Analisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat Kalibrasi Adalah suatu proses menghubungkan sinyal analitik yang diukur (respon alat) dengan konsentrasi analit. Metode Kalibrasi: A. Kurva Kalibrasi (Kurva Baku) B. Metode Adisi Standard C. Metode Standard Internal Analisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat A. KURVA KALIBRASI Sejumlah larutan baku dengan dengan variasi konsentrasi disiapkan, kemudian diukur menggunakan instrumen, dan respon instrumen dicatat. Larutan Baku Larutan analit yg telah diketahui konsentrasinya. Larutan baku dibuat agar dalam pengukuran menggunakan instrumen tidak melampaui batas linearitas (LOL = Limit of Linearity) dari instrumen. Kurva Kalibrasi Plot konsentrasi baku (X) versus respon instrumen (Y). Hubungan antara konsentrasi baku dan respon instrumen adalah linier. Analisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat A. KURVA KALIBRASI Konsentrasi Respon Instrumen (RI)RI terkoreksi (Si Sbl) 0,000.0130.000 6.010.1010.088 31.800.8110.798 63.501.4981.485 88.902.0942.081 Sampel0.9240.875 Kurva Kalibrasi0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 020406080100 Konsentrasi RI terkoreksi 1. Penyiapan Kurva Kalibrasi Analisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat A. KURVA KALIBRASI xi yi xi2 yi2 xiyi ConcentrationIRCorr. IR 0.0000.0130.0000.0000000.0000000.000000 6.0100.1010.08836.1201000.0077440.528880 31.8000.8110.7981011.2400000.63680425.376400 63.5001.4981.4854032.2500002.20522594.297500 88.9002.0942.0817903.2100004.330561185.000900 E = 190.2104.45212982.8201007.180334305.203680 Mean38.0420.890 Gunakan metode regresi linier untuk menghitung persamaan fitting y = mx + b 1. Penyiapan Kurva Kalibrasi ( )( )( )( )( )( ) intercept) - (Y (Slope)

yy xxxyxx xyi ii i i i xyii i yyii i xxS SSrm x - y b S S mNy xy x y y x x SNyy y y SNxx x x S== = = = = = = =222222( )( )( )( )( )( ) intercept) - (Y (Slope)

yy xxxyxx xyi ii i i i xyii i yyii i xxS SSrm x - y b S S mNy xy x y y x x SNyy y y SNxx x x S== = = = = = = =222222( )( )( )( )( )( ) intercept) - (Y (Slope)

