Laboratorium FisIologi Ternak dan BIokimiaFAKULTAS PETERNAKAN UNIVERSITAS PADJADJARAN

PROTEIN ADALAH MAKRO MOLEKUL B.M. 5000 spi 1 JUTA DITEMUKAN PADA SETIAP BAGIAN DARI SEL 50% BOBOT KERING SEL

A. FUNGSI BIOLOGI PROTEIN• ENZIM• PROTEIN STRUKTURAL• PROTEIN MOTIL• PROTEIN NUTRIEN• PROTEIN HORMON• PROTEIN TRANSPOR• PROTEIN ANTIBODI• PROTEIN LAIN :

MONELIN RASA AMAT MANIS PLASMA DARAH BEBERAPA JENIS IKAN ANTI BEKU RESILIN, PERSENDIAN (ELASTIS) SAYAP INSEKTA

• PROTEIN BERSIFAT RACUN

B. BERAT MOLEKUL BEBERAPA PROTEIN

PROTEIN BM INSULIN (SAPI)

RIBONUKLEASE (PANCREAS SAPI)

LISOSINI (PUTIH TELUR)

MIOGLOBIN (JANTUNG KUDA)

KHIMOTRIPSIN (PANCREAS SAPI)

HEMOGLOBIN (MANUSIA)

SERUM ALBUMIN (MANUSIA)

HEKSOKINASE

- GLOBULIN (KUDA)

GLUTAMAT DEHIDROGENASE (HATI SAPI)

5.733

12.640

13.930

16.890

22.600

64.500

68.500

102.000

149.900

1.000.000

C. PENGGOLONGAN PROTEIN BERDASARKAN FUNGSI BIOLOGIS GOLONGAN CONTOH ENZIM - RIBONUKLEASE

- TRIPSIN PROTEIN TRANSPORT - HEMOGLOBIN

- ALBUMIN SERUM- MIOGLOBIN- 1 – LIPOPROTEIN

PROTEIN NUTRIEN - GLIADIN (GANDUM)- OVALBUMIN (TELUR)- KASEIN (SUSU)- FERITIN

PROTEIN KONTRAKTIL - AKTIN- MIOSIN- TUBULIN- DYNEIN

PROTEIN STRUKTURAL - KERATIN- FIBROIN- KOLAGEN- ELASTIN- PROTEOGLIKAN

PROTEIN PERTAHANAN - ANTIBODI- FIBRINOGEN- TROMBIN- TOKSIN BOTOLINUS- TOKSIN DIFTERI- BISA ULAR

PROTEIN PENGATUR - INSULIN- KORTIKOTROPIN- GH

HIDROLISIS HIDROLISIS

• PROTEIN ASAM AMINO C,H,N,O,S,P, Fe,Cu,Zn,I

(MAKRO MOLEKUL) (UNIT MOLEKUL) (UNSUR)

• SEMUA JENIS PROTEIN DENGAN FUNGSI YANG BERANEKA HANYA DIBANGUN DARI 20 A.A. SAJA

TIAP JENIS PROTEIN MENGANDUNG PROPORSI A SAM AMINO YANG BERBEDA NYATA DENGAN JENIS LAIN

• BEBERAPA PROTEIN MENGANDUNG GUGUS KIMIA LAIN DISAMPING A.A.

PROTEIN SEDERHANA HANYA MENGANDUNG ASAM AMINO, TIDAK GUGUS KIMIA LAIN

PROTEIN KONYUGASI

MENGHASILKAN KOMPONEN KIMIA LAIN DISAMPING ASAM AMINO SETELAH DIHIDROLISIS GUGUS PROSTETIK

D. PROTEIN KONYUGASI

GOLONGAN GG.PROSTETIK CONTOH

LIPOPROTEIN LIPID 1- LIPOPROTEIN DARAH

GLIKOPROTEIN KARBOHIDRAT - GLOBULIN DARAH

FOSFOPROTEIN GG.FOSFAT KASEIN - SUSU

HEMOPROTEIN HEME HEMOGLOBIN

FLAVOPROTEIN FLAVIN - NUKLEOTIDA SUKSINAT - DEHIDROGENASE

METALOPROTEIN BESI, SENG FERITIN, ALKOHOL DEHIDROGENASE

INI BERBEDA

INI SAMA

PROTEIN DENGAN RATUSAN ATAU RIBUAN MOLEKUL AA

AA BERSAMA-SAMA BERANTAI MEMBENTUK PROTEIN

® 20 AA DIKETEMUKAN DI DALAM PROTEIN, DINAMAKAN MONOMER SUATU RANTAI PROTEIN-PROTEIN DINAMAKAN POLYMER SETIAP AA DIBENTUK DARI C, H, O, N KADANG-KADANG S : C2H5O2N GLYCINE

