macam-medium-dan-reagent.pdf

MACAM MEDIUM DAN REAGENT By. Drh. Husnurrizal

Medium Yeast Mannitol Agar

Komposisi : 1. Mannitol 10 gram 6.

CaCO3 3 gram

2. Ekstrak Khamir 0,2 gram 7. Congo Red 1%

2,5 gram

3. K2HPO4 0,5 gram 8 Agar-

agar 15 gram

4. MgSO4 0.2 gram 9. Aquadest

1000 ml

5. NaCl 0,1 gram pH :7,4±0,2

Medium Cair Glucosa Extract Khamir (Glukosa Yeast Extract Broth)

Komposisi : 1. Trypton 10 gram 4. Glukosa 5

gram

2. Yeast Extract 10 gram 5. Aquadest 1000 ml

3. K2HPO4 5 gram pH :7,4±0,2

Medium Cair Tryptopan 1%

Komposisi : 1. Trypton 1 gram

2. Aquadest 100 ml pH :7,4±0,2

Medium cair MR-VP (Methyl Red – Voges Prouskauer)

Komposisi : 1. Pepton 7 gram 3. K2HPO4 5

gram

2. Glukosa 5 gram 4. Aquadest 1000 ml

pH :7,4±0,2

Medium cair Tryptopan + Glukosa

Komposisi : 1. Tryptopan 10 gram 3. Aquadest 1000 ml

pH :7,4±0,2

2. Glukosa 10 gram

Medium TSI Agar (Triple Sugar Iron Agar)

Komposisi : 1. Meat Extract 3. Gram 7.

Na2S2O3 0,5 gram

2. Yeast Extract 3 gram 8. Laktosa 10

gram

3. Pepton from Casein 15 gram 9. Sukrosa

10 gram

4. Pepton from Meat 5 gram 10. Glukosa 1 gram

5. NH4 Fe (III) Citrat 0,5 gram 11. Agar-agar

15 gram

6. NaCl 5 gram 12. Aquadest 1000

ml

Medium DSI Agar (Double Sugar Iron Agar)

Komposisi sama dengan TSI Agar, kecuali : 1. Sukrosa 10 gram

2. Glukosa 1 gram pH :7,4±0,2

Medium SSI Agar (Single Sugar Iron Agar)

Komposisi sama dengan TSI Agar, kecuali Glukosa 10 gram pH

:7,4±0,2

Medium Cystein/Cystine/Methionine Agar

Komposisi : 1. Meat Extract 3 gram 6.

NaCl 5 gram

2. Yeast Extract 3 gram 7. Na2S2O3 0,5

gram

3. Cystein/Cystine/Methionine 10 gram 8. Agar-agar 15

gram

4. Glukosa 10 gram 9.

Aquadest 1000 ml

5. NH4 Fe (III) Citrat 0,5 gram pH :7,4±0,2

Medium Simmon Citrate

Komposisi : 1. (NH4) H2 PO4 1 gram 5. Mg

SO4 0,2 gram

2. K2HPO4 1 gram 6. BTB (Bromo Thymol Blue)

0,08 gram

3. NaCl 5 gram 7. Agar-

agar 12-15 gram

4. Na Citrate 2 gram 8.

Aquadest 1000 ml

Medium Agar Citrate + Glukosa

Komposisi sama dengan Medium Agar Citrat hanya di tambah dengan Glukosa 1

gram

Medium Agar Citrate + Lactat

Komposisi sama dengan Medium Agar Citrat hanya di tambah dengan Na Laktat/Ca

Laktat/Li Laktat sebanyak 1 gram

Medium Nitrifikasi

Komposisi : 1. K2HPO4/Na2 HPO4 13,5 gram 5.

(NH4)2 SO4 2,5 gram

2. KH2PO4 0,7 gram 6. FeCl3. 6 H2O 14,4

gram

3. MgSO4. 7 H2O 0,1 gram 7. CaCl2. 7 H2O 18,4

gram

4. NaHCO3 0,5 gram 8. Aquadest 1000

ml

Medium Denitrifikasi

Komposisi : 1. KNO3 2 gram 3. CaCO3

5 gram

2. Glukosa 10 gram 4. Larutan Winogradksy 1000 ml

pH :7,4±0,2

Isi Larutan Winogradksy :

1. K2HPO4 5 gram 4. Fe SO4. 7H2O 0,05 gram

2. Mg SO4. 7 H2O 2,5 gram 5. Mn SO4 0,05

gram

3. NaCl 2,5 gram 6. Aquadest 1000

ml

Medium Pati Agar

Komposisi : 1. Meat Extract 3 gram 3. Agar-agar 15-20

gram

2. Pati (Soluble Strack) 2 gram 4. Aquadest 1000 ml

pH :7,4±0,2

Medium Nutrien Gelatine

Komposisi : 1. Meat Extract 3 gram 3. Gelatine 12-15 gram

2. Peptone 5 gram 4 Aquadest 1000 ml pH

:7,4±0,2

Medium Agar Susu Skim

Larutan A komposisi : 1. Peptone 10 gram

2. Agar-agar 20 gram pH :7,4±0,2

3. Aquadest 1000 gram

Larutan B Susu Bebas Lemak 10% : komposisi : 1.Susu Skim 10 gram

2. Aquadest 100 ml

Kedua larutan di buat dan disterilkan secara terpisah. Setelah larutan A dimasukkan

ke dalam cawan petri steril, setelah itu baru Larutan B ditambahkan sebanyak 1 ml

secara aseptis.

