efektivitas ekstrak daun sirih (piper betle linn...
TRANSCRIPT
EFEKTIVITAS EKSTRAK DAUN SIRIH (Piper betle Linn)
SEBAGAI LARVASIDA TERHADAP
LARVA Culex sp INSTAR III/IV
Laporan Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk
memperoleh gelar SARJANA KEDOKTERAN
OLEH :
SYABILA FANYA MAHARANI
1113103000090
PROGRAM STUDI KEDOKTERAN DAN PROFESI DOKTER
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UIN SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
1437 H / 2016 M
ii
iii
iv
v
KATA PENGANTAR
Bismillahirrahmanirahim.
Puji syukur kami panjatkan kepada Allah SWT atas segala nikmat, rahmat,
dan inayah-Nya sehingga penelitian ini dapat terselesaikan dengan judul “Efektivitas
ekstrak daun sirih (Piper betle Linn) sebagai larvasida terhadap larva Culex sp instar
III/IV”
Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak,
sangatlah sulit untuk menyelesaikan penelitian ini. Oleh karena itu, dalam
kesempatan kali ini saya ingin menyampaikan penghargaan yang setinggi-tingginya
dan rasa terima kasih yang tak terhingga kepada:
1. Prof. Dr. H. Arif Sumantri, M.Kes selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan
Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
2. dr. Achmad Zaki SpOT, M.Epid selaku Ketua Program Studi Kedokteran
dan Profesi Dokter Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta
3. dr. H. Meizi Fachrizal Ahmad, M.Biomed dan Prof. Dr. dr Sardjana
SpOG(K), SH selaku dosen pembimbing yang telah banyak menyediakan
waktu, tenaga, dan pikiran untuk mengarahkan kami dalam penyusunan
penelitian ini.
4. dr. Nurul Hiedayati, Ph.D dan ibu Silvia Fitrina Nasution, M.Biomed
sebagai penguji sidang skripsi yang telah meluangkan waktu dan tenaga
serta banyak memberikan masukan agar penelitian kami lebih baik.
5. dr. Flori Ratna Sari, PHD selaku penanggung jawab riset Program Studi
Kedokteran dan Profesi Dokter angkatan 2013
vi
6.
vii
ABSTRAK
Syabila Fanya Maharani. Program Studi Kedokteran dan Profesi Dokter.Efektivitas
Daun Sirih (Piper betle Linn) Sebagai Larvasida Terhadap Larva Culex sp.
Latar belakang: Penggunaan bahan kimiawi sebagai larvasida dalam jangka waktu
lama dapat menyebabkan resistensi pada nyamuk dan pencemaran lingkungan. Daun
sirih (Piper betle Linn) dapat menyebabkan kematian pada larva, dan bersifat aman
terhadap hewan, serta aman bagi lingkungan. Tujuan: untuk mengetahui pengaruh
daun sirih (Piper betle Linn) terhadap kematian larva Culex sp, serta konsentrasi
efektif yang menyebabkan 50% dan 90% kematian larva. Metode penelitian:
Eksperimental, dengan rancangan penelitian yang digunakan adalah post test only
control group design. Sampel menggunakan purposive sampling berupa larva instar
III dan IV. Selanjutnya uji dilakukan dengan 5 konsentrasi daun sirih (Piper betle
Linn) yaitu 0,02%, 0,04%, 0,08% , 0,16%, dan 0.32% serta kontrol negatif. Hasil:
Analisa statistik didapatkan bahwa konsentrasi daun sirih (Piper betle Linn)
berpengaruh kuat terhadap kematian larva. Nilai LC50 adalah 0,092% dan LC90 adalah
0,186%. Kesimpulan: Daun sirih (Piper betle Linn) efektif menyebabkan kematian
larva instar III dan IV nyamuk Culex sp.
Kata kunci: Efektivitas, Daun sirih (Piper betle Linn). Culex sp, larvasida, LC50,
LC90
ABSTRACT
Syabila Fanya Maharani. Medical and Professional Doctor Program Studies. The
Efectiveness of Piper betle Linn (Daun Sirih) as larvicides against larvae of Culex sp.
Background: The use of chemicals as a long term larvacide can cause resistance to
the mosquito and environmental contamination. Betle leaf (Piper betle Linn) can
cause death for the larvae, and are safe for animals, as well as safe for the
environment. Objective: To determine the effect of betle leaf (Piper betle Linn)
against the death of larvae of Culex sp, as well as the effective concentration that can
cause 50% and 90% mortality of larvae. Methodology: Experimental, with the design
of the research is a post test only control group design. Samples taken with purposive
sampling of third and fourth instar larvae. Further tests are conducted with five
concentrations of betle leaf (Piper betle Linn) at 0.02%, 0.04%, 0.08%, 0.16%, and
0.32% and a negative control. Results: The statistical analysis showed that the
concentration of betle leaf (Piper betle Linn) strongly affected the mortality of the
larva. LC50 value is 0.092% and the LC90 was 0.186%. Conclusion: The betle leaf
(Piper betle Linn) will effectively cause the death of the third and fourth instar larvae
of the mosquito Culex sp.
