ISOLASI GENISTEIN DARI TEMPE SECARAKROMATOGRAFI

Wuryanl

Puslitbang Kimia Terapan - L1PIKawasan PUSPIPTEK, Serpong 15310

INTISARIKeberadaan genisteln dalam tempe dapat dideteksi dengan

menggunakan berbagai tehnik kromatograJi seperti KromatograJiLapis-Tlpis (KLT), Kolom dan Calran Kinerja Tinggi (KCKT).Pada penelitlan ini, isolasi dan pemurnlan genistein dari tempetelah dllakukan secara KLT. Anallsa secara spektrofotometri danspektrometri massa, penyemprotan dengan reagen kromogenikserta hidrollsis dilakukan untuk mengidentifikasi genistein. Kuan-tifikasi dilakukan dengan menggunakan spektrofotometer, dandiperoleh bahwa 100g tempe yang dibuat di laboratorium me-ngandung 13,80 mg genistein.

ABSTRACTThe presence of genisteln in tempe (fermented soybean) could

be detected by using various chromatographic techniques, suchas Thin-Layer, Column and High Pressure Liquid Chromato-graphy. In this experiment, TLC was chosen for the isolation andpurification of genistein from tempe. Spectrophotometry, MassSpectrometry, spraying with chromogenic reagents and hydro-lysis were carried out for identifying genistein. Quantificationwas carried out spectrophotometrlcally and it was shown thatthe laboratory prepared tempe (l00 g) contained 13.80 mg ofgenisteln.

PENDAHULUANGenistein dikenal mempunyai bcrbaga! sifat, sepcrti

misalnya oestrogenik (1) dan antioksidan (2). Akhir-akhirini, beberapa pencliti dari Jerman mclaporkan bahwa genis-tein mampu menghentikan pertumbuhan kapiler darahyang baru. Penelitian masih terus dilanjutkan untuk mcng-uji apakah senyawa yang termasuk kedalam kclompokisollavonoid ini juga dapat meneegah perkembangankanker.

Isolasi genistein bcserta turunannya 7-0-glukosida ge-nistein dari kedelai, pertama kali dilakukan olch Walter(3). Menyusul Nash et al (4) mclaporkan kemudian bahwakedua scnyawa ini terdapat pula dalam produk kedelailainnya yaitu konsentrat protein kcdclai, kedeJai bebaslcmak dan soy flakes (5). Scdangkan Farmakalidis danMurphy (6) menemukannya dalarn roasted, defatted soyflakes.

Berbagai tchnik kromatografi tclah digunakan untukmclakukan analisis kualitatif gcnistcin dalam tempe. Misal-

24

nya Gyorgy et al. (7) menggunakan sistim kromatografikertas, sedangkan Zilliken (8) menggunakan tehnik kro-matografi gabungan antara tehnik Kolom dan KLT. Untuktujuan yang sama Murakami et al. (9) menerapkan tehnikKCKT. Kelompok peneliti tersebut di atas menyimpulkanbahwa tempe mengandung genistein.

SeJain untuk mengukur kadar genistein dalam tempe,penelitian ini juga bertujuan untuk mendapatkan genisteinmumi. Konsentrasi genistein ditetapkan secara spekrofoto-metri, sedangkan kromatografi kolom dan KLT diterapkanuntuk mengisolasi genistein dari senyawa isoflavon lainnyayang ada dalam tempe serta untuk meningkatkan tingkatkemumian isolat genistein. Tehnik KCKT, Spektrofotome-ter dan Spektrometer Masa digunakan pada tahap identifi-kasi.

PERCOBAANBahan

Hasil fcrmcntasi kedele dengan Rhizopus oligosporusSaito (lMI 174457), pelat lapis tipis (Merck Silica-gel 60yang mengandung indikator lluoresent F-254, teballapisan2 mm) serta berbagai senyawa kimia bermutu pro-anali-sis tclah digunakan pada pencJitian ini.

Alat

Peralatan ekstraksi (Soxhlct), vacuum evaporator,mcsin KCKT (model Gilson seri 302), SpcktrofotometerUV-Visible (Unicam LAMDA 5), Spektrometer (KratosMS 80 RFA) dan alat-alatgelas.

