lampiran 1. perhitungan seri konsentrasi hidrokuinon dari...
TRANSCRIPT
38
Lampiran 1. Perhitungan seri konsentrasi hidrokuinon dari larutan baku
hidrokuinon
a. Ditimbang 10 mg, dilarutkan dengan etanol 96% hingga 25 ml
10 mg / 25 ml = 10.000 µg / 25 ml = 400 µg/ml
b. Dari 400 ppm dibuat seri konsentrasi 10, 20, 30, 40, 50 dan 60 ppm. Masing-
masing seri konsentrasi dilarutkan hingga 10 ml = 10.000 µl
Konsentrasi 10 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2
X x 400 = 10.000 x 10
400 X = 100.000
X = 100.000 : 400
X = 250 µl
Konsentrasi 20 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2
X x 400 = 10.000 x 20
400 X = 200.000
X = 200.000 : 400
X = 500 µl
Konsentrasi 30 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2
X x 400 = 10.000 x 30
400 X = 300.000
X = 300.000 : 400
X = 750 µl
39
Konsentrasi 40 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2
X x 400 = 10.000 x 40
400 X = 400.000
X = 400.000 : 400
X = 1000 µl
Konsentrasi 50 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2
X x 400 = 10.000 x 50
400 X = 500.000
X = 500.000 : 400
X = 1250 µl
Konsentrasi 60 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2
X x 400 = 10.000 x 60
400 X = 600.000
X = 600.000 : 400
X = 1500 µl
40
Lampiran 2. Perhitungan Uji Ketelitian Hidrokuinon
a. Perhitungan presisi kadar hidrokuinon
Replikasi 1 (absorbansi 0,509)
Y = BX + A
0,509 = 0,0103X + 0,1091
0,509 – 0,1091 = 0,0103X
0,3999 = 0,0103X
X = 38,83 µg/ml
Replikasi 2 (absorbansi 0,515)
Y = BX + A
0,515 = 0,0103X + 0,1091
0,515 – 0,1091 = 0,0103X
0,4059 = 0,0103X
X = 39,41 µg/ml
Replikasi 3 (absorbansi 0,511)
Y = BX + A
0,511 = 0,0103X + 0,1091
0,511 – 0,1091 = 0,0103X
0,4019 = 0,0103X
X = 39,02 µg/ml
41
Replikasi 4 (absorbansi 0,513)
Y = BX + A
0,513 = 0,0103X + 0,1091
0,513 – 0,1091 = 0,0103X
0,4039 = 0,0103X
X = 39,21 µg/ml
Replikasi 5 (absorbansi 0,51)
Y = BX + A
0,51 = 0,0103X + 0,1091
0,51 – 0,1091 = 0,0103X
0,4009 = 0,0103X
X = 38,92 µg/ml
Replikasi 6 (absorbansi 0,506)
Y = BX + A
0,506 = 0,0103X + 0,1091
0,506 – 0,1091 = 0,0103X
0,3999 = 0,0103X
X = 38,53 µg/ml
42
b. Perhitungan nilai RSD
x x 100%
Keterangan :
RSD = Standar deviasi relative
SD = Standar deviasi
x = Kadar rata-rata hidrokuinon dalam sampel
x 100%
RSD = 0,78%
Lampiran 3. Contoh Perhitungan Perolehan Kembali Hidrokuinon dengan Standard
Addition Method
1. Perolehan kembali pada sampel yang ditambah baku sejumlah 80% dari target kadar
analit dalam sampel
a. Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (B)
1) Absorbansi hidrokuinon = 0,307
2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091
adalah 19,21 µg/mL
b. Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan (C)
1) Absorbansi hidrokuinon = 0,311
2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091
adalah 19,60 µg/mL
c. Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (A)
1) Absorbansi total analit 1 = 0,507
43
Absorbansi total analit 2 = 0,511
Absorbansi total analit 3 = 0,509
2) Berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103x + 0,1091 maka :
Kadar total analit 1 = 38,63 µg/mL
Kadar total analit 2 = 39,02 µg/mL
Kadar total analit 3 = 38,83 µg/mL
Perhitungan perolehan kembali
a. Analit 1
% perolehan kembali =
= 99,06%
b. Analit 2
% perolehan kembali =
= 101,04%
c. Analit 3
% perolehan kembali =
= 100,05%
2. Perolehan kembali pada sampel yang ditambah baku sejumlah 100% dari target kadar
