plagiat merupakan tindakan tidak terpuji - core.ac.uk · rumus bangun carvacrol ... uv 365, dan...

AKTIVITAS ANTIMIKROBA FRAKSI PETROLEUM ETER, KLOROFORM,

ETANOL BUNGA PULU (Chartamus tinctorius L.) TERHADAP Staphylococcus

aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans

SKRIPSI

Diajukan Untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Hermawan Deny Prasetyo

NIM : 098114036

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2013

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i



aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans

SKRIPSI

Diajukan Untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh


NIM : 098114036

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2013


ii

30 Mei 2013


iii

31 Mei 2013


iv

Kupersembahkan karya kecilku untuk Ayah Ibuku, serta orang-orang

yang hidup dengan cinta dan mencintai hidupnya dan Almamaterku


v

LEMBAR PERNYATAAN KEASLIAN KARYA

Saya menyatakan dengan sesungguhnya bahwa skripsi yang saya tulis ini tidak

memuat karya orang lain, kecuali yang telah disebutkan dalam kutipan dan daftar

pustaka, sebagaimana layaknya karya ilmiah.

Yogyakarta, 11 Maret 2013

Penulis,



vi

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN

PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS

Yang bertanda tangan dibawah ini, saya mahasiswa Universitas Sanata Dharma:

nama : Hermawan Deny Prasetyo

nomor mahasiswa : 098114036

Demi pengembangan ilmu pengetahuan, saya memberikan kepada Perpustakaan

Universitas Sanata Dharma karya ilmiah saya yang berjudul:



aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans.

beserta perangkat yang diperlukan (bila ada). Dengan demikian saya memberikan

kepada Perpustakaan Universitas Sanata Dharma hak untuk menyimpan, mengalihkan

dalam bentuk media lain, mengelolanya dalam bentuk pangkalan data,

mendistribusikannya secara terbatas, dan mempublikasikannya di internet atau media

lain untuk kepentingan akademis tanpa perlu meminta izin kepada saya maupun

memberikan royalti kepada saya selama tetap mencantumkan nama saya sebagai

penulis.

Demikian pernyataan ini saya buat dengan sebenarnya.

Dibuat di Yogyakarta

Pada tanggal : 23 Mei 2013

Yang Menyatakan



vii

KATA PENGANTAR

Puji syukur kehadirat Allah atas rahmat dan hidayahNya sehingga pada akhirnya

penulis dapat menyelesaikan penyusunan skripsi dengan judul “Aktivitas Antimikroba

Fraksi Petroleum Eter, Kloroform, Etanol Bunga Pulu (Chartamus tinctorius L.)

terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans”.

Penyusunan skripsi ini sebagai syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi

Program Studi Farmasi Universitas Sanata Dharma. Perjuangan panjang dalam

penyusunan skripsi ini tentunya tidak lepas dari bantuan dan kerja sama berbagai pihak.

Oleh karena itu, penulis ingin mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya

kepada:

1. Bapak dan Ibu tercinta, Harya Adi Setiawan dan Sumarsih atas kesabaran dan

kepercayaan, tulusnya doa dan kasih sayang, dukungan moral dan materi, serta

semangat yang selali mengiringi langkahku.

2. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. Selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas

Sanata Dharma.

3. Ibu Agustina Setiawati M.Sc., Apt. selaku Dosen Pembimbing yang telah

meluangkan waktunya untuk memberikan bimbingan, dukungan moril,

pengarahan, evaluasi dan saran mulai penyusunan proposal hingga skripsi ini

selesai.

4. Bapak Yohanes Dwiatmaka M. Si. dan Prof. Dr. C.J. Soegihardjo, Apt. selaku

Dosen Penguji yang telah meluangkan waktunya untuk memberikan bimbingan,

pengarahan dan saran baik langsung ataupun tidak.


viii

5. Ibu Rini Dwiastuti selaku dosen pembimbing akademik yang telah begitu

perhatian, terima kasih atas saran, masukan dan petuah yang sangat berarti baik

itu menunjang akademik maupun kepribadian saya.

6. Ibu Maria Dwi Jumpowati, S.Si yang telah bersedia meluangkan waktu untuk

berdiskusi, memberi semangat serta masukan kepada penulis.

7. Teman-teman IA1 SMAN I Kolaka yang telah banyak mengisi cerita hidup.

8. Teman-teman seperjuanganku : Wanda Indriani W., Johanes Putra W.,

Bernadeta Arum W., terimaksih untuk doa, kerjasama, dan dukungannya.

9. Seluruh laboran dari lantai satu sampai empat, terutama Mas Wagiran, Mas

Sigit, Pak Mukmin yang telah banyak membantu selama penelitian sampai

skripsi dapat diselesaikan.

10. Teman-teman kelas A FSM 2009 untuk kebersamaan dan dukungannya.

11. Teman-teman KKN Kelompok 20 XLIV: Victor, Evy Feny Veronika, Maria

Sukma, Agustin Nugroho, Fenny, Elsa Ridho terimakasih untuk pelajaran hidup

yang berharga, canda tawa dan kebersamaan kita.

12. Semua pihak yang telah membantu dan mendukung penulis dari awal sampai

skripsi ini selesai yang tidak dapat disebutkan satu persatu.

Penulis menyadari bahwa penelitian dan penyusunan skripsi ini jauh dari

kesempurnaan dan masih memerlukan kritik dan saran yang membangun dari segi

manapun. Akhir kata, penulis berharap hasil penelitian ini bermanfaat dikemudian hari.

Penulis


ix

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING

HALAMAN PENGESAHAN

HALAMAN PERSEMBAHAN

LEMBAR PERNYATAAN KEASLIAN KARYA

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA

ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS

KATA PENGANTAR

DAFTAR ISI

DAFTAR TABEL

DAFTAR GAMBAR

DAFTAR LAMPIRAN

INTISARI

ABSTRACT

BAB I. PENGANTAR

A. Latar Belakang

1. Permasalahan

2. Keaslian penelitian

3. Manfaat penelitian

B. Tujuan Peneltian

BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA

A. Bunga Pulu

1. Klasifikasi

2. Uraian tanaman

3. Kandungan kimia

4. Sifat kimiawi dan aktivitas farmakologi

B. Staphylococcus aureus

Halaman

i

ii

iii

iv

v

vi

vii

ix

xii

xiii

xiv

xvi

xvii

1

1

2

3

4

4

5

5

5

5

6

6

7


x

1. Struktur Antigen

2. Toksin dan enzim

3. Patogrnesis dan patologi

C. Escherechia coli

1. Struktur antigen

2. Patogenesis dan tanda klinis

D. Candida albicans

1. Struktur fisik

2. Patogenesis

E. Ekstraksi Bertingkat .

F. Maserasi

G. Kromatografi Lapis Tipis

H. Minyak Atsiri

I. Flavonoid

J. Metode Pengujian Aktivitas Antimikroba

1. Metode dilusi

2. Metode difusi

K. Landasan Teori

L. Hipotesis

BAB III. METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian

B. Variabel dan Definisi Operasional

1. Variabel penelitian

2. Definisi operasional

C. Bahan dan Alat Penelitian

1. Bahan

2. Alat

D. Tata Cara Penelitian

1. Determinasi bunga pulu

8

9

10

11

11

12

15

16

17

18

18

19

20

22

24

24

24

25

25

26

26

26

26

27

27

27

28

28

28


xi

2. Pengumpulan bahan

3. Pengeringan dan pembuatan serbuk

4. Ekstraksi bertingkat serbuk bunga pulu

5. Pengujian potensi antimikroba

6. Identifikasi kandungan senyawa bunga pulu dengan uji tabung

E. Kromatografi Lapis Tipis (Uji Penegasan Flavonoid)

F. Kromatografi Lapis Tipis (Uji Penegasan Minyak Atsiri)

G. Analisis Hasil

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Determinasi Tanaman

B. Hasil Pengumpulan dan Pembersihan

C. Hasil Pengeringan

D. Hasil Penyarian Serbuk

E. Uji Aktivitas Antimikroba Fraksi Petroleum Eter, Kloroform, Etanol

Bunga Pulu terhadap Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan

Candida albicans dengan Metode Difusi

F. Skrining Fitokimia

1. Uji tabung

2. Uji kualitatif secara kromatografi lapis tipis

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN

DAFTAR PUSTAKA

LAMPIRAN

BIOGRAFI PENULIS

29

29

29

30

33

36

36

37

38

38

38

38

40

41

45

46

51

58

59

63

84


xii

DAFTAR TABEL

Tabel I. Pembuatan variasi konsentrasi uji

Tabel II. Hasil maserasi serbuk bunga pulu

Tabel III. Kepolaran relatif pelarut organik

Tabel IV. Diameter zona hambat fraksi petroleum eter bunga pulu (Carthamus

tinctorius L.) terhadap Staphylococcus aureus,Escherechia coli dan

Candida albicans

Tabel V. Diameter Zona Hambat fraksi kloroform bunga pulu (Carthamus


Candida albicans

Tabel VI. Diameter zona hambat fraksi etanol bunga pulu (Carthamus


Candida albicans

Tabel VII. Hasil Pengamatan uji tabung terhadap serbuk bunga pulu

Tabel VIII. Nilai Rf dan warna bercak pada uji KLT dengan fase diam selulosa

dan fase gerak n-butanol - asam asetat glasial - air (4:1:5)v/v dan

pembanding rutin 0,05% untuk analisis flavonoid

Tabel IX. Nilai Rf dan warna bercak pada uji KLT dengan fase diam silika gel

dan fase gerak toluen - etil asetat (93:7) v/v dan pembanding terpenoid

untuk analisis minyak atsiri

Halaman

31

39

40

43

43

44

46

53

55


xiii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Bunga Pulu....................................................................................

Gambar 2. Staphylococcus aureus..................................................................

Gambar 3. Escherecia coli pada media LA, Inkubasi 370C...........................

Gambar 4. Mikrograf Fluoresensi Candida albicans dewasa........................

Gambar 5. Rumus Bangun Carvacrol............................................................

Gambar 6. Rumus Bangun Flavon.................................................................

Gambar 7. Reaksi antara NaCl dengan senyawa fenolik................................

Gambar 8. Reaksi antara senyawa fenolik dengan FeCl3...............................

Gambar 9. Interaksi Flavonoid dengan CaSO4 membentuk kompleks khelat

Gambar 10. Hasil Uji KLT Flavonoid.............................................................

Gambar 11. Reaksi Flavonoid dengan NH3...................................................

Gambar 12. Hasil Uji KLT Minyak Atsiri......................................................

Halaman

5

7

11

15

21

22

48

50

52

52

54

55


xiv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat Keterangan Selesai Melakukan Determinasi

Lampiran 2. Sertifikat Hasil Uji Staphylococcus aureus ATCC 25923

Lampiran 3. Sertifikat Hasil Uji Escherichia coli ATCC 32518

Lampiran 4. Sertifikat Hasil Uji Candida albicans ATCC 10231

Lampiran 5. Foto Tanaman Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) dan Serbuk Bunga

Pulu

Lampiran 6. Foto Maserasi, Penguapan Menggunakan Rotaevaporator, Variasi

Konsentrasi Fraksi Etanol, Fraksi Kloroform, Fraksi Petroleum eter

Lampiran 7. Foto Hasil Uji Pendahuluan Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius

L.) dengan uji tabung

Lampiran 8. Foto Hasil Uji Alkaloid Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.)

dengan Uji Tabung

Lampiran 9. Foto Hasil Uji Antrakinon Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.)

dengan Uji Tabung

Lampiran 10. Foto Hasil Uji Polifenol Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.)

dengan Uji Tabung

Lampiran 11. Foto Hasil Uji Tanin Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.)

dengan Uji Tabung

Lampiran 12. Foto Hasil Uji Saponin Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.)

dengan Uji Tabung

Lampiran 13. Foto Hasil KLT Fraksi Metanol Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.)

dengan Deteksi UV 254, UV 365, dan Uap Amonia pada Analisis

Flavonoid

Lampiran 14. Foto Hasil KLT Fraksi Metanol Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.)

dengan Deteksi UV 254, UV 365, dan Vanilin-Asam Sulfat pada Analisis

Minyak Atsiri

Halaman

63

64

65

66

67

68

71

71

72

72

73

73

74

75


xv

Lampiran 15. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Petroleum Eter terhadap

Staphylococcus aureus ATCC 25923 dengan Metode Difusi Sumuran

Lampiran 16. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Kloroform terhadap


Lampiran 17. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Etanol terhadap Staphylococcus

aureus ATCC 25923 dengan Metode Difusi Sumuran


Escherichia coli ATCC 32518 dengan Metode Difusi Sumuran



Lampiran 20. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Etanol terhadap Escherichia

coli ATCC 32518 dengan Metode Difusi Sumuran


Candida albicans ATCC 10231 dengan Metode Difusi Sumuran

Lampiran 22. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Kloroform terhadap Candida

albicans ATCC 10231 dengan Metode Difusi Sumuran

Lampiran 23. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Etanol terhadap Candida


Lampiran 24. Foto Kontrol Media dan Pertumbuhan Staphylococcus aureus,

Escherichia coli, dan Candida albicans

Lampiran 25. Foto Kemampuan Difusi Fraksi Petroleum Eter, Kloroform, Etanol

Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) pada Media Agar

76

76

77

77

78

78

79

79

80

80

83


xvi

INTISARI

Bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) merupakan tanaman obat yang secara

empiris digunakan untuk mengatasi kolesterol tinggi, angina pectoris, dan berbagai

penyakit lainnya. Kandungan dari Carthamus tinctorius L. ialah flavonoid yang terdiri dari

chalcones, carthamin, carthamone, lignin, linalool, carvacrol,dan thymol. Profil resistensi

antibiotik terus berkembang terhadap Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan

Candida albicans. Perlu dilakukan eksplorasi aktivitas antimikroba dari bunga pulu

terhadap bakteri atau fungi tersebut untuk menemukan agen antimikroba alternatif yang

lebih poten.

Penelitian ini termasuk penelitian eksperimental murni rancangan acak lengkap

pola satu arah. Ekstraksi bertingkat bunga pulu dilakukan menggunakan pelarut

petroleum eter, kloroform, dan etanol menggunakan metode maserasi. Uji aktivitas

antimikroba menggunakan metode difusi sumuran, dilanjutkan metode dilusi padat

untuk mengetahui Kadar Hambat Minimal (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM).

Serbuk bunga pulu kemudian diuji secara kualitatif untuk mengidentifikasi kandungan

senyawanya. Data zona hambat yang diperoleh kemudian dianalisis secara deskriptif

komparatif.

Hasil penelitian menunjukkan fraksi petroleum eter, kloroform, etanol tidak

memiliki aktivitas antimikroba terhadap Staphylococcus aureus, Escherechia coli,

Candida albicans. Kandungan senyawa aktif hasil uji KLT diperkirakan adalah

flavonoid, senyawa fenolik dan minyak atsiri.

Kata kunci : Aktivitas antimikroba, Bunga pulu (Carthamus tinctorius L.),

Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Candida albicans


xvii

ABSTRACT

Pulu flower (Carthamus tinctorius L.) is a medicinal plant, that is empirically

used to treat high cholesterol, angina pectoris, and other disease. Constituents of

Carthamus tinctorius L. is flavonoid such as chalcones, carthamin, carthamone, lignin,

linalool, carvacrol,and thymol Profil of antibiotic resistance is growing among

Staphylococcus aureus, Escherechia coli, and Candida albicans. Need some

exploration of antimicrobial activity Pulu flower towards bacterial or fungi, to discover

alternative antimicrobial agents are potently.

