CANCER CHEMOPREVENTION RESEARCH CENTER FAKULTAS FARMASI UGM

Dokumen nomor : Tanggal : Mengganti nomor : Tanggal :

URAIAN DIBUAT OLEH DIPERIKSA

OLEH DIPERIKSA

OLEH DISETUJU

OLEH Jabatan Peneliti CCRC Staf CCRC Supervisor CCRC Pimpinan CCRC Paraf

Nama Ilyas Pratomo Adam Hermawan Muthi’ Ikawati Edy Meiyanto Tanggal

DAFTAR ISI HALAMAN

DAFTAR ISI

1. TUJUAN 1

2. PENDAHULUAN 2

3. OPERASIONAL 3

Halaman

PROSEDUR TETAP

ISOLASI DNA

A. TUJUAN

Mengatur standar kerja dalam melakukan isolasi DNA dari sampel darah

B. PENDAHULUAN

DNA (Deoxyribonucleid Acid) yang terdiri dari basa guanin, adenin, purin, dan

pirimidin merupakan materi genetik yang fudamental pada organisme. DNA dapat

menjadi suatu target penghambatan perkembangan kanker, selain itu juga dapat berfungsi

untuk deteksi suatu penyakit/kondisi patologis. Isolasi DNA merupakan salah satu cara

untuk mengetahui kemampuan suatu senyawa dalam menghambat perkembangan

kanker.. Isolat DNA yang diperoleh dari sampel darah digunakan untuk amplifikasi DNA

secara PCR untuk deteksi penyakit maupun pengamatan ekspresi gen.

C. PERSIAPAN

-Alat dan Bahan

Ethanol absolute

Isopropanol absolute

PBS

Eppendorf

Tabung mikrosentrifuse

200-300µl darah utuh

Seperangkat alat PCR

Persiapan kit kerja:

Komponen/ warna tutup

Isi Persiapan larutan kerja Stabilitas Kegunaan

3 pink

Protein kinase K

Larutkan protein kinase K dalam 4,5 ml aqua bides, campur

15-250 C, stabil 12 bulan

Cell lysis

4a hitam

Inhibitor removal buffer

Tambahkan 20 ml etanol absolute pada inhibitor removal buffer, campur. Catatan: tandai botol bahwa etanol 1 sudah ditambah.

15-250 C, stabil sampai tgl kadaluarsa

Untuk menghilangkan PCR inhibitor

4 biru

Wash buffer

Tambahakan 80 ml etanol absolute pada wash buffer, campur. Catatan: tandai botol bahwa etanol 1 sudah ditambah

15-250 C, stabil sampai tgl kadaluarsa

Menghilangkan pengotor

D. OPERASIONAL

No Prosedur Kerja Perhatian 1. Ambil sampel uji sebanyak 200 µl darah utuh.

Segera tambahkan 200 µl binding buffer dan 40 µl protein kinase K, segera campur, inkubasi 10 menit 720C. Catatan: sebelum digunakan panaskan elution buffer sampai 700C

2. Tambahkan 100 µl isopropanol, campur. Lalu masukkan campuran ke tabung high pure filter, sentrifuse selama 1 menit pada 8000 x g.

Ambil supernatannya.

3. Sentrifuse 1 menit pada 8000 x g. Ambil supernatannya

Tambahkan 500 µl inhibitor removal buffer.

4. Sentrifuse 1 menit pada 8000 x g. Ambil supernatannya

Tambahkan 500 µl wash buffer.

5. Sentrifuse 1 menit pada 8000 x g. Ambil supernatannya

Tambahkan 500 µl wash buffer.

6. Sentrifuse 10 detik pada 13.000 x g 7. Sentrifuse 1 menit pada 8000 x g.

Ambil supernatannya Masukkan dalam tabung baru dan tambahkan 200 µl elution buffer 700C. Hasil yang diperoleh merupakan template DNA murni

Muthi’ SOP yang ini aku gak begitu donk... Please check lagi ya kebenarane....

Jika ada sesuatu dalam SOP ini tidak bisa dilakukan atau tidak sesuai dengan kenyataan dilapangan, segera laporkan kepada Staff/Supervisor CCRC