analit dalam sampel
a. Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (B)
1) Absorbansi hidrokuinon = 0,307
44
2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091
adalah 19,21 µg/mL
b. Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan (C)
1) Absorbansi hidrokuinon = 0,408
2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091
adalah 29,01 µg/mL
c. Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (A)
1) Absorbansi total analit 1 = 0,606
Absorbansi total analit 2 = 0,604
Absorbansi total analit 3 = 0,606
2) Berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091 maka :
Kadar total analit 1 = 48,24 µg/mL
Kadar total analit 2 = 48,04 µg/mL
Kadar total analit 3 = 48,24 µg/mL
Perhitungan perolehan kembali
a. Analit 1
% perolehan kembali =
= 100,03%
b. Analit 2
% perolehan kembali =
= 99,36%
c. Analit 3
45
% perolehan kembali =
= 100,03%
3. Perolehan kembali pada sampel yang ditambah baku sejumlah 120% dari target kadar
analit dalam sampel
a. Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (B)
1) Absorbansi hidrokuinon = 0,307
2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091
adalah 19,21 µg/mL
b. Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan (C)
1) Absorbansi hidrokuinon = 0,509
2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091
adalah 38,82 µg/mL
c. Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (A)
1) Absorbansi total analit 1 = 0,709
Absorbansi total analit 2 = 0,707
Absorbansi total analit 3 = 0,706
2) Berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103x + 0,1091 maka :
Kadar total analit 1 = 58,24 µg/mL
Kadar total analit 2 = 58,04 µg/mL
Kadar total analit 3 = 57,95 µg/mL
Perhitungan perolehan kembali
46
a. Analit 1
% perolehan kembali =
= 100,53%
b. Analit 2
% perolehan kembali =
= 100,03%
c. Analit 3
% perolehan kembali =
= 99,78%
Lampiran 4. Perhitungan LOD dan LOQ hidrokuinon dengan
Spektrofotometri Visibel
No X Xi² i-
( i-
)² Yi Yc
(Yi-
Yc) (Yi-Yc)²
1 10 100 -25 625 0,207 0,2121 -
0,0051 2,601E-05
2 20 400 -15 225 0,322 0,3151 0,0069 4,761E-05
47
3 30 900 -5 25 0,426 0,4181 0,0079 6,241E-05
4 40 1600 5 25 0,525 0,5211 0,0039 1,521E-05
5 50 2500 15 225 0,621 0,6241 -
0,0031 9,61E-06
6 60 3600 25 625 0,735 0,7271 0,0079 6,241E-05
35 9100 1750 0,00022326
Keterangan :
Yc diperoleh dari persamaan regresi linier dimana
Y = 0,0103 X + 0,1091
Yc = 0,0103 x kadar masing-masing larutan + 0,1091
1. 10 µg/ml = 0,0103 x 10 + 0,1091 = 0,2121
2. 20 µg/ml = 0,0103 x 20 + 0,1091 = 0,3151
3. 30 µg/ml = 0,0103 x 30 + 0,1091 = 0,4181
4. 40 µg/ml = 0,0103 x 40 + 0,1091 = 0,5211
5. 50 µg/ml = 0,0103 x 50 + 0,1091 = 0,6241
6. 60 µg/ml = 0,0103 x 60 + 0,1091 = 0,7271
∑
{
}
1/2
= 0,007471
48
⁄ √∑
∑
= 0,007471 x √
= 0,007471 x 0,93094
= 0,006955
Perhitungan LOD
Dihitung berdasarkan rumus Y = YB + 3SB
Y = 0,1091 + 3 (0,006955)
= 0,1091 + 0,020865
= 0,129965
Maka nilai LOD :
Y = 0,0103 X + 0,1091
0,129965 = 0,0103 X + 0,1091
X = 2,026 µg/ml
Perhitungan LOQ
Dihitung berdasarkan rumus Y = YB + 10SB
Y = 0,1091 + 10 (0,006955)
= 0,1091 + 0,06955
= 0,17865
49
Maka nilai LOQ :
Y = 0,0103 X + 0,1091
0,17865 = 0,0103 X + 0,1091
X = 6,572 µg/ml
Lampiran 5. Penetapan kadar hidrokuinon dalam sediaan krim dengan
metode Spektrofotometri Visibel
Persamaan regresi linier kurva baku adalah :
Y = bx + a
Y = 0,0103X + 0,1091