C6H14O2N2 LYSINEC3H7O2NS CYSTEINE

ASAM AMINO• ASAM AMINO MEMPUNYAI GUGUS AMINO DAN GUGUS KARBOKSILAT TERIKAT PADA - ATOM KARBON YANG SAMA

O

O – H

C (1)

H – C – N

H

H

(2)

R

ACID GROUP

(CARBOXYL)

BASIC GROUP

(AMINO)

® MOLEKUL YANG MEMPUNYAI SIFAT ASAM DAN BASA DISEBUT : AMPHOTERIC PERBEDAAN AA k/ BEDA R GROUP

• MOLEKUL-MOLEKUL AMPHOTERIC MUNGKIN MEMBENTUK “ INTERNAL SALTS”, DISEBUT : ZWITTERIONS

O C

C – N

H H R

H+

O-– H

• PADA MOLEKUL ASAM AMINO TERDAPAT ATOM C ASIMETRIK® PADA RUMUS RUANG (STEREO) POSISI –NH2 ADA DUA (MEMILIKI 2 ISOMER RUANG)

R

H2N – C – H

C

O OH

R

H – C – NH2

CO OH

L – ASAM - AMINO

( LEAVO = KIRI)

D – ASAM AMINO

( DEXTRO = KANAN)

DI ALAM BANYAK DITEMUKAN : L – ASAM - AMINO

® ATOM C PADA KE 20 AA ASIMETRIS, KECUALI PADA AA GLISINA (GUGUS R-NYA ADALAH GUGUS H)

H

NH2 – C – H H

C

O OHGLISINA

• SINGKATAN AAASAM AMINO SINGKATAN LAMBANG

ALANIN

ARGININ

ASPARGIN

ASAM ASPARTAT

SISTEIN

GLUTAMIN

ASAM GLUTAMAT

GLISIN

HISTIDIN

ISOLEUCIN

LEUCIN

LISIN

METIONIN

FENILALANIN

PROLIN

SERIN

TREONIN

TRIPTOFAN

TIROSIN

VALIN

ALA

ARG

ASN

ASP

CYS

GLN

GLU

GLY

HIS

ILE

LEU

LYS

MET

PHE

PRO

SER

THR

TRP

TYR

VAL

A

R

N

D

C

Q

E

G

H

I

L

K

M

F

P

S

T

W

Y

V

• KE – 20 AA TERNYATA BERSIFAT OPTIKA MAMPU MEMUTAR BIDANG SINAR TERPOLARISASI KE KIRI ATAU KE KANAN ALAT YANG DAPAT MEMBACA BESARNYA PUTARAN : POLARIMETER, DENGAN RUMUS:

LAMBANG PUTARAN KHAS

pxcaC

D

O0

25

25OC = KONDISI SUHU PENGAMATAN

D = PANJANG GELOMBANG

aO = PUTARAN KHAS

p = PANJANG TABUNG POLARIMETER (dm)

c = KONSENTRASI DALAM gr/mlAndi Mushawwir, S.Pt., MP.

PUTARAN KHAS BEBERAPA AA

AA PUTARAN KHAS

L-ALANINL-ARAGININL-ISOLEUCINL-PENILALANINL-HISTIDINL-GLUTAMATL-PROLIN

+ 1,8+ 12,5+12,4- 34,5- 38,5+ 12,0- 86,2

GAMBAR IKATAN PEPTIDA

-------- HN – CH – C – NH – CH – C CH – C ----------

R1

OO O

NH R3

O

R2

RESIDU

ASAM AMINO-1

IKATAN PEPTIDA

RESIDU

ASAM AMINO-2RESIDU

ASAM AMINO-3

ASAM AMINO BERIKATAN (SECARA KOVALEN) SATU DENGAN YANG LAIN DALAM VARIASI URUTAN YANG BERMACAM-MACAM MEMBENTUK SUATU RANTAI POLIPEPTIDA