Keywords: Effectiveness, betle leaf (Piper betle Linn). Culex sp, larvicides, LC50,
LC90
viii
DAFTAR ISI
LEMBAR PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ....................................... ii
LEMBAR PENGESAHAN PEMBIMBING ................................................. iii
PENGESAHAN PANITIA UJIAN ................................................................. iv
KATA PENGANTAR ..................................................................................... v
ABSTRAK ........................................................................................................ vii
ABSTRACT ...................................................................................................... vii
DAFTAR ISI .................................................................................................... viii
DAFTAR TABEL ........................................................................................... x
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ xi
DAFTAR GRAFIK ......................................................................................... xii
BAB I PENDAHULUAN .............................................................................. 1
1.1 Latar Belakang .................................................................................... 1
1.2 Rumusan Masalah ............................................................................... 3
1.3 Hipotesis ............................................................................................. 3
1.4 Tujuan ................................................................................................. 3
1.4.1 Tujuan Umum ............................................................................ 3
1.4.2 Tujuan Khusus ........................................................................... 3
1.5 Manfaat Penelitian ............................................................................. 3
1.5.1 Manfaat Peneliti ......................................................................... 3
1.5.2 Manfaat Perguruan Tinggi ......................................................... 3
1.5.3 Manfaat Masyarakat ................................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .................................................................... 5
2.1 Culex sp ............................................................................................... 5
2.1.1 Klasifikasi Taksonomi ............................................................... 5
2.1.2 Distribusi Geografis Culex sp ................................................... 5
2.1.3 Morfologi dan Siklus Hidup ....................................................... 5
2.1.4 Perilaku nyamuk Culex sp .......................................................... 11
2.2 Sirih Hijau (Piper betle Linn) ............................................................. 12
2.2.1 Deskripsi Tanaman .................................................................... 12
2.2.2 Klasifikasi Taksonomi ............................................................... 13
2.2.3 Morfologi Sirih Hijau ............................................................... 13
2.2.4 Kandungan Daun Sirih Hijau ................................................... 14
2.2.5 Pemanfaatan Daun Sirih Hijau dalam Pemberantasan Vektor
Nyamuk di Indonesia ............................................................... 17
2.3 Kerangka Teori .................................................................................. 18
2.4 Kerangka Konsep ................................................................................ 19
2.5 Definisi Operasional ........................................................................... 20
BAB III METODOLOGI PENELITIAN ...................................................... 21
3.1 Desain Penelitian ................................................................................ 21
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian ............................................................. 21
3.2.1 Tempat dan Waktu Rearing Larva ............................................. 21
3.2.2 Tempat dan Waktu Determinasi Daun Sirih (Piper betle Linn) 21
ix
3.2.3 Tempat dan Waktu Ekstraksi Daun Sirih (Piper betle Linn) ..... 22
3.2.4 Pengenceran Ekstrak Daun Sirih (Piper betle Linn) .................. 22
3.3 Populasi dan Sampel Penelitian .......................................................... 22
3.3.1 Populasi Penelitian ..................................................................... 22
3.4 Jumlah Sampel .................................................................................... 23
3.5 Kriteria Sampel .................................................................................... 24
3.6 Alur Penelitian ................................................................................... 25
3.7 Alat dan Bahan .................................................................................... 26
3.8 Cara Kerja ........................................................................................... 27
3.8.1 Rearing Larva ........................................................................... 27
3.8.2 Uji Eksplorasi ............................................................................ 27
3.8.3 Uji Utama .................................................................................. 29
3.8.4 Pengumpulan Data .................................................................... 30
3.9 Analisis Data ....................................................................................... 30
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ......................................................... 32
4.1 Hsil Penelitian ..................................................................................... 32
4.1.1 Uji Eksplorasi ............................................................................. 32
