isolasi dan inokulasi iin.docx

8/16/2019 ISOLASI DAN INOKULASI IIN.docx

1/12

ISOLASI DAN INOKULASI 1

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar BelakangSaat melakukan suatu percobaan didalam laboratorium yang

bertujuan untuk menumbuhkan dan mengembangbiakan atau meneliti

suatu mikrorganisme kita pasti perlu melakukan isolasi dan inokulasi untuk

mendapatkan mikroorganisme murni sehingga memudahkan dalam

mengamati morfologi, zat yang dihasilkan mikroorganisme dan lain

sebagainya. Harus dilakukan pemisahan antara mikroorganisme yang

diinginkan dengan yang tidak diinginkan agar benar – benar dapat fokus

dalam meneliti mikroorganisme tersebut.alam pengerjaannya isolasi memiliki beberapa metode yang dapat

dilakukan yang memiliki cara kerja dan fungsi yang berbeda yaitu metode

tuang, metode tabur, metode gores, dan metode sebar, masing – masing

dapat digunakan dengan menyesuaikan dengan sampel seperti apa yang

ingin di teliti. Sedangkan inokulasi yang merupakan proses penanaman

kembali bibit bakteri maupun jamur ke lingkungan yang baru dapat

dibedakan menjadi beberapa metode yaitu medium miring, medium tegak,

dan medium cair, penggunaan medium – medium tersebut disesuaikan

dengan banyaknya atau bagian mana dari bakteri atau jamur yang ingin

dilihat atau diteliti. !ada praktikum, akan di kerjakan semua metode

isolasi dan inokulasi mikroorganisme agar praktikan dapat mengetahui

dan membedakan masing – masing metode tersebut.Iin Eirka Lembayung15020140072

AFRIZAL


2/12


B. "aksud !raktikum Adapun maksud dari praktikum ini adalah untuk mengenal macam#

macam metode isolasi dan inokulasi beserta cara kerjanya.$. %ujuan !raktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk melakukan isolasi

mikroorganisme dengan metode tuang, metode sebar, metode tabur dan

metode gores serta melakukan inokulasi mikroorganisme menggunakan

medium miring, medium tegak, dan medium cair.

. &umusan masalah Adapun rumusan masalah dari praktikum ini adalah '

(. Apa pengertian isolasi)*. Bagaimana cara kerja metode tuang, metode sebar, metode gores,

dan metode tabur)+. Apa pengertian inokulasi). Bagaimana cara kerja medium miring, medium tegak dan medium

cair)-. "anfaat !raktikum

Adapun manfaat dari praktikum ini adalah mengetahui apa itu

isolusi dan inokulasi, macam#macam metode isolasi dan inokulasi beserta

cara pengerjaannya.BAB II

KAJIAN PUSTAKA

A. %eori mum

/solasi adalah pengambilan bagian tertentu dari induk jamur yang

akan dibiakkan dalam media !A, dilakukan pada keadaaan steril dan

dilakukan dalan kotak inokulasi untuk mencegah kontaminasi dari

kontaminasi sehingga dapat menjaga kemurnian mikroorganisme yang

disolasikan 0&ahmat, *1((2.

Iin Eirka Lembayung15020140072

AFRIZAL


3/12


/solasi merupakan cara memisahkan mikroorganisme dari sampel

atau alam dan menumbuhkan dalam media kultur secara in 3itro sehingga

diperoleh biakan murni 0Harti, *1(42./solasi mikroorganisme dengan menggunakan medium nutrient agar

dapat dilakukan menggunakan metode ca5an gores atau ca5an tuang

dimana sel#sel mikroorganisme akan terpisah sendiri#sendiri dan setelah

inkubasi sel#sel tersebut akan memperbanyak diri dengan cepat dalam

jangka 5aktu (6 – * jam kemudian membentuk massa yang

berkelompok disebut koloni. alam mengisolasi mikroorganisme terdapat

beberapa teknik yang dapat digunakan yaitu 0/rianto *1(+,2 '(. $a5an gores

ilakukan pada permukaan medium agar, menggunakan jarum

pindah. !ada garis – garis yang terbentuk terdapat bakteri yang

diinokulasikan yang akan tumbuh menjadi koloni # koloni.*. $a5an tebar

Setetes sampel berisi mikroorganisme ditempatkan dalam medium

agar pada ca5an petri menggunakan batang kaca bengkok yang steril

lalu disebarkan secara merata pada permukaan medium. !ada

permukaan akan ditumbuhkan koloni – koloni bakteri yang terpisah #

pisah.