This research is purely experimental, completely randomized design. Terraced

extraction pulu flower perfomed using petroleum ether, chloroform, and ethanol using

material method. Antimcrobial activity test using diffusion method, followed by dense

dilution method to determine the Minimal Inhibitory Concentration (MIC) and Minimal

Bactericidal Concentration (MBC). The data then tested qualitatively to identify the

content of the active compound. The result was analysed using comparative-descriptive

analysing method.

The result showed petroleum ether, chloroform, and ethanol extract does not

have antimicrobial activity againts Staphylococcus aureus, Escherechia coli, and

Candida albicans. The content of active compound predicted with TLC assay are

flavonoids and essential oil (Carvacrol).

Keyword : Antimcrobial Activity, Pulu Flower (Carthamus tinctorius L.) Escherechia

coli, Candida albicans, Staphylococcus aureus.


1

BAB I

PENGANTAR

A. Latar Belakang

Penyakit infeksi merupakan salah satu masalah dalam bidang kesehatan

yang dari waktu ke waktu dan terus berkembang dan pada tahun 2002, sebanyak

14,9 juta manusia meninggal akibat penyakit infeksi. Penyakit infeksi kulit, demam,

dan sakit perut merupakan penyakit yang banyak dijumpai dimasyarakat. Penyakit

tersebut antara lain disebabkan oleh bakteri Staphylococcus aureus (10.460 kasus),

Escherichia coli (7.632 kasus) dan jamur. Jamur yang paling menginfeksi manusia

adalah jamur oportunistik. Salah satu agen jamur yang ditemui dengan frekuensi

terbesar adalah Candida albicans dengan jumlah 7.808 kasus di Amerika Serikat

(Madigan, Martinko, Dunlap, Clark, 2009).

Sejak satu dekade terakhir, telah terjadi perubahan profil resistensi

antibiotik. Penisilinase menyebabkan resistensi hampir disemua strain

Staphylococcus hingga 4,8% pada tahun 2007 (Sudibyo, Rohmawati, Munira,

Febriana, Radiono, Suswanto, 2008). Resistensi E. coli terjadi peningkatan 0,59

%/tahun pada amoksisilin (Tadesse, Zhao, Tong, Ayers, Singh, Bartholommew,

dkk., 2002). Biofilm Candida albicans resisten terhadap delapan senyawa

antifungal diantaranya ialah ketokonazol (Safina, 2011). Seiring dengan

meningkatnya resistensi bakteri harus diimbangi dengan penemuan obat baru. Hal

ini mendorong usaha penemuan agen antimikroba alternatif yang lebih poten,

memiliki efek samping yang lebih kecil, dan tersedia terus-menerus sehingga

penyakit infeksi bisa diatasi.


2

Bunga pulu atau kasumba turatea (Carthamus tinctorius L.) dalam bahasa

Bugis digunakan secara empiris untuk menurunkan kolesterol tinggi, mengatasi

angina pectoris, tromboangitis, hipertensi, kanker, nyeri haid, dan sakit perut

setelah melahirkan (Wijayakusama, 2008). Analisis kimia dari ekstrak bunga pulu

mengungkapkan senyawa utama ialah chartamin, chartamone, neo-chartamin,

nona-cosane, zat warna kuning saflawer, safflomin A, dipalmitin, adenosid, beta-

sitosterol, dan polisakarida (Wijayakusuma, 2008a). Analisis minyak atsiri bunga

pulu ditemukan thymol, carvacrol, linalool, dan eugenol (Ziarati, Asgarpanah,

Klanifard, 2012). Beberapa senyawa tersebut berpotensi mempunyai aktivitas

antimikroba (Nostro dan Papalia, 2012); (Akroum, Satta, Lalaoui, 2009).

Sehubungan dengan potensi tersebut, maka perlu dilakukan eksplorasi

yang merupakan penelitian pendahuluan, untuk mencari bahan alam yang

mempunyai kemampuan sebagai antimikroba dari beberapa penyari untuk

mempermudah menyari senyawa-senyawa tersebut diatas, berdasarkan kelarutan

dan aktivitasnya terhadap Staphylococcus aureus yang mewakili Gram positif,

Escherichia coli yang mewakili Gram negatif dan Candida albicans yang mewakili

fungi. Setelah diketahui adanya kemampuan sebagai antimikroba pada tanaman ini,

tanaman ini dapat dikembangkan sebagai bahan dasar obat antimikroba baru.


3

1. Permasalahan

a. Apakah fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol bunga pulu memiliki

aktivitas antimikroba terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan

Candida albicans?

b. Berapa Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum

(KBM) dari fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol bunga pulu terhadap

Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans?

c. Golongan senyawa apakah yang terkandung didalam bunga pulu?

2. Keaslian penelitian

Pernah dilakukan penelitian mengenai potensi antibakteri ekstrak tanaman

Carthamus tinctorius L. pada Propionibacterium acne and Staphylococcus

epidermidis (Chomnawang, Surassmo, Nukoolkam, Gritsanapan, 2005). Selain itu,

pernah dilakukan pengujian ekstrak metanol dan air panas pada tanaman

Carthamus tinctorius pada beberapa bakteri diantaranya Staphylococcus aureus

(Mothana, Abdo, Hason, Althawab Fasial, Alaghbari, Lindequist, 2008) dan ekstrak

metanol, etanol pada campuran bunga dan daun Carthamus tinctorius pada

beberapa bakteri (Akroum, Satta, Lalaoui, 2009). Sejauh penelusuran pustaka oleh

penulis, penelitian mengenai aktivitas antimikroba fraksi petroleum eter, kloroform,

etanol bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) terhadap Staphylococcus aureus,

Escherichia coli, dan Candida albicans ini berbeda dalam proses ekstraksi, yaitu

menggunakan metode ekstraksi bertingkat, dan asal bunga yang digunakan,

sehingga penelitian ini belum pernah dilakukan.


4

3. Manfaat penelitian

a. Manfaat teoritis

Penelitian ini diharapkan dapat mengembangkan khasanah ilmu

pengetahuan khususnya di bidang kesehatan tentang penggunaan bunga pulu

(Carthamus tinctorius L.) yang berkhasiat sebagai antimikroba.

b. Manfaat praktis

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi tentang manfaat

bunga pulu sebagai pengobatan alternatif bagi masyarakat terutama untuk

mengobati penyakit yang disebabkan oleh infeksi bakteri dan jamur.

B. Tujuan Penelitian

1. Tujuan umum

Tujuan umum dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas

antimikroba fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol bunga pulu terhadap

Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans.

2. Tujuan khusus

a. Mengetahui aktivitas antimikroba fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol

bunga pulu terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida

albicans.

b. Mengetahui Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum

(KBM) dari fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol bunga pulu terhadap

Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans.

c. Mengetahui golongan senyawa yang terkandung didalam bunga pulu.


5

BAB II

PENELAAHAN PUSTAKA

A. Bunga Pulu

1. Klasifikasi (Birla Institute of Scientific Research, 2010).

Kingdom : Plantae (Tumbuhan)

Divisio : Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Sub Divisio : Spermatophyta (Tumbuhan berbiji)

Classis : Dicotyledoneae (Tumbuhan berkeping dua)

Ordo : Asterales

Famili : Asteraceae

Genus : Carthamus

Spesies : Carthamus tinctorius Linn.

Gambar 1. Bunga Pulu (Nagaraj dkk., 2012)

2. Uraian tanaman

Bunga pulu merupakan herba tahunan, tanaman bercabang yang tingginya

dapat mencapai 0,3 -1,5 m. Tanaman ini memiliki sistem akar yang luas dengan akar

tunggang yang kuat berdaging mencapai 2-3 m. Akar lateral mendalam dan tipis masuk


6

30 cm kedalam tanah. Batang yang licin, berkayu, silinder dan berwarna kehijauan di

dekat pangkalan. Daun diatur dalam roset dari dasar, panjang 4-20 cm dan luas 1-5 cm,

hijau tua mengkilap, daun atas menanggung banyak duri tajam. Setiap batang beruang

perbungaan terminal. Ini adalah kapitulum bulat, 1,3 -3,5 cm, mengandung 20-80

tabung oranye-merah, bunga menjadi merah tua saat berbunga. Bunga masing-masing

menghasilkan satu buah. Buah safflower adalah achenes, biasanya disebut biji,

dikelilingi oleh lambung fibrosa tebal yang halus, mengkilap dan runcing sekitar 6-9

mm, berwarna putih atau kecoklatan dan putih dengan abu-abu, cokelat atau garis-garis

hitam (Heuze dan Tran, 2011).

3. Kandungan kimia

Kandungan dari Carthamus tinctorius L. ialah flavonoid yang terdiri dari

chalcones, carthamin, carthamone, dan lignin (Cai, Luo, Sun, Corke, 2003). Analisis

kimia dari ekstrak bunga pulu mengungkapkan konstituen utama ialah chartamin,

chartamone, neo-chartamin, nona-cosane, zat warna kuning saflower, safflomin A,

dipalmitin, adenosid, beta-sitosterol, dan polisakarida (Wijayakusuma, 2008a).

4. Sifat kimiawi dan aktivitas farmakologi

Bunga pulu memiliki rasa pedas dan agak pahit, berbau aromatik, dan

bersifat hangat. Bunga pulu dapat meningkatkan sirkulasi darah, mencegah

pembekuan darah, peluruh haid (emenagog), pencahar (laxative) dan sebagai

stimulan (Wijayakusuma, 2008a).


7

B. Staphylococcus aureus

Gambar 2. Staphylococcus aureus (Stierman, 2012)

Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif, anaerob fakultatif

yang tidak membentuk spora, tidak bergerak dinding selnya mengandung

peptidoglikan dan asam teikoat. Selnya berbentuk bola dengan diameter kira-kira 1 µm

tersusun berkelompok menyerupai buah anggur. Tumbuh paling cepat pada suhu 37

0C. Staphylococcus aureus relatif tahan terhadap panas (500C selama 30 menit) dan

tahan terhadap natrium klorida 9%, tetapi dapat dihambat zat kimia tertentu (Jawetz,

Melnick, Adelberg, 2005). Sifat patogenesis dapat diamati terhadap kemampuan

memfermentasi materi secara aerob, kemampuan memecah gelatin, dan menghemolisis

darah (Todar, 2012). Staphylococcus aureus membentuk koloni abu-abu hinga kuning

emas, karakteristik pertumbuhan dengan menghasilkan katalase, yang membedakan

dengan streptokokus, bakteri ini memfermentasi karbohidrat, menghasilkan asam laktat

dan tidak menghasilkan gas. Aktifitas proteolitik bervariasi dari satu galur ke galur lain,

menyebabkan penyakit pada hampir semua jaringan tubuh yang terutama adalah abses.

Bakteri ini merupakan flora normal pada rongga hidung bagian depan, perineum,

saluran pencernaan, atau kulit (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005).

Staphylococcus aureus dapat menyebabkan penyakit berkat kemampuannya

melakukan pembelahan dan menyebar luas ke dalam jaringan dan melalui produksi


8

beberapa bahan ekstraseluler. Beberapa bahan tersebut adalah enzim, yang lain dapat

berupa toksin, meskipun fungsinya adalah sebagai enzim. Beberapa toksin berada

dibawah kontrol genetik plasmid, beberapa dibawah kontrol kromosom dan yang lain

mekanisme kontrol genetiknya belum ditemukan (Jawetz, Melnick, dan Adelberg,

2005).

1. Struktur antigen

Staphylococcus mengandung antigen polisakarida dan protein seperti zat lain

yang penting dalam struktur dinding sel. Peptidoglikan, suatu polimer polisakarida

yang mengandung subunit-subunit yang bergabung memberikan eksoskeleton yang

kaku dari dinding sel. Peptidoglikan dirusak oleh asam kuat atau paparan terhadap

lisozim. Infeksi akan merangsang pembentukan interleukin (pirogen endogen) dan

antibodi opsonin oleh monosit; dan ini dapat menjadi penarik kimiawi bagi leukosit

polimorfonuklear, mempunyai aktivitas seperti endotoksin dan mengaktivasi

komplemen (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005).

Protein A merupakan komponen dinding sel kebanyakan galur

Staphylococcus aureus yang bisa mengikat ke bagian Fc molekul IgG kecuali IgG3.

Meskipun IgG terikat pada protein A, namun fragmen Fab tetap bisa bebas berikatan

dengan antigen spesifik. Protein A telah menjadi reagen yang penting dalam imunologi

dan teknologi laboratorium diagnostik. Beberapa galur Staphylococcus aureus

mempunyai kapsul yang menghambat fagositosis oleh lekosit polimorfonuklear kecuali

jika terdapat antibodi spesifik. Sebagian besar galur Staphylococcus aureus

mempunyai koagulase atau faktor penggumpalan pada permukaan dinding sel, ikatan

koagulase secara non enzimatik pada fibrinogen, menyebabkan agregasi pada bakteri

(Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005).


9

2. Toksin dan enzim

Staphylococcus aureus menghasilkan katalase, yang mengubah hidrogen

peroksida menjadi air dan oksigen; koagulase, protein yang menyerupai enzim yang

mampu menggumpalkan plasma yang ditambah dengan oksalat atau sitrat dengan

adanya suatu faktor yang terdapat dalam serum. Faktor serum bereaksi dengan

koagulase untuk membentuk esterase dan aktivitas penggumpalan, dengan cara yang

sama ini untuk mengaktivasi protrombin menjadi trombin. Cara kerja koagulase adalah

dalam lingkup kaskade penggumpalan plasma normal. Koagulase dapat membentuk

fibrin pada permukaan Staphylococcus, ini bisa mengubah ingestinya oleh sel fagositik

atau pengrusakannya dalam sel fagosit; eksotoksin, ini meliputi beberapa toksin yang

bersifat letal jika disuntikkan pada binatang, menyebabkan nekrosis pada kulit, dan

berisi larutan hemolisis yang dapat dipisahkan dengan elektroforesis. Aflatoksin

(hemolisin) adalah protein heterogen yang dapat melisiskan eritrosit dan merusak

platelet serta dimungkinkan sama dengan faktor dermonekrotik dari eksotoksin;

Lekosidin, toksin Staphylococcus aureus ini dapat membunuh sel darah putih pada

berbagai binatang. Peran toksin dalam patogenesis tidak jelas, karena Staphylococcus

aureus yang patogenik tidak dapat membunuh sel darah putih dan dapat difagositosis

efektif seperti yang nonpatogenik; enterotoksin, ada sedikitnya enam (A-F) toksin larut

yang dihasilkan oleh hampir 50 % galur Staphylococcus aureus. Seperti TSST-1,

enteroktoksin adalah superantigen yang berikatan dengan molekul MHC kelas II,

menimbulkan stimulasi sel T, entertoksin stabil terhadap panas dan resisten terhadap

aksi enzim usus (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005).


10

3. Patogenesis dan patologi

Staphylococcus aureus yang patogenik dan bersifat invasif menghasilkan

koagulase dan cenderung untuk menghasilkan pigmen kuning dan menjadi hemolitik.

Kemampuan patogenik Staphylococcus aureus adalah pengaruh gabungan antara

faktor ektraseluer dan toksin bersama dengan daya sebar invasif (Jawetz, Melnick, dan

Adelberg, 2005).