4.1.2 Uji Utama ................................................................................... 32
4.2 Analisis Data ....................................................................................... 34
4.2.1 Uji Distribusi Data ..................................................................... 34
4.2.2 Uji One Way ANOVA ................................................................. 35
4.2.3 Uji Post-Hoc Least Significance Difference .............................. 35
4.2.4 Analisis Probit ............................................................................ 36
4.3 Pembahasan .......................................................................................... 38
BAB V PENUTUP ............................................................................................ 41
5.1 Kesimpulan ......................................................................................... 41
5.2 Saran ................................................................................................... 41
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 42
Lampiran
x
DAFTAR TABEL
Tabel 4.1 Jumlah Mortalitas Larva Culex sp pada Berbagai Konsentrasi
Ekstrak Daun Sirih (Piper betle Linn) setelah 24 jam Perlakuan
Pada Uji Eksplorasi ......................................................................... 32
Tabel 4.2 Jumlah Mortalitas Larva Culex sp pada Berbagai Konsentrasi
Ekstrak Daun Sirih (Piper betle Lin) setelah 24 jam Perlakuan
Pada Uji Utama .............................................................................. 33
Tabel 4.3 Hasil Uji Distribusi Data ................................................................ 35
Tabel 4.4 Hasil Uji Variasi Data .................................................................... 35
Tabel 4.5 Hasil Uji One Way ANOVA ........................................................... 35
Tabel 4.6 Hasil Uji Post-Hoc LSD .................................................................. 36
Tabel 4.7 Nilai Lethal Concentration and Confidence Limits Ekstrak daun
sirih (Piper betle Linn) terhadap kematian larva Culex sp setelah
24 jam perlakuan ............................................................................. 37
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Siklus Hidup Nyamuk Culex sp ............................................. 6
Gambar 2.2 Ciri Khas Nyamuk Culex sp ..................................................... 7
Gambar 2.3 Telur Nyamuk Culex sp .......................................................... 8
Gambar 2.4 Perbedaan Morfologi Larva Culex sp ...................................... 9
Gambar 2.5 Pupa dan Larva Nyamuk Culex sp ........................................... 10
Gambar 2.6 Nyamuk Culex sp .................................................................... 11
Gambar 2.7 Sirih Hijau ............................................................................... 12
Gambar 2.8 Daun Sirih Hijau (Piper betle Linn)......................................... 13
Gambar 2.9 Struktur Senyawa Fenol ........................................................... 14
Gambar 2.10 Struktur Senyawa Alkaloid .................................................... 15
Gambar 2.11 Struktur Senyawa Saponin ...................................................... 16
Gambar 2.12 Struktur Senyawa Steroid ........................................................ 16
xii
DAFTAR GRAFIK
Grafik 4.1 Mortalitas Rerata Larva Culex sp Terhadap Berbagai Konsentrasi
Ekstrak Daun Sirih (Piper betle Linn) Setelah 24 Jam ................ 34
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang
Filariasis atau yang biasa dikenal oleh masyarakat sebagai Penyakit
Kaki Gajah (elephantiasis), merupakan penyakit yang disebabkan oleh infeksi
cacing Nematoda famili Filarioidea. Jenis cacing tersebut adalah Wuchereria
Bancrofti, Brugia Malayi, dan Brugia Timori, dimana penularannya
diperantarai oleh nyamuk.1 Pada tahun 2014, World Health Association
(WHO) mencatat terdapat 1,3 miliar penduduk di 83 negara yang berisiko
tertular filariasis, dan lebih dari 60% Negara-negara tersebut berada di Asia
Tenggara.2 Diperkirakan lebih dari 120 juta orang diantaranya sudah
terinfeksi dan 43 juta orang sudah menunjukkan gejala klinis yaitu terjadinya
pembengkakan pada anggota tubuh, dan lebih banyak terjadi pada perempuan
dibandingkan pada laki-laki.2
Indonesia termasuk salah satu Negara endemis filariasis. Terutama
pada wilayah Indonesia Timur.3 Menurut Departemen Kesehatan RI (2009),
dari tahun ke tahun dilaporkan bahwa kasus filariasis terus meningkat. Pada
tahun 2009 terdapat 11.914 kasus yang tersebar di 401 kabupaten/kota.2 Di
Indonesia kasus filariasis terbanyak adalah di daerah Jakarta, Surabaya,
Pekalongan, dan Tangerang.2,4,5,6 Menurut penelitian mengenai epidemiologi
kasus filariasis di Tangerang selatan yang dilakukan oleh Abdullah Hamdani
Tadjoedin berdasarkan data yang didapat dari Dinas Kesehatan Kota
Tangerang Selatan pada tahun 2008 – 2012 terdapat 20 kasus filariasis.7 Dan
nematoda terbanyak yang menyebabkan terjadinya kasus filariasis tersebut
adalah Wuchereria Bancrofti.8,9
2
Vektor yang berperan dalam penyebaran filariasis adalah nyamuk
Culex sp, dan yang paling banyak ditemukan di Indonesia adalah jenis Culex
sp.1 Salah satu cara untuk menanggulangi kasus filariasis adalah dengan cara
mematikan vektor yaitu dengan mematikan larva nyamuk Culex sp, dan
biasanya menggunakan larvasida sintetik.8,10 Seringnya pemberian larvasida
sintetik menyebabkan terjadinya resistensi pada nyamuk.10,11 Menurut
penelitian yang dilakukan oleh Westy Ayu Permatasari dkk tahun 2015
menunjukkan bahwa telah terjadi resistensi pada nyamuk Aedes aegyptii
akibat pemberian larvasida yang berlebih.12 Selain larvasida sintetik, banyak
pula tumbuhan yang dapat dijadikan larvasida dikarenakan kandungan
kimiawi yang mereka miliki, salah satunya adalah daun sirih (Piper betle
Linn).