Medium Selulosa Agar

Komposisi : 1. K2HPO4 1 gram 5. NaCl 2

gram

2. Mg SO4. 7 H2O 1 gram 6. Selulosa 10 gram

3. Na2CO3 1 gram 7. Agar-agar 12-20 gram

4. (NH4)2 SO4 2 gram 8. Aquadest 1000 ml

Medium Nutrien Agar

Komposisi : 1. Meat Extract 3 gram 3. Agar-agar 15-20

gram

2. Peptone 5 gram 4. Aquadest 1000 ml

pH :7,4±0,2

Medium Nitrate Cair

Komposisi : 1. Meat Extract 3 gram 3. KNO3 1 gram


pH :7,4±0,2

Medium Kentang Agar (Potato Dextrose/Glukosa Agar)

Komposisi : 1. Kentang 200 gram 3. Agar-

agar 15-20 gram

2. Dextrose/Glukose 20 gram 4. Aquadest 1000

ml pH :7,4±0,2

Kentang di kupas dan di potong kecil-kecil, lalu di rebus sampai lunak (mendidih) disaring

dan diambil filtratnya, lalu filtrat ditambah dengan aquadest sampai 1000 ml dicampur

dengan Dextrose/Glukose + Agar-agar dipanaskan.

Medium YMA (Yeast Mannitol Agar)

Komposisi : 1. Mannitol 10 gram 5.

NaCl 0,1 gram

2. Extract Khamir 0,2 gram 6. Congo Red 1%

2,5 gram

3. . K2HPO4 0,5 gram 7. Agar-

agar 15 gram

4. Mg SO4. 7 H2O 0,2 gram 8.

Aquadest 1000 ml

Medium YGA (Yeast Extract Glukosa Agar)

Komposisi sama dengan medium YMA tetapi Mannitol diganti dengan Glukosa

sebanyak 10 gram.

Medium YSA (Yeast Extract Sukrosa Agar)

Komposisi sama dengan medium YMA tetapi Mannitol diganti dengan Sukrosa

sebanyak 15 gram.

Medium Urea

Komposisi : 1. Peptone 1 gram 5. Phenol Red 0,012

gram

2. Glukosa 1 gram 6. Agar-agar 12 gram

3. NaCl 5 gram 7. Aquadest 1000 ml

4. KH2PO4 2 gram pH : 6,8±0,2

Untuk kristal Urea 20 gram tidak disterilkan dengan Autoclave tetapi hanya

dipanaskan pada suhu 700C (bisa dengan Oven), sedangkan no:1-7 harus

disterilkan dengan Autoclave.

Medium Urea (Metode Christensen)

Komposisi : 1. Peptone 1 gram 4. Phenol Red 0,012

gram

2. NaCl 5 gram 5. Agar-agar 15-20 gram

3. KH2PO4 2 gram 6. Aquadest 1000 ml

Media tersebut diatas disterilkan dengan Autoclave pada suhu 121 0C selama 20

menit.

Medium Urea + Glukosa

Komposisi sama hanya di tambah Glukosa sebanyak 1 gram.

Medium Urea Cair

Komposisi sama hanya Agar-agar dihilangkan.

Medium Urea (yang Redimite/siap saji)

1. Timbang Agar-agar (khusus untuk Urea) sebanyak 15 gram + 1000 ml

aquadest panaskan sampai larut masukkan ke dalam Erlenmeyer di cek

pHnya (6,8±0,2) lalu mulut Erlenmeyer ditutup dengan kapas disterilkan

(Autoclave suhu 121 0C selama 15 menit)

2. Timbang Kristal Urea sebanyak 29 gram dipanaskan pada suhu ± 70 0C selama

15 menit

3. No. 1 dan 2 di campur secara aseptik (Campuran ini disebut medium Urea)

4. Tuang campuran medium tersebut ke dalam tabung reaksi streril secara aseptis.

5. Dinginkan dan media siap digunakan.

Medium Gliserol

Komposisi : 1. Extract Khamir 10 gram

2. Agar-agar 15 gram

3. Aquadest 1000 ml

Larutkan dulu bahan-bahan diatas, kemudian saring bila perlu; selanjutnya ditambah

dengan Gliserol 20 gram. Disteril dengan Autoclave pada suhu 121 0C selama 15

menit.

Medium Mannitol Phenol Red Agar

Komposisi : 1. D (-) Mannitol 10 gram 4. Phenol Red

0,025 gram

2. Pepton 1 gram 5. Agar-agar 15 gram

3. Yeast Extract 0,5 gram 6. Aquadest 1000

ml

ph medium diatur (7,0 ±0,1) lalu disterilkan dengan Autoclave pada suhu 121 0C

selama 15 menit.

Medium MC BETH

Komposisi : 1. K2HPO4 1 gram 5. CaCl2 2

gram

2. MgSO4.7H2O 1 gram 6. Kertas Filter 1 lembar

3. NaCl 1 gram 7. Aquadest 1000 ml

4. (NH4)2.SO4 2 gram pH :7,4±0,2

Medium Glukonobacter Oxydans

Komposisi : 1. Glukosa 100 gram 3. Agar-agar 15

gram

2. Yeast Extract 10 gram 4. Aquadest 1000 ml

pH :6,8±0,2

Medium ini dipakai untuk menumbuhkan Acetobacter sp

Medium SSA (Staphylococcus Selektive Agar)

Komposisi : 1. Yeast Extract 2,5 gram 6.