® IKATAN PEPTIDA MERUPAKAN IKATAN ANTARA GUGUS - KARBOKSIL DARI ASAM AMINO YANG SATU DENGAN GUGUS - AMINO DARI ASAM AMINO YANG LAINNYA

MAKA ILLUSTRASI PROTEIN SEBAGAI BERIKUT :

CN

CC C

CNN

H

HO

O H

R1 R3

R2

IKATAN PEPTIDA IKATAN PEPTIDA

BANYAK PERBEDAAN DIANTARA PROTEIN PERBEDAAN PROTEIN MENGANDUNG PERBEDAAN KOMBINASI ASAM-ASAM AMINO,

ABAB BERBEDA DENGAN BABA

BB A

A

CONTOH : TELUR DAGING WOOL ENZIM

HEMOGLOBIN MANUSIA 578 AS. AMINO

BM. 63000

INSULIN51 AS. AMINO

BM. 6000 SUATU ENZIM UREASE DARI

KACANG-KACANGAN 4500 ASAM AMINO

BM. 473000

ASAM-ASAM AMINO TIDAK HANYA DIPERGUNAKAN UNTUK MEMBENTUK PROTEIN-PROTEIN, TAPI BEBERAPA JUGA MERUPAKAN AWAL UNTUK SINTESIS KOMPONEN-KOMPONEN DI DALAM SEL, CONTOH :

AMINO ACIDS

GLISINE

GLUTAMIC ACID

ASPARTIC ACID

PART OF PYRIMIDINE MOLECULE PART OF

PURINE MOLECULE

PART OF PORPHYRIN MOLECULE

NUCLEIC ACIDS

CYTOCHROMES

HEMOGLOBIN

CONTOH LAIN :

GLISINE DIPERLUKAN UNTUK MENSINTESIS MAKRO MOLEKUL HEM DARI HEMOGLOBIN

TRIPTOPAN DIPERLUKAN UNTUK MENSINTESIS SENYAWA PADA SISTEM SYARAF

TIROSIN DIPERLUKAN UNTUK MENSINTESIS KOMPONEN KULIT, yi. MELANIN

• ASAM AMINO ESENSIAL (BAGI HEWAN ATAU MANUSIA) SEL TUBUH HEWAN/MANUSIA TIDAK DAPAT MENSINTESIS AA YANG DIPERLUKAN OLEH JARINGAN TUBUHNYA SENDIRI AA JENIS INI HARUS DIDATANGKAN D ARI LUAR (MAKANAN) AA INI DISEBUT AA ESENSIAL

CONTOH :HISTIDIN, METIONIN, VALIN, ISOLEUCIN, TREONIN, LISIN, TRIPTOPAN, ARGININ HANYA ESENSIAL PADA MASA BAYI

AA NON PROTEINAA YANG TIDAK TERGOLONG PADA 20 AA PEMBENTUK PROTEIN DISEBUT AA NON PROTEIN. FUNGSINYA BEBERAPA SUDAH ADA YANG DIKETAHUI

H

C4

H5

3CH2

2CHCOOH

N

H

4 – HIDROKSI PROLIN

CH3

NH

CH2

CHOH

(CH2)2

CHNH2

COOH

5

2

1

5 - HIDROKSILISIN

KEDUA AA INI DITEMUKAN PADA KOLAGEN DARI JARINGAN PENGIKAT

CH3

NH

(CH2)4

CHNH2

COOH

6

2

16 – N – METILISIN

AA INI DITEMUKAN PADA MIOSIN YAITU PROTEIN OTOT UNTUK KONTRAKSI

• BERDASARKAN KENYATAAN DI ATAS MAKA YANG MEMBEDAKAN KE 20 AA TERSEBUT ADALAH GUGUS R-NYA

® SIFAT – KIMIA FISIK DARI KE-20 ASAM -AMINO TERLETAK PADA GUGUS R-NYA SIFAT-SIFAT GG.R DARI 20 AA INI PADA LARUTAN BER- pH 7, SBB :