Daun sirih (Piper betle Linn) memiliki beberapa senyawa seperti
saponin, tannin, flavonoid, steroid, alkaloid, dan fenol yang diduga
bermanfaat sebagai larvasida.13 Menurut penelitian yang dilakukan oleh Made
Oka Adi Parwata dkk tahun 2011 menunjukkan terdapat hasil yang signifikan
mengenai aktivitas Ekstrak Daun Sirih (Piper betle Linn) dalam mematikan
larva nyamuk Aedes aegypti.13 Selain itu, pada penelitian lain oleh Handayani
dkk tahun 2013 menyatakan bahwa ekstrak daun sirih (Piper Betle Linn)
terbukti efektif sebagai larvasida bagi kematian larva nyamuk Aedes
aegyptii.14 Dan pada penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Mardiyah
tahun 2014 menunjukkan bahwa daun sirih (Piper betle Linn) memiliki
toksisitas yang efektif sebagai larvasida dan dapat membunuh larva nyamuk
Aedes aegypti.15
Berdasar beberapa penelitian yang telah dilakukan sebelumnya. Maka,
peneliti akan menggunakan ekstrak daun sirih (Piper betle Linn) sebagai
larvasida terhadap larva Culex sp.
3
1.2. Rumusan Masalah
Berdasarkan uraian di atas dapat dirumuskan masalah sebagai berikut:
1 Apakah ekstrak daun sirih (Piper betle Linn) efektif sebagai larvasida
pada larva Culex sp instar III atau IV di daerah Ciputat?
2 Berapakah Lethal Concentration 50% (LC50) dari ekstrak daun sirih
(Piper betle Linn)untuk membunuh larva Culex sp. Dalam 24 jam?
1.3. Hipotesis Penelitian
Hipotesis dari penelitian ini adalah ekstrak daun sirih (Piper betle Linn)
efektif sebagai larvasida pada larva nyamuk Culex sp instar III atau IV
1.4. Tujuan Penelitian
1.4.1. Tujuan Umum
Mengetahui efektivitas ekstrak daun sirih (Piper betle Linn) sebagai larvasida
pada larva Culex sp instar III atau IV
1.4.2. Tujuan Khusus
1. Mengetahui persentase kematian larva Culex sp. setelah pemberian
ekstrak daun sirih (Piper betle Linn)
2. Mengetahui nilai LC50 dan LC90 dalam 24 jam pada daun sirih (Piper betle
Linn)
1.5. Manfaat Penelitian
1.5.1. Bagi Peneliti
1. Meningkatkan pengetahuan mengenai potensi daun sirih sebagai larvasida
terhadap larva Culex sp.
1.5.2. Bagi Perguruan Tinggi
1. Menambah referensi penelitian dalam bidang kedokteran di Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
4
1.5.3. Bagi Masyarakat
1. Meningkatkan pemanfaatan daun sirih (Piper betle Linn) sebagai
larvasida pada larva nyamuk Culex sp
2. Sebagai informasi yang ilmiah kepada masyarakat mengenai pemanfaatan
daun sirih (Piper betle Linn) sebagai larvasida pada larva nyamuk Culex
sp
5
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.2. Culex sp
2.1.1. Klasifikasi taksonomi
Klasifikasi dari nyamuk Culex sp adalah sebagai berikut:
Kingdom : Animalia
Filum : Arthropoda
Kelas : Insecta
Ordo : Diptera
Sub Ordo : Nematocera
Famili : Culicidae
Subfamily : Culicinae
Genus : Culex16
2.1.2. Distribusi geografis Culex sp
Culex sp sendiri memiliki beberapa jenis, dimana banyak tersebar di
area tropis dan subtropik daerah Asia Tenggara seperti, Thailand, Singapura,
Malaysia, dan juga Indonesia. Nyamuk ini hidup dan berkembangbiak di air
yang keruh atau kotor seperti di got, selokan, comberan, sungai yang dipenuhi
sampah dan tempat-tempat lainnya yang tinggi pencemarannya.17,18,19 Begitu
pula dengan larva, lebih menyukai tempat-tempat yang tertutupi rumput
maupun tanaman air. Hal ini bertujuan agar larva terlindungi dari ikan dan
predator air lainnya.19
2.1.3. Morfologi dan Siklus Hidup Culex sp
Daur hidup nyamuk Culex sp terdiri atas stadium telur, larva, pupa,
dan nyamuk dewasa Nyamuk Culex sp termasuk ke dalam binatang yang
6
mengalami metamorfosis sempurna, yaitu melewati tahapan telur larva pupa
dewasa. Dimana larva akan menjadi pupa yang berkembang di dalam air, kemudian
dalam waktu 2-3 hari telur tersebut akan menetas menjadi larva yang disebut larva
instar 1.17 Selanjutnya larva akan berkembang menjadi larva instar 2, 3, dan 4.
