Abstrak Ikan mas (termasuk hias koi ikan mas) Cyprinus carpio L. secara ekologis dan ikan air tawar ekonomis penting di Eropa dan Asia. C. carpio baru-baru ini telah terancam oleh virus herpes cyprinid ketiga, yang dikenal sebagai cyprinid herpesvirus-3 (CyHV-3), yang agen etiologi penyakit koi herpes (KHVD), yang menyebabkan morbiditas yang signifikan dan mortalitas pada koi dan ikan mas. Tanda-tanda klinis dan patologis termasuk lecet epidermal, produksi lendir yang berlebihan, nekrosis insang dan organ internal, dan kelesuan. KHVD telah hancur populasi ikan mas besar di Israel, Indonesia, Taiwan, Jepang, Jerman, Kanada, dan Amerika Serikat, dan telah terdaftar sebagai penyakit harus dilaporkan di Jerman sejak tahun 2005, dan oleh Organisasi Dunia untuk Kesehatan Hewan sejak tahun 2007. KHVD diperburuk dalam budidaya karena relatif tinggi tuan rumah padat tebar, dan CyHV-3 dapat terkonsentrasi oleh organisme air filter-makan. CyHV-3 taksonomi dikelompokkan dalam keluarga Alloherpesviridae, dapat diperbanyak dalam jumlah baris sel, dan aktif di berbagai suhu 15-28 ° C. Tiga isolat yang berasal dari Jepang (KHV-J), USA (KHV-U), dan Israel (KHV-I) telah diurutkan. CyHV-3 memiliki 295 kb genom dengan 156 frame pembacaan terbuka unik dan bereplikasi dalam inti sel, dan dewasa partikel virus yang 170-200 nm diameter. CyHV-3 dapat dideteksi oleh beberapa PCR berbasis metode dan oleh enzim-linked immunosorbent assay. Beberapa mode imunisasi telah dikembangkan untuk KHVD; Namun, ikan diimunisasi dengan baik vaksin atau tipe liar virus mungkin menjadi operator untuk CyHV-3. Tidak ada pengobatan saat ini untuk KHVD. Kata kunci Akuakultur; KHV; Penyakit herpes koi; KHVD; Perdarahan kulit; Deteksi virus; Enzyme-linked Immunosorbent Assay; ELISA

PENGANTAR Protein ikan membuat naik 20% atau lebih dari total protein yang dikonsumsi di berpenghasilan rendah, makanan- negara kekurangan, dengan akuntansi budidaya untuk 46% dari pasokan ikan pangan global di 2008; selain menjadi bentuk kritis gizi, produksi foodfish melalui akuakultur juga merupakan bentuk utama dari kerja (FAO 2010). Carp (Cyprinidae) membuat 71% dari bertani produksi ikan air tawar global dan merupakan sumber penting makanan di Cina dan India di mana 70,7 dan 15,7%, masing-masing, dari ikan mas ternak yang dihasilkan. Namun, cyprinid herpesvirus (CyHV-3), yang merupakan agen etiologi dari virus yang sangat menular penyakit, penyakit koi herpes (KHVD), yang menyebabkan kerusakan besar ke dunia produksi koi dan ikan mas Cyprinus carpio L. Penyakit ini telah terdaftar sejak 2005 di Jerman, dan sejak tahun 2007 di Inggris dan oleh Organisasi Dunia Hewan Kesehatan (OIE) sebagai penyakit yang wajib lapor, dan telah menyebar ke sebagian besar wilayah dunia karena perdagangan ikan global dan internasional menunjukkan koi hias KHVD ditandai dengan bercak putih, perdarahan kulit, lesu, kurang nafsu makan, mata cekung, pembesaran limpa dan ginjal, dan nekrosis insang (Gambar. 1) pada ikan yang terinfeksi (Hedrick et al. 2005). Virus bereplikasi di insang, usus, interstitium, hati, otak, dan jaringan ginjal (Pikarsky et al. 2004), dan sebelumnya dikenal sebagai ikan mas nefritis interstitial dan insang virus nekrosis. Karena KHVD telah menjadi begitu merugikan produksi dunia foodfish, ulasan ini akan mencakup penemuan KHVD, penyebaran CyHV-3, kemajuan dalam pemahaman kita tentang penyakit dan inang-patogen hubungan, alat dikembangkan untuk mendeteksi virus, dan metode yang dikembangkan untuk mengendalikan penyakit ini. The cyprinid keluarga herpesvirus