Penyiapan Contoh

Kedelai kering (1 kg) direndam semalam dalam air(3 L) yang mengandung 0.01% asam asetat pada suhuruang, untuk sclanjutnya dikuliti, dircbus (30 mcnit) danditiriskan. Kedelai (300-400g) kemudian diinokulasidcngan larutan spora R. oligosporus scbanyak 3 mL yangmcngandung sckitar 6x1Q6 spora, Kacang basil inokulasidimasukkan ke dalam bcberapa kantung plastik bcningbcrlubang-lubang (20x30 em), dan diinkubasi pada suhu30°C sclama 36 jam. Scbclum digiling, tempe yang di-

JKTI, VOL. 4 - No.1, Junl, 1994

peroleh diiris (0.5 x 3 em) dan dikeringkan dalam oven(50°C, 12 jam).

Ekstraksi minyak dari tepung tempe (100g) dilakukandalam perala tan Soxhlet dengan menggunakan n-heksanaselama 3-4 jam. Tempe bebas lemak (30g) dicampurdengan campuran metanol-air (80% metanol, 20% air),lalu disimpan dalarn lemari pendingin (4°C) semalam,Perbandingan antara tempe bebas lemak dan cairan metanolini ialah 1:10. Campuran ini selanjutnya disaring, pelarut-nya diuapkan di bawah tekanan rendah pada suhu sekitar40°C. Residu yang tertinggal dilarutkan kembali denganmetanol murni (120 mL), bagian supernatan kembalidiuapkan sampai setengahnya dan disimpan pada suhu-20°C selama 20 menit Endapan yang terbentuk dianalisakandungan isoflavonnya secara kromatografi (KLT, silikagel dalam campuran etil asetat-asam format-air dengankomposisi 10:2:3). Apabila hasil pengecekan menunjukkanbahwa isoflavon telah diekstraksi seluruhnya, endapan di-buang melalui penyaringan. Sedangkan bagian filtratnyadiuapkan dan disimpan sampai diperlukan. Bagan penyiap-an cuplikan adalah sebagai berikut:

Biji kcdclai

1direndarn, dikuliti,dire bus, ditiriskan,diinokulasi dengan R.oligosporusdikemas (kantung plastik)diinkubasi (30·C, 36 jam)

Tempe

~

di iris- irisdikeringkan dalam oven (SO·C,12 jam)digiling

Tepuog tempe

• diekstraksi (Soxhlet,n-heksana)

Tepuog tempe bebas lemak

! dicampur dengan metanol (80%)disimpan di lemari es WC,12 jam)disaring

FiUrat tempe (1)

-I cairan metanol diuapkant . (vacuum evaporator, 4O.C)

_ Res~. u tempe. dilarutkan dalam metanoldisaring

FLitrat tempe (2)diuapkan sampai setengahnyadisimpan pada (-20·C,20 menit)disaring

Eodapan bebas isoflavon(dibuang)

Filtrat tempe (3)(disimpan)

Kromatografi Lapis Tipis (KLT)Filtrat tempe (100 mg) dilarutkan dalam metanol (5

mL),lalu dibububkan pada pelat lapis tipis. PeIat-pclat inidimasukkan ke dalam bejana pengembangan berisi campur-

JKTI, VOL. 4 - No.1, Juni, 1994

an pelarut etil asetat-asam format (90%)-air (10:2:3).Kemudian pelat disinari dengan sinar ultra violet padagelombang pendek (254 nm) dan panjang (365 nm) untukmendeteksi adanya bagian yang berfluoresensi. Bagianyang berfluoresensi ini dikerok dan dielusi dengan metanol(2 x 2.5 mL). Eluat diuapkan dibawah tekanan rendab padasuhu 40°C, dan senyawa yang larut didalamnya dimurnikansecara KLT (e1uen metanol-kloroform,1:9) untuk kemudiandiidentifikasi.