NaCl 7,5 gram

2. Pepton from Casein 10 gram 7. K2HPO4

5 gram

3. Gelatine 30 gram 8. Agar-agar

1,5 gram

4. Laktosa 2 gram 9 Aquadest 1000 ml

5. Mannitol 10 gram

Medium VJA (Vogel Johnson Agar) = (Staphylococcus Selektive Agar)

Komposisi : 1. Pepton from Casein 10 gram 6. Glycine 10

gram

2. Yeast Extract 5 gram 7. Phenol Red 0,025 gram

3. Mannitol 10 gram 8. Agar-agar 13 gram

4. K2HPO4 5 gram 9. Aquadest 1000 ml

5. Lithium Chlorida 5 gram

NB : Tiap 10 ml medium VJA harus ditambah 3-4 tetes Kalium Tellurit 1%.

Medium VJA (Vogel Johnson Agar) dan medium SSA (Staphylococcus Selektive

Agar) dipakai untuk identifikasi Staphylococcus sp

Medium Glukosa Yeast Extract Agar

Komposisi : 1. Extract Khamir 5 gram 4. Agar-agar 20 gram


3. Glukosa 10 gram

Medium Streptococcus Selektive Agar

Komposisi : 1. Peptone 5 gram 7.

Glukosa 5 gram

2. Peptone from Casein 14,4 gram 8. Sodium Azide 0,2

gram

3. NaCl 4 gram 9. Crystal Violet 0,0002

gram

4. Na Citrate 1 gram 10. Agar-agar 15

gram

5. L-Cistine 0,2 gram 11. Aquadest 1000

ml

6. Na2SO3 0,2 gram

Medium Lactobacillus Selektive Agar (Rogosa Agar)

Komposisi : 1.Peptone from Casein 10 gram 7. Na

Acetate 15 gram

2. Yeast Extract 5 gram 8.

MgSO4 0,575 gram

3. Glukosa 20 gram 9. Ferri Sulfate

0,034 gram

4. KH2PO4 6 gram 10. Manganase

Sulfate 0,12 gram

5. NH4 Citrate 2 gram 11. Agar-

agar 15 gram

12. Aquadest 1000 ml

6. Polyoxy Ethylen Surbitol Monoblecite 1 gram pH : 5,5±0,2

Medium Dexstrine Cair

Komposisi : 1. Extract Dagaing 3 gram 4. BTB

1% 1 ml


3. Dexstrine 5 gram pH :7,0±0,2

Medium Jensen Agar

Komposisi : 1. Dextrosa 2 gram. 6. Agar-agar 15

gram

2. Casein 0,2 gram.(yang telah dilarutkan dalam 10 ml NaOH 0,1

ml)

3. K2HPO4 0,5 gram 7. Aquadest 1000 ml

4. MgSO4. 7H2O 0,2 gram

5. FeCl3. 6H2O sedikit pH medium :7,0±0,2

Medium Nitrate Cair

Komposisi : 1. Extract Daging 3 gram 3. KNO3 1

gram

2. Peptone 5 gram 4. Aquadest 1000 ml pH :

7,2±0,2

Medium Lactose Cair

Komposisi : 1. Extract Daging 3 gram 4. Phenol Red

1,6% 1 ml


3. Laktosa 5 gram pH :7,0±0,2

Medium Lactose Agar

Komposisi : 1. Extract Daging 3 gram 4. BTB 1% 1

ml

2. Peptone 5 gram 5. Agar-agar 15 gram

3. Laktosa 5 gram 6. Aquadest 1000 ml

pH : 7,0±0,2

Medium untuk Reduksi SUSU

Reagent yang dipakai adalah 1. Methylen Blue 5% 0,005 gram

2. Aquadest 100 ml

Medium Peptone Iron Agar

Komposisi : 1. Peptone 15 gram 5. Na2S2O3.

5H2O 0,08 gram

2. Proteosa Peptone 5 gram 6. Agar-agar

20 gram

3. Fe NH4 Citrate 0,5 gram 7.

Aquadest 1000 ml

4. K2HPO4 1 gram pH : 7,0±0,2

Medium Sukrosa Triptone Cair

Komposisi : 1. Extract Daging 3 gram 3. Sukrosa 5

gram

2. Triptone 5 gram 4. Aquadest 1000 ml pH :

7,0±0,2

Medium EMB Agar (Eosine Methylene Blue Agar)

Komposisi : 1.Peptone from Casein 10 gram 5.

Eosin 0,4 gram

2. K2HPO4 2 gram 6. Methylen Blue

0,065 gram

3. Laktosa 5 gram 7. Agar-

agar 15 gram

4. Sukrosa 5 gram 8.

Aquadest 1000 ml

Medium ini selektif untuk bakteri Gram negatip.

Medium EA (Endo Agar)

Komposisi : 1. Peptone 10 gram 5. Basic Fuchine 0,4 gram

2. Laktose 10 gram 6. Agar-agar 15 gram

3. K2HPO4 3,5 gram 7. Alkohol 40

ml

4. Na2SO3 2,5 gram 8. Aquadest 1000

ml pH : 7,1±0,2

NB : Medium EA (Endo Agar) mengandung zat penghambat Na2SO3 dan Basic

Fuchine.

Bila Laktosa negatip media berwarna merah muda dan bila Laktosa positip

media berwarna merah tua/merah methalik karena bakteri meragi Fuchine

membentuk Aldehide + Asam.

Proses oksidasi juga dapat menyebabkan Laktosa menjadi positip karena

O2 dapat memecah ikatan antara Fuchine dengan Sulfite, dimana Sulfite

teroksidasi menjadi Sulfat. Medium ini selektif untuk bakteri Gram negatip.

Medium MCA (Mac Conkey Agar)

Komposisi : 1. Peptone from Casein 17 gram 6.

Neutral Red 0,03 gram

2. Peptone from Meat 3 gram 7. Christal Violet

0,001 gram


agar 15 gram

4. Lactose 10 gram 9.

Aquadest 1000 ml

5. Bile Salt 1,5 gram pH : 7,1±0,2

NB : Medium MCA (Mac Conkey Agar) mempunyai zat penghambat Garam

Empedu dan Kristal Violet.