Berdasarkan urutan keselarasan dari daerah lestari untuk polimerase DNA dan terminase gen, virus herpes cyprinid berhubungan erat dengan anguillid herpesvirus 1 (-AngHV 1) (Waltzek et al. 2009a). CyHV-3 saham 40 gen dilestarikan dengan AngHV-1 (van Beurden et al. 2010), dan menurut Komite Internasional Taksonomi Semua 3 virus herpes cyprinid dan AngHV-1 dikelompokkan dalam genus Cyprinivirus. Pertama cyprinid virus herpes, cyprinid herpesvirus-1 (CyHV-1), adalah terisolasi di Jepang dari pertumbuhan kulit papillomatous pada koi yang terinfeksi dan disebarkan di epithelioma papulosum cyprini (EPC) dan orang bodoh minnow (FHM) sel garis pada 20 ° C (Sano et al. 1985a), dan digambarkan dengan dimensi 113 dan 190 nm untuk nukleokapsid dan matang menyelimuti virion masing (Sano et al. 1985b). Kemudian, sebuah cyprinid herpes diisolasi di Amerika Utara oleh Hedrick et al. (1990), dan digambarkan dengan dimensi 109 dan 157 nm untuk nucleocapsid dan matang menyelimuti virion. CyHV-1 adalah mematikan pada ikan muda, dan dapat menyebabkan tingkat kematian hingga 97% (Sano et al. 1991). Meskipun CyHV-1 menyebabkan pertumbuhan akut papiloma, biasanya non-mematikan untuk koi dewasa (Calle et al. 1999). Cyprinid herpesvirus-2 (CyHV-2) mempengaruhi terutama ikan mas Carassius auratus auratus dan telah diisolasi di EPC dan sel FHM garis tumbuh pada 20 ° C (Jung & Miyazaki 1995, Groff dkk. 1998), tetapi tidak cell line cocok untuk serial passaging yang virus (Goodwin et al. 2006a). Jeffery et al. (2007) passaged CyHV-2 dalam koi sirip-1 (KF-1) garis sel sekali, tapi tidak ada efek sitopatik (CPE) diamati pada ayat-ayat berikutnya. CyHV-2 telah passaged dalam ikan mas garis sel sirip (GF-1) untuk studi di filogenetik analisis dan deteksi tes (Waltzek et al. 2005, 2009b). Tanda-tanda klinis CyHV-2 infeksi termasuk kelesuan, pengembangan kulit pucat dengan warna putih, berlendir, blister-seperti proyeksi pada jaringan, dan akhirnya kematian (Jeffery et al. 2007). Pemeriksaan postmortem dari CyHV-2 ikan mas yang terinfeksi mengungkapkan nekrosis parah insang dan kerusakan ginjal dan hati (Jeffery et al. 2007). CyHV-2 menyebabkan nekrosis hematopoietik herpesviral di ikan mas (Jung & Miyazaki 1995), dan dapat dideteksi dengan PCR (Goodwin et al. 2006a, b). CyHV-2 partikel virus yang heksagonal, dan partikel intranuklear memiliki diameter 100 nm dengan 50 inti nm (Jeffery et al. 2007). Dewasa, virion menyelimuti berkisar 170-220 nm dalam ukuran ketika diamati di ruang sitoplasma dan ekstraseluler (Jung & Miyazaki 1995). Acak sampling dalam peternakan ikan mas telah menunjukkan bahwa CyHV-2 adalah sangat umum di Amerika Serikat (Goodwin et al. 2009). Ada 3 isolat utama dari virus herpes cyprinid ketiga, CyHV-3, satu berasal di Jepang, lain di Israel, dan lain terisolasi di AS, dilambangkan KHV-J, KHV-I, dan KHV-U, masing-masing.

Taksonomi CyHV-3 saham homologi Poxviridae, Iridoviridae, dan protein yang terlibat dalam Nimaviridae sintesis deoksinukleotida tri-fosfat (dNTP); Namun, CyHV-3 secara genetik berbeda dari keluarga virus tersebut dan lebih mirip dengan CyHV-1 dan CyHV-2; Oleh karena itu, CyHV-3 dianggap virus herpes cyprinid ketiga (Waltzek dkk. Gotesman dkk. 2005, Ilouze dkk. 2006). Protein perbandingan urutan helikase, protein kapsid tripleks, Polimerase DNA, dan protein utama capsid (open reading frame 39: ORF39) dikonfirmasi homologi signifikan cukup untuk CyHV-3 untuk dikelompokkan dengan yang lain 2 cyprinid virus herpes dalam orde baru, yang (al Waltzek et. 2005) Herpesvirales. Berdasarkan gen encoding polimerase DNA virus dan ATPase subunit terminase, CyHV-3 saat ini diklasifikasikan bersama dengan CyHV-1 dan CyHV-2 dalam genus Cyprinivirus dalam keluarga Alloherpesviridae (Waltzek et al. 2009a, Michel et al. 2010a). Isolat dapat dibedakan oleh duplex PCR untuk mendeteksi mutasi kecil di coding daerah antara ORF29 dan ORF31 (Bigarre et al. 2009). Kloning dan sekuensing