Kromatografi Cairan Kinerja Tinggi (KCKT)

Contoh ekstrak tempe yang mengandung isoflavondilarutkan dengan metanol (100 mL), lalu 20 ~ diinjeksi-kan ke dalam mesin KCKT dengan menggunakan alatpenyuntik Rheodyne (ukuran loop 20 ~). Pemisahandilangsungkan pada kolom ODS-1 (octadecylsilyl silica-gel), dengan sistim gradien. Deteksi dilakukan denganmengukur absorbansi sinar UV pada panjang gelombang260 nm (Spectroflow 757 detector). Detector photodiodearray PU 4120 (Phillips Analytical, Cambridge, England)yang diset pada daerah panjang gelombang 190-390 nm,digunakan untuk mengkonfirmasi identitas dari puncakyang sebelumnya telah diduga merupakan senyawa iso-flavon. Data yang keluar dari detektor ini diolah lebiblanjut menggunakan komputer Dell System 310 (DellComputer Corporation, USA) yang dilengkapi dengan pro-gram diode array PU 6003 (Phillips Analytical, Cam-bridge, England). Kecepatan pemisahan dari setiap analisisdipertabankan pada 1.0 mL/menit. Perubahan komposisifasa gerak diatur dengan menggunakan dua buah pompa.Fasa gerak berupa pelarut A (97:3, air-asam asetat) danpelarut B (97:3, metanol-asam asetat). Pada 5 menit per-tama, fasa gerak berupa 100% pelarut A. Sctelah itu,perbandingan pelarut B meningkat secara Iinier sampai100% dalam jangka waktu 55 menit. Lima men it ber-ikutnya, pelarut B dipertahankan pada tingkat 100%, laluditurunkan sampai 0% selama period a 5 menit.

Kromatografi Kolom

Sephadex LH-20

Kolom terbuat dari gelas mula-mula dibilas denganetanol, dikeringkan dan bagian lehernya ditutup dengankapas, kemudian dibilas dengan beberapa milliliter pelarutn-propanol-etil asetat-air (5:5:1). Sephadex LH-20 yangdipilih sebagai fasa diam, mula-mula diaduk dengan cam-puran pelarut yang sarna sebelum dituangkan ke dalamkolom. Berdasarkan percobaan pendahuluan, perbandinganoptimum antara sampcl dan fasa diamnya ialah 1:30.

FiItrat tempe (100 mg) dalam metanol (2 mL) dipisah-kan mclalui kolom yang telah disiapkan, dcngan mcng-gunakan Iasa gerak diatas (8). Terdapat 7 fraksi cluat yangmasing-masing banyaknya 25 mL dan semua fraksi inidianalisa dcngan cara KCKT.

25

Aluminium oksidaKolom berisi aluminium oksida (CAMAG, pH 6.5-7.5,

ukuran partikel 100-240 mesh) digunakan untuk me-misahkan senyawa isotlavon yang memiliki gugus hidrok-sil pada posisi kelima (misalnya genistein) dengan yangtidak (10). Karena genistein akan terikat pada fase diam,maka cairan metanol (50%) dituangkan kedalam kolomuntuk mengelusi senyawa isotlavon lain yang terdapatpada filtrat tempe. Selanjutnya komponen yang terikatdapat dilepaskan dengan menambahkan eluen berupametanol yang mengandung 4% HCI (10). Setelah meng-uapkan sebagian besar pelarut yang bersifat asam inidengan rotary evaporator pada suhu 40°C, asam yang ter-tinggal dihilangkan dengan menambahkan 80% etanol (10ml) untuk kemudian diuapkan kembali seluruhnya dengancara yang sarna.

Genistein yang terdapat dalam residu dilarutkan denganetil asetat; setelah pelarutnya diuapkan, genistein dilarutkankembali dalam meta no!. Kromatografi dilakukan pada pelatsilika (ketebalan 2 mm), dengan campuran kloroform-metanol (20:3) sebagai fasa geraknya. Bagian yang ber-tluoresensi dielusi dengan metanol untuk dimumikan lebihlanjut dengan KLT dalam eluen etil asetat-asam format(90%)-air (10:2:3).