yy xxxyxx xyi ii i i i xyii i yyii i xxS SSrm x - y b S S mNy xy x y y x x SNyy y y SNxx x x S== = = = = = = =222222Metode Kalibrasi Alat A. KURVA KALIBRASI 1. Penyiapan Kurva Kalibrasi Analisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat A. KURVA KALIBRASI Gunakan persamaan fitting y = mx + b untuk menghitung konsentrasi sampel 2. Interpretasi Kurva Kalibrasi m = 0.0236&b = -0.00881 y = 0.0236x 0.00881 Sehingga: x = (y b)/m x = (y + 0.00881)/0.0236 dan: x (konsentrasi sampel) = (0.875+0.00881)/0.0236 = 37.4 Analisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat B. METODE ADISI STANDARD Digunakan untuk analit dalam matriks yang kompleks, yg mengakibatkan terjadinya interferensi dalam respon instrumen (RI). Contoh: darah, sedimen, serum, dll. Sering disebut juga metode SPIKING. Metode: 1. Siapkan beberapa aliquot identik, Vx, dari sampel. 2. Tambahkan sejumlah volume tertentu secara bervariasi, Vs, larutan baku yang telah diketahui konsentrasinya, cs, pada tiap aliquot. 3. Encerkan (add-kan) masing2 larutan hingga volume tertentu, Vt 4. Ukurlah dengan instrumen untuk mendapatkan respon instrumen, S 5. Hitung konsentrasi sampel, cx, dengan persamaan berikut: Analisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat B. METODE ADISI STANDARD Persamaan Adisi Standard tx xts sVc kVVc kVS + =S =sinyal atau respon instrumen k=konstanta proporsionalitas Vs =volume standard yg ditambahkan cs =konsentrasi standard Vx =volume aliquot sampel cx =konsentrasi sample Vt =volume total pengenceran Analisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat B. METODE ADISI STANDARD Plot respon instrumen (S) vs volume standard (Vs) b mV Ss + =V s Respons Instrumen ( S ) m =A y/ A x b = y-intercept (V s ) 0 Analisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat B. METODE ADISI STANDARD Hitung konsentrasi sampel. Kombinasikan: b mV Ss + = dan tx xts sVc kVVc kVS + =xsxmVbcc =Analisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat B. METODE ADISI STANDARD Contoh:Metode Adisi Standard Arsenik in suatu sampel biologi ditetapkan dengan metode adisi standard.10 mL aliquot sample dipipet ke dalam 5 buah labu takar 100 mL. Variasi volume dari standard 22.1 ppm ditambahkan ke dalam 4 labu takar, masing2 diencerkan hingga batas. Absorbansi masing2 larutan ditentukan. Sample (mL)Standard (mL)Absorbance 10.00.000.156 10.05.000.195 10.010.000.239 10.015.000.276 10.020.000.320 Hitung konsentrasi sampel!Analisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat B. METODE ADISI STANDARD Contoh:Metode Adisi Standard Adisi Standard Arsenik0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 05101520 Volume Standard (V s ) Absorbance m = 0.00818 b = 0.1554 s m= 0.000119 s b= 0.001463 xsxV mc bc..=) 10 )( 00818 . 0 () 1 . 22 )( 1554 . 0 (=xcppm 98 . 41 =xcAnalisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat B. METODE ADISI STANDARD Contoh:Metode Adisi Standard Penggunaan AdisiStandard untuk menghitung konsentrasi sampel 1)Buat 2 larutan yg mengandung aliquot sampel yg sama, tambahkan standar pada salah satu larutan. Encerkan hingga batas (100 mL) ( )xs sxV S SV c Sc1 21=dimana:S1 = respon instrumen sampel S2 = respon instrumen sampel + spike 2)Ukurlah respon instrumennya (absorbansi) pada kedua larutan. 3)Hitung konsentrasi sampel dengan persamaan berikut: Analisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat B. METODE ADISI STANDARD Contoh: Standard Addition 2 titik Sebanyak 25.0 mL aliquot larutan quinine diencerkan hingga 50.0 mL dan diukur absorbansinya, mempunyai absorbansi 0.416 pada 348 nm diukur dalam kuvet setebal 1.00 cm. Sebanyak 25 mL aliquot kedua dicampur dengan 10.0 mL larutan yg mengandung 23.4 ppm quinine. Setelah diencerkan hingga50.0 mL, larutan ini memiliki absorbansi 0.610 (kuvet 1.00 cm pada panjang gelombang yg sama). Hitung konsentrasi (ppm) quinine dalam sampel. S1 = 0.416 S2 = 0.610 Vs = 10 mL cs = 23.4 ppm Vx = 25.0 mL ppm 07 . 20) 0 . 25 )( 416 . 0 610 . 0 () 0 . 10 )( 4 . 23 )( 416 . 0 (==xc( )xs sxV S SV c Sc1 21=Analisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat C. METODE STANDARD INTERNAL Umumnya digunakan dalam GC dan HPLC Suatu senyawa reference/pembanding (standard internal) dengan volume/massa yg konstan ditambahkan ke dalam larutan standar dan sampel. Rasio analit terhadap standard internal digunakan sebagai sumbu Y dalam plot kurva kalibrasi dan untuk menetapkan sampel. Analisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat C. METODE STANDARD INTERNAL Hexane Calibration Curvey = 31641x + 142659R2 = 0.81710.00E+005.00E+051.00E+061.50E+062.00E+062.50E+060 10 20 30 40 50 60Conc. (ppt hexane)Peak AreaAnalisis Instrumen I Arie BS Metode Kalibrasi Alat C. METODE STANDARD INTERNAL Hexane/Octane Calibration Curvey = 0.0359x + 0.0772R2 = 0.999800.511.522.50 10 20 30 40 50 60Conc. (ppt hexane)Heaxne/Octane Peak Area