berikutnya dari 3 glikoprotein ORF25, ORF65, dan ORF 116 variasi mendeteksi bahwa termasuk spesifik sisipan dan penghapusan antara 3 isolat KHV utama (Han et al. 2013). Sejarah awal dan distribusi di seluruh dunia CyHV-3 awalnya diidentifikasi oleh Hedrick et al. (2000) sebagai agen penyebab untuk massa wabah kematian di AS dan Israel, tetapi mungkin telah terdeteksi sedini tahun 1996 di Inggris (Haenen et al. 2004) dan 1997 di Jerman (Bretzinger et al. 1999). Tiga CyHV-3 isolat-benar diurutkan: nos aksesi. dalam database nukleotida NCBI NC_009127 (DQ177346 [regangan I]; DQ657948 [regangan U], dan AP008984 [regangan J, TUMST1]). Masing-masing dapat diidentifikasi berdasarkan perbedaan urutan gen yang berbeda. Kurita et al. (2009) dikelompokkan 3 sequencing CyHV-3 isolat baik sebagai US / I atau J strain berdasarkan nucleotide polymorphism di timidin kinase (TK) gen; sistem pengelompokan ini diverifikasi oleh Avarre dkk. (2011) disparitas pelacakan di tandem mengulangi di urutan genetik dari 8 berbeda CyHV-3 lokus. Beberapa isolat Eropa mirip dengan isolat dari AS dan Israel (KHV-U dan KHV-I, masing-masing). Isolat lain yang mungkin varian CyHV-3, yang dikenal sebagai KHV-J, telah terdeteksi di Jepang, Malaysia, Taiwan, dan lainnya East Negara-negara Asia (Kurita et al. 2009, Cheng et al. 2011). Baru-baru ini, berdasarkan urutan perbandingan glikoprotein, varian baru dari KHV terdeteksi di Korea (Han et al. 2013).

Eropa Para peneliti di Jerman termasuk di antara yang paling awal untuk menggambarkan KHVD di koi (Bretzinger dkk. 1999). Sejak itu, CyHV-3 telah terdeteksi di beberapa peternakan di Polandia, di mana ikan mas adalah ditanam untuk makanan (Antychowicz et al. 2005, Bergmann et al. 2006). Ada sporadis Lokasi CyHV-3-positif dari koi komersial dan peternakan ikan mas di Republik Republik (Pokorova et al. 2007). Inggris dan Wales memiliki KHVD luas di ikan mas dan perikanan koi, tetapi ada ikan mas dan koi peternakan terpisah yang bebas dari CyHV-3 (Taylor et al. 2010, 2011). Dua kasus KHVD dilaporkan di Irlandia, satu pada tahun 2005 dan satu lagi di 2007, dan setiap kasus yang terlibat koi import (McCleary et al. 2011). Pada hari ini, sebagian besar negara-negara Eropa Barat, termasuk Austria, Belgia, Denmark, Perancis, Italia, Luxemburg, Rumania, Slovenia, Spanyol, Swedia, Swiss, dan Belanda memiliki melaporkan tes positif untuk CyHV-3 (Pokorova et al. 2005, OIE 2012).

Asia Sebuah gugus tugas internasional didirikan dalam upaya untuk menentukan penyebab dari 2002 wabah penyakit di Indonesia. Selanjutnya, isolat Indonesia yang unik CyHV-3 (a hibrida dari AS / I dan Jepang mengisolasi) diisolasi dan diidentifikasi dari daerah di Indonesia (Bondad-Reantaso et al. 2007, Sunarto dkk. 2011). KHVD pertama kali terdeteksi di Jepang di 2003 selama acara kematian massal ternak ikan mas di Danau Kasumigaura, Ibaragi prefektur (Sano et al. 2004). Setelah itu, CyHV-3 terdeteksi oleh PCR dan tes ELISA berbasis di ikan mas liar di Danau Biwa, dan CyHV-3-DNA terdeteksi dalam sampel air dari 4 situs sepanjang Sungai Tamagawa di Tokyo, Jepang, pada tahun 2006; sejak saat itu, CyHV-3 telah Gotesman dkk. dikonfirmasi di 90% dari 109-A kelas sungai nasional alam di Jepang (Ishioka et al. 2005, Sano et al. 2005, Haramoto dkk. 2009, Uchii dkk. 2009, Minamoto dkk. 2012). Kematian karena CyHV-3 terdeteksi di Taiwan utara pada tahun 2002 (Tu et al. 2004), dan massa Peristiwa kematian yang pertama kali terlihat pada tahun 2003 di perikanan Taiwan

selatan (Cheng et al. 2011). CyHV-3 telah terdeteksi di China (Dong et al. 2011) dan di koi induk di Korea Selatan (Gomez et al. 2011, Lee et al. 2012, Han et al. 2013).

Amerika Utara Karena deteksi awal KHVD di AS, konvensional dan real-time PCR dengan dikumpulkan sampel dari hati, limpa, dan ginjal diambil dari ikan mas selama acara kematian massal 2004 ikan mas liar di New York menegaskan bahwa ikan terinfeksi oleh CyHV-3 (Grimmett et al. 2006). Selanjutnya, CyHV-3 terdeteksi di Ontario, Kanada, pada tahun 2007, dan setelah itu, beberapa danau di Ontario menderita peristiwa kematian ikan mas kotor karena KHVD (Garver et al. 2010). Menurut Michigan Departemen Sumber Daya Alam, ada telah kematian massal ikan mas baru-baru ini disebabkan oleh CyHV-3 di wilayah Midwest utara AS berbatasan Kanada (Whalen 2011). Tampaknya bahwa virus menyebar ke arah barat adalah bersama AS / Kanada perbatasan.

