ELEKTROFORESISI PROTEIN

Kelompok 3

ELEKTROFORESIS

• Suatu teknik pemisahan berdasarkan pergerakan molekul bermuatan dalam suatu medan listrik,dimana kecepatan pergerakan molekul tergantung dari muatan,bentuk serta ukuran.dan teknik ini dapat digunakan untuk separasi(pemisahan molekul) protein dan DNA

Tujuan dan Prinsip

Prinsip AnalisisSuatu metode untuk memisahkan makromolekul

seperti asam nukleat dan protein berdasarkan ukuran muatan istrik dan cirifisik•

Tujuan Mengetahui prinsip dasar pemisahan protein

dengan metode elektroforesisMenentukan berat molekul kasein

Aplikasi

Alat dan Bahan Alat :

• Seperangkat alat elektroforesis• Mikropipet• Tip• Beker• glass 100 ml• Beker• glas• 50 ml• Eppendorf• Shaker

Bahan

• Sampel Kasein • •Buffer Bufer Tris-Cl 0,5 M pH 6,8 ; SDS 2% ;

Merkaptoetanol 0,05% • •Larutan stock Akrilamid 30% 29.2 gram

akrilamid ditambah 0.8 gram N’N’-bis-methylene acrylamid dalam 100 ml aquades

Bahan

Larutan SDS 10 % Amonium persulfat (APS) 10% (di buat setiap akan

digunakan) TEMED • •Larutan Pewarna (Staining) 0.1 % commasie

blue dalam larutan metanol : air : asam asetat (5:5:2)

• •Larutan Pembilas (destaining) metanol : air : asam asetat (5:5:2)

• •Aquades

Berdasarkan posisi matrik penyangga

elektroforesis terdiri :1. Elektroforesis Vertikal

Dimana posisi gel(matrik )penyangga berdiri tagak lurus.

2. Elektriforesis horisontal Posisi gel (matrik)penyangga dalam posisi

mendatar.

vertikal

horizontal

Bagian – bagian alat elektroforesis protein

keterangan

tutup elektroconectionrendah Chamberapper ChamberGrease untuk spacerSisir piring untuk membentuk sampel sumurCam untuk melampirkan kaset untuk pengecoran berdiripengatur jarakklempelat kacaCasting Berdirikoil pendingin

Menagapa SDS-PAGE• Pemisahan berdasarkan ukuran.

-Protein berikatan Artikel Baru SDS menjadi bermuatan negatif.-SDS = natrium dodesil sulfat => anionik deterjen (muatan negatif)-Protein bergerak melalui matriks gel ke anoda (kutub listrik dengan muatan positif).-The RATE mereka bergerak didasarkan pada ukuran.-Baik untuk menentukan komposisi protein, kemurnian, dan perkiraan berat molekul.

Elektroforesis SDS-PAGE• Protein mempunyai muatan positif dan negatif • •Muatan listrik menyebabkan protein bergerak ke

elektroda melewati gel poliakrilamid • •Gel memisahkan molekul berdasarkan : • 1. Ukuran • 2. Bentuk molekul • 3. Kekuatan medan listrik • 4. Sifat hidrofobik relatif sampel • 5. Kekuatan ionik. • Poliakrilamid memisahkan Protein MW 0,5-250 kDa • memisahkan DNA 5-2000 bp

Isoelectric Point (pI)

• •Setiap protein memiliki (pI), kondisi dimana protein tidak bermuatan sehingga tidak terjadi perpindahan.

• •pH dimana protein tidak bermuatan • •Protein dikatakan basa, asam atau netral tergantung

pada muatan protein pada pH fisiologis • •Nilai pH dibawah pI protein berpindah sebagai

kation(-) meningkatnya mobilitas dengan penurunan pH

• •Nilai pH diatas pI protein berpindah sebagai anion(+), meningkatnya mobilitas dengan eningkatan pH

Media untuk Elektroforesis

• Kertas Strip• Selulosa asetat• Agar• Pati• gel poliakrilamida (PAGE) pengayak molekul digunakan untuk keuntungan besar.•PAGE Ukuran, bentuk dan mobilitas elektroforesis, resolusi Peningkatan