+. $a5an tuangituangkan medium cair steril dari tabung reaksi kedalam ca5an petri

lalu diinkubasi. ari ca5an petri tersebut akan tumbuh koloni – koloni

mikroorganisme.. Biakan penyuburan

engan beberapa teknik isolasi untuk memindahkan mikroorganisme

kedalam medium dengan komposisi dengan inkubasi. engan


AFRIZAL


4/12


prosedur penyuburan akan meningkatkan proporsi organisme yang

diinginkan.4. /solasi sel tunggal

engan mengambil satu jenis mikroorganisme dari suspensi berisi sel

– sel sambil memeriksa preparat ini menggunakan mikroskop

kemudian mikroorganisme ini dipindahkan dalam medium steril./nokulasi adalah penanaman bibit jamur kedalam media

pertumbuhan yang telah disiapkan dalam keadaan yang bebas mikroba

lain agar sampel tidak terkontaminasi oleh bakteri lain. /nokulasi dilakukan

dalam ruangan khusus agar meminimalkan kontaminasi dari

mikroorganisme lain. Sehingga dilakukan langkah sterilisasi sebelum

digunakan. Sterilisasi dilakukan dengan membersihkan debu terlebih

dahulu lalu dilakukan penyemprotan menggunakan alkohol 718 dan

formalin *8. /nokulasi harus dilakukan dalam keadaan aseptis sehingga

alat#alat yang digunakan harus disterilkan terlebih dahulu. Biasanya alat#

alat#alat seperti ose yang digunakan di panaskan atau dipijarkan

menggunakan spiritus. Selain itu orang yang melakukan inokulasi juga

harus dalam keadaan bersih dan rapi. /nokulasi dikerjakan didekat lampu

spiritus yang menyala sehingga meminimalkan kontaminasi

mikroorganisme 0"uchroji, *1162./nokulasi adalah pemasukkan bibit jamur dalam media tumbuh dalam

keadaan bersih dari mikroorganisme yang dapat merugikan 0Achmad,

*1(*2./nokulasi dapat dilakukan dengan dua cara yaitu cara tusukan dan

cara taburan 0"uchroji, *1162.


AFRIZAL


5/12


Alat dan bahan yang digunakan dalam kultur mikroorganisme antara

lain 0Harti, *1(42 '(. 9arum inokulan 0terbuat dari platina atau nikrom2, terdiri dari dua jenis

yaitu jarum ose 0loop2, ujung jarum bulat, berdiameter * – mm dan

jarum ent, ujung jarum runcing.*. "edia kultur terdiri dari jenis media yaitu media agar tegak 0agar

deep media2, media agar miring 0agar slant media2, media lempeng

agar 0agar plate media2, media cair 0broth media2.

!engamatan pertumbuhan mikrorganisme pada media kultur 0Harti,

*1(42 '(. $iri – ciri koloni meliputi bentuk, permukaan, tepi, 5arna koloni pada

media agar.*. Sifat pertumbuhan atau penyebaran mikroorganisasi pada media

semisolid.+. %ingkat kekeruhan pada media cair dengan sifat aerob dan anaerob.. !erubahan 5arna media atau ciri koloni spesifik dari reaksi biokimia5i

atau metabolisme mikroorganisme.

B. raian "ikroba(. Staphyloccus Aureus 0itis.go32

:ingdom ' Bacteria

Subkingdom ' !osibacteria

!hylum ' ;irmicutes

$lass ' Bacilli


6/12


=enus ' Staphylacoccus

Species ' Staphylococcus Aureus

BAB III

KAJIAN PRAKTIKUM

A. Alat >ang ipakai Alat#alat yang diguanakan dalam percobaan ini yaitu Autoklaf,

ca5an petri, erlenmeyer, enkas, inkubator, lampu spiritus, ose bulat, ose

lurus, o3en, rak tabung, spoit ( dan (1 mL, dan tabung reaksi.B. Bahan >ang igunakan Bahan# bahan yang digunakan dalam percobaan ini yaitu Air laut