Bila Laktosa positip media menjadi berwarna merah muda dan Laktosa

negatip berwarna kuning. Contoh : bakteri E. Coli memfermentasi Laktosa

selama 24 jam. Dalam 48 jam jika karbohidratnya (Glukosa) habis maka akan

memecah Asam Amino menjadi NH3 (basa) yaitu kuning. Medium ini selektif

untuk bakteri Gram negatip.

Medium Agar Darah

Komposisi : 1. NaCl 5 gram 4. Agar-agar 15

gram

2. Tryptone 10 gram 5. Aquadest 1000 ml

3. Yeast Extract 5 gram pH : 7,0±0,2

NB : tiap-tiap 10 ml medium ini ditambah dengan 1 ml darah.

Medium Salmonelle Shigella Agar

Komposisi : 1. Extract Daging 5 gram 7. Ferri

Citrate 1 gram

2. Peptone from Meat 5 gram 8. Brilliant Green

0,0003 gram

3. Lactose 10 gram 9. Indikator Neutral Red

0,025 gram

4. Bile Salt 8,5 gram 10. Agar-

agar 15 gram

5. Na2S2O3 0,5 gram 11.

Aquadest 1000 ml

6. Na Citrate 10 gram pH : 7,0±0,2

NB : Pakai tabung reaksi steril panjang dan medium tidak perlu disterilkan.

Medium SSA (Salmonella Shigella Agar) mempunyai zat penghambat Brilliant

Green & Bile Salt (menghambat bakteri Gram Positip) serta S2O3 & Citrate

(menghambat bakteri golongan Coliform). Medium ini selektif untuk bakteri

Salmonella dan Shigella. Bakteri Salmonella koloni berwarna Coklat dan

ditengahnya ada titik Hitam; sedangkan Shigella koloni kecil-kecil dan

berwarna Coklat.

Medium BSA (Bismuth Sulfite Agar)

Komposisi : 1. Extract Daging 5 gram 6. Brilliant

Green 0,025 gram

2. Peptone from Meat 10 gram 7. Bismuth Sulfide

(Indikator) 8 gram

3. Glukosa 5 gram 8. Agar-

agar 15 gram

4. K2HPO4 4 gram 9.

Aquadest 1000 ml

5. FeSO4 0,3 gram

NB : Pakai tabung reaksi steril panjang dan medium tidak perlu disterilkan.

Medium BSA (Bismuth Sulfite Agar) mengandung zat penghambat Brilliant

Green (menghambat bakteri Gram Positip) dan Bismuth (menghambat bakteri

Proteus dan bakteri golongan Coliform)

Koloni Salmonella : Mata ikan (Fish Eye)/Mata Kelinci (Rabbit’s Eye)koloni

bulat, ditengah koloni warna hitam dan pinggirnya warna perak methalik.

Warna Hitam terjadi karena Sulfite bereaksi dengan Ferro sedangkan warna

Perak Methalik bereaksi dengan Bi2+

.

Medium PSA (Pseudomonas Selektif Agar)

Komposisi : 1. Pepton from Casein 10 gram 5.

Glyserol 10 gram

2. Pepton from Meat 10 gram 6. Agar=agar

15 gram

3. MgSO4 1,5 gram 7.

Aquadest 1000 ml

4. K2HPO4 1,5 gram pH : 7,2

Medium S.I.M (Sulfida Indole Motilitas)

Komposisi : 1. Pepton from Casein 20 gram 4.

Na2S2O3 0,2 gram

2. Pepton from Meat 6 gram 5. Agar-agar 3 gram

3. NH4 Iron (III) Citrat 0,2 gram 6. Aquadest 1000

ml pH : 7,3±0,2

Medium KIA (Kliger’s Iron Agar)

Komposisi : 1. Beef Extract 3 gram 7. Ferro

Sulfat 0,2 gram

2. Yeast Extract 3 gram 8. NaCl

5 gram

3. Peptone 15 gram 9. Na2S2O3 0,3

gram

4. Protease Peptone 5 gram 10. Phenol Red 0,024

gram

5. Laktose 10 gram 11. Agar-agar 12

gram

6. Dextrose 1 gram 12. Aquadest 1000

ml pH : 7,4±0,2

Medium Simmon Citrate

Komposisi : 1. (NH4)2 H2PO4 1 gram 5.

MgSO4 0,2 gram

2. K2HPO4 1 gram 6. BTB 0,08

gram

3. NaCl 5 gram 7. Agar-agar 12

gram

4. Na Citrate 2 gram 8. Aquadest 1000

ml pH : 6,8±0,2

Medium PAD (Phenyalanine Deaminase)

Komposisi : 1. Yeast Extract 1 gram 6. L-

Phenyalanine 1 gram

2.( NH4)2 Sulfat 2 gram 7. BTB

0,025 gram

3. K2HPO4 0,6 gram 8. Agar-

agar 12-15 gram

4. KH2PO4 0,4 gram 9.

Aquadest 1000 ml

5. NaCl 2 gram pH : 6,9±0,2

Medium Ornitine Decarboxylase

Komposisi : 1. Peptone from Meat 5 gram 4. BCP (Bromo

Cresol Purple) 0,016 gram

2. Yeast Extact 3 gram 5.

Ornitine 5 gram

3. Glukose 1 gram 6. Aquadest 1000 ml

pH : 6,7±0,2

Medium Peptone Alkali

Komposisi : 1. Peptone from Meat 10 gram 4. KH2PO4

1,5 gram

2. NaCl 5 gram 5. Aquadest 1000

ml

3. K2HPO4 9 gram pH : 8,8±0,2

Medium Arginine Dihidrolase

Komposisi : 1.Peptone from Meat 5 gram 4. BCP (Bromo

Cresol Purple) 0,016 gram

2. Yeast Extact 3 gram 5. Arginine

Monohydrochloride 5 gram

3. Glukose 1 gram 6. Aquadest 1000 ml

pH : 6,7±0,2

Medium Tryptone Cair

Komposisi : 1. Tryptone 10 gram

2. NaCl 5 gram

3. Aquadest 1000 ml pH : 7,3±0,2

Medium LIA (Lysine Irone Agar)