DETEKSI CyHV-3 awalnya dibedakan dari virus ikan lele dan virus herpes cyprinid dengan analisis polipeptida yang mengungkapkan peptida novel dalam dimurnikan ekstrak virus dan oleh analisis pembatasan ekstrak DNA dimurnikan. Teknik yang terakhir menyebabkan awal Metode PCR berbasis deteksi (Gilad et al. 2002). Selanjutnya, metode PCR berbasis adalah dikembangkan berdasarkan amplifikasi gen TK (Bercovier et al. 2005). Loop-dimediasi amplifikasi isotermal (LAMP) dari gen TK memungkinkan untuk mendeteksi CyHV-3 dalam langkah 1 proses tanpa memerlukan pengendara sepeda termal (Gunimaladevi et al. 2004, Yoshino et al. 2006, 2009). Deteksi CyHV-3 dapat dilakukan dengan nested PCR atau dengan menangkap virus partikel dengan antibodi diikuti oleh LAMP untuk mendeteksi partikel virus (El-Matbouli dkk. 2007a, Soliman & El-Matbouli 2009). Real-time PCR, nested PCR, dan semi-nested PCR adalah salah satu alat yang paling sensitif untuk mendeteksi CyHV-3 (Bergmann et al. 2010b). Dalam satu metode deteksi yang lebih elegan untuk CyHV-3 oleh Soliman & El-Matbouli (2005), produk LAMP-PCR divisualisasikan dengan mencampur dengan SYBR-Green saya untuk mengkonfirmasi positif hasil untuk CyHV-3 (Gambar. 2). Diferensiasi CyHV-3 isolat dari Israel, Jepang, dan AS dapat dicapai dengan analisis dari sejumlah variabel pengulangan tandem di coding dan daerah non-coding (al. Avarre et 2011). Selain berbagai metode molekuler untuk mendeteksi CyHV-3, antibodi monoklonal yang dihasilkan terhadap ORF68 juga telah dikembangkan untuk digunakan untuk mengkonfirmasikan CyHV-3 oleh imunohistokimia (Akoi et al. 2011). Sebuah sensitif enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) yang probe untuk menangkap ikan mas anti-KHV antibodi dikembangkan untuk deteksi tidak langsung CyHV-3 oleh Adkison dkk. (2005); satu sama lain dengan St-Hilaire et al. (2009). Sebuah ELISA lanjut yang menggunakan antibodi anti-KHV untuk Probe untuk menangkap partikel KHV dikembangkan oleh Disyon et al. (2005) dan dijual sebagai kit komersial. Penderitaan ikan dari KHVD diketahui memiliki bakteri sekunder Infeksi (Haenen et al. 2004), sehingga metode PCR berbasis masih ditambah dengan susunan DNA teknologi untuk cepat mendeteksi CyHV-3 ikan positif yang terinfeksi Flavobacterium (Lievens et al. 2011) atau bakteri lainnya. Penyelidikan primer dirancang terhadap mRNA exonic coding urutan memungkinkan untuk mendeteksi CyHV-3 selama tahap replikasi (Yuasa et al. 2012).

MODE OF Entry Tes bioluminescent menggunakan rekombinan CyHV-3 genom luciferase-mengekspresikan kloning menjadi kromosom buatan bakteri (BAC) mengungkapkan bahwa CyHV-3 dapat masuk melalui kulit dalam hubungannya dengan rute diduga sebelumnya masuk, insang (Costes dkk. 2009). Lecet epidermal menyediakan situs rentan terhadap masuknya virus, dan luka penyembuhan daerah yang juga rentan terhadap masuknya virus (Raj et al. 2011). Makan pada CyHV-3-positif materi menyediakan mode tambahan masuk untuk CyHV-3 melalui periodontal faring mukosa selama pengunyahan, dan diketahui bahwa CyHV-3 ulangan deras di usus (Fournier et al. 2012) daripada yang masuk melalui usus (Ilouze et al. 2010). Respon inflamasi dan TK mRNA yang terdeteksi dalam ikan mas usus 3 pasca perendaman dengan CyHV-3, dan gen claudin (claudin-2, -3, -11, -23 dan) yang berpartisipasi dalam pemeliharaan persimpangan ketat di sel epitel yang termodulasi dalam usus selama CyHV-3 Infeksi (Syakuri et al. 2013).

TRANSMISI Faktor lingkungan CyHV-3 menginduksi kematian yang tinggi untuk koi pada suhu antara 18 dan 28 ° C, tapi tidak ada mortalitas diamati untuk ikan CyHV-3-terkena pada 13 ° C (Gilad et al. 2003). CyHV-3 adalah ditularkan secara horizontal melalui kotoran ikan yang sakit; Oleh karena itu, memiliki kepadatan tinggi ikan seperti di perusahaan budidaya akan memperburuk suatu CyHV-3 wabah dengan memfasilitasi pelepasan tingkat tinggi CyHV-3 melalui kotoran ikan yang sakit (Disyon et al. 2005). CyHV-3 titer dalam air sungai dan danau yang terkontaminasi dapat diukur dengan berkonsentrasi partikel virus menggunakan ultrasentrifugasi atau filter berlapis kationik diikuti oleh kuantitatif real-time PCR (qPCR) (al. Honjo et 2010). Penggunaan qPCR telah menunjukkan bahwa CyHV-3 konsentrasi bervariasi di dekat situs penyimpanan plankton dan kemungkinan terkonsentrasi oleh Filter- makan Rotifera (Minamoto et al. 2011). CyHV-3 dapat ditularkan ke ikan mas ketika makan plankton langsung, atau bivalvia yang telah diberi plankton dan telah terkonsentrasi CyHV-3 di tabung pencernaan mereka (Minamoto et al. 2011). Organisme filter-makan lainnya, seperti moluska air tawar dan krustasea, juga dapat menguji positif untuk CyHV-3 (Kielpinski et al. 2010). Kawin juga dapat meningkatkan prevalensi CyHV-3 dengan menggabungkan terinfeksi ikan dan / atau menyebabkan pengurangan respon imun (Uchii et al. 2011). Penting tingkat CyHV-3 DNA terdeteksi di laguna 1 bln sebelum acara kematian massal, dan konsentrasi yang sama juga terdeteksi di sebuah danau yang telah bebas dari CyHV-3 terkait Peristiwa kematian massal selama 3 tahun (Honjo et al. 2010). Beberapa strain bakteri alami yang jelas air CyHV-3 dan dengan demikian mengurangi infektivitas CyHV-3 di lingkungan alam dalam beberapa hari (Shimizu et al. 2006).