Dimana pada setiap pergantian instar akan ditandai dengan pengelupasan kulit yang
disebut dengan ekdisis. Selanjutnya, larva instar 4 akan berkembang menjadi pupa
dan kemudian menjadi nyamuk.17 Siklus hidup nyamuk Cules xp dapat dilihat pada
gambar 2.1 dan untuk ciri nyamuk Culex sp dapat dilihat pada gambar 2.2
Gambar 2.1 Siklus Hidup Nyamuk Culex sp Sumber: American Mosquito Control Association. 2014.20
7
Gambar 2.2 Ciri khas nyamuk Culex sp
Sumer: Kent S Littig, 2012.21
1. Telur Culex sp
Nyamuk Culex sp bertelur di air tawar yang relatif kotor,
seperti pada genangan air, got saluran air, dan di tempat pembuangan
8
air limbah rumah tangga.17,22 Nyamuk Culex sp dapat bertelur 100 –
400 buah yang akan menetas dalam 24-30 jam setelah diletakkan di
dalam air.17,23 Telur tersebut akan berkelompok dan bila diperhatikan
akan terlihat seperti gambaran rakit di atas permukaan air.17,23 Pada
saat pertama kali nyamuk menetaskan telurnya, telur itu berwarna
putih dan setelah beberapa menit telur tersebut berubah warna menjadi
warna abu-abu, dan kurang dari 20 menit setelahnya, telur tersebut
akan berubah menjadi wana hitam.17 Gambaran telur nyamuk Cules xp
dapat dilihat pada gambar 2.3
Gambar 2.3 Telur Nyamuk Culex sp Sumber: Yogi Ismail Gani, 2011.24
2. Larva Culex sp
Dalam waktu 2 – 3 hari telur akan menetas menjadi larva, yang
disebut dengan larva instar I, selanjutnya akan berkembang menjadi
larva instar II, III, dan IV dengan waktu sekitar 6-8 hari, sesuai dengan
temperatur dan ketersediaan makanan.25. Setiap akhir instar, larva
akan melakukan pergantian kulit yang disebut dengan “moulting”.25
Ciri khas pada larva Culex sp adalah siphon yang panjangnya 4 kali
lebih panjang daripada larva nyamuk lainnya.26 Sifon (corong nafas)
digantungkan di atas permukaan air, sehingga dengan demikian larva
dapat mengambil makanannya.26 Beberapa faktor yang mempengaruhi
pertumbuhan dan perkembangan larva nyamuk antara lain suplai
nutrisi dan temperatur tempat larva hidup.23
9
Sesuai dengan perkembangannya, larva nyamuk dibagi
menjadi 4 tahap yaitu instar I, II, III dan IV.26
Instar I yaitu pada hari ke 1-2 setelah telur menetas dengan ukuran
1-2 mm.
Instar II yaitu pada hari ke 2-3 setelah telur menetas dengan
ukuran 2,5 - 3,5 mm.
Instar III yaitu pada hari ke 3-4 setelah telur menetas dengan
ukuran 4-5 mm.
Instar IV yaitu pada hari ke 4-6 setelah telur menetas dengan
ukuran 5-6 mm.23 Gambaran perbedaan morfologi larva Cules xp
dapat dilihat pada gambar 2.4
Gambar 2.4 Perbedaan Morfologi Larva Culex sp Sumber:University of Michigan Museum of Zoology Culex, 2016.27
3. Pupa Culex sp
Waktu yang dibutuhkan dari seekor larva menjadi pupa
adalah selama 5-8 hari. Fase pupa untuk menjadi nyamuk berlangsung
selama 1-3 hari. Pada saat menjadi pupa, bagian kepala dan dada
bergabung menjadi cephalothoraks dengan perut melengkung
sehingga terlihat seperti bentuk koma dan pupa bergerak secara
10
aktif.17,23,26 Pupa sering naik ke permukaan air untuk bernapas melalui
sepasang terompet pernafasan di bagian toraksnya.26 Pada fase ini,
pupa tidak memerlukan makanan dan terjadi perkembangan organ
tubuhnya seperti sayap untuk persiapannya menjadi nyamuk dewasa.19
Gambaran pupa dan larva nyamuk Cules xp dapat dilihat pada gambar
2.5
Gambar 2.5 Pupa dan Larva Nyamuk Culex sp Sumber: NSW Arbovirus Surveillance and Vector Monitoring Program.28
4. Nyamuk dewasa Culex sp
Setelah 2 – 3 hari, dari pupa akan muncul nyamuk dewasa
melalui proses robeknya kulit pada bagian toraks.17 Tubuh nyamuk
Culex sp dewasa berwarna hitam kecoklatan yang terdiri atas bagian
kepala, toraks, dan abdomen. Pada bagian kepala terdapat sepasang
mata, antenna yang terdiri atas 15 ruas, dimana antenna pada nyamuk
jantan lebih lebat bila dibandingkan dengan nyamuk betina karena
berfungsi untuk mencari nyamuk betina dengan cara mendeteksi bau
nyamuk betina, palpus yang terdiri atas 5 ruas berfungsi sebagai
pendeteksi tingkat kelembapan lingkungan, dan proboscis yang
digunakan untuk menghisap makanan. Selain itu, ada hal lain yang
membedakan jantan dan betina yaitu panjang palpus dan proboscis.