Komposisi : 1. Peptone from Meat 5 gram 6. Lysine

Monohydrochloride 10 gram

2. Yeast Extact 3 gram 7. BCP (Bromo Cresol

Purple) 0,02 gram

3. Glukose 1 gram 8. Agar-

agar 12,5 gram

4 Na2S2O3 0,04 gram 9.

Aquadest 1000 ml

5. NH4Ferri Citrat 0,05 gram

Medium LDS (Lysine Deaminasi Sulfhidrase)

Komposisi : 1. Peptone from Meat 4,5 gram

7. Na2S2O3 0,2 gram

2. Peptone from Saymeal 2 gram 8. NH4 Ferro

Sulfat 0,2 gram

3. Yeast Extract 3 gram 9.

BCP 0,032 gram


agar 6 gram

5. Glukosa 1 gram 11.

Aquadest 1000 ml

6. Lysine Monohydrochloride 10 gram pH :

5,6±0,2

Medium Gula-gula

Komposisi : 1. Extract Daging 3 gram 3. Phenol Red 1% 1

ml


Setelah semua komposisi itu larut, cek pHnya : 7,0±0,2, baru tambahkan

Karbohidrat (Glukosa, Laktosa, Sukrosa, Maltosa, Dextrosa, dsb) sebanyak @ 5

gram ; dan jangan lupa diberi tanda pada tutup atau kapasnya nama-nama dari

karbohidrat tsb.

Medium Mannitol Salt Phenol Red Agar

Komposisi : 1. Peptone from Meat 10 gram 5. Phenol

Red 0,025 gram

2. Extract Daging 1 gram 6. Agar-agar 15

gram

3. NaCl 7,5 gram 7.

Aquadest 1000 ml

4. Mannitol 10 gram

Medium SGA 4%(Sabaraut Glukosa Agar 4%) (* + Chlorampenicol 100

mg/1000 ml)

Komposisi : 1. Special Peptone 10 gram 3. Agar-

agar 15 gram

2. Glukosa/Maltosa/Dextrosa 40 gram 4. Aquadest

1000 ml

Catatan : Bila untuk menumbuhkan Bakteri tidak perlu di tambah Chlorampenicol.

Bila untuk menumbuhkan Jamur maka perlu di tambah dengan

Chloramphenicol.

Medium MRS Agar (De Man Rogosa Sharpe)

Komposisi : 1. Peptone 10 gram 7.

(NH4)2 Hydrogen Citrate 2 gram

2. Extract Daging 5 gram 8. Na Acetat 5

gram

3. Yeast Extract 5 gram 9. Mg SO4 0,1

gram

4. Glukosa 20 gram 10. Mn SO4 0,05

gram

5. K2HPO4 2 gram 11. Agar-agar 12

gram

6. Tween 80 1 gram 12. Aquadest 1000

ml

pH media : 6,5±0,2. Untuk yang redimite MRS Agar =62 gram/lt dan MRS Cair=50

gram/lt

Media Sulfite Irone Agar Base

Komposisi : 1. Peptone from Casein 15 gram 4. FeSO4 1,4 gram

2. Yeast Extract 10 gram 5. Agar-agar 15 gram

3. Na2SO3 0,5 gram pH : 6,9±0,2.

Medium Agar Darah Tellurite

Komposisi : 1. Peptone 10 gram 3. Agar-agar 15 gram

2. NaCl 5 gram pH : 7,8±0,2.

NB : medium disterilkan dengan Autoclave; dinginkan ad.Suhu ± 55 0C;tambah

dengan darah 5% dan 10 ml Kallium Tellurite 3,5%.

Medium Oxgal

Komposisi : 1. Extract Daging 3 gram 3. Bile Salt 8%

2. Peptone 5 gram

Catatan : Medium Oxgal dapat juga dibuat dari 100 ml Medium Nutrien Cair + Bile

Salt 8 gram

Medium Thioglycolat

Komposisi : 1. Peptone from Casein 15 gram 6. Na

Thioglycolate 0,5 gram

2. Yeast Extract 5 gram 7. Na Resozurine

0,001 gram

3. Glukosa 5,5 gram 8. Agar-

agar 0,75 gram

4. Cysteine 0,5 gram 9.

Aquadest 1000 ml

5. NaCl 2,5 gram pH : 7,1±0,2.

Medium Lowenstein Jensen Agar

Larutan I berisi : 1. Asparagin 3,6 gram 4. Mg

Sulfate 0,024 gram

2. KH2PO4 2,4 gram 5. Glyserine

12 ml

3. Mg Citrate 0,6 gram 6. Aquadest 600

ml

Larutan I disterilkan dengan Autoclave pada suhu 115 0C selama 15 menit.

Larutan II berisi : 100 ml Telur Ayam atau Telur Bebek yang sudah dikocok

homogen dan secara aseptis.

Cara pembuatan larutan II :

1). Siapkan Erlenmeyer steril yang berisi Glass Parel atau Glass Bite (bila tidak ada

Glass Parel atau Glass Bite pakailah kerikil).

