SELEKSI DAN KARAKTERISASI Bacillus sp. PENGHASIL

ANTIBAKTERI PENGHAMBAT Vibrio sp. DARI KAWASAN HUTAN

MANGROVE HANURA

(Skripsi)

Oleh

SUNDARI AYU OKTALIA

JURUSAN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS LAMPUNG

2019

http://www.kvisoft.com/pdf-merger/

Sundari Ayu Oktalia

iii

ABSTRAK

SELEKSI DAN KARAKTERISASI Bacillus sp. PENGHASIL ANTIBAKTERI

PENGHAMBAT Vibrio sp. DARI KAWASAN HUTAN MANGROVE

HANURA

Oleh

SUNDARI AYU OKTALIA

Ekosistem hutan mangrove merupakan tempat banyak ditemukannya Bacillus sp.

yang unik. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan isolat Bacillus sp.yang dapat

menghambat pertumbuhan bakteri Vibrio sp. Penelitian ini dilakukan dengan

menyeleksi 77 isolat Bacillus sp. dari kawasan hutan mangrove hanura. Selanjutnya

bakteri terseleksi dilakukan pengujian terhadap cekaman garam, cekaman pH, uji

patogenisitas, dan uji kepekaan terhadap antibiotik. Isolat terpilih diuji dengan kultur

bersama dengan bakteri Vibrio sp. selama 7 hari. Bacillus sp. dan Vibrio sp. dikultur

bersama kembali dengan penambahan Bakteri Fotosintetik Anoksigenik selama 4

hari.

Sundari Ayu Oktalia

iii

Hasil seleksi awal didapatkan 4 isolat yang dapat menghambat pertumbuhan

Vibrio sp. Hasil akhir menunjukan isolat Bacillus IL2K8 diketahui dapat

menghambat petumbuhan Vibrio sp., dapat tumbuh pada kadar garam 0 %, 3 %, 6 %

dan pH 7 serta 10. Isolat IL2K8 tidak bersifat patogen, resisten terhadap antibiotik

amplisin, striptomisin, asam nalidiksat dan kloramfenikol namun peka terhadap

antibiotik trimetoprim. Dalam kultur bersama pada media cair IL2K8 bersama

dengan Bakteri Fotosintetik Anoksigenik (BFA) dapat menghambat pertumbuhan

Vibrio sp.

_______

Kata kunci : Antibakteri, Bacillus sp., BFA, Mangrove, Vibrio sp.

SELEKSI DAN KARAKTERISASI Bacillus sp. PENGHASIL

ANTIBAKTERI PENGHAMBAT Vibrio sp. DARI KAWASAN HUTAN

MANGROVE HANURA

Oleh

SUNDARI AYU OKTALIA

Skripsi

Sebagai Salah Satu Syarat untuk Mencapai Gelar

SARJANA SAINS

Pada

Jurusan Biologi

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS LAMPUNG

BANDAR LAMPUNG

2019

Judul Skripsi : Seleksi dan Karakterisasi Bacillus sp. Penghasil

Antibakteri Penghambat Vibrio sp. dari Kawasan

Hutan Mangrove Hanura

Nama Mahasiswa : Sundari Ayu Oktalia

NPM : 1517021164

Jurusan / Program Studi : Biologi / S1 Biologi

Fakultas : Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

MENYETUJUI

1. Komisi Pembimbing

Pembimbing 1 Pembimbing 2

Dr. Sumardi, M.Si. Ir. Salman Farisi, M. Si.

NIP. 196503251991031003 NIP. 196104181987031001

2. Ketua Jurusan Biologi

FMIPA Unila

Drs. M. Kanedi, M.Si.

NIP. 196101121991031002

MENGESAHKAN

1. Tim Penguji

Ketua : Dr. Sumardi, M.Si. .................................

Sekretaris : Ir. Salman Farisi, M.Si. .................................

Penguji

Bukan Pembimbing : Dra. C. N. Ekowati, M.Si. .................................

2. Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu pengetahuan Alam

Drs. Suratman, M.Sc.

NIP. 196406041990031002

Tanggal Lulus Ujian Skripsi : 3 Juli 2019

PERNYATAAN KEASLIAN SKRIPSI

Yang bertanda tangan dibawah ini:

Nama : Sundari Ayu Oktalia

NPM : 1517021164

Menyatakan dengan sebenar-benarnya dan sesungguh-sungguhnya, bahwa

skripsi saya yang berjudul:

“Seleksi dan Karakterisasi Bacillus sp. Penghasil Antibakteri

Penghambat Vibrio sp. dari Kawasan Hutan Mangrove Hanura”

Adalah benar karya saya sendiri yang saya susun dengan mengikuti norma

dan etika akademik yang berlaku. Selanjutnya, saya juga tidak keberatan

apabila sebagian atau seluruh data pada skripsi ini digunakan oleh dosen dan

/ atau program studi untuk kepentingan publikasi, sepanjang nama saya

disebutkan. Jika dikemudian hari terbukti pernyataan saya tidak benar, saya

bersedia menerima sanksi akademik berupa pencabutan gelar sarjana

maupun tuntutan hukum.

Bandar Lampung, 24 Juli 2019

Yang menyatakan,

Sundari Ayu Oktalia

NPM. 1517021164

RIWAYAT HIDUP

Sundari Ayu Oktalia putri sulung dari tiga bersaudara

dari pasangan Bapak Suparno dan Ibu Welly Ahwiyah

yang dilahirkan di Desa Sukananti, Kecamatan Way

Tenong, Kabupaten Lampung Barat pada tanggal 12

Oktober 1997.

Penulis mengawali pendidikan Sekolah Dasar di SD

Negeri 1 Sukananti pada tahun 2009. Pendidikan formal penulis dilanjutkan ke

jenjang Sekolah Menengah Pertama di SMP Negeri 2 Way Tenong dan

diselesaikan pada tahun 2012, penulis menyelesaikan pendidikan wajib belajar 12

tahun di SMAN 1 Way Tenong pada tahun 2015. Penulis selanjutnya menempuh

pendidikan di Perguruan Tinggi Negeri Universitas Lampung melalui jalur

Seleksi Bersama Masuk Perguruan Tinggi Negeri (SBMPTN) pada tahun 2015 di

Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.

Selama menjadi mahasiswa, penulis pernah menjadi asisten praktikum mata

kuliah Struktur dan Perkembangan Hewan, Mikrobiologi, Mikrobiologi Pangan

dan Industri serta Bioteknologi. Penulis juga aktif di Organisasi Himpunan

Mahasiswa Biologi (HIMBIO) sebagai anggota Bidang Ekspedisi pada tahun

2016-2017.

Pada tahun 2018 penulis pernah menjadi salah satu penerima Beasiswa

Peningkatan Prestasi Akademik (PPA) Fakultas Matematika dan Ilmu

Pengetahuan Alam UNILA.

Penulis pernah mengikuti Karya Wisata Ilmiah di Kecamatan Air Naningan

Kabupaten Tanggamus pada tahun 2016 dan melaksanakan Kuliah Kerja Nyata

(KKN) di Desa Setia Bumi, Kecamatan Gunung Terang, Kabupaten Tulang

Bawang Barat, pada Januari hingga Maret 2018. Penulis melaksanakan Praktik

Kerja Lapangan di Laboratorium Mikrobiologi Pusat Penelitian Biomaterial LIPI

Cibinong pada bulan Juli hingga Agustus 2018 dan menyelesaikan laporan praktik

kerja lapangan dengan judul “Evaluasi Media Tumbuh Jamur Entomopatogen

Untuk Biopestisida”.

MOTTO

“ Allah tidak membebani seseorang melainkan sesuai dengan kesanggupannya”

(QS. Al-Baqarah : 286)

“Sesungguhnya dibalik kesulitan pasti ada kemudahan”

(QS. Al Insyirah :5-6)

“The dawn right before the sun rises is the darkest”

(BTS)

“Of course it’s hard. It’s supposed to be hard. If it was easy, everyone would do it.

Hard is what makes it great”

(Anonim)

“Your life is not only about your dreams, but also about their dreams”

(Penulis)

PERSEMBAHAN

Bismillahirrahmanirrahim

Alhamdulillahirabbila’lamin, atas segala nikmat yang telah Engkau berikan ya Allah

Allahumashalialasyayidina Muhammad, shalawat serta salam semoga tercurah kepada insan

paling mulia, suri tauladan kami Rasulullah SAW

Kupersembahkan karya kecilku ini untuk orang-orang tercinta

Papa dan Mama yang tiada hentinya menyebutkan namaku dalam tiap

doa’nya, yang selalu memberikan pelukan hangat penuh kasih serta beribu cinta

yang tiada hentinya

Almarhumah nenekku tercinta yang selalu mencurahkan kasih sayangnya hingga akhir

Kedua adikku, yang selalu memberikan do’a, semangat, canda tawa dan kasih sayang

Untuk orang-orang luar biasa yang selalu mendukung, memberi banyak pengajaran

dan motivasi dalam tiap perjalananku

Dan Almamaterku tercinta,

Universitas Lampung

1

SANWACANA

Alhamdulillahirabbila’lamin, karena berkat rahmat dan karunia Allah SWT

penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul “Seleksi dan Karakterisasi

Bacillus sp. Penghasil Antibakteri Penghambat Vibrio sp. dari Kawasan

Hutan Mangrove Hanura” yang merupakan salah satu syarat untuk memperoleh

gelar Sarjana Sains di Universitas Lampung. Penelitian ini merupakan bagian dari

proyek penelitian Bapak Dr. Sumardi, M.Si. tahun 2018.