Identifikasi

Analisa spektrum dari setiap senyawa isotlavon yangtelab dimumikan dilakukan dengan spektrofotometer UV-Visible (Unicam LAMDA 5). Pengukuran dilakukan padapanjang gelombang 200-400 nm, dengan menggunakanpelarut mctanol, campuran metanol dengan natrium hidrok-sida, metanol dengan natrium asetat, metanol dengannatrium asetat dan asam borat serta metanol dengan alu-minium klorida (11).

Warna kbas akan terbentuk bila pelat silika yang me-ngandung isotlavon disemprot dcngan reagen tertcntusepcrti Gibbs atau dengan diazotised p-nitroaniline (12).

Dalam proscdur hidrolisis, komponcn tempe yang telahdimurnikan (masing-masing 1 mg) dilarutkan dalam meta-nol, kemudian ditambahkan HCI 2N sebanyak 2 mL. Cam-puran ini dipanaskan dalam penangas air seIama 30-40menit pada subu 100°C. SeIama pemanasan, metanol di-tambahkan agar volume campuran tidak berubah. Diakhirhidrolisis, isi campuran dikurangi sampai 1 mL dan air (3-5 mL) ditambahkan. Setelah dingin, dilakukan ekstraksidcngan etil asetat (3 kali, masing-masing scbanyak 5 mL).Ekstrak yang dipcrolch dikcringkan (tckanan rcndah, 40°C)sebelum dianalisa (KLT, silika gel dalam sistim pclarutkloroform-metanol=4: 1), bcrsamaan dcngan bcbcrapa stan-dar senyawa gula (xilosa, glukosa, fruktosa dan sukrosa).

Spcktrum masa gcnistein ditetapkan pada alat spcktro-meter.

KuantiflkaslKonsentrasi genistcin dalarn tempe ditcntukan sccara

spektrofotomctri. Isolat gcnistcin yang tclah dimurnikan

26

scbclumnya, dilarutkan dalam sejumlah tertentu metanol(D), kcmudian diukur harga absorbansinya pad a panjanggelombang 263 nm. Konstanta (C) untuk genistein(7.3)dipcrolch dcngan cara menurunkan harga koeflsienekstingsi (E) yang telab dilaporkan sebelumnya oleh Ollis(13) yaitu sebesar 37153 pada panjang gelombang yangsarna. Selanjutnya perhitungan menggunakan rumus di-bawah ini:

E (gcnistcin) : 1000 = BBerat Molekul (genistein) : B = CKadar genistein (I-tg)= A x D x C

HASIL DAN PEMBAHASAN

Dengan mcnerapkan teknik KLT, isotlavon dalamfiltrat tempe dapat dipisahkan menjadi beberapa pita.Empat buah pita utama, yaitu yang memiliki Rf 0.93(senyawa T-I), Rf 0.89 (T-II), Rf 0.52 (T-III) dan Rf 0.45(T-IV) diamati lebih mendalam. Penampilan keempatnyapada pclat silika setelah disinari sinar UV, sebelum dansctelah diasapi dcngan uap amonia, serta warna yangdihasilkannya setclah penyemprotan dengan reagen kromo-gcnik disajikan pada Tabel 1.

Tabcl 1. Rcspon isoflavone tempe terhadap penyinaran (VV) danpenyemprotan (reagen kromogenik)

Senyawa Fluoresensi Jenis Reagen(pada 365nm) Gibbs p-nitroaniline

T-I ungulua biru keunguan kuningT-Il biru muda negatif coklat mudaT-IIJ ungu tua biru keunguan kuningT-IV tak tercatat negatif coklat muda

Warna ungu tua yang bcrfluoresensi serta tidak di-pcngaruhi olch nap amenia (sepcrti yang ditunjukkan olehscnyawa T-I dan T-lII), mcrupakan tanda khusus bagiisoflavon yang mcmiliki gugus hidroksil pada posisi kelimadari struktur molckulnya (14). Hasil reaksi dcngan reagenp-nitroanil in mcuunjukkan bahwa keempatnya tcrmasuk kedalam golongan fcnol,

Tahap idcntifikasi, kcmudian dilanjutkan dengan me-ngukur spcktrum serapannya. Mcnurut Horowitz dan Jurd(15), isoflavon scringkali dapat dikcnali dari spcktranyayang bcrbcutuk khas. Dalam mctanol, pcnyerapantcrkuat tcrjadi disckitar panjang gclombang antara 250dan 270 nm (puncak kcdua), disertai tonjolan yangintcnsitasnya relatif lcbih rcndah pada dacrah 300 dan 330nm (puncak pcrtama).