2). Telur Ayam atau Telur Bebek dicuci sampai bersih lalu direndam dalam Alkohol

70% selama ± 24 jam

Larutan III berisi : 20 ml Malacite Green steril

Larutan I+II+III dicampur secara aseptis, kemudian dibagi-bagikan kedalam tabung

reaksi steril secara aseptis sebanyak @ 5 ml. Lalu tabung-tabung ini dipanaskan

pada suhu 85 0C selama 45 menit dalam inspirator.

Medium ini dipakai untuk menumbuhkan bakteri Mycobacterium tuberculosis.

Medium PAI

Komposisi : 1. Telur 3 bagian

2. NaCl 0,85% 1 bagian

NB : cara membuat medium ini sama seperti membuat medium Lowenstein Jensen,

lalu dipanaskan pada suhu 90 0C selama 1 jam. Medium ini dipakai untuk

menumbuhkan Corynebacterium difteri

Medium CSA (Corynebacterium Selective Agar (Cat: 5416) 500 gram)

Cara pembuatan : Timbang 42 gram medium CSA + 1000 ml Aquadestpanaskan

ad. Larut. Autoclave pada suhu 121 0C selama 15 menit. Dinginkan sampai suhu ±

45-50 0C setelah itu tambah dengan 50 ml Serum/lt dan 5-10 ml Kalium Tellurite

1% campur.

Medium untuk bakteri Asam Laktat : Medium Semi Solid MRS + Juice Tomato

20%

Cara pembuatan Juice Tomato 20% :

1. Timbang Tomat sebanyak 20 gram

2. Tambah 100 ml Aquadest

3. Blender tomat tersebut

4. Saring dan ambil air tomat yang jernih

Cara pembuatan medium MRS + Juice Tomato 20%

1. Timbang medium MRS (Menurut kebutuhan)

2. Tambahkan 100 ml cairan Juice tomat tersebut kedalam medium MRS

3. Campur dan panaskan hingga larut

4. Sterilkan medium tersebut dengan Autoclave pada suhu 121 0C selama 15 menit

Medium untuk bakteri Pediococcus halophyllus : Medium MRS + NaCl 5%

Cara pembuatan NaCl 5% :

1. Timbang kristal NaCl sebanyak 5 gram

2. Tambah dengan aquadest 100 ml

3. Campur hingga larut

Cara pembuatan medium MRS + NaCl 5%

1. Timbang medium MRS (Menurut kebutuhan)

2. Tambahkan 100 ml larutan NaCl 5% tersebut kedalam medium MRS

3. Campur dan panaskan hingga larut

4. Sterilkan medium tersebut dengan Autoclave pada suhu 121 0C selama 15 menit

NB : Semua bakteri yang ditanam pada medium MRS hanya bertahan ± 2 minggu,

sehingga sebelum 2 minggu bakteri tersebut perlu diremajakan.

Macam-macam bakteri yang memakai medium MRS + Juice Tomato 20%; MRS

+ NaCl 5%; dan TSA (Tryptone Soya Agar) adalah :

1. Leuconostoc mesenteroides FNCC : 0023 Medium TSA

2. Acetobacter acetti FNCC : 0016 Medium TSA

3. Lactobacillus bulgaricus FNCC : 0041 Medium MRS + Juice

Tomato 20% suhu pertumbuhannya 43-46 0C

4. Lactobacillus plantarum FNCC : 0027 MRS + Juice Tomato

20%

5. Pediococcus halophyllus FNCC : 0032 MRS + NaCl 5%

6. Streptococcus thermophyllus FNCC : 0015 TSA suhu

pertumbuhannya 43-45 0C

7. Staphylococcus epidermidis FNCC : 0048 TSA

8. Enterococcus faecium FNCC : 0014 TSA

9. Staphylococcus aureus FNCC : 0047 TSA

10. Pseudomonas aeruginosa FNCC : 0063 TSA

11. Bacillus cereus FNCC : 0057 TSA

12. Bacillus subtilis FNCC : 0003 TSA

13. Salmonella thypynum FNCC : 0050 TSA

14. Lactobacillus acidophyllus FNCC : 0042 Medium MRS + Juice

Tomato 20% suhu pertumbuhannya 37-45 0C

15. Streptococcus lactis dan Streptococcus eremoris suhu pertumbuhannya

25 0C

Catatan : 1. NRRL : Nothern Regional Reaserch Laboratory.

2. ATCC : American Type Culture Colections.

3. FNCC : Farming National Culture Colection.

Macam-macam indikator pH yang biasa dipakai untuk pembuatan medium :

Nama Indikator Konsentrasi Nilai pH Perubahan

warna (Asam ke basa)

1. Thymol Blue 0,04% 1,2 - 2,8 Merah

ke Kuning

2. Methyl Orange 0,05% 3,1 - 4,4 Kuning

ke Biru

3. Brom Phenol Blue 0,48% 3,1 –

4,7 Kuning ke Biru

4. Brom Cresol Green 0,04% 3,8 –

5,4 Kuning ke Biru

5. Methyl Red 0,02% 4,2 –

6,3 Merah ke Kuning

6. Klor Fenol Red 0,04% 5,1 –

6,7 Kuning ke Merah

7. Brom Cresol Ungu 0,04% 5,4 –

7,0 Kuning ke Ungu

8. Brom Thymol Blue 0,04% 6,1 –

7,7 Kuning ke Biru

9. Phenol Red 0,02% 6,9 –

8,5 Kuning ke Merah

10. Cresol Red 0,02% 7,4 –

9,0 Kuning ke Merah

11. Thymol Blue 0,04% 8,0 –

9,6 Kuning ke Biru

12. Phenolpthlain 0,10% 8,3 – 10

Tanpa warna ke Merah

Macam dan cara pembuatan Indikator :

