Lokakarva Fungsional Non Pene liti 1999

TEKNIS ANALISIS ASAM LEMAK MUDAH MENGUAP

(VFA) DENGAN ALAT GAS KROMATOGRAFI

ENDANG NUGRAHA

Balai Penelitian Ternak, PO Box 221, BOGOR

RINGKASAN

Gas kromatografi adalah suatu teknik analisis berdasarkan distribusi pemisahan

contoh pada dua fase yang berbeda. Sebagai fase diam (padat) adalah kolom dan fase

geraknya adalah gas . Teknik analisis gas kromatografi pertama kali dikembangkan oleh

Ramsey pada tahun 1905 .

Dengan teknik gas kromatografi bisa ditentukan kandungan asam lemak mudah

menguap dan faktor terpenting pada teknik ini adalah tersedianya jenis kolom ; jenis isi

kolom; jenis gas ; jenis detektor; jenis larutan standar ; dan besar mesh dari contoh .

PENDAHULUAN

Dasar dari gas kromatografi adalah berdasarkan distribusi pemisahan contoh

pada dua fase yang berbeda. Fase pertama adalah fase diam (padat) dan fase yang kedua

adalah fase bergerak (gas) . Sebagai fase diam pada kromatografi adalah kolom,

sedangkan fase bergeraknya adalah gas . Kolom berfungsi sebagai jantung pada analisis

kromatografi . Apabila kolomnya berupa padatan biasa disebut dengan istilah GSC (Gas

Solid Chromatographi ), sedangkan apabila fase diam nya berupa larutan maka disebut

GLC (Gas Liquid Chromatographi). Ada beberapa jenis kolom yang biasa digunakan

pada alat gas kromatografi diantaranya adalah kolom tembaga, alumunium, baja, gelas

dan yang paling mutakhir kolom kapiler. Kolom padat bisa berisi antara lain silika gel,

molekul halus dan arang batubara . Pada kolom kapiler berisi bahan larutan inert yang

tidak bereaksi baik dengan contoh maupun gas yang digunakan . Pada GLC suhu yang

digunakan tidak lebih dari 400C, oleh sebab itu perlu selektifitas penggunaan suhu

sewaktu analisis dilakukan . Gas kromatografi bisa digunakan untuk analisis bahan gas,

bahan larutan dan bahan padatan (H .M . Mc .Nair & E.J .Bonneli, 1967) . Gas

kromatografi pertama kali dikembangkan oleh Ramsey pada tahun 1905 . Dengan gas

kromatografi terjadi suatu teknik pemisahan contoh yang dialiri suatu gas penibawa

melewati kolom (H.M.Mc.Nair & E.J .Bonneli, 1967 ) . Bagian-bagian terpenting pada

alat gas kromatografi adalah silinder gas, indikator aliran gas, injektor, kolom, detektor,

Integrator/recorder, dan termostat untuk injektor, kolom, dan detektor seperti yang

terlihat pada gambar 1 .

209

2 1 0

Thermostats

Flow

Recorder

Controller

Detector

Column

Carrier

Gas

Enlarged Cross Section

Gambar 1 . Skema sistem alat gas Kromatograpi

BAHAN DAN CARA KERJA

Loknkruya Fungslonol Non Peneliti 1999

Materi berupa contoh rumen dan limbah yang dapat diperoleh didalam negeri

umumnya berbentuk cairan. Untuk bahan padatan terlebih dahulu diekstrak dengan

ditambahkan air suling sebanyak 1 :1, dari hasil ekstrak diambil2 ml sebagai larutan

contoh .

Sebanyak 2 ml larutan contoh dipipet kedalam tabung plastik10 ml, kemudian

ditambahkan 30 mg sulfosalisil acid dan diaduk hingga homogen. Selanjutnya di pusing

kan dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 menit. Larutan bagian atasyang terpisahkan

disaring dengan menggunakan kertas saring millipore berdiameter 0,22 mm dan

ditampung kedalam tabung gelas 5 ml .Hasil saringan di-injeksikan sebanyak 0,5 ul

hingga 1 .0 ul kedalam alat GC"HEWLETT PACKARD" model 5890 dengan detektor

FID (Detektor ionisasi nyala ) .Injeksi standar sama perlakuannya dengan injeksi larutan

contoh. Kolom yangdigunakan adalah kolom baja yang diisi dengan 10% Sp-AT-1200

pada kromosob WAW.DMCS (80/100 mesh), panjang kolom6 feet(183 cm), diameter

dalam 0,20 cm dan diameter luar 0,40 cm . Sebagaigas pembawa adalah Nitrogen HP

dengan kecepatan alir 2,5 ml/ 5 detik dan sebagai gaspembakar dipakai gas oksigen dan

gas hidrogen dengan kecepatan alir masing-masing5 ml/ detik dan 5 ml/detik. Suhu

kolom adalah 125C(isotermal), sedangkan suhu pada injektor dan detektor masing-

masing 160 C dan 200C .Respon dari teknik analisa asam lemak mudah inenguap pada

Lokukarva Fungsional Non Penrlui1999

alat kromatografi ditampilkan dalam kertas kromatogram dengan kecepatan gerak kertas