1. NON – POLAR, HIDROFOBIK TIDAK DAPAT MEMBENTUK IKATAN HIDROGEN DENGAN H2O ALANIN (Ala/A) ISOLEUSIN (Ileu/I) LEUSIN (Leu/L) METIONIN (Met/M) FENILALANIN (Phe/F) PROLIN (Pro/p) TRIPTOFAN (Trip/W) VALIN (Val/V)2. POLAR, TETAPI TIDAK BERMUATAN DAPAT MEMBENTUK IKATAN HIDROGEN DENGAN H2O ASPARAGIN (Asn/N) SISTEIN (Cys/C) GLUTAMIN (Gln/Q) GLISINA (Gly/G) SERINA (Ser/S) TREONIN (Thr/T) TIROSIN (Tyr/Y)3. GUGUS R BERMUATAN NEGATIF ASAM ASPARTAT (Asp/D) ASAM GLUTAMAT (Glu/E) 4. GUGUS R BERMUATAN POSITIF ARGININ (Arg/R) HISTIDIN (His/H) LISINA (Lys/K)

• SIFAT YANG BERBEDA-BEDA DARI GUGUS R AMAT PENTING KARENA AKAN BERPERANAN DALAM MEMBICARAKAN PEPTIDA DAN TERHADAP PROTEIN PRIMER, SEKUNDER, TERSIER DAN KUARTER

• KELOMPOK (1) 8 AA

PROLIN, GUGUS -AMINONYA DISUBSTITUSI OLEH GUGUS R-NYA SEHINGGA TIDAK BEBAS DAN TERBENTUKALAH STRUKTUR AROMATIK

TRIPTOFAN, GUGUS R-NYA MENGANDUNG GUGUS INDOL YANG BANYAK DITEMUKAN PADA BERBAGAI ZAT BIOLOGI

• KELOMPOK (2) 7 AA GUGUS R-NYA WALAUPUN TIDAK BERMUATAN, TETAPI POLAR, BERARTI DAPAT BERINTERAKSI DENGAN MOL. H2O MEMBENTUK IKATAN HIDROGEN DAN DIKATAKAN HIDROFILIK (SUKA AIR), ARTINYA AKAN LARUT DALAM AIR

INDOL

H

1. AA DENGAN GUGUS R NON POLAR

COOH IH2N – C – H

CH3

ALANIN COOH IH2 N– C – H

H – C – CH3

CH2

CH3

ISOLEUCIN

COOH I H2N– C – H

C

COOH IH2N – C – H

CH

H3C CH3

VALIN COOH I C – HHN CH2

H2C CH2

PROLIN

TRIPTOFAN

COOH I H2N– C – H

CH2

C= CH

NH

COOH IH2 N– C – H

CH2

CH

H3C CH3

LEUCIN

CH2

CH3

COOH I H2 N C H

CH2

S

METIONINFENILALANIN

2. AA DENGAN GUGUS R POLAR TAK BERMUATAN COOH I H2N C – H

GLISINE

H

COOH I H2N C – H

CH2

SH

SISTEIN COOH I H2N – C – H

CH2

OH2N

C

CH2

GLUTAMIN

COOH I H2N C – H

CH2OH

SERIN

COOH I H2N C – H

C

TIROSIN

OH

COOH I H2N- C – H

H C – OH

CH3

TREONIN

OH2N

COOH I H2N C – H

CH2

C

ASPARGIN

3. AA DENGAN GUGUS R BERMUATAN NEGATIF

COOH I H2N – C – H

CH2

COO-

ASAM ASPARTAT

ASAM ASPARTAT

COOH I H2N – C – H

CH2

COO-

CH2

4. AA DENGAN GUGUS R BERMUATAN POSITIF

COOH I H2N C – H

C- H2

C- H2

LISIN

C- H2

C- H2

N+H3

COOH I H2N - C – H

C- H2

C- H2

ARGININ

C- H2

N- H

NH2

C=N+H2 HISTIDIN

COOH I H2N – C – H

CH2

C – NH

CH

C – N+

H

• YANG MENGANDUNG GUGUS HIDROKSIL IALAH AA SERIN, THREONINA DAN TIROSINA GUGUS HIDROKSIL TIROSINA ADA PADA FENOL YANG BERFUNGSI SEBAGAI DONOR PROTON YANG LEMAH ATAU DIKATAKAN ASAM LEMAH

OH O- + H+

PROTON

• ASPARAGIN DAN GLUTAMIN MENGANDUNG GUGUS AMIDA GUGUS R. AA INI MIRIP DENGAN GUGUS R PADA ASAM ASPARTAT DAN ASAM GLUTAMAT PADA KELOMPOK (3)