Dari Tabcl 2 dan Gambar 1, dcngan jclas dapat di-kctahui bahwa kccmpat scnyawa ini mcmpunyai scrapantcrtinggi scsuai dcngan yang dibcrikan olch isol1avon.Absorbansi maksimum seuyawa T-I dan T-III sama denganyang dilaporkan scbclumnya untuk gcnistcin dan turun-

JKT', VOL. 4 - No.1, Junl, 1994

I

11

annya genistin (16). Berdasarkan data ini, identifikasi yanglebih terarah hanya dilakukan terhadap senyawa dengankode T-I dan T-IIL

400

Gambar 1. Spektra UV isoflavon tempe.(Kornponen T-I. Komponen T-II, Komponen T-II1, Kornponen T-IV)

27

KOMF\J'lEN T - 1

Tabel 2. Spektra uv dari isoflavone dalam tempe.

Senyawa

t«MPONEN T-1I

Panjang gelombang maksimum (nm)dalam metanol

T-I

T-II

T-III

T-IV

261,324

248,301

261,328

250,259,306

200 300PANJANG GELOMBANG (nm)

Dalam campuran metanol dan natrium hidroksida(Tabel 3), puncak kedua (dalam metanol) dari keduakomponen ini bergeser sebesar 13 dan 8 nm. Hal ini me-iunjukkan bahwa masing-masing memiliki paling sedikitsatu gugus hidroksil pada struktur molekulnya. Meskipundemikian, dalam metanol yang mengandung natrium asetat,hanya senyawa T-I yang mengalami pergeseran. MenurutWilliams dan Harborne (12) dari data ini dapat diketahuibahwa T-I merupakan senyawa isoflavon yang mempunyaigugus hidroksil pada atom karbonnya posisi 7. Sebaliknya,bahan kimia yang sama tidak menimbulkan pergeseranpada senyawa T-III, sehingga dapat disimpulkan bahwa C-7 mengalami derivatisasi. Hal serupa dapat dilihat padapenambahan aluminium kIorida, serapan maksimum se-nyawa T-I dan T-III bergeser sampai 11 nm, sesuai denganyang diperkirakan untuk isoflavon dengan gugus hidroksilpada karbon posisi-S (15). Berdasarkan data UV di atasserta kurva penyerapan dalam pelarut metanol, dapatdisimpulkan bahwa T-I dan T-III masing-masing identikdengan genistein dan genistin.

200 300

PANJANG CiEl.CMBANG (nm)

I04F'ONEN T-1II

Tabel3. Pergeseran panjang gelombang penyerapan maksimum(nm) 300

PANJANG GELQ.1£W«; (nm)

Pelarut Senyawa T-I Senyawa T-III

Metanol (MeOH)

MeOH+natrium hidroksida

MeOH+aluminium klorida

MeOH+natrium asetat (jenuh)

261274272270261

261269272261260MeOH+natrium asetat+asam borat

Hasil hidrolisa menunjukkan bahwa komponen T-Itidak mengalami perubahan, berbeda dengan T-III yangmemberikan noda berwarna kuning tua (sesuai denganreaksi yang diberikan glukosa) setelah penyemprotan de-nga n reagen na ftoresorsinol.

