8/18/2019 Tahapan Pembuatan Tanaman Transgenik dengan “Agrobacterium Mediated Transformation of Tobacco”

1/1

Tugas III Matakuliah Bioteknologi

Tahapan Pembuatan Tanaman Transgenik dengan

“ Agrobacterium Mediated Transformation of Tobacco”

1. Bacterial Suspension Preparation

- Bakteri agrobakterium dibiakkan di media agar yang mengandung kanamycin dan

hygromycin. Koloni bakteri yang tumbuh kemudian diinokulasikan ke dalam YEP

cair yang mengandung kanamycin.

- Dikocok dengan shaker selama semalam.

2. Eplant Preparation

- Daun tembakau diambil dari tanaman yang berumur 1 bulan. Daun tembakau

dipotong-potong selebar 3-5 mm menggunakan gunting steril.

- Potongan daun tembakau ditampung dalam botol steril yang berisi g!l" dan #$een

"% kemudian dikocok selama 3 menit &sterilisasi'.- Daun tembakau dipindahkan ke tissu steril pada ca$an petri untuk menyerap g!l".

!. Preculture

- Potongan daun tembakau dikultur selama " hari di dalam media precultur.

- Diinkubasi dalam ca$an petri diba$ah cahaya pada suhu "5o!.

". #o$culti%ation

- Kokultivasi potongan daun tembakau dengan Agrobacterium

dilakukan dengan menanam potongan daun tersebut dengan

 Agrobacterium selama 10-20 menit- Potongan daun dikeringkan dengan tissu steril dalam cawan petri

lalu ditransfer ke dalam media kokultur- Diinkubasi selama 2 hari pada suhu 25o

&. Selection

- (etelah " hari) eksplan dicuci dengan akuades steril yang mengandung ce*ota+ime.

- E+plant dikeringkan dengan tissu steril dan dipindahkan ke media seleksi hingga

tumbuh akar.

'. (ooting

- (etelah proses seleksi) akar akan tumbuh dan dipindahkan ke dalam botol yang berisi

media seleksi yang baru &rooting medium).

- (etelah "-3 minggu) akan didapatkan tanaman tembakau yang sempurna dalam botol.