Staphylococcus aureus menetap di folikel rambut menyebabkan nekrosis

jaringan (faktor dermonekrotik). Koagulase dihasilkan dan mengkoagulasi fibrin di

sekitar lesi dan di dalam limfatik, membentuk dinding yang menghambat proses

penyebaran dan diperkuat lagi oleh akumulasi sel inflamasi dan kemudian jaringan

fibrosa. Di dalam pusat lesi, terjadi likuefaksi dan nekrosis jaringan (dipacu oleh

hipersensitivitas tipe lambat) pada bagian abses yang lemah. Drainase cairan pusat

jaringan nekrotik diikuti dengan pengisian secara kavitas oleh jaringan granulasi dan

akhirnya terjadilah penyembuhan (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005).

Supurasi fokal (abses) adalah khas untuk infeksi stafilokokus. Dari tiap fokus

manapun, organisme dapat menyebar melalui aliran limfatik dan aliran darah ke bagian

lain dalam tubuh. Supurasi yang terjadi dalam pembuluh darah vena, yang berhubungan

dengan trombosis, merupakan gambaran umum proses penyebaran tersebut. Pada

osteomielitis, fokus primer pertumbuhan Staphylococcus aureus adalah khas di

pembuluh darah tepi dari metafisis menyebabkan pneumonia, meningitis, empiema,

endokarditis atau sepsis dengan supurasi di tiap organ. Staphylococcus aureus

mempunyai kemampuan invasi yang rendah, terlibat dalam banyak infeksi kulit

(misalnya akne, pioderma atau impetigo) (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005).


11

C. Escherichia coli

Gambar 3. Eschericia coli pada SEM (Rogers, 2011)

Escherichia coli merupakan bakteri Gram negatif yang banyak

ditemukan pada ileum caudal, berbentuk batang pendek, dan dapat begerak. Pada

lingkungan yang kurang baik dapat membentuk spora, dan merupakan kuman

aerob fakultatif. Escherichia coli menghasilkan tes positif terhadap indole, lisin

dekarboksilase, dan memfermentasi manitol dan menghasilkan gas dari glukosa.

Bakteri ini merupakan bagian terbesar dari flora usus dan dianggap sebagai

bakteri yang tidak patogen dalam saluran pencernaan. Escherichia coli akan

bersifat patogen apabila berada terdapat di luar saluran pencernaan dan pada saat

kondisi tubuh manusia menurun (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005).

1. Struktur antigen

a. Antigen O merupakan bagian terluar dinding sel lipopolisakarida dan

terdiri dari unit berulang polisakarida. Beberapa polisakarida spesifik O

mengandung gula unik. Antigen O tahan terhadap panas dan alkohol

biasanya dideteksi dengan cara aglutinasi bakteri.

b. Antigen K merupakan bagian terluar dari antigen O pada beberapa

enterobacteriaceae. Beberapa antigen K adalah polisakarida, antigen K


12

dapat berpengaruh pada reaksi aglutinasi dengan antisera O. Antigen K

menyebabkan perlekatan bakteri pada sel epitelial yang memungkinkan

invasi ke sistem gastrointestinal atau saluran air kemih.

c. Antigen H terletak pada flagella dan didenaturasi oleh panas atau alkohol.

Antigen H mengadakan aglutinasi dengan antibodi H, biasanya IgG

(Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005).

2. Patogenesis dan tanda klinis

Manifestasi klinis infeksi Escherechia coli tergantung pada tempat

infeksi, dan tidak dapat dibedakan dengan gejala atau tanda dari proses-proses

yang disebabkan oleh bakteri lain. Berikut beberapa penyakit yang

berhubungan dengan Escherechia coli:

a. Infeksi sistem saluran kencing, Escherechia coli merupakan penyebab

paling banyak dari infeksi sistem saluran kencing dari jumlah untuk infeksi

saluran kencing. Nefropatogenik Escherechia coli secara khas

memproduksi hemolisin. Kebanyakan infeksi disebabkan oleh

Escherechia coli dari sejumlah antigen O. Antigen K menjadi penting

dalam patogenesis infeksi sistem saluran bagian atas.

b. Escherechia coli yang berhubungan dengan penyakit diare. Escherechia

coli yang umumnya menyebabkan diare ini diklasifikasikan berdasarkan

sifat karakteristik dari virulensinya dan tiap kelompok menyebabkan

penyakit dengan mekanisme yang berbeda.

1) Enterophatogenic E coli (EPEC) merupakan penyebab penting diare

pada bayi. EPEC melekat pada sel mukosa usus kecil. Faktor yang


13

berhubungan dengan kromosom mendukung pelekatan yang erat.

Terjadi kehilangan microvili (affecement), pembentukan filamentasi

actin atau struktur seperti cangkir, dan biasanya masuk ke dalam sel

mukosa.

2) Enteroxigenic E. coli (ETEC) merupakan penyebab umum diare pada

musafir. Strain ETEC memproduksi sebuah eksotoksin yang sifatnya

labil terhadap panas (LT) dibawah kontrol plasmid. Sub unit B melekat

dengan Gml gangliosida pada sisi sel epitel dari usus kecil dan

memberikan fasilitas sebuah pemasukan dari subunit A ke dalam sel,

dimana mengaktivasi adenylyl cyclase. Hal ini ditandai dengan adanya

peningkatan konsentrasi lokal dari cyclic adenosine monophosfat

(cAMP), yang menghasilkan hiperekskresi yang sering dan lama dari

air dan klorid serta menghambat penyerapan natrium. Lumen usus

digelembungkan dengan cairan hipermotility dan diare terjadi.

3) Enterohemorhagic E. coli (EHEC) memproduksi verotoksin, dan

dinamakan berdasarkan efek sitotoksik pada sel vero, merupakan

biakan sel ginjal dari monyet hijau Afrika. Terdapat sedikitnya dua

bentuk antigenik dari toksin. EHEC berhubungan dengan kolitis

hemoragik, bentuk diare yang berat dan dengan sindroma uremia

hemolitik, suatu penyakit akibat gagal ginjal akut, anemia hemolitik

mikroangiopatik, dan trombositopenia.

4) Enteroinvasive E. coli (EIEC) menyebabkan penyakit yang mirip

dengan shigellosis. Penyakit yang terjadi umumnya pada anak di negara


14

berkembang dan dalam perjalanan ke negara tersebut. Strain EIEC

memfermentasi laktosa dengan lambat atau tidak memfermentasi

laktosa dan tidak motil. EIEC menyebabkan penyakit dengan

menyerang sel epithelial mukosa usus.

5) Enteroagregative E. coli (EAEC) menyebabkan diare akut dan kronis.

Patogenesis EAEC penyebab diare tidak begitu dipahami dengan baik,

meskipun demikian dinyatakan bahwa EAEC melekat pada mukosa

intestinal dan menghasilkan enterotoksin dan sitotoksin. Akibatnya

adalah kerusakan mukosa, pengeluaran sejumlah besar mukus, dan

terjadi diare.

c. Sepsis bila pertahanan inang normal tidak mencukupi. Escherechia coli

dapat memasuki aliran darah dan menyebabkan sepsis. Bayi yang baru

lahir dapat sangat rentan terhadap sepsis Escherechia coli karena tidak

memiliki antibodi IgM. Sepsis dapat terjadi akibat infeksi saluran kemih.

d. Meningitis pada bayi, salah satunya disebabkan oleh Escherechia coli

yang mempunyai antigen K1. Antigen ini bereaksi silang dengan grup B

kapsular polisakarida dari N meningitidis. Mekanisme virulensi

berhubungan dengan antigen KI belum dipahami (Jawetz, Melnick, dan

Adelberg, 2005).


15

D. Candida albicans

Gambar 4. Mikrograf fluoresensi Candida albicans dewasa. A) sebelum diinkubasi dengan

thymol, biofilm sangat banyak pada jaringan multi-layer sel fungi dan berbentuk serabut. B)

setelah diinkubasi dengan Thymol ½x dari MIC selama 24 jam, terdapat sedikit perubahan

terlihat dibandingkan dengan kontrol. C) setelah diinkubasi dengan Thymol 1x dari MIC

terjadi perubahan struktur biofilm. D) setelah diinkubasi dengan Thymol 2x dari MIC jelas

menghambat semua unsur dan merusak struktur filamen (Braga, Sasso, Culici, Alfieri, 2008)

Candida albicans termasuk organisme eukariotik dengan bentuk lonjong dan

bertunas, yang menghasilkan pseudomiselium yang terdiri atas pseudohifa yang

membetuk blastokonidia pada nodus-nodus dan kadang-kadang klamidokonidia pada

ujung-ujungnya baik dalam biakan maupun dalam jaringan. Pada agar sabouraud yang

diinkubasi pada suhu kamar atau 37 0C selama 24 jam, spesies Candida menghasilkan

koloni-koloni halus berwarna krem yang mempunyai bau seperti ragi. Pertumbuhan

permukaan terdiri atas sel-sel bertunas lonjong. Candida adalah anggota flora normal

selaput lendir saluran pernafasan, saluran pencernaan, dan genitalia wanita. Pada

tempat ini Candida albicans menjadi dominan dan cenderung patogen. Candida

albicans patogen dapat menimbulkan infeksi dalam aliran darah, endokardiosis, atau

infeksi pada mata dan organ lain (Simatupang, 2009).

Candida dapat eksis dalam rongga mulut sebagai saprofit tanpa menyebabkan

lesi apapun. Antara genus Candida, albicans diduga spesies patogen dan diterima


16

sebagai faktor penyebab paling umum kandidiasis oral. Candida albicans dapat

ditemukan dalam rongga mulut yang sehat pada konsentrasi rendah (20 sel/cc saliva).

Dalam konsentrasi ini, organisme tidak bisa terdeteksi di bawah mikroskop, tetapi

hanya dapat dideteksi melalui kultur dalam media tertentu seperti pada Dextrose

Sabouroud Agar dalam bentuk koloni. Keseimbangan flora rongga mulut dapat

berubah menimbulkan suatu keadaan patologis atau penyakit karena beberapa faktor

seperti kesehatan mulut yang buruk, obat immunosupresan, penyakit sistemik yang

menurunkan daya tahan lokal tubuh (Tanjong cit., Sudiono, 2006).

1. Struktur fisik

Dinding sel Candida albicans berfungsi sebagai pelindung dan juga

sebagai target dari beberapa mikotik. Dinding sel berperan pula dalam proses

penempelan dan kolonisasi serta bersifat antigenik. Fungsi utama dinding sel

tersebut adalah memberikan bentuk pada sel dan melindungi sel ragi dari

lingkungannya. Candida albicans mempunyai struktur dinding sel yang kompleks,

tebalnya 100 sampai 400 nm. Komposisi primer terdiri dari glukan, manan, dan

khitin. Manan dan protein berjumlah sekitar 15,2 – 30% dari berat kering dinding

sel, 1,3 – D-glukan dan 1,6 – D – glukan sekitar 47-60 %, khitin sekitar 0,6 – 9 %,

dan lipid 1-7 %. Dalam bentuk ragi, kecambah dan miselium, komponen-komponen

ini menunjukan proporsi yang serupa tetapi bentuk miselium memiliki khitin tiga

kali lebih banyak dibandingkan dengan sel ragi. Dinding sel Candida albicans

terdiri dari lima lapisan yang berbeda (Tjampaksari, 2006).


17

2. Patogenesis

Infeksi Candida albicans berkaitan dengan perubahan bentuk sel-sel

Candida albicans dari bentuk yeast menjadi bentuk mycelium. Mycelium berbentuk

panjang dengan struktur seperti akar yang disebut rhizoid. Rhizoid dapat menembus

mukosa, dan dapat juga masuk melalui sel-sel epitel di saluran cerna, invasi ini

dapat berlanjut hingga ke pembuluh darah dan menyebabkan septikemia (Riskillah

cit., Kayser, Bienz, Eckert, Zinkernage, 2005).

Menempelnya mikroorganisme dalam jaringan sel host menjadi syarat

mutlak untuk berkembangnya infeksi. Secara umum diketahui bahwa interaksi

antar mikroorganisme dan sel pejamu diperantarai oleh komponen spesifik dari

dinding sel mikroorganisme, adhesin dan reseptor. Makanan dan manoprotein

merupakan molekul-moleku Candida albicans yang mempunyai aktifitas adhesif.

Khitin, komponen kecil yang terdapat pada dinding sel Candida albicans juga

berperan dalam aktifitas adhesif. Setelah terjadi proses penempelan, Candida

albicans berpenetrasi ke dalam sel mukosa. Dalam hal ini enzim yang berperan

adalah aminopeptidase dan asam fosfatase. Setelah proses penetrasi, semua

tergantung dari keadaan imun dari host (Tjampaksari, 2006).

Sembilan faktor virulen Candida albicans yaitu perubahan fenotip, bentuk

dan susunan hifa, thigmotropism, hydrophobicity, kemampuan meniru molekul-

molekul permukaan, produksi enzim yang bersifat litik, dan kebutuhan nutrisi

(Riskillah cit., Arenas, 2001).


18

E. Ekstraksi Bertingkat

Ekstraksi adalah teknik pemisahan suatu senyawa berdasarkan perbedaan

distribusi zat diantara dua pelarut yang saling bercampur. Pada umumnya zat terlarut

yang diekstrak bersifat tidak larut atau sedikit larut dalam suatu pelarut tetapi mudah

larut dengan pelarut lain. Metode ekstraksi yang tepat ditemukan oleh tekstur

kandungan air bahan-bahan yang akan diekstrak dan senyawa-senyawa yang akan

diisolasi (Harbone,1996). Telah dikembangkan suatu teknik ekstraksi dengan ekstraksi

bertingkat menggunakan pelarut yang berbeda tingkat polaritasnya. Metode ekstraksi

bertingkat memiliki keuntungan karena semua senyawa aktif yang berbeda polaritasnya

dapat diekstraksi sesuai dengan tingkat polaritasnya terhadap pelarut (Damayanti dan

Suparjana, 2007).

F. Maserasi

Maserasi merupakan cara penyarian yang sederhana, maserasi dilakukan

dengan merendam serbuk atau daun segar dalam cairan penyari. Cairan penyari akan

menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif. Zat

aktif larut dan karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan didalam dengan

diluar sel, maka larutan yang terpekat akan terdesak ke luar. Peristiwa tersebut berulang

sehingga terjadi kesetimbangan konsentrasi antara di luar dan di dalam sel (Departemen

Kesehatan RI, 1986).

Maserasi digunakan untuk penyarian simplisia yang mengandung zat aktif

yang mudah larut dalam cairan penyari, tidak mengandung zat yang mudah

mengembang dalam cairan penyari, tidak mengandung benzoin, stirak dan lain-lain

(Departemen Kesehatan RI, 1986). Proses pemisahan senyawa dalam simplisia,


19

menggunakan pelarut tertentu sesuai dengan sifat senyawa yang akan dipisahkan.

Pemisahan pelarut berdasarkan kaidah like dissolved like artinya suatu senyawa polar

akan larut dalam pelarut polar. Ekstraksi dapat dilakukan dengan bermacam-macam

metode, tergantung dari tujuan ekstraksi, jenis pelarut yang digunakan dan senyawa

yang diinginkan (Pratiwi, 2008).

Keuntungan cara penyarian dengan maserasi adalah cara pengerjaan,

peralatan sederhana, dan mudah dilakukan. Adapun kerugian cara maserasi adalah

waktu pengerjaan yang lama dan penyarian kurang sempurna. Cara maserasi ini dapat

dipercepat dengan menggunakan mesin pengaduk yang terus-menerus berputar

sehingga mempersingkat waktu maserasi menjadi 6 – 24 jam (Departemen Kesehatan

RI, 1986).

G. Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ialah metode pemisahan fisikakimia. Pada

KLT ini menggunakan dua macam fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam

merupakan lapisan berpori dan akan menghasilkan pemisahan pada plat. Fase gerak

atau pelarut pengembang ialah media angkut dan terdiri atas satu atau beberapa pelarut,

yang bergerak didalam fase diam karena adanya gaya kapiler (Rohman dan Gandjar,

2007).

Prinsip kerja KLT berupa lapisan yang memisahkan terdiri atas bahan berbutir

atau fase diam ditempatkan pada penyangga berupa plat gelas, logam atau lapisan yang

cocok. Campuran yang akan dipisah berupa larutan dan ditotolkan berupa bercak atau

pita. Setelah plat ditaruh di dalam bejana tertutup rapat yang berisi larutan pengembang

atau fase gerak yang cocok, pemisahan terjadi selama masa perambatan kapiler atau


20

pengembangan, selanjutnya senyawa yang tidak berwarna harus ditampakkan atau

dideteksi dengan lampu ultraviolet atau dengan pereaksi semprot (Rohman dan

Gandjar, 2007). Pada kromatogram KLT dikenal istilah faktor retardasi (Rf) yang

didefinisikan

𝑅𝑓 =𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑝𝑢ℎ 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡

𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑝𝑢ℎ 𝑓𝑎𝑠𝑒 𝑔𝑒𝑟𝑎𝑘

(Rohman dan Gandjar, 2007).

H. Minyak Atsiri

Minyak atsiri (disebut juga minyak menguap atau minyak etheral) adalah

cairan berwujud minyak yang beraroma yang berasal dari berbagai bagian tumbuhan

(bunga, kuncup, biji, daun, ranting, kulit, batan, dan rempa, kayu, buah, dan akar)(Di

Pasqua, De Feo, Villani, Mauriello cit. Burt., 2004). Minyak atsiri yang bagian

utamanya terpenoid, biasanya terdapat pada fraksi yang tersuling. Zat inilah penyebab

wangi, harum, atau bau yang khas pada banyak tumbuhan minyak atsiri larut alkohol,

eter, dan pelarut lipid lainnya praktis tidak larut air (Kokate, Purohit, Gokhale, 2009).

Zat pengawet alami salah satunya adalah komponen-komponen minyak atsiri dari

ekstrak tumbuhan seperti rempah-rempah, tanaman tahunan, dan rumput-rumputan

(Ardiansyah, 2007).

Carvacrol, thymol dan eugenol adalah komponen minyak atsiri yang

diketahui memilik aktivitas antibakteri yang tinggi. Ketiga senyawa ini masuk dalam

golongan fenol (Bouhdid, Skali, Idaomar, Zhiri, Baudoux, Amensour, dkk., 2008).


21

Gambar 5. Rumus bangun carvacrol (Nostro dan Papalia, 2012)

Carvacrol atau 2-metil- 5-(1 Metiletil)- fenol adalah monoterpen fenol.

Dibiosintesis dari -terpinen melewati p-cimen. Aktivitas antibakteri carvacrol telah

dikaitkan dengan efek yang cukup besar terhadap struktur dan fungsi dari membran

sitoplasma (Nostro dan Papalia, 2012).

Carvacrol berinteraksi dengan lipid bilayer dari membran sitoplasma

menyebabkan perluasan dan destabilisasi struktur membran dan meningkatkan fluiditas

dan permeabilitas membran. Pada konsentrasi subletal carvacrol mengubah komposisi

asam lemak dari sitoplasma yang mengarah terhadap perubahan struktur permukaan sel

membentuk saluran membran untuk ion, materi seluler, asam nukleat, dan ATP

meninggalkan sitoplasma, menyebabkan kerusakan pada kolam ATP intrasel, baik

dengan pengurangan sintesis ATP atau peningkatan hidrolisis ATP (Nostro dan

Papalia, 2012).

I. Flavonoid

Senyawa flavonoid diturunkan dari unit C6–C3 (fenil-propana) yang

bersumber dari asam sikimat (via fenilalanin) dari unit C6 yang diturunkan dari jalur

poliketida. Fragmen poliketida ini disusun dari tiga molekul malonil-KoA, yang

bergabung dengan unit C6-C3 (sebagai KoA triester) untuk membentuk unit awal


22

triketida. Oleh karena itu, flavonoid berasal dari biosintesis gabungan terdiri atas unit-

unit yang diturunkan dari asam sikimat dan jalur poliketida (Heinrich, Barnes, Gibbons,

Williamson, 2010).

Unit awal triketida mengalami siklisasi oleh enzim kalkon sintase untuk

membentuk gugus kalkon pada flavonoid. Kemudian terjadi siklisasi untuk

menghasilkan cincin piranon yang mengandung inti flavonon, yang memiliki ikatan

C2-C3 teroksidasi (tak jenuh) untuk menghasilkan gugus flavonol pada flavonoid.

Senyawa flavonoid berperan dalam memberikan warna di alam terutama mahkota

kuning dan jingga, bahkan flavonoid yang tidak berwarna mengabsorbsi cahaya pada

spektrum UV (karena banyak gugus kromofor) (Heinrich, Barnes, Gibbons,

Williamson, 2010).

Gambar 6. Rumus bangun flavon (Flavonoid) (Cushnie dan Lamb, 2005)

Flavonoid merupakan senyawa polar yang umumnya mudah larut dalam

pelarut polar seperti etanol, metanol, butanol, dan aseton. Flavonoid merupakan

golongan terbesar dari senyawa fenol, senyawa fenol mempunyai sifat efektif

menghambat pertumbuhan virus, bakteri dan jamur (Khunaifi, 2010).

Mekanisme flavonoid menghambat pertumbuhan bakteri, yaitu dengan

menyebabkan terjadinya kerusakan permeabilitas dinding sel, mikrosom, dan lisosom.

Selain itu, gugus hidroksil pada gugus flavonoid dapat meyebabkan perubahan


23

komponen organik dan transpor nutrisi yang akhirnya akan mengakibatkan timbulnya

efek toksik bagi bakteri (Sabir, 2008).

J. Metode Pengujian Aktivitas Antimikroba

Pengujian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan suatu larutan uji dalam

menghambat atau membunuh mikroba. Metode pengujian antimikroba dapat

dibedakan menjadi dua yaitu:

1. Metode dilusi

Metode dilusi, pada prinsipnya antibiotik diencerkan sehingga diperoleh

beberapa macam kadar. Pada dilusi cair, tiap-tiap kadar sampel obat ditambahkan pada

suspensi bakteri pada media. Pada dilusi padat setiap kadar obat dicampur dengan

media agar kemudian ditanami bakteri. Pengamatannya adalah ada tidaknya

pertumbuhan bakteri atau bila mungkin tingkat kesuburan bakteri. Metode dilusi ini

dapat digunakan untuk menentukan KHM dan KBM (Jawetz, Melnick, dan Adelberg,

2005).

2. Metode difusi

Metode difusi merupakan metode yamg digunakan untuk mengukur potensi

antibakteri berdasarkan pengamatan luas zona jernih yang terbentuk disekitar tempat

penginokulasian obat karena berdifusinya obat (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005).

Dilakukan dengan cara menempatkan senyawa uji pada media padat yang lebih

ditanami dengan biakan bakteri. Metode difusi terdapat beberapa cara salah satunya

ialah metode sumuran, metode ini dilakukan dengan membuat lubang pada agar padat

yang telah diinokulasi dengan bakteri. Jumlah dan letak lubang disesuaikan dengan

tujuan penelitian, kemudian lubang diinjeksikan dengan ekstrak yang akan diuji.


24

Setelah dilakukan inkubasi, pertumbuhan bakteri diamati untuk melihat ada tidaknya

daerah hambatan di sekeliling lubang (Kusmayanti dan Agustini, 2007).

Prinsip metode pengenceran adalah senyawa antibakteri diencerkan hingga

diperoleh beberapa macam konsentrasi, kemudian masing-masing konsentrasi

ditambahkan suspensi bakteri uji dalam media cair. Perlakuan tersebut akan diinkubasi

dan diamati ada atau tidaknya pertumbuhan bakteri, yang ditandai dengan terjadinya

kekeruhan. Larutan uji senyawa antibakteri pada kadar terkecil yang terlihat jernih

tanpa adanya pertumbuhan bakteri uji, ditetapkan sebagai Kadar Hambat Minimum

(KHM) atau Minimal Inhibitory Concentration (MIC). Larutan yang ditetapkan KHM

selanjutnya dikultur ulang pada media cair tanpa pertumbuhan bakteri uji ataupun

senyawa antibakteri, dan diinkubasi selama 18-24 jam. Media cair yang tetap terlihat

jernih setelah inkubasi ditetapkan sebagai Kadar Bunuh Minimum (KBM) atau

Minimal Bactericidal Concentration (MBC) (Pratiwi, 2008).

K. Landasan Teori

Penyakit infeksi terus berkembang disertai dengan profil resistensi antibiotik

yang meningkat oleh beberapa bakteri dan fungi oportunistik diantaranya

Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans. Sehubungan dengan

itu perlu dilakukan eksplorasi bahan alam yang mempunyai aktivitas antimikroba yang

memiliki efek samping lebih kecil dan tersedia terus menerus.

Bunga pulu berkhasiat menurunkan kolesterol tinggi, mengatasi angina

pectoris (nyeri dada akibat penyempitan pembuluh darah jantung), tromboangitis

(radang pembuluh darah disertai pembekuan darah dalam lumennya), hipertensi,

kanker, nyeri haid, dan sakit perut setelah melahirkan (Wijayakusama, 2008).


25

Salah satu senyawa yang terkandung di dalam bunga pulu adalah flavonoid

(Cai, Luo, Sun, Corke, 2003). Flavonoid dapat tersari dalam etanol dan memiliki

aktivitas sebagai antibakteri (Akroum, Satta, Lalaoui, 2009). Penelitian Ziarati,

Asgarpanah, Kianifard (2012) menyebutkan bahwa terdapat 29 konstituen yang

dapat diidentifikasi pada minyak atsiri Carthamus tintorius. Dua puluh sembilan

konstituen tersebut sebagian besar mempunyai aktivitas antibakteri terhadap bakteri

patogen (Sokovic, Glamoclija, Marin, Brkic, van Griensven, 2010).

Aktivitas antimikroba fraksi petroleum eter, kloroform, etanol bunga pulu

dilakukan dengan metode difusi sumuran yang ditunjukan dengan diameter zona

hambat (zona jernih) yang dihasilkan dan metode dilusi untuk menentukan nilai

KHM dan KBM. Prinsip metode difusi, yaitu pengamatan luas zona jernih

pertumbuhan bakteri karena berdifusinya senyawa uji ke sekitar daerah

penginokulasian. Penelitian mengenai adanya aktivitas antimikroba fraksi

petroleum eter, kloroform, etanol bunga pulu terhadap Staphylococcus aureus,

Escherechia coli, dan Candia albicans diharapkan dapat memberikan informasi

kepada masyarakat dan perkembangan ilmu pengetahuan mengenai manfaat bunga

pulu sebagai salah satu terapi alternatif penyakit infeksi yang disebabkan oleh

mikroba di atas.

L. Hipotesis

Fraksi petroleum eter, kloroform, etanol bunga pulu (Carthamus tinctorius)

memiliki aktivitas antimikroba terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia

coli,dan Candida albicans. Kandungan senyawa yang diduga memiliki aktivitas

antimikroba adalah golongan flavonoid dan minyak atsiri.


26

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini termasuk jenis penelitian rancangan eksperimental murni,

dengan rancangan penelitian acak lengkap pola satu arah. Penelitian ini dilakukan di

Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia, Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta, dan Laboratorium Mikrobiologi, Balai

Laboratorium Kesehatan Yogyakarta.

B. Variabel dan Definisi Operasional

1. Variabel penelitian

a. Variabel bebas : Fraksi petroleum eter, kloroform, etanol dengan

konsentrasi 50 %(b/v) ; 25 %(b/v) ; 12,5 %(b/v) ; 6,25 %(b/v) dan 3,125 %(b/v).

b. Variabel tergantung : Diameter zona hambat, Rf.

c. Variabel terkendali : Waktu inkubasi (24 jam), suhu inkubasi (37 0C), jenis

bakteri uji, volume suspensi bakteri uji yang di inokulasikan dalam media (50

µL), konsentrasi suspensi mikroba uji setara dengan larutan standar Mc.

Farland II (6 x 108 CFU/mL), tempat tumbuh tanaman, suhu pengeringan ±

450C.

d. Variabel tak terkendali: Umur tanaman.


27

2. Definisi operasional

a. Aktivitas antimikroba adalah kemampuan fraksi petroleum eter, kloroform,

etanol bunga pulu untuk menghambat atau membunuh mikroba uji

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 32518, dan

Candida albicans ATCC 10231.

b. Sampel bunga pulu adalah kumpulan bunga-bunga yang terkumpul dalam satu

karangan atau satuan bunga yang menyusun bunga majemuk tanpa daun

pelindung.

c. Zona hambat adalah zona jernih pada media agar yang telah ditanami bakteri

uji, yang terbentuk disekitar lubang sumuran.

C. Bahan dan Alat Penelitian

1. Bahan

a. Bunga pulu (Carthamus tintorius L.) diperoleh dari petani (Bapak Mubarak)

pada tanggal 15 Agustus 2012, Kabupaten Bone, Sulawesi Selatan.

b. Bakteri Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans

diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Balai Laboratorium Kesehatan

Yogyakarta.

c. Medium Nutrien Agar (Oxoid®), Media Potato Dextrose Agar (Oxoid®), DMSO

(Merck®), Alkohol (Jayamas Medica Industri®), Kloroform (Merck®), Etanol


28

96% (Brataco®), Petroleum eter teknis (Brataco®), Ketoconazole (Indofarma®),

Amoksisillin (Hexpharm Jaya®).

2. Alat

Alat-alat yang digunakan adalah alat-alat gelas, yaitu Erlenmeyer, tabung

reaksi, corong, labu ukur, pipet tetes, pH meter, cawan petri, batang pengaduk, gelas

ukur, sendok, pelubang sumuran, Platform Shaker (InnovaTM 2100), autoclave (Model

KT-40, ALP Co. Ltd Hamurasi Tokyo Japan), oven (memmert), rotary evaporator

(Janke dan Kunkel, Ika-labotechnik, RV 05-ST), inkubator (Mammert tipe BE 400,

GmbH + CoKG-D91126, Swahaban FRG Germany microbiological safety cabinet),

neraca analitik (Scaltec Instruments Heiligen stadt Germany), densicheck (Vitek®),

bunsen, jarum ose, flakon, tempat pengembangan (Chamber) KLT, mikrokapiler,

penyangga lempeng kaca, kertas saring, lempeng kromatografi lapis tipis.

D. Tata Cara Penelitian

1. Determinasi bunga pulu

Bunga pulu dideterminasi dengan mencocokan ciri-ciri tanaman dengan yang

dimiliki tanaman bunga pulu (Carthamus tintorius L.) menggunakan pustaka acuan

Idtools (2003).


29

2. Pengumpulan bahan

Bunga pulu didapat dari Kabupaten Bone, Sulawesi Selatan. Bagian yang

diambil adalah bagian dasar bunga hingga pucuk bunga. Bunga diambil pada sore hari,

kemudian dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan pengotor kemudian

ditiriskan untuk menghilangkan sisa-sisa air cucian.

3. Pengeringan dan pembuatan serbuk

Pengeringan dilakukan dengan memasukkan bunga ke dalam oven ± 3 hari

dengan suhu 450C. Pengeringan dilakukan hingga bunga tersebut mudah dipatahkan.

