasi pengambilan sampel ............................ 12

Tabel 2. Rendemen Hasil Ekstraksi ..................................................................... 25

Tabel 3. Data % sel hidup ekstrak metanol jamur dan media pertumbuhan jamur

pada setiap konsentrasi ........................................................................... 29

Tabel 4. Komposisi media Czapek dox................................................................ 31

ix

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Skema jalannya penelitian ................................................................... 11

Gambar 2. Skema uji sitotoksik ............................................................................ 17

Gambar 3. Pengamatan identifikasi jamur pada cawan Petri pertama dan kedua

ekstrak metanol jamur tanah waduk pada media Czapek dox setelah

14 hari. ................................................................................................ 22

Gambar 4. Pengamatan identifikasi jamur pada cawan Petri pertama dan kedua

ekstrak metanol jamur tanah hutan pada media Czapek dox setelah 14

hari. ..................................................................................................... 23

Gambar 5. Pengamatan identifikasi jamur pada cawan Petri pertama dan kedua

ekstrak metanol jamur tanah sawah pada media Czapek dox setelah 14

hari. ..................................................................................................... 24

Gambar 6. Pengamatan identifikasi jamur pada cawan Petri pertama dan kedua

ekstrak metanol jamur peternakan sapi pada media Czapek dox setelah

14 hari. ................................................................................................ 24

Gambar 7. Pengamatan identifikasi jamur pada cawan Petri pertama dan kedua

ekstrak metanol jamur tanah kapur pada media Czapek dox setelah 14

hari. ..................................................................................................... 25

Gambar 8. Pemanenan sel MCF-7 pada konfluen 80% dan pemisahan sel setelah

diberi tripsin. ...................................................................................... 27

Gambar 9. Reaksi reduksi garam kuning tetrazolium menjadi formazan berwarna

ungu. ................................................................................................... 28

Gambar 10. Perubahan sel MCF-7 dari sel normal dan sel mati setelah diberi

ekstrak. ............................................................................................... 28

Gambar 11. Morfologi sel MCF 7 yang hidup dan mati ....................................... 29

Gambar 12. Grafik pengaruh konsentrasi ekstrak metanol jamur waduk terhadap

% sel hidup MCF-7. ........................................................................... 30

Gambar 13. Pengaruh konsentrasi Czapek dox terhadap % sel hidup .................. 31

x

Gambar 14. Pengaruh konsentrasi ekstrak metanol jamur hutan, sawah,

peternakan sapi, tanah kapur dan media Czapek dok terhadap

persentase sel hidup. ........................................................................... 32

Gambar 15. Hasil KLT ekstrak jamur tanah waduk pada (A) sinar tampak, (B)

sinar UV 254 nm, (C) sinar UV 366. ................................................. 33

xi

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Foto pengambilan sampel ................................................................ 38

Lampiran 2. Perhitungan rendemen ..................................................................... 39

Lampiran 3. Perhitungan larutan sampel ............................................................. 41

Lampiran 4. Perhitungan IC50 ekstrak metanol jamur tanah hutan..................... 43

Lampiran 5. Perhitungan IC50 ekstrak metanol jamur tanah waduk ................... 44

Lampiran 6. Perhitungan IC50 ekstrak metanol jamur tanah sawah ................... 45

Lampiran 7. Perhitungan IC50 ekstrak metanol jamur tanah peternakan sapi .... 46

Lampiran 8. Perhitungan IC50 ekstrak metanol jamur tanah kapur .................... 47

Lampiran 9. Perhitungan 1C50 ekstrak media pertumbuhan jamur .................... 48

Lampiran 10. Hasil Absorbansi pada ELISA reader ........................................... 49

Lampiran 11. Skema 96 plate well ...................................................................... 50

xii

DAFTAR SINGKATAN

DMEM : Dulbecco’s Modified Eagle Medium

DMSO : Dimethyl Sulfoxide

ELISA : Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay

FBS : Foetal Bovine Serum

IC50 : Inhibitory Concentration 50

KLT : Kromatografi Lapis Tipis

LAF : Laminar Air Flow

MCF-7 : Michigan Cancer Foundation

MK : Media Kultur

MTT : 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazoliumbromide

PBS : Phospate Buffered Saline

SDS : Sodium Dodecyl Sulfate

UV : Ultraviolet

xiii

ABSTRAK

Kanker payudara merupakan penyebab kematian akibat kanker terbesar

kedua di dunia, maka dari itu peneliti tertarik mengembangkan bahan alam sebagai

agen sitotoksik, salah satunya mikroba yang dihasilkan dari tanah. Tujuan

penelitian ini yaitu untuk mengeksplorasi tanah di Wonogiri pada ekosistem yang

berbeda yaitu tanah daerah waduk, hutan, sawah, peternakan sapi, dan tanah kapur

terhadap efek sitotoksik sel MCF-7.

Sampel diambil dengan metode purposive sampling, kemudian

ditumbuhkan pada media Czapek dox selama 14 hari dan dengan metode cawan

pengenceran, pengenceran mencapai konsentrasi 10-3

jamur yang tumbuh kemudian

diekstraksi dengan metanol dan dipekatkan dengan rotary evaporator. Ekstrak

kental metanol jamur dari tanah diuji dengan sel MCF-7 menggunakan metode

MTT pada seri konsentrasi 500 µg/mL; 250 µg/mL; 125 µg/mL; 62,5 µg/mL, dan

31,25 µg/mL. Uji kualitatif menggunakan fase diam plat silika GF 254 dan fase

gerak kloroform : metanol (95 : 5).

Dari hasil penelitian dihitung nilai IC50, namun ekstrak methanol jamur

tanah waduk hanya dapat menghambat 83,95% sel hidup pada konsentrasi 500

µg/mL, sedangkan ekstrak jamur yang diisolasi dari tanah daerah hutan, sawah,

peternakan sapi, dan tanah kapur tidak memiliki efek sitotoksik. Hasil uji kualitatif

ekstrak methanol jamur tanah waduk diduga mengandung komponen poliketida dan

fenil propanoid.

Kata Kunci: Tanah, jamur, MTT, sitotoksik, sel MCF-7.

xiv

ABSTRACT

Breast cancer is the leading cause of cancer deaths the second largest in

the world, and therefore the researchers are interested in developing natural

products as a cytotoxic agent, one of them is microbes be produced from soil. The

purpose of this study is to explore the soil in Wonogiri on different ecosystems

which are land reservoirs area, forests, fields, cattle and limestone soils of the

cytotoxic effects of MCF-7 cells.

Samples were taken with the purposive sampling method, then cultured in

Czapek dox media for 14 days and methods plate dilution, dilution 10-3

mold

growing concentration is then extracted with methanol and then concentrated by

rotary evaporator, condensed methanol extract soil of fungi tested with MCF-7

cells using MTT methode on a series of concentration 500 µg/mL; 250 µg/mL; 125

µg/mL; 62,5 µg/mL, dan 31,25 µg/mL. Qualitative test using silika GF 254 plate

stationary phase and a mobile phase of chloroform: methanol (95: 5).

From the results of this study calculated IC50 values, but the methanol

extract of soil fungi reservoirs can only inhibit 83.95% of living cells at a

concentration of 500 mg / mL, whereas extracts of fungi isolated from soil forest

areas, fields, cattle ranches, and limestone soil has no effect cytotoxic. Qualitative

test of the extract of soil fungi is thought to contain the component polyketides and

phenyl propanoid.

Keywords: Soil, fungi, MTT, MCF-7 cells.