- CH2 – CO

NH2

- CH2 – CO

O-

ASPARAGIN ASAM. ASPARTAT

- CH2 – CH2 – CO

NH2

- CH2 – CH2 – CO

O-

GLUTAMIN ASAM. GLUTAMAT

• SISTEIN MENGANDUNG GUGUS SULFIDRIL ATAU TIOL YANG CENDERUNG AKAN MELEPASKAN H+

® SISTEIN DAPAT MEMBENTUK SISTIN JIKA DUA MOL SISTEIN BERINTERAKSI MEMBENTUK IKATAN KOVALEN SEBAGAI JEMBATAN DISULFIDA, MISAL PADA PROTEIN

H – C – NH2

COOH I H2N C – H

C- H2

SISTEIN

C- H2S H H S

COOH

SISTEIN

2H

COOH I H2N – CH

SISTIN

C H2

H – C – NH2

COOH

JEMBATAN DISULFIDA

C- H2 S – S

® SISTIN DITEMUKAN PADA MAKMOLEKUL INSULIN DAN IMMUNOGLOBULIN DIMANA JEMBATAN DISULFIDA MENGHUBUNGKAN DUA RANTAI POLIPEPTIDA

• GUGUS R DARI GLISIN BERUPA ATOM HIDROGEN YANG PENGARUHNYA TERHADAP GUGUS AMINO DAN KARBOKSIL SEDIKIT SEKALI

• KELOMPOK (3) 2 AA R – KEDUANYA BERMUATAN TOTAL NEGATIF PADA pH 7.0, KEDUANYA MEMILIKI GUGUS KARBOKSIL KEDUA AA INI HANYA SEDIKIT BERBEDA DENGAN ASPARAGIN DAN GLUTAMIN

• KELOMPOK (4) 3 AA GUGUS R- NYA BERMUATAN TOTAL POSITIF PADA pH 7,0

GUGUS R LISIN MENGANDUNG GUGUS ASAM AMINO PADA POSISI E (UJUNG RANTAI)

ARGININ PADA GUGUS R-NYA MENGANDUNG GUGUS GUANIDIUM YAITU SUATU BASA N BASA GUANIDIUM KIRA-KIRA 1000 KALI LEBIH KUAT DARI BASA NH3

NH+3

H2N

C

NH2

ION GUANIDIUM

(ASAM KONYUGAT BASA GUANIDIN)

• HISTIDIN PADA GUGUS R-NYA MENGANDUNG GUGUS INI DAZOL GUGUS IMIDAZOL INI SEDIKIT SEKALI MENGION DAN DAPAT BEKERJA MENGIKAT ION LOGAM

GUGUS IMIDAZOL

N :HN

• AA DALAM LARUTAN JIKA AA DILARUTKAN DALAM AIR, MAKA KEDUA GUGUS FUNGSIONIL AKAN MENGALAMI IONISASI/DISOSIASI

• MISAL ALANIN

H H I R – C – COO- R – C – COO- + H+

NH3 NH2

+

AKAN MENGHASILKAN H+ BERARTI SEBAGAI DONOR PROTON, SEHINGGA BERPERAN ASAM

• ATAU

H H I R – C – COO- +H+ R – C – COOH NH3 NH3

+ +

AKAN MENERIMA H+ BERARTI SEBAGAI AKSEPTOR PROTON, SEHINGGA BERPERAN BASA

COOH COO-

IH2N – C – H H3

+N – C – H R R

BENTUK NON-ORGANIK BENTUK DIPOLAR (ZWITERION)

TITIK ISOLISTRIK (TIL) pH TIL

REAKSI SPESIFIK AAAA APAPUN JIKA DIREAKSIKAN DENGAN 2 MOL NINHIDRIN, AKAN MENGHASILKAN PIGMEN BIRU, KECUALI PROLIN DAN HIDROKSIPROLIN AKAN MENGHASILKAN PIGMEN KUNING