Operator Selamat dari KHVD memiliki CyHV-3 DNA di hati, jantung, insang, dan mata, dan CyHV-3 mungkin bertahan dalam sel-sel epitel gastrointestinal atau leukosit (Bergmann et al. 2009, Eide dkk. 2011a). Bertahan ikan mas yang pembawa CyHV-3 dan dapat mengeluarkan virus terutama berikut kegiatan yang terkait dengan stres seperti bersarang (Bergmann & Kempter 2011). Ikan mas telah ditunjukkan untuk menjadi tuan rumah CyHV-3 virus ketika co-habitated dengan koi yang terinfeksi (El-Matbouli et al. 2007b, Bergmann et al. 2010a). Goldfish juga telah dilaporkan untuk bertindak sebagai operator untuk CyHV-3 di AS (Sadler et al. 2008). Leukosit dari kedua koi dan ikan mas telah diuji positif untuk CyHV-3. Selain itu, dalam studi kohabitasi, ikan mas yang terinfeksi menular virus untuk koi naif seperti yang ditunjukkan oleh

immunostaining dengan anti-CyHV-3 serum, in situ hibridisasi, dan PCR (Bergmann et al. 2010a). Dalam sebuah penelitian serupa, ikan mas menunjukkan ke bertindak sebagai pembawa untuk CyHV-3 dalam percobaan hidup bersama dengan ikan mas naif (El- Matbouli & Soliman 2011). Bersarang PCR telah mengungkapkan CyHV-3 DNA dalam sampel yang sehat ikan termasuk ikan mas rumput Ctenopharyngodon idella, biru ide kembali Leuciscus idus, dan Ancistrus sp., Menunjukkan bahwa spesies ikan ini mungkin operator potensi CyHV-3 (Bergmann et al. 2009). Demikian pula, Ikan sturgeon Rusia Acipenser guel denstaedtii dan Ikan sturgeon Atlantik A. oxyrinchus juga telah diuji positif untuk CyHV-3 DNA dengan PCR berbasis metode (Kempter et al. 2009).

Faktor yang mempengaruhi infeksi Meskipun muda dan dewasa ikan mas yang rentan terhadap CyHV-3, larva ikan mas yang tahan terhadap infeksi oleh CyHV-3 (Ito et al. 2007). Polimorfisme nukleotida tunggal dalam gen respon imun bawaan dari ikan mas, seperti di Toll-like atau pada gen IL-10a, mungkin membedakan ketahanan terhadap CyHV-3 (Kongchum et al. 2010, 2011). Peningkatan regulasi dari 8 gen yang berhubungan dengan kekebalan tubuh, termasuk interferon diinduksi protein-pertunjukan seperti 1 dan penekan dari sitokin sinyal 1 diamati pada korban KHVD, selain lebih cepat sitokin reaksi KHV (Rakus et al. 2012). CyHV-3 juga mungkin dapat memodulasi respon interferon dalam jenis sel yang berbeda (Adamek et al. 2012). Infeksi CyHV-3 downregulates gen pertahanan kulit seperti muc5B, komponen dari selimut lendir, claudin (23, 30), yang penting untuk pemeliharaan persimpangan ketat, dan anti mikroba peptida seperti β-defensin-1 dan -2, yang terlibat dalam infeksi bakteri sekunder (Adamek et al. 2013). Namun, lendir memberikan perlindungan bawaan terhadap masuknya virus dengan menyediakan ikan dengan penghalang kental terhadap masuk dan sebagai media penyimpanan untuk menetralkan virus faktor (Raj et al. 2011). Oleh karena itu, meskipun kulit dapat mengalami CyHV-3 entri (Costes dkk. 2009), karena perlindungan yang lendir menyediakan, saluran pencernaan dan atau insang jaringan yang semakin besar kemungkinan jalur untuk CyHV-3 entri (SM Bergmann pers. obs.).