Penulis telah menerima banyak bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak dalam

penyusunan skripsi ini. Oleh sebab itu, sebagai wujud rasa hormat penulis

menyampaikan ucapan terimakasih kepada:

1. Kedua orangtua, Bapak Suparno dan Ibu Welly Ahwiyah atas do’a,

dukungan, cinta dan kasih sayang serta segalanya;

2. Almarhumah nenekku tercinta yang telah membesarkan, mendidik,

memberikan do’a, dukungan, nasehat, cinta dan kasih sayang tak terhingga

sampai akhir;

3. Kedua adikku, Rahma Azizah dan M. Dimas Pranata yang selalu

menguatkan iman, membagikan canda tawa, kasih sayang, dukungan serta

motivasi;

xiii

4. Bapak Dr. Sumardi, M.Si. selaku dosen pembimbing utama yang telah

memberikan ilmu, bantuan, kritik dan saran, serta motivasi selama

perkuliahan, pelaksanaan penelitian hingga penyusunan skripsi;

5. Bapak Ir. Salman Farisi, M.Si. selaku dosen pembimbing kedua atas saran,

bimbingan dan motivasi yang telah diberikan kepada penulis selama

pelaksanaan penelitian hingga penyusunan skripsi;

6. Ibu Dra. C.N. Ekowati, M.Si. selaku dosen pembahas atas ilmu, kritik dan

saran yang telah diberikan kepada penulis dalam penyusunan skripsi;

7. Bapak Prof. Sutyarso, M.Biomed. selaku pembimbing akademik yang

selalu memberikan pengarahan, bimbingan dan saran selama perkuliahan;

8. Bapak Drs. Suratman, M.Sc. selaku Dekan FMIPA Universitas Lampung;

9. Bapak Drs. Kanedi, M.Si. selaku Ketua Jurusan Biologi FMIPA

Universitas Lampung;

10. Ibu Dra. Yulianty, M.Si. selaku Ketua Program Studi S1 Biologi FMIPA

Universitas Lampung;

11. Seluruh dosen, dan staff Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lampung

yang telah memberikan ilmu dan bantuan kepada penulis;

12. Ibu Oni Mastuti S.Si. selaku Laboran Laboratorium Mikrobiologi terbaik

atas kerjasama, dukungan, do’a dan dan bantuan selama penelitian dan

penulisan skripsi ini;

13. Ibu Nunung Cahyawati A.Md. selaku Laboran Laboratorium

Biomolekuler atas bantuan, kerjasama dan dukungan selama penelitian

dan penulisan skripsi;

xiv

14. Mbah Kodim dan Mbah Wastam beserta keluarga yang senantiasa

memberikan do’a dan dukungan kepada penulis selama perkuliahan,

penelitian hingga penyusunan skripsi ini;

15. Tanteku Febri Nurrohmah atas segala bantuan, dukungan, do’a dan

motivasi selama perkuliahan, penelitian hingga penyusunan skripsi ini;

16. Seluruh keluarga atas dukungan, do’a, motivasi serta pembelajaran yang

telah diberikan khususnya pada saat penelitian dan penyusunan skripsi ini;

17. Mba Desfika Ardia Putri S. Pd., Yunita, Cahya Intan L., Dwi Eka R., Siti

Mardiana, M. Iqbal dan Edelyn Stephani S. selaku teman jatuh, bangun

dan berjalan bersama selama penelitian hingga penyusunan skripsi ini;

18. Sahabat-sahabatku Siti Mardiana, Yunita, Inas Fadhilah, Tia Annisa,

Winda Yulia Ningtyas, Sri Rahmaning Tiyas, Noufallia Fikri Arra, Nada

Risa Zain dan Dewi Larasati yang selalu memberikan dukungan, bantuan,

semangat, canda tawa, rasa kekeluargaan serta pengalaman dan pengajaran

yang diperoleh bersama selama perkuliahan hingga penyusunan skripsi ini;

19. Eriola Maulidya, teman seperARMY-anku, atas bantuan, dukungan,

gangguan dan godaan selama penelitian dan penyusunan skripsi ini;

20. Mba Nandia, Mba Komang, Yuk Rida serta kakak tingkat Microholic ’14

atas arahan dan bimbingan selama penelitian dan penyusunan skripsi;

21. Micrew 2015 atas bantuan dan kebersamaannya selama ini;

22. Fathia Adni F., Resti Amanda P., Trisna Ramadanti, Resti Safitri dan

Nurul Aniqotun atas dukungan, semangat dan kebersamaan selama masa

sulit perkuliahan dan penyusunan skripsi;

xv

23. Sahabat-sahabat setiaku Riza Fitriani, Pitri Andriani, Siska Yulina,

Ramiah dan Desta Feranita atas do’a dan dukungan selama ini;

24. Teman-teman Neofelis (Nest of Excellent Biologist) 2015, seluruh kakak

dan adik tingkat Jurusan Biologi FMIPA Unila atas kebersamaannya yang

telah diberikan;

25. Team Hokage Desa Setia Bumi Uncu Rima Anggari, Kak Brygita, Ami

Amantha, Kak Manez, Taufik, Soparid serta Bapak Eko dan keluarga atas

kebersamaan, do’a dan dukungan selama KKN, penelitian dan penyusunan

skripsi ini;

26. Semua pihak dan instansi yang telah membantu penulis dalam pelaksanaan

penelitian dan penyusunan skripsi.

Akhir kata, penulis menyadari masih banyak kesalahan dan kekurangan dalam

penyusunan dan penulisan skripsi ini. Penulis berharap semoga skripsi ini

dapat memberikan manfaat untuk kita semua.

Bandar Lampung, Juli 2019

Sundari Ayu Oktalia

xvii

DAFTAR ISI

Halaman

SAMPUL DEPAN ............................................................................................. i

ABSTRAK ......................................................................................................... ii

HALAMAN JUDUL DALAM ......................................................................... iv

HALAMAN PERSETUJUAN ......................................................................... v

HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................... vi

PERNYATAAN KEASLIAN SKRIPSI .......................................................... vii

RIWAYAT HIDUP ........................................................................................... viii

HALAMAN PERSEMBAHAN ....................................................................... x

MOTTO .............................................................................................................. xi

SANWACANA .................................................................................................. xii

DAFTAR ISI ...................................................................................................... xvi

DAFTAR TABEL ............................................................................................. xviii

DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xx

I. PENDAHULUAN ........................................................................................ 1 A. Latar Belakang ......................................................................................... 1

B. Tujuan ....................................................................................................... 3

C. Manfaat ..................................................................................................... 3

D. Kerangka Pikir.......................................................................................... 3

E. Hipotesis ................................................................................................... 5

xvii

II. TINJAUAN PUSTAKA .............................................................................. 6 A. Hutan Mangrove ....................................................................................... 6

1. Fungsi dan Manfaat Biologis dan Ekologis........................................ 7 2. Fungsi dan Manfaat Fisik ................................................................... 8 3. Fungsi dan Manfaat Ekonomi dan Produksi ...................................... 8

B. Bacillus sp. ............................................................................................... 9 C. Antibakteri ................................................................................................ 11 D. Probiotik ................................................................................................... 13 E. Vibrio sp. . ................................................................................................ 15 F. Bakteri Fotosintetik Anoksigenik (BFA) ................................................. 17

III. METODE PENELITIAN ......................................................................... 18 A. Waktu dan Tempat ............................................................................... 18 B. Alat dan Bahan ..................................................................................... 18 C. Metode Penelitian ................................................................................. 19

a. Seleksi Isolat Bacillus sp. ................................................................ 20 1. Pembuatan Suspensi Isolat Bacillus sp. dan Vibrio sp. ............. 20 2. Seleksi Isolat Penghasil Senyawa Antibakteri .......................... 20

b. Karakterisasi Isolat Bacillus sp. ...................................................... 21 1. Uji Cekaman Terhadap Kadar Garam ....................................... 21 2. Uji Cekaman Terhadap pH ........................................................ 21 3. Uji Patogenisitas ........................................................................ 21 4. Uji Kepekaan Antibiotik............................................................ 22

c. Uji Kultur Bersama Isolat Bacillus sp. dan Vibrio sp. ................... 22 d. Uji Kultur Bersama Isolat Bacillus sp. dan Vibrio sp. dan BFA ... 23

D. Diagram Alir ........................................................................................ 25

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN.................................................................. 26 A. Seleksi dan Karakterisasi Isolat Bacillus sp. Penghasil Antibakteri

Penghambat Vibrio sp. ........................................................................ 26

B. Uji Kultur Bersama Isolat Bacillus sp. dan Vibrio sp. ........................ 31 C. Uji Kultur Bersama Isolat Bacillus sp. dan Vibrio sp. dan BFA ......... 34

V. SIMPULAN .............................................................................................. 36

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................... 37

LAMPIRAN .............................................................................................. 43

xvii

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1. Morfologi Bacillus cereus. ................................................................................. 10

2. Grafik pertumbuhan isolat Bacillus sp. (garis terang) dan Vibrio sp. (garis samar)

setelah kultur bersama ............................................................................................ 33

3. Seleksi Isolat Bacillus sp. penghambat Vibrio sp .............................................. 44

4. Uji Cekaman Terhadap Kadar Garam ................................................................ 44

5. Uji Patogenisitas ................................................................................................ 44

6. Uji Kepekaan Antibiotik .................................................................................... 45

5. Bakteri Vibrio sp. Dalam Media TCBS Setelah Kultur Bersama Isolat Bacillus ................................................................................................... 45

8. Bakteri Vibrio sp. Dalam Media TCBS Setelah Kultur Bersama Isolat Bacillus sp.

dan BFA ............................................................................................................ 45

xvii

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

1. Seleksi dan Karakterisasi Isolat Bacillus sp. ..................................................... 27

2. Pertumbuhan Vibrio sp. Setelah Kultur Bersama ............................................. 35

1

I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Provinsi Lampung merupakan wilayah dengan ekosistem hutan mangrove dan

laut yang luas, salah satunya terletak di Desa Hanura Kecamatan Padang

Cermin Kabupaten Pesawaran. Perairan pantai Desa Hanura sebagian besar

ditumbuhi hutan mangrove dan merupakan salah satu kawasan yang subur

karena mendapat masukan bahan organik dari berbagai sumber antara lain air

sungai yang membawa limbah pertanian, serasah daun mangrove pada dasar

hutan dan aktivitas budidaya ikan laut yang menghasilkan limbah organik

(Siegers, 2013). Budidaya ikan laut dan udang juga dapat berkembang di

Desa Hanura karena keadaan alamya yang berada disekitar pantai dan laut.

