João Silva Neves

Introdução Grupo de Neuroendocrinologia e Neurogénese

- Culturas de células

- Técnicas laboratoriais

Tipos de cultura de células Culturas primárias- culturas feitas directamente a

partir de tecidos animais/vegetais.

Linha celular- células que foram retiradas de tecidos animais, e que foram modificadas de modo a poderem proliferar indefinidamente.

Vantagens

Culturas primárias: Células não modificadas geneticamente que apresentam as características das células in vivo.

Linhas celulares: Células imortalizadas que proliferam indefinidamente permitindo que sejam usadas muitas vezes.

Culturas primárias: Utilização limitada (proliferação reduzida ou inexistente). Utilização de um número elevado de animais.

Linhas celulares: Células geneticamente modificadas que podem não apresentar as características das células in vivo.

Desvantagens

Exemplos Linhas celulares

3T3-L1 N42

Culturas primárias- Hipotálamo

Técnicas laboratoriais Para estudar proteínas:

- Imunocitoquímica/ Imunohistoquímica

- Western blot.

Para estudar lípidos:

- Oil red

Para estudar RNA:

- RT-PCR

Para estudar proteínas Imunocitoquímica/Imunohistoquímica: Técnica que

usa anticorpos específicos para a detecção de proteínas existentes nas células/tecidos, sem alteração da sua morfologia

Os anticorpos estão ligados a sondas, permitindo a sua visualização a microscópio de fluorescência.

TUJ

DAPI

Para estudar proteínas

Western Blot: Técnica que usa anticorpos específicos para a detecção de proteínas existentes num lisado de células ou tecido

As proteínas são separadas de acordo com o peso molecular e reconhecidas através da ligação a anticorpos específicos.

Para estudar lípidos Oil Red: Técnica utilizada com o objectivo de

observar/quantificar as gotas lipídicas nas células, através do reagente Oil Red O que cora os lípidos de vermelho.

Para estudar RNA RT-PCR: É uma reacção que permite detectar o RNA

das células.

- Utiliza como molde uma cadeia simples de RNA.

- A partir do RNA cria-se uma cadeia de DNA complementar, cDNA, pela utilização da enzima transcriptase reversa (Transcrição reversa – RT)

Transcriptase reversa

Para estudar RNA RT-PCR: É uma reacção que permite detectar o RNA

das células.

- A cadeia de cDNA é amplificada numa reacção em que se usa a enzima DNA polimerase (reacção em cadeia da polimerase – PCR)

Trabalho realizado por:

João Pedro Silva Neves

FIM