1. Methyl Orang (MO) : 0,5 gram MO bebas asam + 1000 ml aquadest, lalu disaring

2. Methyl Red (MR) : 1 gram MR bebas asam + 1000 ml aquadest panaskan atau

larutkan dalam 600 ml alkohol + 400 ml aquadest

3. Phenolpthlain (PP) : 5 gram PP + 500 ml alkohol + 500 ml aquadest

4. Thymolphthalein (TP) : 0,4 gram TP + 600 ml alkohol + 400 ml aquadest

5. α – Naphtholphthalein (α – NPt) : 1 gram α – NPt + 500 ml alkohol + 500 ml

aquadest

6. Methyl Yellow (MY) : 1 gram MY dilarutkan dalam 1000 ml alkohol 80%

7. Netral Red (NR) : 1 gram NR dilarutkan dalam 1000 ml alkohol 80%

8. Congo Red (CR) : 1 gram CR dilarutkan dalam 1000 ml alkohol 80% atau 1000 ml

aquadest

Indikator yang mempunyai gugus Sulphonephthalein biasanya bersifat

asam dan dapat larut dalam aquadest dengan penambahan NaOH.

Penambahan NaOH bertujuan untuk menetralkan potensial asam Sulphanilat.

9. Bromo Phenol Blue (BPB) : 1 gram BPB + 15 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

10. Bromo Cresol Green (BCG) : 1 gram BCG + 14,4 ml NaOH 0,1N + 1000 ml

aquadest

11. Bromo Cresol Purple (BCP) : 1 gram BCP + 18,6 ml NaOH 0,1N + 1000 ml

aquadest

12. Chloro Phenol Red (CPR) : 1 gram CPR + 23,6 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

13. Bromo Thymol Blue (BTB) : 1 gram BTB + 16 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

14. Phenol Red (PR) : 1 gram PR + 16 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

15. Thymol Blue (TB) : 1 gram TB + 21,5 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

16. Cresol Red (CR) : 1 gram CR + 26,2 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

17. Meta Cresol Purple (MCP) : 1 gram MCP + 26,2 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

18. Indikator Universal :

a. 0,25 gram Bromo Thymol Blue (BTB) + 500 ml alkohol + 1000 ml aquadest

b. 0,025 gram Thymol Blue (TB) + 500 ml alkohol + 1000 ml aquadest

c. 0,625 gram Methyl Red (MR) + 500 ml alkohol + 1000 ml aquadest

d. 0,5 gram Phenolphthalein (PP) + 500 ml alkohol + 1000 ml aquadest

Macam dan cara pembuatan reagent

1. Reagent EHRLICH.

a. Ehrlich A : - Paradimethyl amino benzaldehide 2 gram

- Alkohol 95% / spiritus fortior 95% 190 ml

- HCl pekat/HCl cone 40 ml

b. Ehlich B : - Kalium Persulfat (K2S2O8) jenuh dalam aquadest

2. METHYL RED : timbang 1gram Methyl Red tambah dengan 300 ml Alkohol 95%

dicampur sampai larut; setelah larut baru di tambah dengan 500 ml aquadest.

3. H2O2 3% : ambil 10 ml H2O2 pekat (30%) tambah dengan 90 ml aquadest.

4. KOH 40% : timbang 40 gram kristal KOH tambah dengan 100 ml aquadest.

5. Reagent BARRIT : timbang 5 gram serbuk α-Napthol lalu tambah dengan 95 ml

Alkohol 95%.

6. Reagent NESSLER : HgCl2 + KI sampai mengendap Jingga tepat larut + NaOH

(penambahan NaOH berhenti jika ditambah NH4Cl terjadi endapan Coklat).

7. Reagent ZN (Ziel Nellson)

ZN A : Larutan A : timbang 0,3 gram Basic Fuchine + 10 ml Alkohol 95%.

Larutan B : timbang 5 gram Phenol + 95 ml Aquadest.

Lalu larutan A dan Larutan B dicampur.

ZN B : Alkohol Asam 3% : ambil 3 ml HCl 37% (HCl Pekat/cone) atau ambil 5 ml

H2SO436 N (H2SO4 pekat/cone) + 100 ml Alkohol 95%.

ZN C : Timbang 0,3 gram serbuk Methylen Blue + 30 ml Alkohol 95% diaduk sampai

larut; lalu tambah dengan 100 ml Aquadest, aduk sampai larut setelah itu disaring.

8. Cat GRAM

a. Gram A : Larutan 1 : timbang 2 gram Kristal Violet + 20 ml Alkohol 95%

Larutan 2 : timbang 0,8 gram NH4 Oksalat + 80 ml Aquadest.

Campur larutan 1 dan larutan 2.

b. Gram B : timbang 1 gram kristal Iodine + 2 gram kristal KI; dicampur dan digerus;

Setelah tercampur baru tambah 300 ml Aquadest.

c. Gram C : ambil 700 ml Alkohol 95% + 300 ml Aceton.

d. Gram D : timbang 0,25 gram serbuk Safranin + 10 ml Alkohol 95% campur sampai

larut lalu tambah dengan 100 ml Aquadest.

9. KARBOL FUCHINE : ambil 10 ml larutan jenuh Fuchine dalam Alkohol 95% + 90

ml Fenol 5%.