Namun, sering terjadi kendala dalam usaha budidaya dibidang tersebut

diantaranya adalah munculnya serangan penyakit yang disebabkan oleh

mikroorganisme patogen. Penggunaan antibiotik sering digunakan sebagai

solusi menanggulangi masalah tersebut, tetapi pemberian antibiotik sebagai

solusi ternyata memunculkan masalah baru yaitu terjadinya resistensi

antibiotik.

2

Menurut Samosir et al., (2017) penggunaan bakteri probiotik sebagai agen

biokontrol dapat menjadi solusi dari permasalahan penyakit terhadap budidaya

laut. Probiotik merupakan mikroorganisme hidup yang dalam jumlah yang

cukup memberikan manfaat bagi kesehatan tubuh dan memiliki pengaruh

menguntungkan karena asosiasinya dengan inang (Wardika et al., 2014;

Anurogo, 2014). Bakteri probiotik mampu menghasilkan asam laktat,

hidrogen peroksida, dan bakteriosin yang dapat berfungsi sebagai antimikroba

dan antibiotik yang mampu menekan pertumbuhan bakteri patogen (Samosir

et al., 2017).

Bakteri dari genus Bacillus, Bifidobacteri, Pseudomonas, Lactobacillus,

Micrococcus, Afifella dan Rhodobacter dapat dijadikan sebagai kandidat

probiotik dalam saluran pencernaan hewan terutama hewan akuatik (Feliatra

dan Suryadi,2004; Chumpol et al., 2017). Bakteri Bacillus dapat dijadikan

kandidat probiotik karena cakupan hidupnya yang luas, salah satunya dapat

ditemukan banyak pada ekosistem mangrove.

Bacillus sp. diketahui memiliki kemampuan menghasilkan antimikroba yang

dapat menghambat pertumbuhan bakteri patogen (Sumardi et al., 2012).

Bacillus cereus dan Bacillus thuringiensis diketahui menghasilkan metabolit

sekunder Zwittermicin A yang memiliki sifat antibiotik sangat luas

diantaranya terhadap Oomycetes, protista alga, bakteri Gram negatif, dan

jamur patogen seperti Alternaria, Fusarium, Helminthosporium dan Ustilago

(Sansinenea dan Ortiz, 2013). Bacillus circulans diketahui memiliki aktivitas

antimikroba yang dapat melawan bakteri Gram positif, Gram negatif dan

jamur patogen tanaman (Abada et al., 2014). Selain itu diketahui bakteri

3

Bacillus sp. memiliki zat antimikroba yang dapat menekan pertumbuhan

bakteri Vibrio sp. pada pasca larva udang Vannamei (Litopenaeus vannamei)

yang terinfeksi Vibriosis (Permanti et al., 2018). Karena kemampuannya

dalam menghasikan antibiotik tersebut bakteri Bacillus dapat dimanfaatkan

sebagai kandidat probiotik penghasil antibakteri alami yang dapat

menghambat pertumbuhan bakteri Vibrio sp. dan dapat menjadi salah satu

solusi bagi permasalahan dalam usaha budidaya perairan. Bakteri Vibrio spp.

merupakan salah satu bakteri yang sering menimbulkan masalah dalam

budidaya perairan.

B. Tujuan Penelitian

Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan isolat bakteri Bacillus sp. dari

kawasan hutan mangrove yang mampu menghasilkan antibakteri penghambat

Vibrio sp.

C. Manfaat Penelitian

Manfaat dari penelitian ini adalah memberikan informasi ilmiah mengenai

isolat Bacillus sp. yang dapat menghasilkan antibakteri penghambat

pertumbuhan Vibrio sp. yang diperoleh dari kawasan hutan mangrove.

D. Kerangka Pikir

Vibrio sp. merupakan mikroorganisme patogen yang sering merugikan karena

dapat meyebabkan penyakit Vibriosis pada hewan budidaya perairan.

Penanggulangan bakteri ini menggunakan antibiotik banyak digunakan

sehingga menyebabkan masalah baru yaitu munculnya resistensi hewan

4

budidaya sehingga diperlukan agen biokontrol yang dapat menanggulangi

masalah tersebut secara alami.

Bacillus merupakan salah satu kandidat probiotik yang potensial karena

memiliki berbagai karakteristik yang menunjang. Kemampuan fisiologis dari

bakteri Bacillus sp. salah satunya dapat menghasilkan antibiotik. Beberapa

jenis Bacillus diketahui dapat menghasilkan bakteriosin yang dapat

menghambat pertumbuhan bakteri lain. Bacillus merupakan salah satu genus

bakteri yang berlimpah di alam termasuk di daerah hutan mangrove. Bacillus

yang diisolasi dari mangrove diketahui dapat menghasilkan antibakteri yang

memiliki kegunaan sebagai respon pertahanan bakteri ketika harus

mendapatkan nutrisi di tengah kompetisi dengan mikroorganisme lain.

Pada budidaya dibidang perairan antara lain budidaya ikan dan udang,

baktreri Vibrio sp. merupakan penyebab penyakit Vibriosis yang sering

muncul dan menyebabkan kematian pada hewan budidaya. Antibiotik sering

digunakan sebagai tindak pencegahan dan pengobatan penyakit tersebut.

Antibiotik yang sering digunakan adalah antibiotik dari golongan tetrasiklin

antara lain oksitetrasiklin. Oksitetrasiklin banyak digunakan dalam budidaya

perairan karena aktivitas spektrumnya yang luas. Antibiotik tersebut bersifat

bakteriostatik dengan cara menghambat sintesis protein bakteri. Bacillus sp.

diketahui dapat menghasilkan senyawa antibakteri bakteriosin golongan

peptida yaitu Zwittermicin A yang memiliki rumus molekul mirip dengan

golongan tetrasiklin dan bersifat bakteriostatik yaitu dapat menghambat

pertumbuhan bakteri lain. Oleh karena itu, bakteri Bacillus sp. dapat

5

dijadikan kandidat probiotik untuk menanggulangi penyakit Vibriosis pada

hewan budidaya perairan.

E. Hipotesis

Adapun hipotesis dari penelitian ini yaitu didapatkan isolat bakteri Bacillus

yang dapat menghasilkan senyawa antibakteri penghambat Vibrio sp.

6

II. TINJAUAN PUSTAKA

A. Hutan Mangrove

Hutan mangrove adalah hutan yang terutama tumbuh pada lumpur aluvial di

daerah pantai dan muara sungai, yang eksistensinya selalu dipengaruhi oleh

pasang-surut air dengan berbagai jenis mangrove yang biasa tumbuh antara

lain Avicennia, Sonneratia, Rhizophora, Bruguiera, Ceriops, Lumnitzera,

Excoecaria, Xylocarpus, Scyphyphora dan Nypa (Sorianegara, 1987).

Mangrove merupakan tumbuhan yang banyak dikenal dan sering dijumpai di

daerah pinggir pantai karena perannya sebagai pelindung fisik pantai untuk

mencegah adanya abrasi (Karuniastuti, 2013). Mangrove merupakan pohon

yang hidupnya dipengaruhi oleh pasang surut air laut (intertidal trees),

tumbuhan ini dapat ditemukan di sepanjang pantai tropis di seluruh dunia.

Pohon mangrove memiliki adaptasi fisiologis secara khusus untuk

menyesuaikan diri dengan garam yang ada di dalam jaringannya. Mangrove

juga memiliki adaptasi melalui sistem perakaran untuk menyokong dirinya di

sedimen lumpur yang halus dan mentransportasikan oksigen dari atmosfer ke

akar. Sebagian besar mangrove memiliki benih terapung yang diproduksi

setiap tahun dalam jumlah besar dan terapung hingga berpindah ke tempat

baru untuk berkelompok (Kusmana, 2008).

7

Tumbuhan mangrove memiliki mekanisme anatomi dan fisiologi sehingga

mampu bertahan hidup dan beradaptasi pada lingkungan yang ekstrem

sepanjang pinggiran pantai seperti terpaan gelombang, pasang surut air dan

salinitas air yang tinggi (Adha, 2015).