PENGARUH histopatologi CYHV-3 Karakteristik ikan CyHV-3 yang terinfeksi meliputi kehilangan nafsu makan, tidak menentu dan tidak terkoordinasi gerakan, dan terengah-engah (Hutoran et al. 2005). CyHV-3 terdeteksi dalam lendir sebagai awal 1 d posting infeksi, dan titer signifikan juga terdeteksi di otak, limpa, ginjal, hati, dan usus koi yang terinfeksi (Gilad et al. 2004). Tanda-tanda klinis utama CyHV-3 Penyakit meliputi: hilangnya epidermis, perubahan warna, erosi sirip ekstremitas, dan peningkatan di produksi lendir di insang (Bretzinger et al. 1999). Perubahan histopatologi yang disebabkan oleh CyHV-3 mencakup: lesi dan nekrosis pada insang dan jaringan ginjal interstisial, dan fokus nekrosis dalam tubuh hati dan inklusi nuklir di jaringan insang (Gambar. 3) dan di ginjal glomerulae (Perelberg et al. 2003). CyHV-3 yang terinfeksi ikan mas ditampilkan inklusi mayat di splenocytes, degenerasi nuklir di sel miokard, dan kemacetan kapiler di vena kecil dari otak (Miyazaki et al. 2008). Selain itu, CyHV-3 penyebab hiperplasia dari lapisan epitel yang kelenjar lambung dalam perut dan usus yang vili di usus membentuk proyeksi papiler kistik, dan hiperplasia sel pernapasan mengakibatkan fusi lamella dan pendarahan di ujung lamella dalam insang (El-Din 2011).

SEL BUDAYA DAN REPLIKASI VIRUS Sel CyHV-3 yang terinfeksi menampilkan sitoplasma padat dengan organel morfologi yang mendegradasi sebagai replikasi virus berlangsung (Miyazaki et al. 2008). CyHV-3 telah dibudidayakan di koi sirip ekor (KF-1) dan otak ikan mas (CCB) (Gambar. 4) kultur sel, dan telah terbukti untuk mereplikasi dalam kultur sel berasal dari ikan mas perak Hypophthalmichthys molitrix dan ikan mas (Neukirch & Kunz 2001, Davidovich et al. 2007, Bergmann et al. 2010a, Dong et al. 2011). CPE disebabkan oleh infeksi CyHV-3 juga telah diamati 15 d posting inokulasi FHM (Grimmett et al. 2006). Replikasi optimal untuk CyHV-3 di-KF 1 sel-line terjadi antara 15 dan 25 ° C (Gilad et al. 2003). Real-time PCR ditentukan bahwa minimal 6 × 10 3 setara genomik CyHV-3 yang diperlukan untuk mengamati CPE di 10 6 KF-1 (fin koi) sel, dan CyHV-3 titer berkisar antara 107 dan 109 setara genom per 10 6 KF-1 sel selama infeksi puncak lendir, hati, ginjal, limpa, usus, dan otak (Gilad et al. 2004). Morfogenesis Elektron mikroskop gambar dari jatuh tempo virus menunjukkan bahwa CyHV-3 ulangan dalam inti dan membentuk kapsid dengan karakteristik mirip dengan virus herpes mamalia dalam hal tonjolan ke dalam dan melalui membran nuklir (Miwa et al. 2007). Awalnya di inti, dewasa CyHV-3 nukleokapsid yang memiliki kerapatan elektron rendah dan 100 nm diameter terbentuk. Selanjutnya, nukleokapsid dewasa dengan kerapatan elektron tinggi dan 117 nm diameter terbentuk (Miyazaki et al. 2008). Kapsid dewasa dengan diameter antara 150 dan 180 nm yang terletak di wilayah perinuklear mana mereka mulai kuncup off dan membawa mereka bagian dari amplop nuklir (Miyazaki et al. 2008). Transmisi elektron studi mikroskopis (TEM) dari CyHV-3 menunjukkan bahwa virus membentuk simetris ikosahedron; Namun, wilayah virus inti elektron-padat wilayah asimetris di mana kompleks DNA dan nukleoprotein genom ada (Hutoran et al. 2005). Elektron yang inti padat dari CyHV-3 dewasa, seperti yang diamati dengan TEM, menunjukkan diameter antara 170 dan 230 nm dan inti protein menjadi 110 nm (Cheng et al. 2011).

GEN FUNGSIONAL Genom masing-masing CyHV-3 isolat (Israel, Jepang, dan Amerika Serikat) terdiri dari 295 kB dengan 22 kB terminal repeat; Oleh karena itu, 164 ORFs potensial terdiri dari 8 ORFs diulang sayap yang kedua ujung genom (Aoki et al. 2007). Dari 156 ORFs potensi unik di yang CyHV-3 genom, studi spektrometri massa diidentifikasi 40 protein dalam virion dewasa yang termasuk 3 protein kapsid, 13 protein amplop, 2 protein tegument, dan 22 struktural protein yang belum diklasifikasikan (Michel et al. 2010b). Sebuah laporan terbaru oleh Ilouze dkk. (2012a) ditunjukkan oleh terbalik transcriptase-real-time PCR yang ke-156 ORFs dari CyHV-3 ditranskripsi, dan ORFs telah dijelaskan dalam hal relatif transkripsi waktu. Tiga gen yang terlibat dalam sintesis dNTP diperlukan untuk sintesis DNA, yaitu. timidilat monofosfat kinase, reduktase ribonucleotide (RNR), dan TK, berbagi homologi dengan cacar gen virus (Ilouze et al. 2006). Namun, TK, RNR, dan gen lain terlibat dalam sintesis DNA, deoxyuridine trifosfat pyrophosphatase, non-esensial untuk replikasi virus di baris sel CCB, tetapi gen ini merupakan faktor virulensi penting dalam mempengaruhi tanda-tanda dan kematian klinis (Fuchs et al. 2011). Protein yang dikode oleh ORF81 ditunjukkan untuk dimasukkan ke amplop virus utuh CyHV-3 partikel oleh mikroskop immunogold (Rosenkranz et al. 2008). Mayoritas CyHV-3 gen yang terlibat dalam sintesis DNA dieliminasi dalam waktu 24 jam dalam sel yang terinfeksi CCB yang ditransfer ke 30 ° C (suhu yaitu non-permisif); Namun, TK, B22Rh, ITP (tripleks