tanjung, A?uadest steril, Bakteri Staphylacoccus Aureus, :apas, :ertas

label, kotoran telinga manusia "edium @A, "edium @B, tanah antang.$. $ara :erja

a. /solasi(. "etode tuang

isiapkan alat dan bahan kemudian diambil medium @A

0bakteri2 sebanyak mL, dan masukkan kedalam ca5an petri

kemudian diambil sampel air laut lalu masukkan kedalam ca5an

petri yang telah berisi medium lalu dinkubasi selama ( * jam

untuk bakteri dan diamati.*. "etode sebar


0bakteri2 sebanyak (1 mL, dan masukkan kedalam ca5an petri

kemudian diambil sampel tanah ( gram lalu masukkan kedalam

ca5an petri yang telah berisi medium lalu dinkubasi selama (

* jam untuk bakteri dan + * jam untuk jamur dan diamati.+. "etode gores




AFRIZAL


7/12


kemudian diambil sampel kotoran telinga lalu masukkan

kedalam ca5an petri yang telah berisi medium lalu dinkubasi

selama ( * jam untuk bakteri dan diamati.. "etode gores jempol



kemudian lakukan sidik jari dengan jempol yang dicuci dan tidak

dicuci pada medium lalu dinkubasi selama ( * jam untuk

bakteri dan diamati.b. /nokulasi

1. "edium tegakisiapkan alat dan bahan kemudian diambil medium @A 0bakteri2

dan sebanyak 4#(1 mL, sterilkan ose lurus yang akan digunakan

lalu diambil biakan murni dari Staphylacoccus Aureus dan

masukkan kedalam medium tegak dengan cara ditusuk kemudian

inkubasi selama ( * pada suhu +7 $ dan diamati.ᵒ

2. "edium miringisiapkan alat dan bahan kemudian diambil medium @A

0bakteri2 sebanyak 4#7 mL, sterilkan ose lurus yang akan

digunakan lalu diambil biakan murni dari Staphylacoccus Aureus

dan masukkan kedalam medium agar miring dengan cara gores

zig#zag kemudian inkubasi selama ( * untuk bakteri pada suhu

+7 $ dan diamati.ᵒ3. "edium cair

isiapkan alat dan bahan kemudian diambil medium

sebanyak (1 mL, sterilkan ose lurus yang akan digunakan lalu

diambil biakan murni dari Staphylacoccus Aureus dan masukkanIin Eirka Lembayung15020140072

AFRIZAL


8/12


kedalam medium cair, kemudian inkubasi selama ( * untuk

bakteri pada suhu +7 $ dan diamati.ᵒ

BAB IV

KAJIAN HASIL PRAKTIKUM

A. Hasil !raktikum

%abel

a2 /solasi

:elompok ///

"etode SampelBentuk

koloni-le3asi %epi

Sebar %anah

lapangan

$ircular $on3e Ser3ate


AFRIZAL


9/12


%uang

=ores

%abur

Antang Air laut

%anjung

Bunga:otoran

telingaBiskuit

$ircular

#

$ircular

;lat

#

&aised

ndulate

#

-ntire

b2 /nokulasi

:elompok ///Bakteri Agar tegak Agar miring Agar cair

Staphylocooccu

s Aureus!apilliate Spreading

Sediment #

anaerob

B. !embahasan!raktikum ini bertujuan untuk mengisolasi dan menginokulasi

mikroorganisme. /solasi adalah memindahkan mikrorganisme dari

lingkungan yang lama ke lingkungan yang baru sedangkan inokulasi

adalah menanam kembali mikroorganisme yang telah di isolasi ke

lingkungan yang baru. %erdapat beberapa teknik dalam isolasi

mikroorganisme yaitu metode tuang, metode tabur, metode sebar dan

metode gores. Semua teknik isolasi tersebut dilakukan dalam praktikum

kali ini, untuk medium yang digunakan untuk isolasi bakteri ialah !otato

etra Agar 0!A2.ntuk metode gores, medium !A di ambil sebanyak (1 mL

menggunakan spoit kemudian di pindahkan kedalam ca5an petri, proses

ini harus dilakukan didekat spiritus yang menyala karena pengerjaannya


AFRIZAL


10/12


harus dalam keadaan aseptis. Setelah dipindahkan, !A dibiarkan

mengeras lalu digoreskan sampel kotoran telinga menggunakan ose bulat.ntuk metode sebar, medium !A diambil sebanyak (1 mL