Hutan mangrove memiliki fungsi dan manfaat yang sangat banyak

diantaranya:

1. Fungsi dan Manfaat Biologis dan Ekologis

Ekosistem mangrove adalah suatu sistem yang terdiri dari lingkungan

biotik dan abiotik yang saling berinteraksi. Komponen biotik mangrove

terdiri dari vegetasi mangrove yang meliputi pepohonan, semak, dan

fauna. Sedangkan komponen abiotik yang mempengaruhi pertumbuhan

dan perkembangan hutan mangrove adalah pasang surut air laut, lumpur

berpasir, terpaan ombak, pantai yang landai, salinitas laut, dan lain

sebagainya.

Secara biologi hutan mangrove mempunyai fungsi sebagai daerah tempat

memijah (spawning ground), berkembang biak (nursery ground), dan

mencari makanan (feeding ground) untuk berbagai organisme yang

bernilai ekonomis seperti ikan dan udang. Dapat juga sebagai habitat

berbagai satwa liar seperti reptilia, mamalia, dan lain-lain. Selain itu,

hutan mangrove juga merupakan sumber plasma nutfah. Ekosistem hutan

mangrove memiliki produktivitas yang tinggi. Produktivitas primer

ekosistem mangrove sekitar 400-500 gram karbon/m2/tahun dimana angka

ini tujuh kali lebih produktif dari ekosistem perairan pantai lainnya. Oleh

8

sebab itu, ekosistem mangrove mampu menopang keanekaragaman jenis

yang tinggi. Daun mangrove yang berguguran diuraikan oleh fungi,

bakteri dan protozoa menjadi komponen-komponen bahan organik yang

lebih sederhana (detritus) yang menjadi sumber makanan bagi banyak

biota perairan (udang, kepiting dan lain-lain) (Kustanti, 2011).

2. Fungsi dan Manfaat Fisik

Secara fisik hutan mangrove menjaga garis pantai agar tetap stabil,

melindungi pantai dan tebing sungai, mencegah terjadinya erosi laut serta

berperan sebagai perangkap zat-zat pencemar dan limbah, mempercepat

perluasan lahan, melindungi daerah di belakang mangrove dari hempasan

dan gelombang dan angin kencang, mencegah intrusi garam (salt

intrution) ke arah darat, serta mengolah limbah organik (Kusmana, 2008).

3. Fungsi dan Manfaat Ekonomi dan Produksi

Menurut Kustanti (2011), mangrove dapat menghasilkan 67 macam

produk yang banyak dimanfaatkan oleh masyarakat, misalnya untuk bahan

bakar (kayu bakar, arang, alkohol); bahan bangunan (tiang-tiang, papan,

pagar); alat-alat penangkapan ikan (tiang sero, bubu, pelampung, tanin

untuk penyamak); tekstil dan kulit (rayon, bahan untuk pakaian, tanin

untuk menyamak kulit); makanan, minuman dan obat-obatan (gula,

alkohol, minyak sayur, cuka); peralatan rumah tangga (mebel, lem,

minyak untuk menata rambut); pertanian (pupuk hijau); chips untuk pabrik

kertas dan lain-lain.

9

B. Bacillus sp.

Bacillus adalah salah satu marga bakteri yang dapat dijumpai di tanah dan air

termasuk pada air laut (Pelczar et al.,2010). Bacillus sp. merupakan bakteri

berbentuk batang, tergolong bakteri yang bersifat Gram positif, motil,

menghasilkan spora yang biasanya tahan panas, bersifat aerob atau anaerob

fakultatif, positif menghasilkan enzimkatalase dan oksidasi bervariasi. Tiap

spesiesnya berbeda dalam penggunaan gula, sebagian melakukan fermentasi

dan sebagian tidak (Barrow, 1993). Genus Bacillus mempunyai sifat

fisiologis yang berbeda-beda tergantung jenisnya, kemampuan fisiologis dari

bakteri ini diantaranya dapat mengdegradasi senyawa organik antara lain

protein, pati, selulosa, hidrokarbon dan agar, mampu menghasilkan antibiotik,

berperan dalan proses nitrifikasi dan dentrifikasi; pengikat nitrogen, bersifat

kemolitotrof, aerob atau fakultatif anaerob, asidofilik, psikoprifilik, atau

thermofilik (Claus dan Barkeley, 1986). Hal ini juga didukung oleh penelitian

Hatmanti (2000) yang menyatakan bahwa Bacillus sp. bersifat aerob namun

beberapa juga dapat bersifat fakultatif anaerob dan sebagian besar

menghasilkan enzim katalase. Kemudian menurut de Vos et al., (2009)

Dinding sel Bacillus sp. tersusun atas peptidoglikan, asam teikoat, dan asam

teikuronat yang merupakan ciri bakteri Gram positif.

10

Menurut de Vos et al,. (2009) klasifikasi Bacillus sp. adalah sebagai berikut:

Kerajaan : Bakteria

Filum : Firmicutes

Kelas : Bacilli

Bangsa : Bacillales

Suku : Bacillaceae

Marga : Bacillus

Jenis : Bacillus spp.

Gambar 1. Morfologi Bacillus cereus (Bergey’s Manual of Systematic

Bacteriology)

Beberapa jenis Bacillus diketahui mampu menghasilkan antibakteri antara

lain Bacillus cereus dan Bacillus thuringiensis. Bacillus juga diketahui dapat

menghambat pertumbuhan dari bakteri Serratia marcescens (Supartono et al.,

2011). Bacillus cereus dan Bacillus thuringiensis diketahui menghasilkan

metabolit sekunder Zwittermicin A yang memiliki sifat antibiotik sangat luas

11

diantaranya terhadap Oomycetes, protista alga, bakteri Gram negatif, dan

jamur patogen seperti Alternaria, Fusarium, Helminthosporium dan Ustilago

(Sansinenea dan Ortiz, 2013). Dalam Abada et al., (2014), Bacillus circulans

diketahui memiliki aktivitas antimikroba yang dapat melawan bakteri Gram

positif, Gram negatif dan jamur patogen tanaman. Selain itu, Rosenfeld dan

Zobell dalam Effendi (1998) menemukan bahwa bakteri dari genus Bacillus

ternyata merupakan penghuni laut yang dapat menghasilkan antibiotik.

Bacillus spp. asal laut telah diteliti oleh ahli-ahli peneliti kelautan dan terbukti

mempunyai beberapa kemampuan, diantaranya adalah mampu menghasilkan

zat antibiotik yang dapat melawan bakteri patogen Vibrio cholerae.

C. Antibakteri

Antibakteri merupakan salah satu jenis dari antibiotik. Antibiotik dapat

diklasifikasikan menjadi beberapa jenis yaitu antibakteri, antijamur,

antiamoeba, dan lain-lain. Antibiotik adalah metabolit yang dihasilkan oleh

suatu organisme, yang dalam jumlah sangat kecil dapat membunuh atau

menghambat pertumbuhan organisme lain (Madigan et al, 2006). Menurut

Wahjudi, Algadrie, dan Chrisnasari (2014), antibiotik adalah suatu metabolit

yang diproduksi oleh mikroorganisme yang dapat membunuh atau

menghambat pertumbuhan dari mikroorganisme lainnya. Bakteriosin

merupakan salah satu zat yang dihasilkan oleh mikroorganisme yang

mempunyai aktivitas antibakteri. Bakteriosin merupakan komponen

ekstraseluler berupa peptida atau senyawa protein dengan bobot molekul

kecil yang aktivitasnya dipengaruhi oleh suhu dan pH. Bakteriosin diketahui

dapat menghambat E. coli pada kisaran ph 2 sampai 6 dan suhu 40o sampai

12

121oC (Sari et al., 2018; Jagaesswari, 2010).

Kadar antibiotik minimal yang diperlukan untuk menghambat pertumbuhan

atau membunuh mikroba dikenal dengan istilah kadar hambat minimal

(KHM) dan kadar bunuh minimal (KBM) (Amin, 2014).

Menurut Amin (2014), antibiotik memiliki cara kerja yang berbeda-beda

dalam membunuh atau menghambat pertumbuhan mikroorganisme.

Berdasarkan mekanisme kerjanya antibiotik dibagi atas;

1. Antibiotik yang menghambat sintesis dinding sel bakteri

Antibiotik ini adalah antibiotik yang merusak lapisan peptidoglikan pada

bakteri Gram-positif maupun Gram-negatif. Contohnya adalah penicilin,

cephalosporin, carbapenem, monobactam dan vancomycin.

2. Antibiotik yang bekerja dengan merusak membran sel mikroorganisme

Antibiotik golongan ini merusak permeabilitas membran sel sehingga

terjadi kebocoran bahan-bahan dari intrasel.

3. Antibiotik yang menghambat sintesis protein mikroorganisme dengan

mempengaruhi subunit ribosom 30S dan 50S.

Antibiotik ini menyebabkan terjadinya hambatan dalam sintesis protein

secara reversibel.

4. Antibiotik yang mengikat subunit ribosom 30S.

Antibiotik ini menghambat sintesis protein dan mengakibatkan kematian

sel. Contohnya adalah aminoglycoside yang bersifat bakterisidal.

5. Antibiotik yang menghambat sintesis asam nukleat sel mikroba

(bakterisidal).

13

6. Antibiotik yang menghambat enzim yang berperan dalam metabolisme

folat (bakteristatik).