11
Pada nyamuk jantan, palpus lebih panjang atau sama dengan
proboscis.17,18,29 Sayap pada nyamuk berbentuk sempit panjang dengan
ujung runcing dan kaki yang berwarna lebih gelap dibandingkan
tubuhnya.17 Nyamuk jantan hidup lebih sebentar daripada nyamuk
betina, yaitu kurang dari 10 hari, sedangkan nyamuk betina dapat
hidup hingga 2 bulan.23 Gambaran nyamuk Cules xp dapat dilihat pada
gambar 2.6
Gambar 2.6 Nyamuk Culex sp Dewasa Sumber: Mosquitoes of Actual and Potential Medical and Military Significance.30
2.1.4. Perilaku Nyamuk Culex sp
Nyamuk Culex sp biasa hidup pada air yang kotor dan keruh seperti di
got rumah ataupun di genangan air yang kotor.17,18,19 Nyamuk jantan dan
betina dewasa biasanya memakan nektar dari tumbuh-tumbuhan.23,31 Nektar
menjadi sumber energi pada saat nyamuk terbang, selain nektar nyamuk
betina juga menghisap darah pada malam hari untuk pematangan telur.23,31
Nyamuk Culex sp dikenal sebagai nocturnal mosquito yang sering
masuk ke dalam rumah-rumah terutama tengah malam dan pada siang hari
nyamuk ini akan istirahat. Nyamuk ini bersifat endofagik (hidup berada di
dalam rumah) juga eksofagik (hidup berada di luar rumah).17,28,32
12
2.2 Sirih Hijau (Piper Betle Linn)
2.2.1 Deskripsi Tanaman Sirih Hijau (Piper Betle Linn)
Sirih hijau (Piper betle Linn) merupakan tanaman merambat dan
bersandar pada batang pohon lain dan masih banyak digunakan oleh
masyarakat Indonesia sebagai obat tradisional untuk berbagai penyakit.14
Tanaman ini juga dikenal dengan nama Betel, Betel pepper, Betel-vine,
Vetrilai, Nagballi, Pan, dan Tambol.15,33 Sirih hijau memiliki panjang yang
dapat mencapai puluhan meter dan tingginya dapat mencapai 5 – 15 meter.
Batangnya berkayu, bulat, berbuku-buku, beralur, dan berwarna hijau.
Sedangkan untuk daun, permukaan daun sirih halus, bentuk daun menyirip,
tunggal, dan bervariasi mulai dari bundar telur atau bundar telur lonjong dan
berwarna hijau dengan ujung daun runcing.13 Tanaman ini berasal dari
Malaysia Tengah dan Timur dan ditanam sejak 2500 tahun yang lalu di
seluruh Malaysia dan Asia Tropis, termasuk Indonesia.15 Tanaman ini tumbuh
subur di daerah hutan hujan tropis dengan kelembapan yang relatif tinggi
dengan PH tanah sekitar 7-7,5.15 Gambaran daun sirih hijau terlhat seperti di
gambar 2.7
Gambar 2.7. Sirih Hijau
Sumber: Qisthina, 2013. 34
13
2.2.2 Klasifikasi Taksonomi Sirih Hijau (Piper betle Linn)
Klasifikasi taksonomi daun sirih hijau (Piper Betle Linn) adalah
sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Division : Magnoliphyta
Class : Magnolipsida
Order : Piperales
Family : Piperaceae
Genus : Piper
Species : Betle
Binominal nomenklatur :Piper Betle Linn15,35
2.2.3 Morfologi Sirih Hijau
Sirih hijau adalah tanaman merambat yang tumbuh di hutan tropis
dengan ketinggian 1 – 1000 meter diatas permukaan laut. Tanaman ini
bersandar pada batang tanaman lain, antara lain pohon pinang (Areca catechu)
dan pohon kelapa (Cocos nucifera) dan dapat mencapai ketinggian 5 – 15
meter.15 Gambaran daun sirih hijau terlhat seperti di gambar 2.8
Gambar 2.8. Daun sirih hijau (Piper Betle Linn) Sumber: Qisthina, 2013.34
14
Daun sirih berwarna hijau, permukaan atas rata, licin agak mengkilat,
permukaan bawah agak kasar, kusam, tulang daun menonjol. Daun tunggal
dengan pangkal berbentuk jantung atau agak bundar berlekuk, ujung daun
runcing, pinggir rata agak menggulung ke bawah.15 Panjang daun 5 – 18 cm
dengan lebar 3 – 12 cm dan memiliki bau aromatik yang khas yaitu terasa