Daun diserbuk dengan menggunakan mesin penyerbuk, serbuk yang diperoleh, diayak

dengan mengunakan pengayak no. 40 sehingga diperoleh serbuk dengan ukuran

partikel yang homogen.

4. Ekstraksi bertingkat serbuk bunga pulu

Ditimbang 300 g serbuk bunga pulu, dimasukkan dalam erlenmeyer dan

ditambah pelarut petroleum eter sampai serbuk terendam semua. Erlenmeyer ditutup

rapat dengan alumunium foil, digojog menggunakan shaker selama 3 hari, kemudian

disaring dengan corong Buchner. Filtratnya diuapkan dengan rotary evaporator dan

dipekatkan di atas penangas air hingga didapatkan fraksi protelum eter. Ampas I (sisa

petroleum eter dibiarkan menguap) dimaserasi dengan cairan penyari kloroform selama

kurang lebih 3 hari dengan shaker dan ditutup dengan alumunium foil. Ampas II (sisa

kloroform dibiarkan menguap) dan filtrat kloroform. Filtrat kloroform ini diuapkan


30

dengan rotary evaporator dan dipekatkan diatas penangas air hingga didapatkan fraksi

kental kloroform. Ampas II dimaserasi dengan etanol 96% kurang lebih 3 hari dengan

shaker dan ditutup dengan alumunium foil. Saring dengan corong Buchner hingga

didapat filtrat etanol dan ampas III (disisihkan). Filtrat etanol diuapkan dengan rotary

evaporator dan dipekatkan di atas penangas air hingga didapatkan fraksi etanol.

5. Pengujian potensi antimikroba

a. Penyiapan stok mikroba uji

Diambil dari kultur mikroba simpanan menggunakan jarum ose steril

sebanyak 1 hingga 2 koloni tunggal. Diinokulasikan pada 5 mL Nutrien Agar miring

dan diinkubasi selama 24 jam dan pada suhu 37 0C.

b. Pembuatan suspensi mikroba uji

Pembuatan suspensi mikroba dilakukan dengan mengambil 1-2 ose mikroba

dari stok yang telah dibuat sebelumnya, diinokulasikan pada 5 mL media Nutrien

Broth, suspensi tersebut diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0C, kemudian

divortex, diambil 1 mL suspensi tersebut ditambah NB dan disetarakan

kekeruhannya dengan larutan standar Mc. Farland II (6 x108 CFU/mL)

menggunakan alat Densicheck.

c. Pembuatan variasi konsentrasi larutan uji

Larutan yang digunakan untuk uji antimikroba didapatkan dengan

melarutkan fraksi petroleum eter, kloroform, etanol dengan DMSO. Fraksi masing-


31

masing dibuat dalam berbagai variasi konsentrasi 50 %(b/v) ; 25 %(b/v) ; 12,5

%(b/v) ; 6,25 %(b/v) dan 3,125 %(b/v).

Pembuatan masing-masing fraksi dengan konsentrasi 50 % (stok larutan

uji) dibuat dengan cara ekstrak kental (hasil penyarian) yang diperoleh ditimbang

sejumlah 5 g yang kemudian dilarutkan ke dalam 10 mL DMSO untuk masing-

masing fraksi. Stok larutan uji yang dibuat, dapat dibuat variasi konsentrasi larutan

uji sebagai berikut:

Tabel I. Pembuatan variasi konsentrasi uji

d. Uji potensi antimikroba

1) Pembiakan suspensi bakteri dan fungi secara pour plate.

Mula-mula dari suspensi mikroba uji diambil sebanyak 0,2 mL,

diinokulasikan kedalam 20 mL media NA dalam tabung reaksi dan divortex. NA

yang telah bercampur dengan suspensi tersebut dituang kedalam petri steril

kemudian digoyang-goyang dan biarkan memadat.

2) Uji potensi antimikroba dilakukan dengan metode difusi sumuran

Larutan uji dibuat variasi konsentrasi 50% (b/v); 25%(b/v); 12,5%(b/v);

6,25%(b/v) dan 3,125%(b/v). Setelah pembiakan suspensi bakteri secara pour

Konsentrasi Larutan

Uji ( %b/v )

Volume yang diambil

dari stok larutan uji (mL)

Di add dengan DMSO

sampai (mL)

25 5,0 10

12,5 5,0 10

6,25 5,0 10

3,125 5,0 10


32

plate, dibuat sumuran dengan menggunakan pelubang sumuran no.4

(berdiameter 8 mm) sebanyak 7 sumuran. Tiap lubang sumuran masing-masing

ditambal dengan 50 µL setelah memadat kemudian diisi 50 µL dengan fraksi

petroleum eter, kloroform, dan etanol yang berkonsentrasi 50 %(b/v); 25 %(b/v);

12,5 %(b/v); 6,25 %(b/v) dan 3,125 %(b/v). Amoksisilin 0,0005 mg/mL sebagai

kontrol positif untuk Staphylococcus aureus, Escherechia coli dan Ketoconazole

0,1 g/mL untuk Candida albicans. DMSO sebagai kontrol negatif dari fraksi

petroleum, kloroform dan etanol. Petri-petri tersebut diinkubasi selama 24 jam

pada suhu 37 0C kemudian diamati ada tidaknya zona hambat disekitar sumuran.

Zona hambat yang terbentuk diukur dengan penggaris. Pada uji potensi

antimikroba ini direplikasi sebanyak 3 kali untuk masing-masing fraksi.

e. Pengukuran KHM dengan metode dilusi padat

Uji potensi antimikroba pada metode difusi didapatkan konsentrasi

terkecil dari fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol yang dapat menghambat

pertumbuhan Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans.

Konsentrasi terkecil tersebut dibuat rentang konsentrasi yang lebih rendah sebanyak

variasi konsentrasi untuk mengetahui besarnya kadar hambat minimal dari masing-

masing fraksi. Fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol dibuat variasi

konsentrasi, mula-mula pengujian dilakukan dengan membuat suspensi bakteri yang

disetarakan kekeruhannya dengan larutan standar Mc. Farland II (6 x 108 CFU/mL)

menggunakan alat Densicheck. Suspensi tersebut diambil 0,5 mL, ditambah dengan

kadar tertentu dan dicampur rata dengan 30 mL media. Setelah itu dituang dalam


33

cawan petri dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0C. Diamati banyak sedikit

atau ada tidaknya pertumbuhan bakteri uji pada berbagai variasi konsentrasi dengan

ditandai suatu notasi tertentu. Larutan uji untuk fraksi petroleum eter, kloroform,

dan etanol dibuat masing-masing dengan cara yang sama.

6. Identifikasi kandungan senyawa bunga pulu dengan uji tabung.

a. Uji pendahuluan

Dua gram serbuk bunga pulu dipanaskan dengan 10 mL air selama 30

menit diatas air mendidih. Larutan yang diperoleh disaring menggunakan kapas.

Jika larutan menjadi berwarna kuning sampai merah dan bila pada saat penambahan

KOH warna larutan menjadi lebih intensif berarti menunjukkan adanya senyawa

yang mengandung kromofor dengan gugus hidrofilik.

b. Uji alkaloid

Dua gram serbuk dimasukkan dalam tabung reaksi besar, tambahkan asam

klorida 1% (10 mL), dipanaskan selama 30 menit dalam penangas air mendidih.

Suspensi disaring dengan kapas kedalam tabung reaksi A dan tabung reaksi B sama

banyak. Larutan A dibagi dua sama banyak, lalu ke dalam tabung reaksi A-1

ditambah pereaksi Dragendorff (3 tetes) dan larutan A-2 ditambah dengan pereaksi

Mayer (3 tetes). Terbentuknya endapan dengan kedua pereaksi tersebut

menunjukkan adanya alkaloid.


34

c. Uji tanin


menit diatas penangas air. Disaring 5 mL filtrat ditambah 1 mL larutan NaCl 2%,

bila terjadi suspensi atau endapan, disaring melalui kertas saring. Filtrat ditambah 5

mL larutan gelatin 1%. Bila terbentuk endapan berarti menunjukan adanya tanin

atau zat samak.

d. Uji antrakinon

Tiga ratus mg serbuk bunga pulu didihkan 2 menit dengan 10 mL kalium

hidroksida 0,5 N dan 1 mL larutan hidrogen peroksida. Setelah dingin suspensi

disaring menggunakan kapas. Lima mL filtrat ditambah 10 tetes asam asetat sampai

pH 5. Ditambahkan 10 mL toluene. Lima mL lapisan atas dipisahkan dengan dipipet

dan dimasukkan dalam tabung reaksi. Ditambah kalium hidroksida 0,5 N, bila

didapatkan warna merah pada lapisan air berarti menunjukan adanya senyawa

antrakinon.

e. Uji polifenol


menit dalam penangas air mendidih. Disaring panas-panas, setelah dingin ditambah

3 tetes pereaksi besi (III) klorida. Bila didapatkan warna hijau-biru menunjukan

adanya polifenol. Uji diulang dengan filtrat hasil pendidihan 2 g serbuk dengan 9-

10 ml etanol 80 % selama 10 menit dalam penangas air.


35

f. Uji saponin

Seratus mg serbuk bunga pulu ditambahkan 10 mL air suling kedalam

tabung reaksi, ditutup dan dikocok kuat-kuat selama 30 detik. Tabung dibiarkan

dalam posisi tegak selama 30 menit. Apabila terbentuk buih setinggi kurang lebih 3

cm dari permukaan cairan, maka menunjukan adanya saponin, uji lain dilakukan

dengan menggunakan pipet kapiler (diameter 1 mm, panjang 12,5 cm). Larutan hasil

pemanasan 2 g serbuk bunga pulu dengan 10 mL air dipanaskan selama 30 menit

diatas penangas air. Setelah disaring filtrat dimasukkan kedalam pipa kapiler penuh-

penuh. Kapiler diletakkan dalam posisi tegak (vertikal), lalu cairan dibiarkan

mengalir bebas. Tinggi air suling yang diperlukan sama. Bila didapatkan tinggi

cairan yang diuji setengah atau kurang dari tinggi air suling maka menunjukkan

adanya saponin.

g. Uji minyak atsiri

Sebanyak 10 g serbuk ditambah 20 mL eter, dikocok kemudian disaring,

filtrat yang didapat dikeringuapkan. Bila sedikit berbau aromatik, larutan residu

ditambahkan dengan sedikit etanol, uapkan lagi sampai kering. Bila terjadi bau

aromatik spesifik menunjukan adanya minyak atsiri.

h. Uji flavonoid

Sebanyak 0,2 g serbuk dilarutkan kedalam NaOH terjadi pembentukan

intensitas warna kuning. Dengan penambahan HCl intensitas warna kuning berubah

mengindikasikan adanya flavonoid.


36

E. Kromatografi Lapis Tipis (Uji Penegasan Flavonoid)

Sejumlah 1 gram serbuk diekstrak menggunakan 10 mL metanol, dipanaskan

diatas water bath (± 60 0C) disaring, kemudian filtrat ditotolkan sebanyak 25 - 30 µL

pada plat KLT. Standar rutin dilarutkan dalam metanol 0,05% dan 10 µL ditotolkan

pada plat KLT. Fase diam yang digunakan adalah selulosa dengan fase gerak n-butanol

: asam asetat glasial : air ( 40:10:50) v/v. Spot dideteksi pada panjang gelombang 254

nm, 366 nm, dan pereaksi uap amonia.

F. Kromatografi Lapis Tipis (Uji Penegasan Minyak Atsiri)

Sejumlah 1 g serbuk diekstrak menggunakan 10 mL heksana, divortex selama

2 menit, kemudian disentrifugasi selama 3 menit. Standar terpenoid dan sampel

ditotolkan sebanyak 10 µL pada plat KLT, fase diam yang digunakan adalah silika gel

60 F254 dengan fase gerak toluena : etil asetat (93:7) v/v. Spot dideteksi pada panjang

gelombang 254 nm, 366 nm, dan pereaksi vanillin asam sulfat.

G. Analisis Hasil

Uji potensi antimikroba ditunjukkan dengan data diameter zona hambat yang

diperoleh dengan metode pengujian menggunakan difusi sumuran pada berbagai

variasi konsentrasi dibandingkan dengan kontrol positif dan direplikasi sebanyak 3

kali. Analisis hasil dilakukan secara deskriptif dengan membandingkan hasil antara

kelompok kontrol dan kelompok uji.


37

Kandungan senyawa dalam serbuk bunga pulu (Carthamus tinctorius L.)

diperoleh dengan uji tabung dan KLT. Analisis hasil KLT bersifat deskriptif dan

komparatif, hasilnya dapat dilihat dari warna bercak yang tampak pada sinar UV 254

nm, UV 365 nm dan setelah disemprot dengan pereaksi yang sesuai dan dilihat

perolehan harga Rfnya.


38

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Determinasi Tanaman

Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Botani Farmasi, Fakultas

Farmasi, Universitas Sanata Dharma yang diidentifikasi menurut acuan Idtools

(2003). Identifikasi tanaman ini bertujuan untuk memastikan bahwa tanaman yang

digunakan adalah bunga pulu atau kasumba turate. Hasil determinasi menunjukkan

bahwa bunga pulu yang digunakan dalam penelitian ini memiliki nama ilmiah

Carthamus tinctorius L. dengan variasi daun dengan tepi berduri, warna bunga pada

saat muda kuning – jingga (didominasi oleh jingga), dan warna bunga pada saat tua

berwarna jingga.

B. Hasil Pengumpulan dan Pembersihan

Sampel berupa bunga pulu diambil dari daerah Soppeng, Sulawesi Selatan.

Bunga yang diambil adalah bunga yang sudah tua yang berwarna merah karena

diharapkan kandungan senyawa yang terkandung berada dalam jumlah yang

maksimal. Waktu pengambilan dilakukan pada sore hari, dengan asumsi bahwa

pada sore hari, hasil dari metabolisme suatu tanaman mencapai puncaknya,

sehingga didapatkan hasil yang maksimal.

C. Hasil Pengeringan

Pengeringan dilakukan untuk mengurangi kadar air sampai kadar air dalam

sampel mencapai kadar tertentu, sehingga terjamin kualitasnya yakni mencegah


39

tanaman dari pencemaran jamur, kapang, atau mikroba. Pengeringan juga berfungsi

untuk menginaktifkan enzim-enzim dalam tumbuhan sehingga menekan terjadinya

peruraian senyawa kimia dalam bunga atau herba oleh enzim-enzim tersebut.

Pengeringan pada penelitian ini dilakukan dengan menggunakan oven pada suhu

45 0C sampai didapatkan herba yang dapat dihancurkan dengan tangan. Hasil

pengeringan bunga tersebut berwarna jingga. Setelah kering dan dapat dihancurkan

dengan tangan, bunga diserbuk dan diayak menggunakan pengayak dengan nomor

mesh 40 untuk memperkecil ukuran partikel, sehingga proses penyarian lebih

efektif dan optimal, dengan memperkecil ukuran partikel (dalam batas optimal) luas

partikel yang kontak dengan pelarut semakin besar. Kandungan zat aktif yang

didapatkan akan larut lebih cepat dan lebih banyak.

Tabel II. Hasil maserasi serbuk bunga pulu

Pelarut Volume filtrat Rendemen

Etanol 2100 mL 5,30 g

Kloroform 2100 mL 6,61 g

Petroleum eter 2100 mL 11,93 g

Berdasarkan tabel diatas, rendemen fraksi kental etanol lebih besar

dibandingkan rendemen pelarut kloroform dan petroleum eter. Hasil tersebut

diduga bahwa kandungan senyawa polar bunga pulu lebih banyak dibandingkan

semipolar dan non polar. Fraksi kental yang didapatkan kemudian digunakan untuk

uji selanjutnya.