Ada banyak jenis mikroorganisme baik bakteri dan fungi yang dapat

menghasilkan antibiotik. Namun, bakteri penghasil antibiotik yang terutama

adalah dari species Bacillus yang menghasilkan basitrasin, polimiksin, dan

sirkulin, selain itu juga dari spesies Pseudomonas (piosianin), serta

Chromobacterium (Basavaraj et al., 2010).

D. Probiotik

Probiotik adalah mikroorganisme hidup bila diberikan di dalam jumlah yang

cukup memberikan manfaat bagi kesehatan tubuh (Anurogo, 2014).

Menurut ILSI International Life Sciences Institute (ILSI) Europe Working

Group, probiotik adalah suplemen makanan dari mikroba hidup yang

memiliki efek menguntungkan bagi kesehatan inang (host).

Bakteri kandidat probiotik umumnya menghasilkan substansi antimikroba

seperti asam laktat, asam asetat, hidrogren peroksida, diasetil, asam

piroglutamat, reuterin, dan bakteriosin (Anurogo, 2014).

Menurut Tomasik (2003), suatu mikroorganisme dapat digolongkan sebagai

probiotik apabila memenuhi kriteria sebagai berikut ;

1. Dapat bertahan hidup melalui traktus gastrointestinal pada pH rendah dan

berhubungan dengan empedu.

2. Melekat ke sel-sel epitel usus.

3. Stabil terhadap mikroflora usus.

4. Tidak bersifat patogen.

14

5. Bertahan hidup di dalam bahan makanan dan berkemungkinan untuk

produksi pharmacopoeia lyophilized preparations.

6. Multiplikasi cepat, baik dengan kolonisasi temporer atau permanen dari

traktus gastrointestinal.

7. Memiliki specificity probiotik yang generik.

Menurut Malago et al., (2011) sifat-sifat dari bakteri probiotik antara lain :

1. Tidak kehilangan sifat aslinya selama masa penyimpanan

2. Secara normal berada pada saluran pencernaan manusia

3. Harus dapat bertahan hidup, dapat melawan pertahanan barrier lambung,

tahan terhadap kerja pencernaan dari getah lambung, enzim pencernaan

dan garam empedu dan berkoloni di usus.

4. Harus bisa melekat dan berkoloni dengan sel intestinal.

5. Harus menimbulkan fungsi metabolik pada level pencernaan, yang

bermanfaat bagi kesehatan inang dan antagonis mikrooganisme patogen

dengan memproduksi zat antimikrobial.

6. Tidak menimbulkan reaksi berbahaya atau patogen.

7. Resistensi terhadap antibiotik.

8. Harus dapat dikelola dalam dosis yang cukup.

Bakteri probiotik memiliki mekanisme melindungi dan memperbaiki kondisi

kesehatan yaitu dengan menghambat pertumbuhan bakteri patogen melalui

beberapa cara antara lain:

1. Memproduksi substansi-substansi penghambat. Probiotik mampu

memproduksi zat-zat penghambat pertumbuhan bakteri Gram positif

15

maupun negatif. Zat-zat ini termasuk asam organik, hidrogen peroksida

(H2O2), bakteriosin yang mampu menghambat tidak hanya bakteri hidup

tetapi juga dapat memproduksi toksin.

2. Menghambat pertumbuhan bakteri patogen dalam mukosa usus dengan

cara kompetisi untuk mengadakan perekatan dengan enterosit (sel epitel

mukosa), karena apabila enterosit sudah dipenuhi oleh probiotik maka

tidak dapat lagi mengadakan perlekatan dengan bakteri lain.

3. Kompetisi nutrisi. Probiotik akan berkompetisi dengan bakteri patogen

untuk memperebutkan nutrisi pada saluran cerna.

4. Memperbaiki respon imun melalui peningkatan ekspresi dari limfosit B

dan sekresi imunoglobulin A baik secara lokal maupun sistemik. Ketika

probiotik berkontak dengan usus yang berasosiasi dengan jaringan

limfoid maka dapat merangsang peningkatan sistem imun dengan

menstimusi respon IgA dan merangsang aktivitas fagositosis

(Simadibrata, 2011).

Kurniasih et al.(2013) menyatakan Bacillus cereus merupakan kandidat

bakteri yang berpeluang untuk dijadikan probiotik dengan kemampuan

menghasilkan L-lactat, acetat, format, succinat, ethanol, dan carbon dioxida

dari sumber karbon sukrosa dan glukosa melalui respirasi anaerobik.

E. Vibrio sp.

Vibrio merupakan bakteri Gram negatif yang bersifat fakultatif anaerob, yaitu

jenis bakteri yang dapat bertahan hidup baik dengan atau tanpa oksigen.

Bakteri Vibrio banyak ditemukan pada daerah sungai pasang surut dan teluk,

16

oleh karena itu bakteri Vibrio banyak ditemukan di air laut (Schoendstadt,

2013).

Klasifikasi Vibrio sp. menurut Schoendstadt (2013) adalah;

Kerajaan : Eubacteria

Divisi : Bacteri

Kelas : Schiomycetes

Bangsa : Eubacteriales

Suku : Vibrionaceae

Marga : Vibrio sp.

Menurut Public Health of England (2015), bakteri spesies Vibrio memiliki

bentuk lurus atau melengkung dan membentuk spora batang, memiliki lebar

0.5-0.8 µm dengan panjang berkisar 1.4-2.6 µm. Bakteri Vibrio dapat

tumbuh pada kisaran pH yang cukup tinggi yaitu 4-9, namun tumbuh optimal

pada kisaran pH 6.5-8.5. Bakteri Vibrio tumbuh baik pada kisaran suhu 20-

300 C. Vibrio dapat ditumbuhkan dalam media selektif seperti media agar

darah dan TCBS (Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose). Vibrio yang

ditumbuhkan pada media TCBS akan memunculkan warna koloni berwarna

kuning atau hijau. Sedangkan pada media agar darah, koloni Vibrio

menghasilkan koloni berwarna keabu-abuan dan berbentuk melingkar,

dengan diameter 2-3 mm. Spesies Vibrio menunjukkan sifat positif untuk uji

oxidase dan katalase serta bersifat fermentatif. Semua jenis anggota Vibrio

adalah motil (bergerak) dan mempunyai kutub flagella dengan sarung

pelindung (Bauman dan Schubert, 2009).

17

F. Bakteri Fotosintetik Anoksigenik (BFA)

Bakteri fotosintetik anoksigenik (BFA) merupakan bakteri yang dapat

melakukan proses fotosintesis tanpa menghasilkan oksigen. BFA dapat

hidup secara aerobik, anaerobik maupun secara fermentasi (Brock dan

Madigan, 1991). Selain itu juga mampu menggunakan cahaya spektrum

merah sampai infra merah, tahan terhadap herbisida tertentu dan mampu

memanfaatkan H2S (Habte dan Alexander, 1980). Bakteri fotosintetik

anoksigenik mampu hidup dalam kondisi gelap (sampai kedalaman 8 cm di

dalam tanah) sehingga memiliki lingkungan hidup yang lebih luas

(Kobayashi et al., 1967). BFA berbentuk batang, bulat, oval dan vibrio.

Beberapa genus bersifat motil karena memiliki alat gerak berupa flagella

(Widodo, 2010; Imhoff, 1955). Menurut Kobayashi et al., (1967) bakteri

fotosintetik dapat hidup dengan baik pada daerah tropis dengan suhu

minimum yang tinggi dan intensitas cahaya matahari yang cukup.

Bakteri Fotosintetik Anoksigenik terbagi dalam dua kelompok yaitu bakteri

ungu (purple bacteria) dan bakteri hijau (green bacteria). Beberapa genus

bakteri yang diketahui termasuk ke dalam famili bakteri fotosintetik yaitu

Rhodobacter, Rhodovulum, Rhodopseudomonas, Rhodoblastus,

Hodomicrobium, Rhodospirillum dan Rhodospira (Madigan dan Jung, 2009).

Dalam Chumpol et al. (2017), bakteri ungu nonsulfur diketahui dapat

menjadi agen probiotik yang dapat mempertahankan kualitas air dan

melindungi udang putih (Litopenaeus vannamei) dari serangan penyakit yang

disebabkan oleh Vibrio parahaemolyticus SR2.

18

III. METODE PENELITIAN

A. Waktu dan Tempat

Penelitian ini akan dilaksanakan pada November 2018- Maret 2019

di Laboratorium Mikrobiologi FMIPA Universitas Lampung.

B. Alat dan Bahan

Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain : hot plate magnetic

stirer, laminar air flowcabinet, autoclave, neraca analitik, inkubator, colony

counter, oven, jarum ose, erlenmeyer, vortex mixer, water bath, shaker,

mikropipet, mikro tip, pipet tetes, drigalski,object glass, cawan petri, gelas

ukur, tabung reaksi, tabung Durham, alumunium foil, batang pengaduk,

bunsen, beaker glass, pinset, cutter, spatula, gunting bedah, gunting,

mikroskop, ice box, sarung tangan, masker, plastik tahan panas, plastik steril,

termometer, karet gelang, kapas, jangka sorong, kertas saring, kain kasa, dan

pH meter.

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain: pepton, ekstrak

khamir,gliserol, agar,air laut, garam fisiologis 0,98%, garam dapur0%:3%

dan 6%,NaOH 1 M, HCl 1 M, kristal violet,akuades, disk antibiotik

trimetoprim, streptomisin, ampisilin, kloramfenikol, asam nalidiksat,

19

pelarut etil asetat, media Sea Water Complete dan Thiosulfate Citrate Bile

Salts Sucrose.