Replikasi I
Y = 0,0103X + 0,1091
0,316 = 0,0103X + 0,1091
0,2069 = 0,0103X
X = 20,09 µg/ml
Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah :
X = 20,087 µg/ml x 50
X = 1004,37 µg/ml
Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel :
1004,36 x 50 ÷ 1000 = 50,22 mg
Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel :
50,218 x 15 = 753,28 mg
Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel :
50
5% x 15 gram = 0,75 gram
= 750 mg
% kadar hidrokuinon =
x 100%
= 100,44 %
Replikasi II
Y = 0,0103X + 0,1091
0,317 = 0,0103X + 0,1091
0,208 = 0,0103X
X = 20,18 µg/ml
Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah :
X = 20,18 µg/ml x 50
X = 1009,0 µg/ml
Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel :
1009,0 x 50 ÷ 1000 = 50,45 mg
Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel :
50,45 x 15 = 756,92 mg
Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel :
5% x 15 gram = 0,75 gram
= 750 mg
% kadar hidrokuinon =
x 100%
51
= 100,92 %
Replikasi III
Y = 0,0103X + 0,1091
0,313 = 0,0103X + 0,1091
0,204 = 0,0103X
X = 19,80 µg/ml
Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah :
X = 19,80 µg/ml x 50
X = 989,81 µg/ml
Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel :
989,81 x 50 ÷ 1000 = 49,49 mg
Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel :
49,49 x 15 = 742,35 mg
Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel :
5% x 15 gram = 0,75 gram
= 750 mg
% kadar hidrokuinon =
x 100%
= 98,98 %
Replikasi IV
Y = 0,0103X + 0,1091
0,314 = 0,0103X + 0,1091
0,205 = 0,0103X
X = 19,89 µg/ml
52
Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah :
X = 19,89 µg/ml x 50
X = 994,66 µg/ml
Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel :
994,66 x 50 ÷ 1000 = 49,73 mg
Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel :
49,73 x 15 = 745,99 mg
Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel :
5% x 15 gram = 0,75 gram
= 750 mg
% kadar hidrokuinon =
x 100%
= 99,47%
Replikasi V
Y = 0,0103X + 0,1091
0,318 = 0,0103X + 0,1091
0,209 = 0,0103X
X = 20,28 µg/ml
Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah :
X = 20,28 µg/ml x 50
X = 1014,08 µg/ml
Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel :
1014,08 x 50 ÷ 1000 = 50,70 mg
53
Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel :
50,70 x 15 = 750,56 mg
Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel :
5% x 15 gram = 0,75 gram
= 750 mg
% kadar hidrokuinon =
x 100%
= 101,41 %
Replikasi VI
Y = 0,0103X + 0,1091
0,32 = 0,0103X + 0,1091
0,211 = 0,0103X
X = 20,48 µg/ml
Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah :
X = 20,48 µg/ml x 50
X = 1023,79 µg/ml
Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel :
1023,79 x 50 ÷ 1000 = 51,19 mg
Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel :
51,19 x 15 = 767,84 mg
Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel :
5% x 15 gram = 0,75 gram
= 750 mg
54
% kadar hidrokuinon =
x 100%
= 102,38 %
Kadar rata-rata hidrokuinon dalam sampel :
Rata-rata =
=
= 100,59 %
Lampiran 6. Hasil scanning optimasi panjang gelombang maksim
55
56
Lampiran 7. Certificate of Analysis hidrokuinon
57
Lampiran 7. Gambar alat yang digunakan dalam penelitian
Spektrofotometri UV-Vis (1800 Shimadzu)
58
Lampiran 8. Surat Keterangan Telah Melakukan Penelitian di
Laboratorium Kimia, Fakultas Farmasi, Universitas Wahid
Hasyim