intercapsomeric protein), dan klon gen Y bertahan sampai 15 d setelah transfer (Disyon et al. 2007). Di sebuah percobaan paralel dalam laporan tersebut, B22R homolog, Orf4, ORF5, dan Gray Sph1hpi adalah yang pertama 4 gen akan kembali ditranskripsi setelah sel yang terinfeksi diinkubasi selama 22 jam pada 30 ° C untuk membersihkan CyHV-3 transkrip dan kembali dipindahkan ke 22 ° C (yaitu permisif suhu). Sebuah BAC membawa seluruh CyHV-3 genom dengan gangguan gen TK ditampilkan mengurangi virulensi dan menyebabkan penurunan 50% angka kematian di koi dibandingkan dengan BAC reversi yang memiliki gen yang memproduksi TK tambahan (Costes dkk. 2008). Protein skrining dengan antibodi terhadap glikoprotein ORF56 mengungkapkan bahwa CyHV-3 berinteraksi dengan sejumlah protein pertahanan tuan rumah yang mencakup lysozymes dan granulins, dan dengan mesin terlibat dalam modifikasi protein seperti PI, glutathione S-transferase rho, dan anggota dari jalur degradasi ubiquitin (Gotesman et al. 2013). ORF134 mengkodekan homolog interleukin-10, ekspresi yang lebih tinggi selama akut dan fase aktivasi CyHV-3 penyakit (Sunarto et al. 2012).

Profilaksis DAN PENGENDALIAN Imunisasi Imunisasi terhadap CyHV-3 ini dicapai dengan mengekspos ikan mas selama 2 sampai 3 d dengan infeksi CyHV-3 dan kemudian mentransfer ikan mas terkena suhu non-permisif (30 ° C), atau dengan menggunakan virus hidup yang dilemahkan diproduksi oleh in vitro bagian serial dan perawatan dengan ultraviolet (UV) iradiasi (Ronen et al. 2003, Perelberg et al. 2005). Tantang dengan virus dilemahkan atau tipe liar menunjukkan bahwa antibodi yang diproduksi di ikan yang terinfeksi dapat menetralisir CyHV-3 in vivo (Perelberg et al. 2008). Adkison dkk. (2005) juga menunjukkan bahwa pengobatan dengan antibodi CyHV-3-diinduksi dapat menipiskan CyHV-3 infeksi. Bertahan koi yang diinokulasi dengan strain BAC diturunkan membawa baik penuh kekuatan atau dilemahkan CyHV-3 resisten terhadap CyHV-3 penyakit (Costes dkk. 2008). Sebuah US paten telah diajukan berdasarkan metode tersebut imunisasi (Costes dkk. 2011). Pemodelan matematika memprediksi bahwa inokulasi ikan budidaya dengan CyHV-3 selama musim gugur akan menghasilkan ikan mas KHVD tahan dalam kesiapan untuk musim permisif berikut (Omori & Adams 2011).

Diimunisasi ikan mas menjadi operator? Sebuah cacat potensial di imunisasi ikan mas terhadap CyHV-3 oleh pergeseran suhu adalah bahwa diimunisasi ikan dapat menjadi operator untuk virus. Ancaman ini ditunjukkan oleh munculnya kembali CyHV-3 dalam budaya dari garis sel CCB yang akut terkena CyHV-3 dan kemudian pindah ke suhu non-permisif (30 ° C) selama 30 d (Disyon et al. 2007). Selanjutnya, Bretzinger dkk. (1999) awalnya melaporkan bahwa koi dipertahankan pada 12 ° C CyHV-3 yang terkena dampak (yaitu suhu non-permisif) adalah sub-klinis; Namun, mereka segera menunjukkan tanda-tanda klinis dan meninggal saat suhu dinaikkan menjadi 21 ° C (suhu yaitu permisif). Sub-klinis ikan yang diimunisasi untuk CyHV-3 oleh inkubasi pada 12 ° C (yaitu non-permisif suhu) mengalami tingkat kematian 57%, dan naif (non-terinfeksi) ikan mengalami 100% Angka kematian ketika mereka cohabitated pada 20 ° C (St-Hilaire et al. 2005). Selanjutnya, Ikan CyHV-3 yang terinfeksi dilakukan antibodi terdeteksi spesifik untuk CyHV-3 sampai 65 minggu pasca eksposur, dan dikembangkan CyHV-3 tanda-tanda penyakit dan kematian bahkan ketika diinkubasi pada non suhu permisif (12 ° C) selama 25 minggu setelah kembali ke suhu permisif (St- Hilaire et al. 2009). CyHV-3 tetap laten dalam sel darah putih dan dapat dideteksi dengan real- time PCR dalam jaringan insang dan kotoran deposito berikut stres

panas (Bergmann et al. 2010b, Eide et al. 2011b). Secara kumulatif, laporan tersebut menunjukkan potensi tinggi untuk CyHV-3 untuk bertahan di operator sub-klinis dan menginfeksi ikan naif, dan imunisasi akan lebih menyebarkan virus.