200PANJANG GELQoIBANG (nm)

JKTI, VOL. 4 - No.1, Junl, 1994

Untuk lebih meyakinkan bahwa komponen T-I benarmerupakan genistein, dilakukan analisa dengan spektro-metri massa. Hasil pengukuran menunjukkan bahwa padaspektrum T-I (Gambar 2) dapat dilihat adanya molecularion dengan mlz 270 (C1slilOOS), serta fragmen yang lebihkecil pada mlz 153 dan 118, keduanya mewakili cincin Adan B seperti terlihat pada Gambar 3.

oHO

m/z 153(C1NCIN A)

OH

OH 0

m/z 270 (Mt)

(SENYAWA T-I )OH ~

m/z 118ICINCIN 8 )

Gambar 2. Fragmen-fragmen hasil perpecahan genistein.

100

80

60

'0

(mlz)

Gambar 3. Spektrum massa senyawa T-!.

Tehnik kromatografi yang lebih sensitif, KCKT, jugadicoba untuk mengisolasi genistein. Seperti terlihat padaGambar 4, kromatogram dari filtrat tempe menunjukkanadanya beberapa puncak. Dengan menggunakan alat detek-si diode array dan senyawa standar isoflavon, empat pun-cak dapat diidentifikasi, yaitu puncak pertama merupakandaidzin, berturut-turut diikuti dengan genistin, daidzeindan genistein.

WAKTU RETENSI (MEN IT 1

Gambar 4 Kromatogram isoflavon dalam ekstrak tempe.Puncak l edaidzin, 2=genistin, 3=daidzein dan 4=genistein.

28

100

70

WAKTU RETENSI (MEN IT)

Gambar 5. Kromatogram isoflavon dalam tempe(Gabungan fraksi kolom 1-4).

100

WAKTU RETENSI I MENITl

Gambar 6. Kromatogram isoflavon dalam tempe(Gabungan fraksi kolom 5-7).

Karena terbatasnya jumlah cuplikan yang dapat dipisah-kan melalui tehnik KCKT, dirasa sangat sulit untuk men-dapatkan genistein murni dalam jumlah cukup untukdianalisa lebih lanjut, sehingga dicoba melakukan peng-gabungan antara tehnik kromatografi kolom dan lapis tipis.Kolom gelas dengan fasa diam Sephadex LH-20 mula--mula digunakan untuk memisahkan glukosida isoflavondari aglikonnya. Selanjutnya senyawa yang terdapat padakedua fraksi ini dipisahkan pada pelat silika.

Seperti dapat dilihat pada Gambar 5, sete1ah dilewatkanpada kolom Sephadex, fraksi aglikon daidzein dan genis-tein dari ekstrak tempe die1usi lebih awal. Hasil analisasecara KCKT se1anjutnya menunjukkan bahwa glukosidadaidzin dan genistin berada pada fraksi berikutnya (Gam-bar 6).

Meskipun kedua kromatogram ini menunjukkan bahwaSephadex berguna dalam pemisahan isoflavon dalamukuran sampel yang lebih besar, namun genistein masihharus dipisahkan dari daidzein. Cara yang telah diterapkanuntuk mencapai tujuan ini ialah KLT pasta silika gel, danfasa gerak kloroform-metanol (9:1). .

KESIMPULANBerbagai teknik kromatografi dapat digunakan untuk

memisahkan isoflavon dalam tempe. Pada percobaan iniisolasi genistein dapat dilakukan dengan hanya menerapkanteknik kromatografi lapis tipis yang kemudian dapat diikutidengan mengukur kadarnya secara spektrofotometri.

UCAPAN TERlMA KASIHPercobaan ini merupakan salah satu bagian dari tesis

PhD penulis pada Universitas Reading, U.K. Untuk itupenulis sangat berterima kasih kepada Dr.J.L.Ingharn atas

JKTI, VOL. 4 - No.1, Juni, 1994

bimbingannya selama percobaan ini dilakukan. Makalahini telah dipresentasikan pada Seminar Nasional HimpunanKimia Indonesia di Depok pada tanggal 27-29 Juli 1993atas dukungan Puslitbang Kimia Terapan, LIP!.