pedas.15 Sedangkan batang tanaman berbentuk bulat dan lunak, berwarna
hijau agak kecoklatan dan permukaan kulitnya kasar serta berkerut.13,33
2.2.4 Kandungan Daun Sirih Hijau
Daun sirih mengandung 4,2% minyak atsiri yang komponen utamanya
terdiri atas Bethel phenol dan beberapa derivatnya diantaranya Euganol
allypyrocatechine 26,8 – 42,5%, Cineol 2,4 – 4,8%, Methyl euganol 4,2 –
15,8%, Caryophyllen 3 – 9,8%, Hidroksi kavikol, Kavikol 7,2 – 16,7%,
Kavibetol 2,7 – 6,2%, estragol, ilypyrokatekol 0 – 9,6%, karvakrol 2,2 – 5,65,
alkaloid, flavonoid, triterpenoid atau steroid, saponin, terpen, fenilpropan,
terpinen, diastase 0,8 – 1,8% dan tannin 1 – 1,3% 35,36
Kandungan bahan aktif seperti fenol, alkaloid, dan kavikol pada daun
sirih dapat dimanfaatkan sebagai larvasida.37 Fenol bersifat antioksidan dan
larvasidal pada beberapa bakteri dan fungi.38 Minyak atsiri yang terdapat
dalam daun sirih mampu menghambat perkembangan serangga dan dapat
merusak telur nyamuk.39 Sehingga telur akan mati dan tidak akan berkembang
menjadi larva. Gambaran struktur fenol terlhat seperti di gambar 2.9
Gambar 2.9. Struktur Senyawa Fenol Sumber: Ilmu Kimia 2013.40
15
Selain itu kandungan alkaloid yang dimiliki oleh daun sirih (Piper
betle Linn) memiliki manfaat yang dapat menghambat enzim asetilkolin
transferase pada nyamuk, sehingga akan mengganggu sistem saraf nyamuk.39
alkaloid juga diduga memiliki efek larvasida dengan mekanisme yang mirip
dengan abate.39,41 Gambaran struktur senyawa alkaloid terlhat seperti di
gambar 2.10
Gambar 2.10. Struktur Senyawa Alkaloid Sumber: Ilmu Kimia, 2013. 40
Kandungan saponin yang terdapat di daun sirih (Piper betle Linn) juga
dapat menyebabkan kematian pada larva dengan meningkatkan permeabilitas
tubuh larva akibat rusaknya membral sel sehingga banyak toksin dapat masuk
ke dalam tubuh larva. Selain itu, saponin memiliki sifat sebagai inhibitorik
dari enzim asetilkolinesterase yang dapat menyebabkan kejang otot dan
paralisis.42 Aktivitas enzim pencernaan dan proses absorbsi pada larva juga
mengalami penurunan sehingga larva mengalami anoreksia.43 Kutikula pada
tubuh larva-pun dapat rusak akibat efek dari saponin yang menyebabkan
hilangnya cairan tubuh larva.44 Perubahan-perubahan ini dapat menyebabkan
kematian pada larva. Gambaran struktur senyawa saponin terlhat seperti di
gambar 2.11
16
Gambar 2.11. Struktur Senyawa Saponin Sumber: Ilmu Kimia 2013. 40
Senyawa lain yang dapat mengakibatkan kematian pada larva adalah
steroid, tannin, dan flavonoid, dimana steroid dapat menurunkan tegangan
permukaan selaput mukosa saluran cerna larva sehingga dinding saluran cerna
larva menjadi korosi.45 Tannin dapat menurunkan aktivitas enzim pencernaan
(protease dan lipase) serta mengganggu aktivitas penyerapan protein dinding
usus.45,46 Berdasarkan mekanisme ini perkembangan larva instar III menjadi
instar IV atau menjadi pupa akan terhambat. Selain itu, Flavonoid bersifat
menghambat nafsu makan serangga dan juga bersifat toksik.48 Gambaran
struktur senyawa steroid terlhat seperti di gambar 2.11
Gambar 2.12. Struktur Senyawa steroid Sumber: Ilmu Kimia 2013.40
17
2.2.5. Pemanfaatan Daun Sirih Hijau dalam Pemberantasan Vektor Nyamuk di
Indonesia
Daun sirih sebagai insektisida di negara Amerika sudah mulai banyak
digunakan, baik untuk membunuh larva.35,43 Indonesia belum banyak
digunakan. Daun sirih sangat mudah ditemukan di Indonesia dan banyak
diperjualbelikan, baik dalam bentuk tanaman utuh ataupun hanya daunnya
saja.