40

D. Hasil Penyarian Serbuk

Penyarian dilakukan dengan menggunakan pelarut petroleum eter,

kloroform, dan etanol. Petroleum eter merupakan pelarut organik yang mampu

menarik senyawa nonpolar. Penggunaan kloroform dimaksudkan untuk menarik

senyawa yang bersifat non polar sampai semi polar. Etanol digunakan untuk

menarik senyawa yang bersifat semi polar sampai polar, sehingga diharapkan zat

aktif yang terkandung di dalam tanaman tersebut tersari maksimal sesuai dengan

sifat polaritasnya.

Tabel III. Kepolaran relatif pelarut organik

Pelarut Formula Kepolaran Relatif

Petroleum eter C6H14 0,009

Kloroform CHCl3 0,259

Etanol C2H6O 0,654

Air H2O 1

(Murov, 2002).

Metode penyarian maserasi digunakan dalam penelitian ini karena tidak

memerlukan pemanasan sehingga zat aktif yang terkandung di dalam bahan tidak

mudah rusak. Selain itu, maserasi merupakan metode penyarian yang sederhana,

mudah dikerjakan, menggunakan peralatan yang sederhana.

Penyarian secara maserasi dilakukan dengan cara merendam 300 gram

serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari menembus dinding sel dan

masuk ke rongga sel yang mengandung zat aktif. Zat aktif akan larut karena adanya

perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dengan zat aktif yang

berada di luar sel, sehingga larutan yang terpekat terdesak keluar.

Pengulangan/penggantian pelarut sebanyak sekali dengan tujuan untuk memenuhi


41

efisiensi dalam mengekstraksi dan untuk mencapai keseimbangan konsentrasi

antara cairan di dalam sel dengan cairan di luar sel, dan untuk menarik zat-zat yang

diperkirakan masih ada. Pengadukan dimaksudkan untuk meratakan konsentrasi di

luar butir simplisia sehingga derajat perbedaan konsentrasi di dalam dan di luar sel

tetap terjaga. Hasil maserasi (maserat) kemudian disaring dan diuapkan dengan

menggunakan rotary evaporator, agar hasil maserat lebih pekat, maka harus

diuapkan lagi di atas waterbath.

E. Uji Aktivitas Antimikroba Fraksi Petroleum Eter, Kloroform, Etanol

Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) terhadap Staphylococcus aureus,

Escherichia coli, dan Candida albicans dengan Metode Difusi

Pengujian aktivitas antimikroba dilakukan secara difusi menggunakan

metode sumuran. Prinsip metode difusi yaitu senyawa uji ditempatkan dalam media

padat yang sebelumnya telah diinokulasikan bakteri uji. Senyawa uji akan berdifusi

ke dalam media dan menghambat pertumbuhan bakteri uji.

Sebelum dilakukan pengujian, terlebih dahulu dibuat suspensi

menggunakan Staphylococcus aureus, Escherechia coli dan Candida albicans

kemudian disetarakan dengan larutam standar Mc. Farland II menggunakan alat

Densicheck (vitek®). Penyetaraan ini dilakukan berguna dalam reprodusibilitas

percobaan. Apabila dilakukan replikasi, dapat diasumsikan jumlah bakteri per

satuan yang digunakan selalu sama. Sumuran yang dibuat berdiameter 8 mm,

konsentrasi fraksi yang digunakan 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,125% dengan

pelarut DMSO digunakan sebagai pelarut fraksi petroleum eter, kloroform, dan

etanol. DMSO digunakan sebagai pelarut dikarenakan ketiga fraksi larut DMSO


42

sampai pada konsentrasi 50%. DMSO digunakan sebagai kontrol pelarut bertujuan

untuk mengetahui apakah pelarut yang digunakan memiliki pengaruh terhadap zona

hambat yang terbentuk.

Dalam penelitian ini digunakan amoksisilin dan ketokonazol sebagai

kontrol positif. Amoksisilin merupakan suatu antibiotik golongan beta laktam

derivat penisilin dengan spektrum luas. Amoksisilin mempunyai aktivitas

bakterisida terhadap bakteri Gram negatif maupun Gram positif dengan mekanisme

menghambat pembentukan atau sintesis dinding sel mikroba (Todar, 2012).

Ketokonazol merupakan turunan imidazol yang mempunyai aktivitas antifungi,

turunan azol bekerja dengan menghambat sintesa ergosterol. Ergosterol adalah

komponen lipid pada membran plasma fungi, sehingga permeabilitas membran

meningkat, isi sitoplasma keluar, dan sel lisis (Hidayah, 2010). DMSO merupakan

pelarut yang bersifat nonpolar tetapi diindikasikan tidak mempunyai daya hambat

terhadap pertumbuhan bakteri.

Volume fraksi, kontrol positif, dan kontrol negatif yang dimasukkan

dalam sumuran adalah 50 L. Setelah diinkubasi selama 24 jam, maka senyawa uji

akan berdifusi dalam media dan menghambat pertumbuhan dan bahkan membunuh

bakteri uji. Penghambatan pertumbuhan bakteri uji ini dapat dilihat dari zona

hambat yang terbentuk setelah inkubasi selama 24 jam. Setelah diinkubasi selama

24 jam, hasil yang diperoleh untuk uji terhadap Staphylococcus aureus,

Escherechia coli, dan Candida albicans yaitu berupa zona hambat dapat dilihat

sebagai berikut:


43

Tabel IV. Diameter zona hambat fraksi petroleum eter bunga pulu (Carthamus

tinctorius L.) terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida

albicans

Senyawa

Diameter zona hambat (mm) terhadap

Staphylococcus aureus Escherichia coli Candida albicans

I II III I II III I II III

Amoxicilin 12 11 11 9 13 12 0 0 0 Ketokonazol 0 0 0 0 0 0 7 7 8 DMSO 5% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 50% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 25% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 12,5% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 6,25% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 3,125% 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Hasil yang diperoleh untuk fraksi petroleum eter terhadap

Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans yaitu kontrol

negatif tidak menunjukan zona hambat, kontrol positif menunjukan adanya zona

jernih disekitar sumuran dengan rata-rata diameternya dari tiga replikasi yaitu 11,3

mm, 11,6 mm untuk amoksisilin dan 8,3 untuk ketokenazol. Hasil uji variasi

konsentrasi fraksi tidak menunjukkan adanya zona hambat. Hal ini menunjukan

tidak adanya penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri uji yaitu Staphylococcus

aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans. Dalam penelitian ini fraksi tidak

menunjukkan aktivitas antimikroba.

Tabel V. Diameter zona hambat fraksi kloroform bunga pulu (Carthamus tinctorius

L.) terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans

Senyawa




Amoxicilin 14 13 12 10 13 12 0 0 0 Ketokonazol 0 0 0 0 0 0 8 9 8 DMSO 5% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 50% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 25% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 12,5% 0 0 0 0 0 0 0 0 0


44

Senyawa




Konsentrasi 6,25% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 3,125% 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Hasil yang diperoleh untuk fraksi kloroform terhadap Staphylococcus

aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans yaitu kontrol negatif tidak

menunjukan zona hambat, kontrol positif menunjukan adanya zona jernih disekitar

sumuran dengan rata-rata diameternya dari tiga replikasi yaitu 13 mm, 11,6 mm

untuk amoksisilin dan 8,3 mm untuk ketokenazol. Hasil uji variasi konsentrasi

fraksi tidak menunjukkan adanya zona hambat. Hal ini menunjukan tidak adanya

penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri uji yaitu Staphylococcus aureus,

Escherechia coli, dan Candida albicans. Dalam penelitian ini fraksi tidak


Tabel VI. Diameter zona hambat fraksi etanol bunga pulu (Carthamus tinctorius

L.) terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans

Senyawa Diameter zona hambat (mm) terhadap



Amoxicilin 13 12 12 10 10 12 0 0 0 Ketokonazol 0 0 0 0 0 0 7 6 6 DMSO 5% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 50% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 25% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 12,5% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 6,25% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 3,125% 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Hasil yang diperoleh untuk fraksi etanol terhadap Staphylococcus aureus,

Escherechia coli, dan Candida albicans yaitu kontrol negatif tidak menunjukan

zona hambat, kontrol positif menunjukan adanya zona jernih disekitar sumuran


45

dengan rata-rata diameternya dari tiga replikasi yaitu 12,3 mm, 10,6 mm untuk

amoksisilin dan 6,3 untuk ketokonazol. Hasil uji variasi konsentrasi fraksi tidak

menunjukkan adanya zona hambat. Hal ini menunjukan tidak adanya

penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri uji yaitu Staphylococcus aureus,

Escherechia coli, dan Candida albicans. Dalam penelitian ini fraksi tidak


Analisis data keseluruhan menunjukkan bahwa variasi konsentrasi uji

fraksi petroleum eter, kloroform, etanol bunga pulu (Carthamus tinctorius L.)

hingga konsentrasi 50% tidak mempunyai kemampuan sebagai antimikroba

terhadap Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans.

F. Skrining Fitokimia

Skrining fitokimia bertujuan untuk mengidentifikasi kandungan bioaktif

pada tumbuhan atau kandungan yang mempunyai aktivitas dalam hal ini sebagai

antimikroba. Skrining pada penelitian ini perlu dilakukan untuk mengetahui ada

tidak senyawa yang berpotensi sebagai antimikroba. Sebagai contoh, yaitu senyawa

flavonoid, alkaloid, fenolik, tanin, dan lain-lain. Analisis kualitatif untuk

mengetahui golongan senyawa dalam tumbuhan tersebut dapat dilakukan dalam

dua tahap, yaitu uji tabung dan uji kualitatif secara KLT.


46

1. Uji tabung

Uji tabung bertujuan untuk mengetahui kandungan kimia bunga pulu, yang

kemudian dipertegas dengan KLT. Uji tabung meliputi uji pendahuluan, uji

alkaloid, uji antrakinon, uji polifenol, uji tanin, uji saponin, dan uji minyak atsiri.

Tabel VII. Hasil pengamatan uji tabung terhadap serbuk bunga pulu

No Pengujian Pengamatan Hasil

1. Uji Pendahuluan

Larutan hasil penyaringan

Filtrat + KOH

Warna merah

Warna merah semakin intensif

+

2 Uji Alkaloid

Filtrat A1 + Dragendorf

Filtrat A2 + Mayers

Larutan berwarna hitam

Larutan berwarna kecoklatan

_

3 Uji Antrakinon

Filtrat + KOH 0,5 N

Lapisan atas(air) bening

_

4 Uji Polifenol

Filtrat + FeCl3

Larutan berwarna hijau biru

+

5 Uji Tanin

Filtrat + NaCl 2% +

Gelatin 1%

Tidak terdapat endapan

_

6 Uji Saponin

Pembentukan buih ≥3 cm

dari tinggi larutan

Kurang dari 3 cm

_

7 Uji Flavanoid

Serbuk + NaOH

Serbuk + NaOH + HCl

Merah bata

Jingga kemerah-merahan

+

8 Uji Minyak Atsiri

Filtrat

Residu + etanol

Bau khas

Bau khas

+

a. Uji pendahuluan

Uji pendahuluan bertujuan untuk mengetahui apakah senyawa di dalam

bunga pulu mengandung gugus kromofor seperti flavonoid, antrakinon, dan lain-

lain atau gugus hidrofilik seperti gula, asam fenolat, dan sebagainya. Hasil

penelitian didapatkan hasil positif yang ditunjukkan dengan larutan yang

berwarna merah bata dan warna menjadi lebih intensif ketika ditambahkan


47

beberapa tetes kalium hidroksida. Kesimpulan sementara yang diperoleh, yaitu

serbuk diduga mengandung senyawa yang mempunyai gugus kromofor dan

gugus hidrofilik.

b. Uji alkaloid

Alkaloid adalah senyawa yang mengandung atom N dan kebanyakan

bersifat basa. Identifikasi alkaloid dapat dilakukan dengan cara reaksi

pengendapan dan reaksi warna, yaitu dengan cara melarutkan 2 g serbuk bunga

pulu dengan HCl. Penambahan HCl bertujuan untuk mengubah alkaloid yang

bersifat basa menjadi garam alkaloid, agar bisa larut dalam air. Pemanasan di

atas penangas air dilakukan untuk mempercepat reaksi pembentukan garam

alkaloid. Setelah dingin, kemudian disaring dan direaksikan dengan larutan

Dragendorff (gabungan bismut (III) dalam nitrat pekat dan kalium iodida) dan

Mayer (gabungan raksa (II) klorida dan kalium iodida). Reaksi positif terjadi jika

terbentuk endapan endapan coklat pada penambahan Dragendorf dan endapan

putih pada penambahan Mayer. Hasil penelitian tidak diperoleh endapan dari

kedua tabung uji yang menunjukkan kemungkinan tidak terdapat alkaloid pada

sampel.


48

c. Uji tanin

Serbuk bunga pulu dilarutkan dalam air dan dilakukan pemanasan untuk

mempercepat reaksi. Penambahan larutan natrium klorida 2% dimaksudkan

untuk membentuk endapan garam Na asam dari tanin. Reaksi yang terjadi adalah

sebagai berikut:

Gambar 7. Reaksi antara NaCl dengan senyawa fenolik (Herlianawati, 2003)

Penambahan gelatin dimaksudkan untuk mengendapan tanin yang terlarut

dalam air. Gelatin merupakan senyawa yang bisa menarik air, selain itu gelatin

mengandung protein dimana tanin mengendapkan protein dan NaCl akan

bereaksi semakin cepat dengan tanin untuk membentuk endapan garam Na asam.

Hasil penelitian dari serbuk bunga pulu adalah negatif yaitu tidak terjadi

endapan.

d. Uji antrakinon

Uji ini dilakukan dengan mendidihkan serbuk dengan KOH dan larutan

hidrogen peroksida selama 2 menit, yang kemudian disaring dengan kapas.

Pemanasan dengan kalium hidroksida bertujuan untuk menghidrolisis glikosida

antrakinon menjadi aglikonnya (antrakinon). Larutan hidrogen peroksida

berfungsi untuk mengoksidasi bentuk tereduksi dari antrakinon, yaitu antron,


49

oksantron, dan diantron menjadi antrakinon. Penambahan asam asetat sampai

pH 5 dan toluen bertujuan untuk memisahkan lapisan air (basa) dengan fase

pelarut organik. Setelah dingin, larutan disaring kemudian filtrat ditambah asam

asetat glasial yang berfungsi untuk menghidrolisis antrakinon menjadi

komponen gula dan aglikonnya. Hasil hidrolisis ini akan diekstraksi dalam

pelarut toluen yang bersifat nonpolar. Lapisan air berwarna merah yang

menunjukan adanya antrakinon. Hasil dari penelitian ini negatif dimana tidak

terjadi warna merah pada lapisan air.

e. Uji saponin

Uji saponin dilakukan dengan menggojog kuat serbuk yang dilarutkan

dengan aquadest, sehingga terbentuk buih setinggi 3 cm. Buih ini akan tahan

dalam jangka waktu yang relatif lama. Buih yang terbentuk disebabkan karena

terbentuknya sabun pada saat penggojogan dengan aquadest. Saponin

merupakan suatu senyawa yang mempunyai gugus hidrofob dan gugus hidrofil.