PUSTAKA

1. H.M.Drane, D.S.P.Patterson, RARoberts and N.Saba.Oestrogenic activity of soyabean products. Fd.Cosmet. Toxicol. 18:425.(1980)

2. M.Naim, B.Gestetner, ABondi and Y.Birk. Antioxi-dative and antihemolytic activities of soybean isoflavo-nes. J.Agric.Fd. Chem. 24:1174. (1974)

3. E.D.Walter. Genistin (an isoflavone glucoside) and itsaglycone, genistein from soybeans. JAm.Chem.Soc.63:3273. (1941)

4. AM.Nash, AC.Eldridge. and W.J.Wolf. Fractionationand characterization of alcohol extractables associatedwith soybean proteins. Nonprotein components.J.Agric.Fd. Chem. 15:102. (1967)

5. ASeo and C.V.Morr. Improved .high-performance li-quid chromatographic analysis of phenolic acids andisoflavonoids from soybean protein products. J. Agric.Fd. Chem. 32:530. (1984)

6. E.Farmakalidis and P.AMurphy. Isolation of 6'-0-acetylgenis tin and 6'-O-acetyldaidzin from toasteddefatted soyflakes. J .Agric.Fd. Chem. 33:385.(1985)

7. P.Gyorgy, K.Murata and H.Ikehata. Antioxidantsisolated from fermented soybeans (tempeh). Nature.203:870.(1964)

8. F.W.Zilliken. Isoflavones and related compounds,method of preparing and using and antioxidant com-positions containing same. US Patent NoA,366,082.(1982)

and S.Matsushita.and liberation ofAgric.BioI.Chem.

9. H.Murakami, T.Asakawa, J.TeraoAntioxidative stability of tempehisoflavones by fermentation.48:2971. (1984)

10. L.C.Wang. Separation of soybean isoflavones fromtheir 5-hydroxy derivatives by thin-layer chroma-tography. Anal.Biochem. 42:296. (1971)

11. K.R.Markham. "Techniques of Flavonoid Identifica-tion". Academic Press, London. (1982)

12. CAWilliams and J.RHarborne. Isoflavonoids. In:"Methods in Plant Biochemistry". P .M.Dey andJ.RHarborne (eds.). Vol.l. Academic Press, London.421. (1989)

13. W.D.Ollis. The flavonoids. In:'The Chemistry ofFlavonoid Compounds". T.AGeissman (ed.).Pergamon Press, Oxford. 353. (1962)

14. T.J.Mabry, KRMarkham and M.B.Thomas. "TheSystematic Identification of Flavonoids". Springer,Berlin.(1970)

15. RM.Horowitz and L.Jurd. Spectral studies onflavonoid compounds. Il.Isoflavones and flavanones.J.Org.Chem. 26:2446. (1961)

16. N.Ohta,G.Kuwata, H.Akahori and T.Watanabe. Iso-lation of a new isoflavone acetylglucoside,6"-0-acetylgenistin, from soybeans. Agric.Biol.Chem. 44:469.(1980)

INFORMASI TRAINING 1994/1995Diselenggarakan oleh: Puslitbang Kimia Terapan-LIPI, Bandung

No. Tanggal Topik Kursus Angkatan Ke:

1. 3-11 Mei 1994 Teknik Analisa Cemaran Kimia dalam Air Limbah Industri 82. 25-29 Juli 1994 International Training of Advanced Capillary Column Gas

Chromatography 23. 6-16 September 1994 Teknik Analisa Kimia Instrumental dan Aplikasinya 134. 18-26 Oktober 1994 Teknik Analisa Cemaran Kimia dalam Air Limbah Industri 95. 6-14 Desember 1994 Teknik Pengolahan Limbah Cair Industri secara Fisika,

Kimia & Biologi 36. 17-26 Januari 19.95 Teknik Analisa Debu dan Gas Berbahaya dalam Udara 17. April 1995 Teknik Dasar Analisa Kimia 28. Juni 1995 Teknik Analisa Cemaran Kimia dalam Air Limbah Industri 109. Agustus 1995 Teknik Analisa Kimia Instrumental dan Aplikasinya 1410. Oktober 1995 17th International Symposium on Capillary Chromatography

(+ Training) 211. Desernber 1995 Teknik Pengolahan Limbah Cair Industri secara Fisika,

Kimia & Biologi 4

JKTI, VOL. 4 - No.1, Junl, 1994 29