lampiran lampiran 1. skema tahapan prosedur penelitian 1.1...
TRANSCRIPT
62
LAMPIRAN
Lampiran 1. Skema Tahapan Prosedur Penelitian
1.1 Tahapan Isolasi DNA
Disiapkan sampel darah dan KIT Qiagen
Dimasukkan sebanyak 20µl proteinase K ke dalam 1,5ml microcentrifuge
tube
Dimasukkan 200µl sampel darah yang sudah dilarutkan dalam PBS
Dimasukkan 200µl buffer AL kedalam sampel, kemudian dipipeting dan
divortex selama 15 detik
Diinkubasi selama 10 menit pada suhu 560C
Dimasukkan 200µl etanol (96-100%) ke dalam sampel, kemudian
dipipeting dan divortex selama 15 detik
Dipindahkan sampel ke dalam QIAamp Mini spin column, kemudian
disentrifugasi dengan kecepatan 8000rpm selama 1 menit.
Dipindahkan kembali sampel ke dalam QIAamp Mini spin column yang
baru, kemudian dimasukkan buffer AW2 sebanyak 500µl, lalu
disentrifugasi dengan kecepatan 14000rpm selama 4 menit.
Dipindahkan kembali sampel ke dalam QIAamp Mini spin column yang
baru, kemudian dimasukkan buffer AW1 sebanyak 500µl, lalu
disentrifugasi dengan kecepatan 8000rpm selama 1 menit.
63
1.2 Pembuatan TBE Buffer (1X) pH 8,3
1.3 Pembuatan Agarose 2,5%
Dipindahkan sampel ke dalam microcentrifuge tube, kemudian dimasukkan
200µl buffer AE disentrifugasi dengan kecepatan 8000rpm selama 1 menit.
Didapatkan DNA dan disimpan dalam frezer suhu – 40C
Disiapkan Tris Base sebanyak 5,4 gram
Ditambahkan boric acid 2,75 gram
Dimasukkan 0,5 M Na2EDTA sebanyak 2 mL
Ditambahkan aqudes sampai dengan 1000mL
Dihomogenkan dengan stirrer selama 5 menit
Disiapkan agarose 0,9 gram
Dilarutkan dalam TBE 1X 40 mL
Dipanaskan dalam microwave sampai larutan menjadi bening
Dibiarkan dalam suhu ruang (t : 50 -550C)
Ditambahkan EtBr (0,5µl)
64
Lampiran 2 : Hasil Penelitian dan Perhitungan
2.1 Data Hasil amplifikasi 100 sampel
Sampel Hasil Isolasi DNA Hasil PCR
Berhasil Tidak berhasil Uji Kuantitas II ID DD
1 √ - 1,87 1
2 √ - 1,78
1
3 √ - 1,85
1
4 √ - 1,80 1
5 √ - 1,98 1
6 √ - 1,82 1
7 √ - 1,78
1
8 √ - 1,83 1
9 √ - 1,91
1
10 √ - 1,82 1
11 √ - 1,88 1
12 √ - 1,86 1
13 √ - 1,89
1
14 √ - 1,91 1
15 √ - 1,93
1
16 √ - 1,84
1
17 √ - 1,80 1
18 √ - 1,82
1
19 √ - 1,87
1
20 √ - 1,81 1
21 √ - 1,91 1
22 √ - 1,82 1
23 √ - 1,81 1
24 √ - 1,94 1
25 √ - 1,85
1
26 √ - 1,89 1
27 √ - 1,83
1
28 √ - 1,85 1
29 √ - 1,82 1
30 √ - 1,82
1
Dimasukkan gel pada cetakan yang sudah berisi sisir
Dibiarkan selama 30 menit, hingga beku
Gel siap digunakan untuk running
65
31 √ - 1,91 1
32 √ - 1,91 1
33 √ - 1,89
1
34 √ - 1,81
1
35 √ - 1,79 1
36 √ - 2,01
1
37 √ - 1,88 1
38 √ - 1,83
1
39 √ - 1,92
1
40 √ - 1,87
1
41 √ - 1,83
1
42 √ - 1,80 1
43 √ - 1,91
1
44 √ - 1,88
1
45 √ - 1,82 1
46 √ - 1,81 1
47 √ - 1,89 1
48 √ - 1,87 1
49 √ - 1,92
1
50 √ - 1,94
1
51 √ - 1,85 1
52 √ - 1,83
1
53 √ - 1,93 1
54 √ - 1,87 1
55 √ - 1,98
1
56 √ - 1,87 1
57 √ - 1,72 1
58 √ - 1,88
1
59 √ - 2,05
1
60 √ - 1,87 1
61 √ - 1,93
1
62 √ - 2,11
1
63 √ - 1,91
1
64 √ - 1,83 1
65 √ - 1,99 1
66 √ - 2,08
1
67 √ - 2,13
1
68 √ - 1,87
1
69 √ - 1,84
1
70 √ - 1,80
1
71 √ - 1,85
1
72 √ - 2,03
1
73 √ - 1,72
1
74 √ - 1,83
1
75 √ - 1,78 1
76 √ - 1,73 1
77 √ - 1,92
1
78 √ - 1,94 1
79 √ - 1,85
1
66
80 √ - 1,83 1
81 √ - 1,93
1
82 √ - 1,87 1
83 √ - 1,99 1
84 √ - 2,08
1
85 √ - 2,13
1
86 √ - 1,87
1
87 √ - 1,84
1
88 √ - 1,87 1
89 √ - 1,78
1
90 √ - 1,85 1
91 √ - 1,80 1
92 √ - 1,98
1
93 √ - 1,82
1
94 √ - 1,78
1
95 √ - 1,83
1
96 √ - 1,93 1
97 √ - 1,87 1
98 √ - 1,98 1
99 √ - 1,87 1
100 √ - 1,72
1
100 0 48 28 24
2.2 : Perhitungan Frekuensi Genotip
Frekuensi genotip diketahui dari hasil amplifikasi dengan menggunakan rumus :
∑
Maka frekuensi genotip dari sampel DNA pasien hipertensi di rumah sakit dr.Saiful
Anwar yaitu :
Diketahui : Jumlah keseluruhan sampel : 100 sampel
Jumlah sampel dengan genotip II : 48 sampel
Jumlah sampel dengan genotip ID : 30 sampel
Jumlah sampel dengan genotip DD : 22 sampel
Maka :
∑
67
∑
∑
∑
∑
∑
Maka Frekuensi genotip :
II : ID: DD
48% : 30% : 22% atau 0,48 : 0,3 :0,22
2.3 : Perhitungan Frekuensi Alel
II + 2ID + DD = 1 dan I + D = 1
Maka : alel I = √
= √
= 0,69
alel D = I + D = 1
= 1- 0,69
= 0,31
Maka frekuensi alel I dan D yaitu,
0,69 : 0,31 atau 69 % : 31%