1,0 cm/menit dan attenuasinya 4 Hasi1 kromatrogram dicatat den-al integrator jenis

HP 3396 A . Persentase asam lemak mudah menguap memakai satuan ul/ml pada

masing-masing komponen .

Rumusnya adalah : % Komponen = areacontoh x ul/ml standar

area standar

Bila akan dihitung dengan persen bobot (ul/100gram contoh) maka rumus

perhitungannya sebagai berikut

Komponen = areacontoh x ul/ml standar x 100

area standar

Standar asam lemak bebas yang digunakan adalah standar VFA yang

mengandung rantai C2 sampai C5, produk Supelco Inc, Bellefonte,Pensnsylvania terdiri

dari acetic, propionic, iso butiric, normal butiric, iso valeric dan normal valeric . Pada

bahan standar tidak dilakukan penambahan sulfosalisil acid dan pemusingan, karena

bahan tersebut sudah dalam bentuk larutan murni yang mengandung 1 ul/ml dari

masing-masing komposisi .

HASIL DAN PEMBAHASAN

Pada teknis analisis asam lemak mudah menguap diperlukan hasil saringan

larutan contoh . Ukuran contoh yang terlalu besar meshnya dapat berakibat pada

pembentukan kurva yang melebar. Pra-kondisi kolom yang baik diperoleh setelah

kromatrogram yang terbentuk benar-benar terpisahkan satu sama lain seperti yang

terlihat pada hasil injeksi larutan standar . Optimumnya suhu yang digunakan dapat

berpengaruh pada pembentukan kurva pada kromatogram . Dan rendahnya suhu pada

kolom akan mengakibatkan pembentukan kurva yang berhimpitan dan mcnumpuk pada

satu skala . Detektor yang kotor atau terkontaminasi oksigen akan bcrdampak pada

pembentukan kurva menjadi negatip (kurva mengarah ke bawah) . Rendah atau

tingginya suhu injektor akan menyebabkan pembentukan kurva menjadi kcrdil (pcndek)

dekat dengan garis dasar . Hal yang sama terjadi apabila nilai attenuasi terlalu tinggi .

Kondisi kolom yang belum stabil (tidak optimum) akan berakibat pada pembentukan

kurva yang bervariatif dan menumpuk pada satu skala. Tanpa injeksi larutan contoh

dan standar kromatogram yamg dihasilkan berbentuk lurus dan sejajar pada garis.

Analisis gas kromatografi bisa digunakan di bidang industri makanan ; industri farmasi ;

industri pertanian dan industri perminyakan .

KESIMPULAN

Faktor terpenting untuk mendapatkan hasil terbaik pada teknis analisis asam

lemak mudah menguap tergantung pada : jenis kolom, jenis padatan, jenis gas,

kandungan larutan contoh, jenis detektor, tata cara pembuatan kolom dan panjang

kolom dan juga suhu alat serta jenis standar yang digunakan .

2 1 1

DAFTAR BACAAN

Lokakarya Fungsional Non Peneliti 1999

H.M . Mc Nair & E.J . Bonelli. Basic Gas Chromatographi, Varian Aerograph 2700,

1967, Mitchell Drive, Walnut Creek, California 94598, U .S .A .

Farihah Wildan, Perbandingan Komposisi asam lemak Rantai panjang dari Lemak

Hewani dan Lemak Nabati, Prosiding Loka Karya Fungsional Non Peneliti,

tanggal 15-16 Desember1998, Puslitbang Peternakan, Bogor , Departemen

Pertanian 1998 .

Scheneider,K ., M .Neuperth and G.Spiteller .1985, J.Chromatography .345, p 19-25

Brian Thompson, 1977, Fundamentals of gas Analysis by gas Chromatography, Varian

Associates, Inc. Library of Congress Catalog Card Number 77 - 71187

Manufactured in the United States of America .

2 1 2

page 1page 2page 3page 4