Sifat ini menyerupai surfaktan/sabun yang dapat menurunkan tegangan

permukaan antara udara/gas dengan air berupa emulsi gas dalam air (buih). Hasil

dari uji diperkirakan bahwa serbuk bunga pulu tidak mengandung saponin,

disebabkan buih yang terbentuk kurang dari 3 cm.

f. Uji flavonoid

Serbuk bunga pulu dilarutkan kedalam NaOH yang selanjutnya

ditambahkan HCL. Larutan NaOH berfungsi sebagai basa kuat yang dapat


50

mengionisasi hampir diseluruh gugus hidroksi pada inti flavonoid yang

menyebabkan terjadinya pergeseran batokromik (Markham, 1988). Pergeseran

batokromik tersebut menyebabkan intensitas warna pada flavonoid menjadi

lebih besar. Larutan HCl berfungsi sebagai agen yang menghentikan reaksi

tersebut (kembali pada warna asli) (Packer,2001).

g. Uji polifenol

Serbuk bunga pulu dilarutkan ke dalam air dan dipanaskan dengan

penangas air selama 10 menit, karena polifenol merupakan senyawa yang larut

dalam air panas. Penambahan pereaksi besi (III) klorida mengindikasikan

adanya gugus fenol. Reaksi senyawa polifenol dengan FeCl3 akan membentuk

kompleks warna. Terjadinya warna hijau-biru menunjukan adanya polifenol.

Reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut:

Gambar 8. Reaksi antara senyawa fenolik dengan FeCl3 (Herlianawati, 2003)

Hasil dari penelitian ini, terjadi warna biru, diperkirakan terdapat senyawa

polifenol didalam serbuk bunga pulu.


51

h. Uji minyak atsiri

Uji minyak atsiri dilakukan dengan cara menggojog 10 gram serbuk

simplisia dengan 20 mL eter kemudian disaring. Minyak atsiri adalah zat berbau

yang pada suhu kamar, mudah menguap di udara, dan pada umumnya larut pada

pelarut organik. Hasil pengujian didapatkan bau aromatik yang menunjukan

bahwa serbuk simplisia yang diuji mengandung minyak atsiri.

Filtrat yang didapat dipisahkan, kemudian residu dilarutkan dengan

sedikit etanol kemudian diuapkan hingga kering. Hasil pengujian tersebut

diperoleh bau khas aromatik serbuk bunga pulu, dari kedua uji tersebut dapat

disimpulkan bahwa simplisia yang diteliti mengandung minyak atsiri. Hasil yang

didapatkan sesuai dengan penelitian.

Dari hasil uji tabung serbuk bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) yang

telah dilakukan dapat diperkirakan adanya kandungan senyawa flavonoid,

polifenol, dan minyak atsiri.

2. Uji Kualitatif secara Kromatografi Lapis Tipis

Identifikasi kualitatif serbuk bunga pulu dilakukan dengan menggunakan

Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Analisis dengan KLT memiliki beberapa

keuntungan diantaranya ialah penanganannya sederhana dan cuplikan serta pelarut

yang digunakan sedikit.

a. Uji KLT flavonoid

Fase diam yang digunakan yaitu selulosa gel dan fase gerak yang

digunakan adalah n-butanol - asam asetat - air (4:1:5) v/v. Selulosa digunakan

sebagai fase diam karena jika digunakan silika gel, maka akan terbentuk kompleks


52

khelat antara salah satu gugus yang terdapat pada flavonoid dengan gypsum

(CaSO4). Kompleks khelat tersebut terikat kuat pada fase diam yang dapat

menyebabkan tidak terjadinya elusi. Reaksinya adalah sebagai berikut:

Gambar 9. Interaksi flavonoid dengan CaSO4 membentuk kompleks khelat (Herlianawati,

2003)

Gambar 10. Hasil uji KLT flavonoid

Pembanding yang digunakan adalah rutin. Penotolan pembanding pada

fase diam dilakukan dengan mikropipet 5 L. Sampel dan pembanding

kemudian ditotolkan pada lempeng KLT kemudian dielusi pada batas tertentu

Rutin sampel sampel

10

cm

Fase gerak n-butanol –

asam asetat- air (4:1:5)

v/v

Fase diam selulosa

Deteksi uap amoniak

2 CaSO4


53

(10 cm). Elusi dilakukan sepanjang 10 cm di dalam bejana yang sudah jenuh.

Bejana yang berisi larutan pengembang harus dijenuhkan telebih dahulu agar

proses elusi dapat berlangsung dengan baik.

Tabel VIII. Nilai Rf dan warna bercak pada uji KLT dengan fase diam selulosa

dan fase gerak butanol : asam asetat glasial : air (4:1:5) dan pembanding rutin

0,05% untuk analisis flavonoid

Bercak No Deteksi

UV254 UV365 Uap amoniak

Rf Warna Rf Warna Rf Warna

Sampel 1 0,64 Kuning 0,64 Ungu 0,64 Kuning

2 0,64 Kuning 0,64 Ungu 0,64 Kuning

Pembanding 1 0,61 Kuning 0,61 Ungu 0,61 Kuning

Dilihat dari hasil yang dapat dilihat dari tabel, maka dapat disimpulkan

mengandung flavonoid. Hal ini terbukti dengan terdapatnya bercak dengan

warna bercak yang mirip dengan bercak pembanding. Jika dilihat dari Rf-nya

diperkirakan yang terjadi adalah flavonoid yang terdapat pada sampel berbeda

dengan pembanding.

Flavonoid mempunyai gugus auksokrom OH yang terikat pada atom

karbon nomor 4 pada cincin B. Flavonoid juga mempunyai gugus O yang

bersifat elektrofil (senang menarik elektron). Adanya basa (NH3), OH akan

mudah melepaskan H yang kemudian diikat oleh NH3, setelah itu terjadi reaksi

penyusunan kembali yang menyebabkan O akan memiliki pasangan elektron

tambahan. Adanya tambahan elektron tersebut, maka energi yang diperlukan

semakin kecil, sehingga akan terjadi pergeseran panjang gelombang menuju

panjang gelombang yang lebih besar.


54

Reaksi yang terjadi sebagai berikut:

Gambar 11. Reaksi flavonoid dengan NH3 (Herlianawati, 2003)

Warna kuning yang terjadi dapat dengan cepat hilang karena di udara

terdapat banyak uap air (H-OH) sehingga H dari uap air akan berikatan dengan

O yang kelebihan elektron, sehingga struktur senyawa tersebut akan kembali

seperti semula. Warna yang terbentuk merupakan warna yang reversibel.

b. Uji KLT minyak atsiri

Fase diam yang digunakan yaitu silika gel GF254. Silika gel GF254

merupakan fase diam yang bersifat polar. Silika gel merupakan adsorben yang

paling banyak digunakan dalam Kromatografi Lapis Tipis (KLT) yang berupa

silika gel yang direkatkan dengan CaSO4 dan yang berfluoresensi pada panjang

gelombang 254 nm. Fase gerak yang digunakan adalah benzena : metanol (10:1).

Pembanding yang digunakan adalah terpenoid. Penotolan bercak dan

pembanding pada fase diam dilakukan dengan mikropipet 5 µL. Sampel dan

pembanding ditotolkan pada lempeng KLT kemudian dielusi pada batas tertentu

(10 cm). Elusi dilakukan sepanjang 10 cm di dalam bejana yang sudah jenuh,

agar proses elusi dapat berlangsung dengan baik.


55

Tabel IX. Nilai Rf dan warna bercak pada uji KLT dengan fase diam silika gel

F254 dan fase gerak toluen : etil asetat (93:7) dan pembanding terpenoid untuk

analisis minyak atsiri

Bercak No Deteksi

UV254 UV365 Vanilin-Asam Sulfat

Rf Warna Rf Warna Rf Warna

Sampel 1 0,25 Ungu - - 0,25 Merah muda

Pembanding 1 0,21 Ungu - - 0,21 Merah Muda

Berdasarkan hasil yang terlihat pada tabel diatas, dapat diasumsikan

bahwa sampel mengandung minyak atsiri. Hal ini terbukti dengan adanya profil

bercak dengan profil bercak yang mirip dengan pembanding.

Gambar 12. Hasil uji KLT minyak atsiri

10

cm

Fase gerak toluen : etil asetat

(93:7) v/v

Fase diam silika gel F 254

Deteksi vanilin asam sulfat

sampel Terpenoid


56

Warna violet yang terdeteksi pada plat KLT diakibatkan oleh reaksi

Liebermann-Burchard, yaitu salah satu reaksi warna yang paling umum pada

senyawa atsiri (terpenoid, fenilpropan, fenol dan turunannya) dengan mekanisme

abstraksi H+ sehingga terbentuk senyawa ikatan rangkap terkonjugasi. Ikatan

rangkap dua pada struktur kimia terpenoid memiliki spektrum serapan pada sinar

ultraviolet dan sinar visibel, sehingga di daerah cahaya tampak terlihat berwarna

violet.

Jika ditinjau ulang pada uji KLT, diketahui bahwa serbuk mengandung

senyawa flavonoid dan minyak atsiri yang merupakan senyawa antimikroba. Ketika

diuji, fraksi petroleum eter, kloroform, etanol bunga pulu (Carthamus tinctorius L.)

hingga konsentrasi 50% tidak mempunyai kemampuan untuk menghambat

pertumbuhan bakteri dan fungi uji. Hal ini diperkirakan disebabkan oleh:

1. Jumlah komponen senyawa antimikroba

Beberapa jenis komponen kimia yang terkandung pada serbuk bunga pulu

(Carthamus tinctorius L.) memiliki sifat sebagai antimikroba seperti flavonoid dan

minyak atsiri. Walaupun demikian, jelas terlihat bahwa fraksi petroleum eter,

kloroform, dan etanol bunga pulu secara keseluruhan tidak memiliki kemampuan

untuk menghalangi pertumbuhan mikroba uji. Hal ini dapat diperkirakan terjadi

karena komponen yang bersifat sebagai antimikroba hanyalah sebagai komponen

minor sehingga perannya sebagai antimikroba tidaklah signifikan, dengan kata lain

komponen utama yang memberikan kontribusi yang signifikan terhadap sifat dan

karakteristik fraksi bunga pulu bukanlah senyawa yang potensial sebagai

antimikroba (Jamal, Agusta, dan Praptiwi, 2003).


57

2. SEES ( Side Effect Eliminating Substances/ Secondary Efficacy Enhancing

Subtances)

Ekstraksi bertingkat dalam penelitian ini bertujuan untuk menyari atau

mengisolasi senyawa aktif yang berbeda polaritasnya. Teori SEES (Side Effect

Elimnating Substances) menjelaskan adanya zat yang meniadakan efek samping/

utama oleh zat-zat yang lain. SEES (Secondary Efficacy Enhancing Subtances) juga

menjelaskan bahwa terdapat zat-zat yang ketika dalam keadaan senyawa tunggal

tidak berefek, sehingga zat yang diisolasi efeknya dalam hal ini sebagai antimikroba

diperkirakan bisa menurun karena tidak terdapat zat sekunder.


58

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

1. Fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol bunga pulu (Carthamus tinctorius

L.) tidak mempunyai aktivitas antimikroba terhadap Staphylococcus aureus,

Escherechia coli, dan Candida albicans.

2. Tidak diketahui seberapa besar Kadar Hambat Minimum (KHM) dan

Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) dari fraksi petroleum eter, kloroform, dan

etanol bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) terhadap Staphylococcus aureus,

Escherichia coli,dan Candida albicans.

3. Berdasarkan uji tabung yang dilakukan, serbuk bunga pulu diduga mengandung

flavonoid, polifenol, dan minyak atsiri. Uji KLT menunjukan ada profil bercak

yang mirip dengan profil bercak flavonoid dan minyak atsiri.

B. Saran

1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai kandungan kimia dari bunga

pulu secara kuantitatif sehingga dapat diketahui berapa kadar senyawa-senyawa

yang terkandung di dalam bunga pulu.

2. Perlu diteliti mengenai potensi antimikroba dari batang, daun atau bagian

lainnya dari tanaman pulu.


59

DAFTAR PUSTAKA

Akroum, S., Satta, D., Lalaoui, K., 2009, Antimicrobial, Antioxidant, Cytotoxic

Activities and Phytochemical Screening of Some Algerian Plant,

EJSR,Vol 31 (2), p. 291.

Ardiansyah, 2007, Antibakteri dari Tumbuhan (bagian pertama),

www.beritaiptek.com, diakses 15 Januari 2013 pukul 16.03.

Arenas, R., Estrada, R., 2001, Tropical Dermatology, Landes Bioscience,

Georgetown, p. 106-9.

Birla Institute of Scientific Research, 2010, Database of Medicinal and Aromatic

Plants in Rajasthan,

http://bioinfo.bisr.res.in/project/domap/plant_details.php?plantid=0014&

bname=Carthamus%20tinctorius, diakses 11 Januari 2013 pukul 16.30.

Bouhdid, S., Skali, S.N., Idaomar, M., Zhid, A., Baudoux, D., Amensour, M., dkk.,

2008, Antibacterial and antioxidant activities of origanum compactum

essential oil, AJB, Vol 7 (10), pp. 1563-1570.

Braga, P.C., Sasso, M.D., Culici, M., Alfieri, M., 2008, Thymol inhibits mature

Candida albicans biofilm Scaning electron miccroscopy (SEM) study, 130

World Congress of Ginaecological Endrocrinology. Florence, Italia.

Burt, S.A., 2004, Essential oil : Their bacterial properties and potential application

in food, a review int. Journal Food microbiology, Vol. 94, pp. 223-253.

Cai, Y., Luo, Q., Sun, M., Corke, H., 2003, Antioxidant activity and phenoloc

compound of 112 traditionla Chines medicinal plants asociated with anticancer, Life Science, p. 2161.

Chomnawang, M.T., Surassmo, S., Nukoolkam, V.S., Gritsanapan, W., 2005,

Antomicrobial effects of Thai Medicinal Plants against Acne-Inducing

Bacteria, Journal of Ethnopharmacology, pp. 1-4.

Damayanti, E., Suparjana, T.,B., 2007, Efek Penghambatan Beberapa Fraksi Ekstrak

Buah Mengkudu Terhadap Shigella dysenteria, Prosiding Seminar Nasional Teknik Kimia “Kajuangan”, UPT BPPTK LIPI, Yogyakarta, p. A05-2

Departemen Kesehatan RI, 1986, Sediaan galenik, Edisi 1, Departemen Kesehatan

Republik Indonesia, Jakarta, pp. 4 - 6.

Hedetniemi, K., Liao, M., 2006, Luria Broth (LB) and Luria Agar(LA) Media and Their

Uses : Enterobacter aerogenes, www.microbelibrary.org, diakses 11 Januari

2013, Pukul 16.07


60

Herlianawati, M., 2003, Uji Potensi Antibakteri Ekstrak Etanol Umbi Binahong

(Anredera cordifolia (Tenore) Steen) terhadap Staphylococcus aureus ATCC

25923 dan Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Skripsi, Universitas

Sanata Dharma.

Heuze, V., Tran, G., 2011, Safflower (Carthamus tinctorius)forage, feepedia.org &

programe by INRA,CIRAD,AFZ and FAO, www.feepedia.org/node/173 , diakses 25 September 2011 pukul 17.12.

Hidayah, A.N., 2010, Efektifitas Air Perasan Jeruk Lemon (Citrus Lion Burm) 25 %

diabndingkan ketokonazol 2% terhadap pertumbuhan Malassezia Sp. Pada ketombe, Artikel Karya Tulis Ilmiah, Universitas Diponegoro, Semarang.