C. Metode Penelitian

Isolat Bacillus diperoleh dari koleksi Laboratorium Mikrobiologi Jurusan

Biologi FMIPA Universitas Lampung yang diisolasi dari kawasan Hutan

Mangrove Hanura. Kemampuan isolat Bacillus dalam menghambat Vibrio sp.

ditentukan melalui uji antagonis antara isolat Bacillus dengan bakteri Vibrio

sp. pada media SWC padat. Bakteri Vibrio dikultur dengan metode pour

plate, kemudian isolat Bacillus dititik di atas permukaan media SWC yang

telah diinokulasi bakteri Vibrio. Sifat antagonis isolat Bacillus dan Vibrio

ditunjukkan dengan adanya zona jernih disekitar koloni Bacillus. Isolat

Bacillus yang menunjukkan sifat antagonis selanjutnya dikarakterisasi

meliputi uji kepekaan terhadap kadar garam dan pH, uji patogenisitas, dan uji

kepekaan antibiotik. Ketahanan isolat terhadap cekaman kadar garam

ditetapkan berdasarkan kemampuan isolat hidup pada media padat dengan

variasi kadar garam 0 %, 3 % dan 6 %, ketahanan isolat terhadap cekaman

garam ditentukan dengan pertumbuhan koloni. Selanjutnya ketahanan isolat

terhadap cekaman pH ditetapkan berdasarkan kemampuan isolat hidup pada

media padat dengan variasi pH 4, 7 dan 10, ketahanan isolat terhadap cekaman

pH ditentukan dengan pertumbuhan koloni. Patogenisitas isolat Bacillus

diketahui melalui uji hemolisis pada media SWC agar darah. Sifat hemolisis

diketahui dari zona jernih yang terbentuk akibat sel darah yang mengalami

lisis. Uji kepekaan antibiotik ditentukan melalui metode Kirby Bauer

terhadap 5 antibiotik yaitu kloramfenikol, ampisilin, streptomisin, trimetoprim

20

dan asam nalidiksat. Kepekaan isolat ditentukan berdasarkan zona jernih yang

terbentuk disekitar disk antibiotik. Selanjutnya dilakukan pengujian tambahan

untuk mengetahui kemampuan isolat Bacillus dan Vibrio sp. dalam kultur

bersama pada media SWC cair. Isolat Bacillus dan Vibrio sp. diinokulasi pada

media SWC cair dengan kepadatan yang sama, kemampuan pertumbuhan

isolat dilihat dari jumlah kepadatan akhir isolat Bacillus dan Vibrio sp.

Kemampuan Isolat Bacillus diuji kembali dengan kultur bersama dengan

Bakteri Fotosintetik Anoksigenik (BFA) dan Vibrio sp. dalam media SWC

cair dengan kepadatan yang berbeda. Pertumbuhan isolat Bacillus, BFA dan

Vibrio sp. dilihat dari jumlah kepadatan akhir bakteri.

a. Seleksi Isolat Bakteri Bacillus sp.

1. Pembuatan Suspensi Isolat Bacillus sp. dan Vibrio sp.

Satu ose isolat dari setiap isolat Bacillus dimasukkan ke dalam aquades

steril sebanyak 10 ml di dalam tabung reaksi lalu diinkubasi pada shaker

selama 4 hari. Bakteri uji Vibrio sp. juga dibuat suspensi sebanyak 10 ml

di dalam tabung reaksi lalu diinkubasi pada shaker selama 1 hari.

2. Seleksi Isolat Penghasil Senyawa Antibakteri

Suspensi Vibrio sp. dimasukkan ke dalam cawan petri dengan metode

pour plate. Kemudian disiapkan kertas cakram steril lalu dicelupkan ke

dalam suspensi isolat bakteri Bacillus sp., kertas cakram lalu diletakkan

di atas media berisi Vibrio sp. Selanjutnya biakan diinkubasi pada suhu

ruang selama 3 hari. Daerah terang atau zona jernih yang terbentuk

menandakan bahwa isolat mampu menghambat pertumbuhan bakteri

21

Vibrio sp. Zona bening diukur menggunakan jangka sorong dan

selanjutnya isolat yang menunjukkan daerah terang atau bening dipilih

untuk dilakukan karakterisasi (Sari et al., 2015).

b. Karakterisasi Isolat Bacillus sp.

1. Uji Cekaman Terhadap Kadar Garam

Isolat Bacillus diambil menggunakan jarum ose steril kemudian

diinokulasi ke dalam media SWC Agar yang dimodifikasi dengan garam

konsentrasi 0 %; 3 %; dan 6 %. Kultur kemudian diinkubasi selama 24

jam pada suhu ruang. Pengamatan dilakukan dengan mengukur diameter

koloni yang tumbuh (Triyanto, 2009).

2. Uji Cekaman Terhadap pH

Isolat Bacillus diambil menggunakan jarum ose steril kemudian

diinokulasi ke dalam media SWC Agar yang dimodifikasi dengan pH 4,

7, dan 10. Kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu ruang.

Pengamatan dilakukan dengan mengukur diameter koloni yang tumbuh

(Triyanto, 2009). Isolat yang menunjukan pertumbuhan yang baik dipilih

untuk dilakukan uji selanjutnya.

3. Uji Patogenisitas

Patogenisitas ditentukan melalui uji hemolitik pada medium agar darah.

Isolat Bacillus diambil menggunakan jarum ose steril kemudian

diinokulasi ke dalam media SWC Agar Darah. Kultur kemudian

diinkubasi selama 24 jam pada suhu ruang. Pengamatan dilakukan

22

dengan melihat zona yang terbentuk disekitar koloni atau perubahan

warna media (Hamtini, 2014). Uji hemolitik positif menunjukkan

karakter patogen pada isolat.Isolat yang tidak menunjukan sifat patogen

dipilih untuk dilakukan uji selanjutnya.

4. Uji Kepekaan Antibiotik

Isolat diuji kepekaannya terhadap 5 jenis antibiotik antara lain

kloramfenikol 30 µg, ampisilin 10 µg, streptomisin 10 µg, trimetoprim 5

µg, dan asam nalidiksat 30 µg dengan menggunakan metode Kirby-

Bauer. Bakteri uji diinokulasi secara swab pada media SWC Agar dalam

cawan petri. Kemudian disk dari 5 jenis antibiotik diletakkan pada cawan

kultur menggunakan pinset steril dan diinkubasi pada suhu ruang selama

24 jam. Pengamatan dengan melihat zona jernih yang terbentuk disekitar

disk antibiotik (Hamtini, 2014 ; Puspitasari, 2017).

c. Uji Kultur Bersama Isolat Bacillus sp. dan Vibrio sp.

Kultur bersama isolat Bacillus dengan Vibrio sp. dilakukan untuk

mengetahui kemampuan isolat dalam menghambat pertumbuhan Vibrio

sp. di dalam media cair. Metode kultur bersama yang dilakukan

merupakan modofikasi dari metode Vaseeharan dan Ramasamy (2003).

Suspensi cair Isolat Bacillus sp. dan Vibrio sp. dengan kepadatan 103 sel

/ml dimasukkan kedalam 50 ml media SWC cair. Sebagai kontrol isolat

Bacillus sp.dan Vibrio sp. ditumbuhkan masing-masing pada media SWC

cair. Selanjutnya diinkubasi pada orbital shaker dengan kecepatan 100

RPM pada suhu ruang selama 7 hari. Setiap hari kultur diambil untuk

23

dihitung kepadatan jumlah Vibrio kontrol dan perlakuan yang tumbuh.

Kultur dibuat pengenceran hingga seri 10-3 kemudian 1 ml dari setiap seri

pengenceran diinokulasikan secara pour plate ke dalam media TCBS.

Setelah inkubasi selama 24 jam kepadatan Vibrio sp. dihitung secara

langsung. Kontrol Bacillus dihitung dengan membuat seri pengenceran

sampai dengan 10-6, lalu diambil 1 ml dari pengenceran 10-4, 10-5, dan 10-

6 lalu diinokulasikan secara pour plate ke dalam media SWC agar dan

diinkubasi selama 24 jam. Pengamatan dilakukan dengan melihat

pertumbuhan koloni bakteri dengan menghitung jumlah koloni

menggunakan colony counter. Hasil yang didapat memperlihatkan pada

hari keberapa bakteri Vibrio sp. mengalami penurunan pertumbuhan.

d. Uji Kultur Bersama Isolat Bacillus sp., Vibrio sp. dan BFA

Selanjutnya dilakukan pengujian ulang kultur bersama dengan kepadatan

isolat Bacillus dan Vibrio yang berbeda serta penambahan isolat BFA.

Suspensi isolat Bacillus dan BFA dengan kepadatan 105 sel/ml dan Vibrio

sp. sebanyak 103 sel/ml dimasukkan ke dalam 16 ml media SWC cair lalu

diinkubasi secara anaerob, pemberian cahaya lampu dan pada suhu ruang

selama 4 hari. Kontrol isolat Bacillus, Vibrio sp. dan BFA ditumbuhkan

secara terpisah dengan kepadatan yang sama dengan perlakuan.