10. LAKTOFENOL:

Isi : 1. Kristal Fenol 20 gram 3. Gliserine 40 ml

2. Asam Laktat 20 ml 4. Aquadest 40 ml

11. LAKTOFENOL COTTON BLUE:

Isi : 1. Kristal Fenol 20 gram 4. Cotton Blue 0,05 gram

2. Asam Laktat 20 ml 5. Aquadest 40 ml

3. Gliserine 40 ml

12. MALACHITE GREEN 5% : timbang 5 gram Kristal Malachite Green + 100 ml

Aquadest

13. MORDAN

Isi : 1. Tanin 20% 2 ml 3. Larutan jenuh Al K(SO4)2 atau Tawas

(Al(SO4)2 5 ml

2. HgCl2 jenuh 2 ml

14. NIGROSIN : timbang 10 gram serbuk Nigrosin; larutkan Nigrosin dalam 100 ml

aquadest, panaskan sampai mendidih selama 30 menit, tambah 0,5 ml Formalin

(sebagai pengawet) campur, lalu saring dengan kertas saring.

15. Reagent NEISSER :

o Neisser A : isi 1. Methylen Blue 0,3 gram 2.

Alkohol 95% 6 ml

3. Asam Acetat Glacial 15 ml 4. Aquadest panas 285 ml

o Neisser B : isi 1. Kristal Violet 1 gram 2. Alkohol 95%

10 ml

3. Aquadest panas 300 ml

o Neisser C : isi I. Bismark Brown : 1 gram + Aquadest panas : 500 ml.

II. Chrysoidine : 1 gram + Aquadest panas : 300 ml.

III.Vesuvine : 1 gram + Aquadest panas : 500 ml.

NB : Untuk Neisser C : PILIH SALAH SATU SAJA.(Pengecatan ini

dipakai untuk pewarnaan Granula)

16. ASAM ACETAT 5% : ambil 5 ml Asam Acetat Glacial (99,7%) + 100 ml Aquadest.

17. ASAM BORAT 0,2 N : timbang 12,4 gram kristal Asam Borat pekat + 1000 ml

Aquadest.

18. ASAM NITRAT 10% : ambil 14,5 ml HNO3 pekat (69%) + 100 ml Aquadest.

19. CuSO4 20% : timbang 20 gram kristal CuSO4.5H2O + 100 ml Aquadest.

20. FENOL 5% : timbang 5 gram kristal Fenol + 100 ml Aquadest.

21. GLISERINE 5% : ambil 5,26 ml + 100 ml Aquadest.

22. HCl 1% : ambil 1 ml HCl pekat (37%) + 100 ml Aquadest.

23. HCL 0,1N : ambil 10 ml HCl pekat (37%) + 1000 ml Aquadest.

24. HgCl2 : timbang 0,1 gram kristal HgCl2 + 100 ml Aquadest.

25. H2O2 3% : ambil 10 ml H2O2 pekat (30%) + 90 ml Aquadest.

26. K2HPO4/Na2HPO4 0,2 N: timbang 34,9 gram kristal K2HPO4/Na2HPO4+1000 ml

Aquadest.

27. NaCl 0,85% : timbang 0,85 gram kristal NaCl + 100 ml Aquadest.

28. NaOH 1N : timbang 40 gram kristal NaOH + 1000 ml Aquadest.

29. NaOH 0,2N : timbang 80 gram kristal NaOH + 1000 ml Aquadest.

30. VASPAR : timbang 50 gram Vaseline + 50 gram Parafine.

31. IODIUM 10% : timbang 10 gram kristal Iodium (I2) + 20 gram kristal KI dicampur

dan digerus

sambil diberi Aquadest 100 ml perlahan-lahan.

32. Larutan Pencuci (K2Cr2O7) : Timbang 4,9 gram kristal K2Cr2O7 + 100 ml Aquadest

campur hingga homogen lalu tambah secara pelan-pelan cairan H2SO4 pekat/cone

(sama banyak).

Nb : jangan dibalik cara masukkannya.

33. Larutan STANDART BROWN :

Isi : BaSO4 1% dan Na Citrate 1%

Cara : 1. Campurlah 7 ml BaSO4 1% dengan 49 ml NaCitrate 1%.

2. Bagilah campuran ini dalam 10 tabung reaksi steril, masing-masing 1 ml, 2 ml, 3

ml, dan seterusnya sampai tabung ke 10 yang berisi 10 ml.

3. Tambahkan dalam masing-masing tabung Na Citrate 1% sehingga volume

masing-masing tabung menjadi 10 ml.

34. STANDART BROWN III : 0,5 ml BaCl2.2H2O 1,17% + 99,5 ml H2SO4 (0,36 N) 1%

35. Larutan LDF (Larutan Dapar Fosfat = Larutan Buffer Fosfat)

a. LDF I : 1. K2HPO4 1 gram 2. KH2PO4 4 gram

3. Aquadest 300 ml pH : 6,0±0,1

b. LDF II : 1. K2HPO4 16,730 gram 2. KH2PO4 0,5 gram

3. Aquadest 1000 ml pH : 8,0±0,1

(NB : pengaturan pH dibuat dengan Asam Fosfat 18N dan KOH 10N yang sudah

diencerkan dengan aquadest steril sampai 500 ml)

36. Membuat HCl 25% sebanyak 100 ml

Cara : konsentrasi HCl pekat = 37%

Pakai Rumus : (VN)1 = (VN)2

37 25 V1. 37

V1. ------ = 100.------ -------- = 25 37.V1 =

2500

100 100 100

2500

V1 = --------- = 67,6 V1 = 67,6 ml.

37

Jadi dipipet HCl pekat (37%) sebanyak 67,6 ml lalu ditambah dengan 32,4 ml

Aquadest.

Note: diambil dari berbagai sumber

macam-medium-dan-reagent.pdf

Documents