Idtools, 2013, Cut Flower Exports of Africa : Carthamus L.,

http://idtools.org/id/cutflowers/key/Cut_Flower_Exports_of_Africa/Medi

a/Html/Fact_sheets/Carthamus.htm, diakses pada tanggal 24 Januari 2013

pukul 22.03 WIB.

Jamal, Y., Agusta, A., dan Praptiwi, 2003, Kompisisi Kimia dan Efek Antibakteri

Minyak Atsiri Buah Gedebong (Piper aduncum L.), Majalah Famasi

Indonesia , 14 (1), pp. 284 – 289.

Jawetz, E., Melnick, J.L., dan Adelberg, E.A., 2005, Mikrobiologi Kedokteran

(Medical Microbiology), diterjemahkan oleh bagian mikrobiologi fakultas

Kedokteran Universitas Airlangga,pp. 100-101, 235, 318-319, 352, EGC,

Jakarta.

Kayser, F.H., Bienz, K.A., Eckert, J., Zinkernage, R.M., 2005, Medical

Microbiology, Ed.10, Stuttgart : Thieme, p. 362-4.

Khunaifi, M., 2010, Uji AktivitasAntibakteri Ekstrak Daun Binahong (Anredera

cordifolia (Ten.) Steenis ) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan

Pseudomonas aeruginosa, Skripsi, 30, Universitas Islam Negeri (UIN)

Maulana Malik Ibrahim, Malang.

Kokate, Purohit, Gokhale, 2009, Pharmacognosi, Nirali Prakashan, Bangalore, p.11.7.

Kusmayati, Agustini, N.W.R., 2007, Uji Aktivitas Senyawa Antibakteri dari Mikroalga (Porphyridium cruentum), Biodiversitas, Vol. 8 (1), pp. 48-53.

Madigan, M.T., Martinko J.M., Dunlap, P.V., Clark, D.P., 2009, Brock Biology of

Microorganism, Pearson Benjamin Cumming, United State, Chapter 3 : epdemiology, pp. 935-954.

Markham, K.R., 1988, Cara Mengidentifikasi Flavonoid, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, Penerbit ITB, Bandung. p. 15.


61

Murov, S., 2002, Properties of Organik Solvent, www.murov.info/orgachem.htm,

diakses 2 Agustus 2012 pukul 21:59.

Mothana, R.A.A., Abdo S.A.A., Hason, S., Althawab, F.M.N., Alaghbari, A.Z.,

Lindequist, U., 2008, Antimicrobial,Antioxidant and Cytotoxic Activities

and Phytochemical Screening of Some Yemeni Medicinal Plants, eCam

Vol. 7 (3), pp. 324-326.

Nostro, A., Papalia, T., 2012, Antimicrobial Activity of Carvacrol : Current

Progress and Future Prospectives, RPADD, Vol. 7, No. 1, pp. 28-35.

Nagaraj, B., Malakar, B., Divya, T.K., Krisnhamurthy, N.B., Liny, P., Dinesh, R.,

Iconaru, S.L., Ciobanu, C.S., 2012, Synthesis of plant mediated gold

nanoparticle using flower extracts of Carthamus tinctorius (Safflower) and

evaluation of their biological activities, Digest Journal of Nanomaterials

and Biostructure, Vol. 7 (3), p.1290.

Packer, L., 2001, Flavonoids Ana Other Polyphenols, Acedemic Press, USA, p. 55.

Pratiwi, S.,T., 2008, Mikrobiologi Farmasi, Erlangga, Jakarta, pp.136-147.

Rogers, K., 2011, Evil E.Coli, Encyclopedia Britanica,

http://www.britannica.com/blogs/2011/06/evil-coli, diakses 11 Januari

2013 pukul 15:11.

Rohman, A. dan Gandjar, I.G., 2007, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar,

Yogyakarta, pp. 354-356.

Sabir, A., 2005, Aktivitas antibakteri flavonoid propolis Trigona sp terhadap

bakteri Streptococcus mutans (in vitro), Majalah Kedokteran Gigi (Dent.

J.), Vol. 38, pp. 135-141.

Simatupang, M.M., 2009, Candida albicans, Departemen Mikrobiologi Fakultas

Kedokteran USU, Sumatera Utara.

Sokovic, M., Glamoclija, J., Marin, P.D., Brkic, D., van Griensven, L.J.L.D., 2010,

Antibacterial effect of the essential oil of commonly consumed medicinal herbs using an In Vitro model, Molecules 2010, 15, pp.7532-7546

Staf Pengajar Departemen Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Sriwijaya,

2009, Kumpulan Kuliah Farmakologi, Ed.2 pp.222, 616, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.

Stierman, B., 2012, Vancomycin Resistance in Stphylococcus aureus: A Danger

Dent in Our Armamentarium, Clinical Correlations The NYU Langone

Online Journal of Medicine, http://www.clinicalcorrelations.org/?p=5810,

diakses 11 Januari 2013 pukul 15.00.


62

Sudibyo, E.S., Rohmawati, E., Munira., Febriana, S.A., Radiono, S., Suswanto,

2008, Profil Resistensi Antibiotik pad Staphylococcus aureus dan

Pseudomonas aeruginosa, Berkala Kesehatan Klinik, Vol XIV, No. 2,

p.100.

Sudiono, J., 2001, Peran Candida albicans di dalam rongga mulut, MI Kedokteran

Gigi Fakultas Kedokteran Usakti, 44 (16), p.96.

Tadesse, D.A., Zhao, S., Tong, E., Ayers, S., Singh, A., Bartholommew, M.,J.,

McDermott, P.,F., 2012, Antimiccrobial Drug Resistance in Escherichia

coli from Humans and Food Animals, United States, 1950-2002, EIDJ,

Vol. 18, No. 5, p. 744.

Tjampaksari, C.R., 2006, Karakteristik Candida albicans,

http://www.kalbe.ci.id/files/cdk/files/13_15_karakteristikbiologicandidaa

lbicans.pdf., diakses 11 Januari 2013.

Todar, K., 2012, Staphylococcus aureus and Staphylococcal Disease, Todar’s Online

Textbook of Bacteriology, http://textbookofbacteriology.net/staph.html,

diakses 11 Januari pukul 15.11.

Wijayakusuma, H., 2008, Ramuan Herbal Penurun Kolesterol, Perpustakaan Bunda

(Grup Puspa Swara), Jakarta, p. 61.

Wijayakusuma, H., 2008a, Atasi Kanker Dengan Tanaman Obat, Puspa Swara, Jakarta, pp.45-46.

Ziarati, P., Asgarpanah, J., Kianifard, M., 2012, The essential oil composition of

Carthamus tintoris L. Flower growing in Iran, AJB Vol. 11 (65), pp. 12921-

12924.


LAMPIRAN


63

Lampiran 1. Surat Keterangan Selesai Melakukan Determinasi


64

Lampiran 2. Sertifikat Hasil Uji Staphylococcus aureus ATCC 25923


65

Lampiran 3. Sertifikat Hasil Uji Escherichia coli ATCC 32518


66

Lampiran 4. Sertifikat Hasil Uji Candida albicans ATCC 10231


67

Lampiran 5. Foto Tanaman Bunga Pulu (Carthamus tinctorius), Foto Serbuk, dan

Foto Bunga Kering

Foto Tanaman Bunga Pulu (Carthamus tinctorius)

Foto Serbuk Bunga Pulu ( Carthamus tinctorius)


68

Foto Bunga Pulu Kering

Lampiran 6. Foto Maserasi, Penguapan Menggunakan Rotaevaporator, Variasi

Konsentrasi Fraksi Etanol, Fraksi Kloroform, Fraksi Petroleum eter

Foto Maserasi


69

Foto Penguapan Menggunakan Rotary Evaporator

Foto Variasi Konsentrasi Fraksi Petroleum Eter Bunga Pulu (Carthamus

tinctorius L.)

Keterangan:

C1= Konsentrasi 50%

C4= Konsentrasi 25%

C7= Konsentrasi 12,5%




70

Foto Variasi Konsentrasi Fraksi Kloroform Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.)

Foto Variasi Konsentrasi Fraksi Etanol Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.)

Keterangan:

C2= Konsentrasi 50%

C5= Konsentrasi 25%




Keterangan:

C3= Konsentrasi 50%

C6= Konsentrasi 25%





71

Lampiran 7. Foto Hasil Uji Pendahuluan Serbuk Bunga Pulu (Carthamus

tinctorius) dengan Uji Tabung

Lampiran 8. Foto Hasil Uji Alkaloid Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius)

dengan Uji Tabung

Keterangan :

A. Sampel + Mayer

B. Sampel + Dragendorf

Keterangan :

A. Sampel + Aquadest

B. Sampel + Aquadest + KOH


72

Lampiran 9. Foto Hasil Uji Antrakinon Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius)

dengan Uji Tabung

Lampiran 10. Foto Hasil Uji Polifenol Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius)

dengan Uji Tabung

Keterangan :

Lapisan atas + KOH

Keterangan :

A. Sampel + Aquadest

B. Sampel + Etanol 80%


73

Lampiran 11. Foto Hasil Uji Tanin Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius)

dengan Uji Tabung

Lampiran 12. Foto Hasil Uji Saponin Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius)

dengan Uji Tabung

Keterangan :

C. Sampel + NaCl 2%

D. Sampel + NaCl 2% + Gelatin


74

Lampiran 13. Foto Hasil KLT Fraksi Metanol Bunga Pulu (Carthamus tinctorius

L.) dengan Deteksi UV 254, UV 365, dan Uap Amonia pada Analisis Flavonoid

Keterangan : I. Deteksi UV 254 nm

a. Pembanding Rutin 0,05 %

b. Sampel

c. Sampel

II. Deteksi UV 365 nm

a. Pembanding Rutin 0,05 %

b. Sampel

c. Sampel

III. Deteksi Uap Amoniak a. Pembanding Rutin 0,05 %

b. Sampel

c. Sampel


75

Lampiran 14. Foto Hasil KLT Fraksi Metanol Bunga Pulu (Carthamus tinctorius

L.) dengan Deteksi UV 254, UV 365, dan Vanilin Asam Sulfat pada Analisis

Minyak Atsiri.

Keterangan : I. Deteksi UV 254 nm

P. Pembanding

S. Sampel

II. Deteksi 365 nm

P. Pembanding

S. Sampel

III. Deteksi Vanilin Asam Sulfat

P. Pembanding

S. Sampel


76

Lampiran 15. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Petroleum Eter (PE)

terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 dengan Metode Difusi Sumuran

Lampiran 16. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Kloroform (CHCL3)

terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 dengan Metode Difusi Sumuran

Keterangan

a. Kontrol Positif

b. Fraksi PE Bunga Pulu 50%

c. Fraksi PE Bunga Pulu 25 %

d. Fraksi PE Bunga Pulu 12,5%

e. Fraksi PE Bunga Pulu 6,25%

f. Fraksi PE Bunga Pulu 3,125%

g. Kontrol Negatif

Keterangan

a. Kontrol Positif

b. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 50%

c. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 25 %

d. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 12,5%

e. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 6,25%

f. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 3,125%

g. Kontrol Negatif


77

Lampiran 17. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Etanol terhadap




Keterangan

a. Kontrol Positif

b. Fraksi EtOH Bunga Pulu 50%

c. Fraksi EtOH Bunga Pulu 25 %

d. Fraksi EtOH Bunga Pulu 12,5%

e. Fraksi EtOH Bunga Pulu 6,25%

f. Fraksi EtOH Bunga Pulu 3,125%

g. Kontrol Negatif

Keterangan

a. Kontrol Positif

b. Fraksi PE Bunga Pulu 50%

c. Fraksi PE Bunga Pulu 25 %

d. Fraksi PE Bunga Pulu 12,5%

e. Fraksi PE Bunga Pulu 6,25%

f. Fraksi PE Bunga Pulu 3,125%

g. Kontrol Negatif


78



Lampiran 20. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Etanol terhadap Escherichia

coli ATCC 10231 dengan Metode Difusi Sumuran

Keterangan

a. Kontrol Positif

b. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 50%

c. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 25 %

d. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 12,5%

e. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 6,25%

f. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 3,125%

g. Kontrol Negatif

Keterangan

a. Kontrol Positif

b. Fraksi EtOH Bunga Pulu 50%

c. Fraksi EtOH Bunga Pulu 25 %

d. Fraksi EtOH Bunga Pulu 12,5%

e. Fraksi EtOH Bunga Pulu 6,25%

f. Fraksi EtOH Bunga Pulu 3,125%

g. Kontrol Negatif


79





Keterangan

K+ : Kontrol Positif

6 : Fraksi CHCl3 Bunga Pulu 50%

7 : Fraksi CHCl3 Bunga Pulu 25 %

8 : Fraksi CHCl3 Bunga Pulu 12,5%



K- : Kontrol Negatif

Keterangan


1 : Fraksi PE Bunga Pulu 50%

2 : Fraksi PE Bunga Pulu 25 %

3 : Fraksi PE Bunga Pulu 12,5%





80

Lampiran 23. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Etanol terhadap Candida


Lampiran 24. Foto Kontrol Media dan Pertumbuhan Staphylococcus aureus,

Escherichia coli, dan Candida albicans

Foto Kontrol Media NA Agar

Keterangan


11 : Fraksi EtOH Bunga Pulu 50%

12 : Fraksi EtOH Bunga Pulu 25 %

13 : Fraksi EtOH Bunga Pulu 12,5%





81

Foto Kontrol Media PDA Agar

Foto Kontrol Pertumbuhan Candida albicans


82

Foto Kontrol Pertumbuhan Escherichia coli

Foto Kontrol Pertumbuhan Staphylococcus aureus


83

Lampiran 25. Foto Kemampuan Difusi Fraksi Petroleum Eter, Kloroform, Etanol

Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) pada Media Agar

Foto Media Agar tanpa FeCl3 Foto Media Agar dengan FeCl3

Keterangan:

A: Standar rutin

B: Etanol

C: Klorofrom

D: Petroleum Eter

E: DMSO 5%


84

BIOGRAFI PENULIS

HERMAWAN DENY PRASETYO lahir

pada tanggal 7 Februari 1992 di Yogyakarta dari

pasangan Bapak Harya Adi Setiawan dan Ibu Sumarsih.

Menjalani Taman Kanan-Kanak di TK IDHATA

(Ikatan Dharma Wanita) Kolaka, Sulawesi Tenggara,

pada tahun 1996. Kemudian pada tahun 1997

melanjutkan untuk menuntut ilmu di SD Negeri 2

Balandete. Tamat dari Madrasah Tsanawiyah Negeri Kolaka pada tahun 2006. Dan

Lulus dari Sekolah Menengah Atas Negeri 1 Kolaka pada tahun 2009, dan berhasil

menyelesaikan S1 di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada

tahun 2013.

Selama menempuh pendidikan di Fakultas Farmasi, penulis aktif dalam

berbagai kegiatan baik di luar kampus maupun bidang kerohanian dan

kemahasiswaan, seperti menjabat sebagai Komisaris Jaringan Mahasiswa

Kesehatan Indonesia (JMKI) Komisariat Fak. Farmasi USD periode 2011-2012,

Seksi Kesenian Insadha 2010 & 2011, UKM KSR PMI Unit VI USD 2009-2010,

UKM Teater Seriboe Djendela 2009-2010, Kepala Departemen Informasi &

Komunikasi JMKI Wilayah yogyakarta 2011-2012, Badan Pengawas Wilayah

JMKI Yogyakarta 2012-2013.


plagiat merupakan tindakan tidak terpuji - core.ac.uk · rumus bangun carvacrol ... uv 365, dan...

Documents