R – CH – COO-

+ 2 NH3

+

O

C

CC

OH

OH

NINHIDRIN

OAA

C + 3H2O +N

PIGMEN BIRU

O

C

C

O-

C

O

C

C

O

+ R CO

H

CO2 + H+

GUGUS AMINO DENGAN 1- FLUORO 2,4 – DINITRO BENZEN (FDNB) AKAN MENGHASILKAN SENYAWA TURUNAN DINITROFENIL (DNP) YANG BERWARNA KUNING-MERAH SPESIFIK

NH3+

R – CH – COO- + O2N

NO2

F

O2N

RNO2

NH CH + HF

COO-TURUNAN DNP

(MERAH – KUNING)

PEPTIDA UNIT KERANGKA SUATU PEPTIDA DISEBUT RESIDU AA

DIPEPTIDA DIBANGUN OLEH DUA RESIDU AA DST UJUNG-UJUNG SUATU PEPTIDA MASIH MEMILIKI GUGUS KARBOKSIL DAN GUGUS AMINO

BEBAS DISEBUT : - UJUNG C - UJUNG N

PENAMAAN PEPTIDA DIDASARKAN PADA KOMPONEN ASAM AMINONYA. URUTAN DIMULAI DARI RANTAI N-UJUNG

NH2 – CH –

CH2

OH

O

C – NH

O

CH –

H

O

C – NH

O O

C – NH

O

CH

CH2

CH –

CH3

OH

N - UJUNG

O

- C – NH

O

CH – COOH

CH2

CH

(CH3)2

C- UJUNG

SER

GLI

TIR ALA

LESSERILGLISILTIROSILALANILLESINA

SIFAT ASAM-BASA PEPTIDA DITENTUKAN OLEH GUGUS UJUNGNYA NH2 DAN –COOH DAN GUGUS R YANG DAPAT BERIONISASI (1) N-UJUNG (BASA), (2) C-UJUNG (ASAM), (3) GUGUS R (ASAM/BASA)

PROTEIN PROTEIN DIBANGUN DARI UNIT KERANGKA 20 RESIDU AA SIFAT-SIFAT KIMIA FISIK PROTEIN MENGIKUTI SIFAT KIMIA FISIK AA SEBAGAI UNIT KERANGKA

PROTEIN STRUKTUR PRIMER

H

C

R2

S

S

R2

C

N

H

R1

C

HC

O

H

N

O

CC

O

N

H

R2

C

H

NC

R4

O

C

O

C

H

NH

C

R1

N

H

O

C

O

C

H

NC

R3

N

H

R4

CC

O

O

C

PROTEIN STRUKTUR SEKUNDER

C IIO

HIN

C IIO

HIN

SATU PUTARAN PENUH, MENGANDUNG 3,6 RESIDU AA

STRUKTUR PRIMER BERPILIN

PROTEIN STRUKTUR TERSIER

COOH

NH2

PROTEIN STRUKTUR KWARTERER

+

DUA MOL.

PROTOMET.

PROTEIN STRUKTUR KWARTNER

REAKSI WARNA ASAM AMINO REAKSI NINHIDRIN

ASAM AMINO PEPTIDA

+ NINHIDRIN

ZAT WARNA BIRU

ANALISA ASAM AMINO BERDASARKAN DAYA LARUT DAN SIFAT ASAM BASANYA

• KROMATOGRAFI PARTISI• KROMATOGRAFI PENUKAR ION• KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS• ELEKTROFORESIS

DENATURASI PERUBAHAN STRUKTUR PROTEIN AKIBAT PEMANASAN 60 – 70OC

PUTIH BENINGCONTOH : PUTIH TELUR

PUTIH PADAT

DIPANASKAN

TIDAK DAPAT KEMBALI BENING SUBSTITUSI & TRANSMISI ASAM AMINO

ASAM AMINO ESENSIAL DAPAT DIBENTUK (DISUBSTITUSI) DARI ASAM AMINO NON ESENSIALCONTOH : METIONIN, DISUBSTITUSI DENGAN SISTINFENILALANIN, DISUBSTITUSI DENGAN TIROSIN

ISOLASI/PEMURNIAN PROTEINRUMIT DAN SULITCONTOH : ISOLASI PROTEIN YANG ADA DALAM SUKSINAT DEHIDROGENASE (ADA DALAM MITOCHONDRIA) TAHAP PEMURNIAN /ISOLASI

o PEMECAHAN SELo PEMISAHAN MITOCHONDRIAo FRAKSINASI PROTEIN TAHAP DEMI TAHAP