Pembastaran Strain negeri Israel ikan mas, yang dikenal sebagai Dor-70 dan Našice (dari bekas Yugoslavia), yang blasteran dengan strain Republik asli dikenal sebagai Sasson menunjukkan lebih tinggi signifikan tingkat kelangsungan hidup untuk KHVD (64 dan 69%) dibandingkan dengan orang-orang dari strain orangtua Dor-70 dan Nasice (28 dan 9%, masing-masing;. Shapira et al 2005). Percobaan serupa di Inggris menunjukkan bahwa persilangan ikan mas dengan 'liar' yang berasal dari galur Amor atau Duna Sungai di Hungaria menghasilkan ikan mas yang lebih tahan terhadap KHVD dari dijinakkan ikan mas (Dixon et al. 2009). Crossbreeds koi × crucian ikan mas Carassius Carassius dan koi ikan mas dianalisis untuk ketahanan terhadap KHVD. Kedua crossbreeds menunjukkan patologis tanda-tanda KHVD; Namun, meskipun koi umum × crucian ikan mas hybrid menunjukkan sejenis tingkat kematian untuk ikan mas berkembang biak murni setelah infeksi CyHV-3-I (91 dan 100%, masing-masing), hibrida antara koi dan ikan mas menunjukkan penurunan mortalitas (35%; Bergmann et al. 2010c).

KESIMPULAN CyHV-3 awalnya digambarkan oleh Hedrick et al. (2000) sebagai koi virus yang mempengaruhi serius dan ikan mas di AS dan Israel. Saat ini, CyHV-3 merupakan ancaman epidemi serius untuk koi dan ikan mas di seluruh dunia dalam hal pembibitan koi, dan untuk produksi ikan mas di lingkungan alam dan dalam budidaya. CyHV-3 adalah anggota keluarga Alloherpesviridae, dan merupakan virus DNA beruntai ganda yang terdiri dari genom 295 kb yang kode untuk 156 gen, yang semuanya telah dijelaskan dan dibuktikan ditranskripsikan (Ilouze et al. 2012a). Virus dapat mereplikasi dalam jumlah baris sel termasuk CCB, KF-1, dan EPC. KHVD terbatas koi dan ikan mas; Namun, ikan mas, biru kembali ide, Ikan sturgeon dan Rusia dan Atlantik dapat bertindak sebagai operator untuk virus. Spesifik dan metode diagnostik divalidasi untuk deteksi dan identifikasi, terutama untuk subklinis infeksi, yang diprediksi akan menjadi yang paling penting alat untuk mencegah penyebaran CyHV-3 (Pearson 2004); Namun, virus telah menyebar di Eropa, Asia, dan Amerika Utara. Sebuah penggunaan praktis untuk CyHV-3 telah dijelaskan di Australia, di mana ikan mas telah diperkenalkan dan dianggap sebagai spesies hama yang baru-baru ini telah dikaitkan dengan penurunan spesies ikan asli Australia. CyHV-3 dianggap sebagai agen kontrol potensial untuk memberantas ikan mas di Australia (McColl et al. 2007). Untungnya, CyHV-3 belum terdeteksi di India dengan menggunakan baik primer PCR yang dikembangkan oleh Ronen et al. (2003) atau yang baru primer maju yang secara khusus menargetkan protein kapsid utama CyHV-3 (Rathore et al. 2009). Namun, negara-negara penghasil utama ikan mas-lain, seperti Cina, Indonesia, dan Jepang, telah melihat insiden meningkat dari KHVD (Dong et al. 2011, Avarre et al. 2012, Minamoto dkk. 2012). Beberapa langkah telah diambil dalam beberapa tahun terakhir untuk mengendalikan penyebaran CyHV-3, seperti pengakuan ancaman dan pengembangan alat-alat yang cepat dan sensitif untuk deteksi virus. Metode lain termasuk imunisasi ikan mas oleh infeksi 'wild type' menular virus dan kemudian mentransfer ikan untuk suhu yang non-permisif untuk CyHV-3 replikasi atau oleh infeksi dari ikan mas dengan virus dilemahkan. Pembiakan selektif program untuk berkembang biak ikan mas KHVD tahan juga telah dimulai. Setiap upaya untuk mengandung

CyHV-3 harus mengakui bahwa korban CyHV-3 wabah dapat menjadi operator untuk virus (St-Hilaire et al. 2005, Uchii et al. 2009, Bergmann et al. 2010b, Eide et al. 2011b, Ilouze dkk. 2012b).