Selanjutnya kultur perlakuan dan kontrol Vibrio diambil dan dibuat

pengenceran sampai dengan 10-2 kemudian diambil 1 ml dari setiap

pengenceran untuk diinokulasikan secara pour plate ke dalam media

TCBS. Kontrol dibuat seri pengenceran hingga 10-7 lalu diambil 1 ml

dari pengenceran 10-5, 10-6, dan 10-7 lalu diinokulasikan secara pour plate

24

ke dalam media SWC agar. Setelah inkubasi selama 24 jam kepadatan

koloni Vibrio sp. perlakuan dan kontrol dihitung secara langsung dengan

menggunakan colony counter . Semua perlakuan dibuat dalam tiga

ulangan.

25

D. Diagram Alir

Seleksi Isolat Bakteri Bacillus sp.

Pembuatan Suspensi Isolat Bacillus sp. dan

Vibrio sp.

Seleksi Isolat Penghasil Senyawa Antibakteri

Karakterisasi Isolat Bacillus sp.

Uji Cekaman

Kadar Garam

Uji Patogenisitas

Uji Kepekaan Antibiotik

pH

Uji Kultur Bersama Isolat Bacillus sp. dan

Vibrio sp.

Uji Kultur Bersama Isolat Bacillus sp., BFA

dan Vibrio sp.

22

V. SIMPULAN

Isolat Bacillus sp. IL2K8 adalah isolat yang diseleksi dari 77 isolat yang didapat

dari kawasan hutan mangrove Hanura yang dapat menghambat pertumbuhan

Vibrio sp. setelah diuji dengan metode Kirby Bauer. Isolat IL2K8 dapat tumbuh

dengan kadar garam 0 %,3 %, 6 % dan nilai pH 7 serta 10. IL2K8 tidak memiliki

sifat patogen. Resisten terhadap antibiotik amplisin, striptomisin, asam nalidiksat

dan kloramfenikol, namun peka terhadap antibiotik trimetoprim. Dalam kultur

bersama pada media cair isolat Bacillus IL2K8 bersama dengan bakteri

fotosintetik anoksigenik dapat menghambat pertumbuhan Vibrio sp.

37

DAFTAR PUSTAKA

Abada, Emad A., El-Hendawy, H. Hoda, M. E. Osma, M. A. Hafez. 2014.

Antimicrobial activity of Bacillus circulans isolated from rhizosphere of

Medicago sativa. Life Science Journal, 11(a8): 711–719.

Adha, M. 2015. Analisis Kemelimpahan Kepting Bakau (Scylla spp.) di Kawasan

Mangrove Dukuh Senik, Desa Bedono, Kecamatan Sayung, Kabupaten Demak.

Skripsi. Universitas Islam Negeri Walisongo. Semarang.

Anurogo, D. 2014. Probiotik: Problematika dan Progresivitasnya. Medical

Review. 27(3):46-57.

Amin, Lukman Z. 2014. Pemilihan Antibiotik yang Rasional. Scientific Journal of

Pharmaceutical Development and Medical Application, 27(3): 40–45.

Barrow, G.I. 1993. Cowan and Steel’s Manual for the Identification of Medical

Bacteria, 3rd edn. Cambridge University Press. Cambridge

Basavaraj, K. H., M.A. Navya, R. Rashmi. 2010. Quality of life in HIV/AIDS.

Journal departement of dermatology, venereology and leprosy, JSS medical

college, JSS University. Mysore, Karnataka. India.

Bauer, A.W, W.M. Kirby, J.C. Sherris, M . Turck. 1966. Antibiotics Susceptibility

Testing By A Standardized Single Disc Method. American Journal of Clinical

Pathology;45: 493-496.

Bauman, P. dan L.R.H.W. Schubert. 2009. Family II Vibrionacea Veron 1965, PP.

515-550. Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology Vol. 1. The

Williams and Wilkins co., Baltimore.

Behera, B.C., S.K. Singdevsachan, R.R. Mishra, B.K. Sethi, S.K. Dutta, H.N. Thatoi.

2016. Phosphate Solubilising Bacteria From Mangrove Soils Of Mahanadi River

Delta, Odisha, India. World Journal Of Agricultural Research 4(1): 18-23.

38

Bindoff, N.L., J. Willebrand, V. Artale, A. Cazenave, J. Gregory, S. Gulev, K.

Hanawa, C. Le Quéré, S. Levitus, Y. Nojiri, C.K Shum, L.D. Talley, A.

Unukrishnan. 2007. Observations: Oceanic Climate Change and Sea Level. In:

Solomo. Cambridge: Cambridge University Press.

Brock, T.D. dan M.T. Madigan. 1991. Biology of Microorganism. Prentice Hall. New

Jersey.

Campbell, N.A., J.B. Reece, L.A. Urry, M.L. Cain, S.A. Wasserman, P.V. Minorsky,

R.B. Jackson. 2012. Biologi. Penerbit Erlangga. Jakarta. 441 hlm.

Chumpol S, D . Kantachote, T. Nitoda dan H. Kanzaki. 2017. The Roles Of Probiotic

Purple Nonsulfur Bacteria To Control Water Quality And Prevent Acut

Hepatopancreatic Necrosis Disease (AHPND) For Enhacement Growth With

Higher Survival In White Shrimp (Litopenaeus vannamei) During Cultivation.

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0044848616312935. Diakses

11 Mei 2019.

Claus, D. dan R.C.W. Berkeley. 1986. Genus Bacillus, In : Bergeys Manual of

Systematic Bacteriology. Vol 2 (SNEATH, P.H.A., ed.) Baltimore : 1105 - 1139.

De Vos, P., G. M. Garrity, D. Jones, N. R. Krieg, W. Ludwig, F. A. Rainey, Karl-

Heinz Schleifer, William B. Whitman. 2009. Bergey’s Manual of Systematic

Bacteriology 2nd Edition Volume Three : The Firmicutes. Bergey’s Manual

Trust. New York. Effendi, Irwan. 1998. Prospek Bioteknologi Bakteri Laut. Dalam :Strategi

Pembangunan Perikanan dan Kelautan Nasional dalam meningkatkan Devisa

Negara (FELIATRA, ed.) Universitas Riau Press, Riau, Indonesia : 225 pp.

Feliatra, E. dan E. Suryadi. 2004. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Probiotik dari

Kerapu Macan (Ephinephelus fuscogatus) dalam Upaya Efisiensi Pakan Ikan.

Jurnal Natur Indonesia 6 (2): 75-80.

Forbes, B.A. dan D.R. Schaberg. 1983. Transfer of Resistance Plasmids from

Staphylococcus epidermidis to Staphylococcus auereus: Evidence for

Conjugative Exchange of Resistance. Journal of Bacteriology, 153(2):627-634.

Habte, M. dan M. Alexander. 1980. Nitrogen Fixation by Photosynthetic Bacteria in

Lowland Rice Culture. Appl. Environ. Microbiol 39: 342-347.

Hamtini. 2014. Isolation and Selection of Bacillus sp. from Catfish ( Clarias sp.) as

well Its potential as a Probiotic. Institut Pertanian Bogor. Bogor.

Hatmanti, A. 2000. Pengenalan Bacillus spp. Oseana, XXV(1), 31–41.

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0044848616312935

39

Howieson, J.G. dan Dilworth, M.J. 2016. ‘Working with rhizobium’ Australian

Centre for International Agricultural Research (ACIAR).

Imhoff, J. F. 1995. Taxonomy and Physiology of Phototrophic Purple Bacteria and

Green Sulfur Bacteria. In: Blankenship, R.E., M. T. Madigan, C. E. Bauer (ed.).

Anoxygenic Photosynthetic Bacteria. Kluwer Academia Publishers.Netherlands.

International Life Sciences Institute (ILSI) Europe Working Group. http://ilsi.eu.

Diakses pada 5 November 2018.

Islamiah, Dwi N., Rahmawati dan R. Linda. 2017. Jenis-Jenis Bakteri Rhizosfer

Kawasan Tanah Mangrove Avicennia Kelurahan Terusan, Kecamatan

Mempawah Hilir, Kalimantan Barat. Protobiont, 6(3) : 165–172. Universitas

Tanjungpura. Pontianak.

Jagadesswari, S. dan Vidya, P. 2010. Isolation and Characterization of Bacteriosin

Producing Lactobacillus sp. from Traditional Ferminted Food. Electronic

Journal of Enviromental Agricultural and Food Chemistry 9(3): 575-581.

Karthikeyan, K., dan Sahayarayan, J. 2017. Antibacterial Activity of a Novel Bacillus

cereus Isolated from Mangrove Ecosystem. International Journal of Current

Microbiology and Applied Sciences. ISSN: 2319-7706. 6(8): 3302-3306.

Karuniastuti. 2013. Peranan Hutan Mangrove bagi Lingkungan Hidup.Forum

Manajemen 6(1): 1-10.

Kobayashi, M., E. Takahashi dan K. Kawaguchi. 1967. Distribution of Nitrogen

Fixing Microorganism in Paddy Soil of Southeast Asia. Soil Sci. 104: 113-118.

Kurniasih, T., Widanarni, Mulyasari, I. Melati, Z. I. Azwar, dan A. M. Lusiastuti.

2013. Isolasi, Seleksi, Dan Identifikasi Bakteri Dari Saluran Pencernaan Ikan

Lele Sebagai Kandidat Probiotik. J. Ris. Akuakultur. 8 (2): 277-286.

Kusmana, C. 2008. Metode Survey Vegetasi. IPB Press. Bogor.

Kustanti, A. 2011. Manajemen Hutan Mangrove. IPB Press. Bogor.