menggunakan spoit lalu di pindahkan kedalam ca5an petri, masih

dilakukan didekat spiritus yang menyala untuk menjaga agar medium tidak

terkontaminasi oleh bakteri yang lain, setelah medium mengeras sampel

tanah ditaburkan diatas permukaan medium, tetapi karena kondisi dari

sampel tanah yang seharusnya kering menjadi lembab, tanah harus

diencerkan terlebih dahulu sebelum di gunakan sehingga penyebarannya

saat isolasi lebih merata. Sampel tanah disebarkan merata menggunakan

drigalsky pada permukaan medium.ntuk metode tabur, cara kerjanya mirip dengan metode sebar dan

gores namun sampel biskuit hanya perlu di tabur tanpa harus diratakan

pada permukaan medium, hal ini yang membedakan antara metode

sebara dan metode tabur. Sedangkan untuk metode tuang, sampel air laut

ditambahkan terlebih dahulu pada ca5an petri lalu dilanjutkan dengan

penambahan medium sebanyak (1 mL./nokulasi dilakukan dengan tiga metode yaitu medium miring,

medium tegak dan medium cair, pada medium miring ditambahkan (1 mL

medium !A kedalam tabung reaksi lalu dibiarkan mengeras sambil

diletakkan miring hampir 1 derajat, setelah memadat dimasukkan bakteri

yang diujikan yaitu Staphylococcus Aureus menggunakan ose bulat

dimana ose tersebut di pijarkan terlebih dahulu untuk mengurangi

kontaminasi, cara kerja ini sama dilakukan untuk medium tegak namun

medium tegak tidak perlu dimiringkan hampir 1 derajat untuk dibiarkanIin Eirka Lembayung15020140072

AFRIZAL


11/12


mengeras, dimasukkan bakteri mneggunakan ose lurus yang telah di

pijarkan, sedangkan metode cair menggunakan medium nutrien broth

dimana bakteri dimasukkan menggunakan ose bulat yang telah dipijar

kedalam tabung reaksi lalu diaduk sebentar agar bakteri benar#benar

tercampur dengan nutrient.Setelah semua pengerjaan untuk isolasi dan inokulasi selesai,

medium di inkubasi selama ( * jam pada suhu +7 o $. Hasil yang

diperoleh setelah adalah metode sebar dengan sampel tanah

menunjukkan adanya koloni ber5arna putih dengan bentuk koloni yang

sirkular , ele3asi yang con3e dan tepi yang serrate. "etode tuang dengan sampel air laut menunjukkan adanya koloni

berbentuk sirkular dengan ele3asi yang flat dan tepi yang undulate, untuk

metode gores tidak diperoleh koloni bakteri yang terbentuk, dan untuk

medium tabur dengan sampel biskuit menunjukkan adanya koloni bakteri

dengan bentuk sirkular dan ele3asi yang raised dan tepi yang entire."edium untuk inokulasi dengan medium agar tegak menunjukkan

adanya koloni membentuk papilliate. Agar miring dengan koloni

membentuk spreading dan agar cair menunjukkan koloni membentuk

sediment # anaerob.

BAB VIin Eirka Lembayung15020140072

AFRIZAL


12/12


KESIMPULAN DAN SARAN

A. :-S/"!LA@

Adapun kesimpulan yang diperoleh dari praktikum ini adalah metode

sebar dengan sampel tanah lapangan Antang memiliki bentuk circular

ele3asi con3e dan tepi serrate, metode tuang dengan sampel air laut

%anjung Bunga memiliki bentuk koloni circular, ele3asi flat, dan tepi

undulate, metode gores dengan sampel kotoran telinga tidak membentuk

koloni, metode tabur dengan sampel biskuit membentuk koloni circular

dengan ele3asi raised dan tepi entire.B. SA&A@

iharapkan para kakak asisten membimbing kami sebagai praktikan

dengan lebih baik lagi selama praktikum, karena bimbingan asisten sangat

penting demi kelancaran praktikum.

DAFTAR PUSTAKA

/rianto, :., *1(+, Mikrobiologi Medis, !enerbit Alfabeta, Bandung.

"uchroji, *116, Budi Daya Jamur Kuping , !enebar S5adaya, 9akarta.

&ahmat, *1((, ntung Besar dari Bisnis Jamur Tiram, Agromedia

!ustaka, 9akarta.

Harti, A., S., *1(4, "ikrobiologi Kesehatan; Peran Mikrobiologi DalamBidang Kesehatan, A@/, >ogyakarta.

Achmad, *1(*, Jamur n!o "engkap dan Kiat Sukses Agribisnis, Agriflo,9akarta


AFRIZAL

isolasi dan inokulasi iin.docx

Documents