Le Marechal, C., Seyffert, N., Jardin, J., Hernandez,D., Jan, G., Rault, L., Azevedo

V., Francois, P., Schrenzel, J., van de Guchte, M., Even, S., Berkova, N., Thiery,

R., Fitzgerald, J.R., Vautor, E., Le Loir, Y. 2011. Molecular Basis of Virulence

in Staphylococcus aureus mastitis. PloS One. 6 : e27354.

Lestari, W.L., Agung B., Artini P. 2016. Bakteri Heterotrof Aerobik Asal Saluran

Pencernaan Ikan Sidat (Anguilla bicolor bicolor) dan Potensinya sebagai

Probiotik. Bioteknologi 13 (1): 9-17. doi: 10.13057/biotek/c130102.

http://ilsi.eu/

40

Madigan, M.T., J.M. Martinko, J. Parker. 2000. Brock Biology of Microorganism.

New Jersey : Prentice-hall. Inc.

Madigan, M.T., J.M. Martikno, J. Parker. 2006. Brock Biology of Microorganism.

Internasional Edition, 11th. Prentice Hall Pearson Education Inc. United States of

America.

Madigan, M. T., dan D. O. Jung. 2009. An Overview of Purple Bacteria: Systematics,

Physiology, and Habitats. In: Hunter, C. N., F. Daldal, M. C. Thurnauer, dan J.

T. Beatty (ed): The purple Phototropic Bacteria. Springer Science dan Business

Media B.V. Carbondale.

Malago, J.J., J.G.L. Koninkx dan R. Marinsek. 2011. Probiotic Bacteria and Enteric

Infection. Cyoptoprotection of Probiotic Bacteria. Springer Dordrecht

Heidelberg London. New York.

Marihati., Nani, H., Muriyati., nilawati., Syarifudin, E., dan Danny, W, H.. 2014.

Penggunaan Bakteri Halofilik Sebagai Biokatalisator Untuk Meningkatkan

Kualitas Dan Produktifitas Garam Nacl Di Meja Kristalisasi. Jurnal Riset

Industri. 8 (3) Hal. 191 – 196.

Moat, A. G., J. W. Foster, dan M.P.Spector. 2002. Microbial Physiologi fourth

edition. New York : Wiley-Liss, Inc.

Noaman, N. H., A. Fattah, M. Khaleafa dan S. H Zaky. 2014. Factors Affecting

Antimicrobial Activity of Synechococcus leopoliensis. Microbiological

Research, 159 (4) : 395-402.

Pelczar, M.J., E.C.S. Chan dan N.R. Krieg. 2010. Microbiology. Tata McGraw Hill,

New Delhi.

Permanti, Y.F., P.G.S. Julyantoro dan M.A. Pratiwi. 2018. Pengaruh Penambahan

Bacillus sp. Terhadap Kelulushidupan Pasca Larva udang Vannamei

(Litopenaeus vannamei) yang Terinfeksi Vibriosis. Current Trends in aquatic

Science I(I), 89-95.

Puspitasari, Putra dan Handayani. 2017. Senyawa Antibiotik dari Bacillus sp 1 (HA1)

yang Bersimbiosis pada Spon Laut Haliclona fascigera. Jurnal Sains Farmasi

dan Klinis.134-140.

Respati, N.Y., E. Yulianti dan A. Rakhmawati. 2017. Optimasi Suhu Dan pH Media

Pertumbuhan Bakteri Pelarut Fosfat Dari Isolat Bakteri Termofilik. Jurnal Prodi

Biologi. Vol 6 (7).

41

Sansinenea, E. dan Ortiz, A. 2013. ‘An Antibiotic from Bacillus thuringiensis against

Gram-Negative Bacteria’, Biochemistry & Pharmacology: Open Access, 2(2),

pp. 1–2. doi: 10.4172/2167-0501.1000e142.

Samosir, M. F., D. Suryanto, dan Desrita. 2017. Isolasi dan Identifikasi Bakteri

Potensial Probiotik Pada Saluran Pencernaan Ikan Mas (Cyprinus Carpio).

Jurnal Bidang Manajemen Sumberdaya Perairan. 15 (1).

Sari, R., P. Apridamayanti, M. Octaviani. Optimasi Aktivitas Bakteriosin yang

Dihasilkan oleh Bakteri Lactobacillus Plantarum dari Minuman Che Hun Tiau.

Pharmaceutical Sciences and Research. 5(1), 1-6.

Sari, Ranap J., Feliatra dan Yoswaty, D. 2015. The Antagonists Test of Probiotic

Bacteria Isolated from Black Tiger Shrimp (Penaeus monodon fabricus) Against

Pathogens Pseudomonas sp, Aeromonas hidrophyla, Vibrio alginolyticus. Jurnal

Online Mahasiswa, 2(1).

Schoendstadt, A. 2013. Vibrio. http://bacteria.emedtv.com/Vibrio/Vibrio/html.

Diakses pada 7 November 2018.

Siegers, W. H. 2013. Kondisi Ekologi Makrobentos pada Ekosistem Mangrove dan

Laut Desa hanura, Kecamatan Padang Cermin, Propinsi Lampung. Tesis. Institut

Pertanian Bogor. Bogor.

Simadibrata, Marcelius. 2011. Probiotik dan Peranannya dalam Dunia Medis. Divisi

Gastroenterologi Departemen Ilmu Penyakit Dalam. Fakultas Kedokteran

Universitas Indonesia. RS Cipto Mangunkusumo. Jakarta. 65-66.

Sudigdoadi, Sunarjati. 2015. Mekanisme Timbulnya Resistensi antibiotik Pada Infeksi

Bakteri. Mikrobiologi Fakultas Kedokteran. Universitas Padjajaran. Bandung.

Sumardi, C.N. Ekowati, K. Handayani, Nurhayati. 2012. Isolasi dan Karakterisasi

Bacillus sp. Penghasil Antimikroba dari Saluran Pencernaan Ayam Kampung (

Gallus domesticus). Prosiding SNSMAIP III-2012. ISBN No. 978-602-98559-1-

3.

Suriani, Sanita., Soemarno, dan Soeharjono. 2013. Pengaruh Suhu dan Ph terhadap

Laju pertumbuhan Lima Isolat Bakteri Anggota Genus Pseudomonas yang

diisolasi dari Ekosistem Sungai Tercemar Deterjen di sekitar Kampus

Universitas Brawijaya. J-PAL, Vol. 3, No.2 .

Supartono, N. Wijayati, L. Herlina, dan E. Ratnaningsih. 2011. ‘Produksi Antibiotika

Oleh Bacillus subtilis M10 Dalam Media Urea-Sorbitol’, Reaktor, 13(3), pp.

185–193.

http://bacteria.emedtv.com/Vibrio/Vibrio/html

42

Tomasik, P.J., dan Tomasik, P. 2003. Probiotics and Prebiotics. Cereal Chem.

80(2):113-117.

Triyanto, A. Isnansetyo, I. D. Prijambada, J. Widada, dan A. Tarmiawati. 2009.

Isolasi, Karakterisasi Dan Uji Infeksi Bakteri Proteolitik Dari Lumpur Kawasan

Hutan Bakau. Jurnal Perikanan. XI (1): 13-18.

Vaseeharan, B. dan Ramasamy, P. 2003. Control Of Pathogenic Vibrio Spp . By

Bacillus Subtilis BT23 , A Possible Probiotic Treatment For Black Tiger Shrimp

Penaeus Monodon. The Society of Applied Microbiolog 83–87.

Vinoj, G., B. Vaseeharan, dan C. Ravi. 2013. Inhibitory effects of Bacillus

licheniformis ( DAB1 ) and Pseudomonas aeruginosa ( DAP1 ) against Vibrio.

Aquacult int (2013) 2: 1121–1135.

Wahjudi, M., L. L. Algadrie dan R. Chrisnasari. 2014. Isolasi Bakteri dari Tanah

Gunung Kapur dan Pengujian Aktivitas Antibakteri Isolat Terhadap Bakteri

Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Jurnal iImiah Sains Dan

Teknologi, 7(2), 7–17.

Wardika, A. S., Suminto dan A. Sudaryono. 2014. Pengaruh Bakteri Probiotik Pada

Pakan Dengan Dosis Berbeda Terhadap Efisiensi Pemanfaatan Pakan,

Pertumbuhan dan Kelulushidupan Lele Dumbo (Clarias Gariepinus). Journal of

Aquaculture Management and Technology. 3(4) : 9-17.

Widiyanto, T., A. Suwantol, H. Adidjuwana, R. Kaswadji. 1998. Kemampuan Bakteri

Fotosintetik Anoksigenik Dalam Menurunkan Konsentrasi H2S dan

Menghambat Pertumbuhan Vibrio harveyi. Jurnal Bioteknologi Pertanian. Vol

3, No 1, pp. 17-22.

Widodo, L. U. 2010. Bakteri Fotosintetik Anoksgeni Peranannya dalam

Mendegradasi Limbah. Biodiversitas dan Bioteknologi Sumberdaya Akuatik.

ISBN 978-979-16109-4-0.

Wintersdorff CJHv, J. Penders, J.Mv. Niekerk, N.D. Mills, S. Majumder, L.Bv.

Alphen, P.H.M. Savelkoul, P.F.G. Wolffs. 2016. Dissemination of

Antimicrobial Resistance in Microbial Ecosystems through Horizontal Gene

Transfer. Frontiers in Microbiology, 7:173.