Di Indonesia, penelitian mengenai daun sirih sebagai larvasida sudah
mulai banyak, menurut penelitian made oka dkk tahun 2011 menyatakan
bahwa kandungan minyak atsiri, phenil asetat, kavikol, dan fenol pada daun
sirih dapat mematikan nyamuk Aedes aegyptii dengan LC50 adalah 309,03
ppm.13 Menurut Handayani dkk tahun 2013 juga menyatakan bahwa semakin
tinggi konsentrasi daun sirih yang diberikan maka kematian nyamuk makin
tinggi, dengan LC50 adalah 1422,81 ppm.14 Sedangkan menurut Kaihena
menyatakan bahwa daun sirih memiliki potensi yang baik dalam mematikan
larva nyamuk baik nyamuk Anopheles dan nyamuk Culex, dengan LC50 pada
nyamuk Culex sp adalah 0,011%.37
18
2.3. Kerangka Teori
Stadium larva instar III/IV
Volume air 100 ml
Kepadatan larva 10 ekor
Tempat perindukan
Kualitas air
Suhu
Kelembapan
Kesehatan larva
Larva Culex sp instar
III dan IV
Variabel luar terkendali Variabel luar tak terkendali
Daun Sirih
Mengandung
fenol
Mengandung
Flavonoid
Mengandung
alkaloid
Mengganggu sistem saraf Menghambat aktivitas makan
larva Mengganggu
perkembangan larva.
Efek
larvasida
Mati
19
2.4. Kerangka Konsep
Larva Culex sp Instar III / IV
Tidak diberikan
ekstrak
Efek larvasida (-) Efek larvasida (=)
Diberikan ekstrak
Larva Culex sp tidak
mati
Larva Culex sp mati
20
2.5. Definisi Operasional
No Variabel Definisi
Operasional
Alat Ukur Hasil Ukur Skala Ukur
1 Kadar ekstrak
daun sirih
(Piper Betle
Linn)
Daun sirih yang
telah di ekstraksi
dengan berbagai
konsentrasi
Gelas ukur,
mikropipet
Konsentrasi Persentase
2 Kematian
Larva Culex
sp instar III/IV
Larva Culex sp
instar III atau IV
yang mati dengan
kriteria tidak
bergerak dan tidak
berespon terhadap
rangsangan
Senter, lidi,
kaca
pembesar
Jumlah Nominal
21
BAB 3
METODE PENELITIAN
3.1 Desain Penelitian
Jenis penelitian yang digunakan bersifat eksperimental murni
dikarenakan larva Culex sp instar III atau IV mendapat perlakuan dengan
dimasukkan ke dalam larutan ekstrak daun sirih (Piper betle Linn) dengan
berbagai konsentrasi. Pengambilan sampel nyamuk dilakukan secara
purposive sampling dimana sampel diambil secara sengaja sebanyak yang
dibutuhkan yang memenuhi kriteria sampel terpilih.
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian
3.2.1 Tempat dan Waktu Rearing Larva
Larva nyamuk Culex sp diambil dari selokan di daerah Ciputat dengan
menggunakan ember dan gayung, kemudian larva ditaruh di botol tempat
larva dan kemudian dilakukan rearing larva di laboratorium nyamuk parasit
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
Identifikasi telur Culex sp juga dilakukan di Laboratorium parasit dibawah
bimbingan dan pengawasan pembimbing 1 yang mana telur diambil dari
dinding tabung sekitar 5 ml diatas permukaan air dan kemudian dilihat
dibawah mikroskop untuk menentukan benar atau tidaknya telur Culex sp.
3.2.2 Tempat dan Waktu Determinasi Daun Sirih (Piper betle Linn)
Determinasi daun sirih dilakukan di Lembaga Ilmu Pengetahuan
Indonesia (LIPI), untuk memastikan bahwa tanaman yang dimaksud adalah
daun sirih (Piper Betle Linn).
22
3.2.3 Tempat dan Waktu Ekstraksi Daun Sirih (Piper betle Linn)
Proses ekstraksi dilakukan di Balai Penelitian Tanaman Rempah dan
Obat (BALITRO), Bogor. Berikut adalah metode dalam pembuatan ekstrak:
1. Daun yang sudah diambil dan dideterminasi, dikeringkan selama
kurang lebih 3 hari menggunakan oven 40 derajat celcius.
2. Daun yang sudah kering akan digiling menggunakan greender
untuk mendapat kehalusan 3 mm.
3. Bagian yang sudah halus akan direndam dalam pelarut etanol 96%
dengan perbandingan 1 : 5 dan dikocok selama 2 -3 jam, lalu
didiamkan selama 24 jam.
4. Setelah didiamkan, bahan akan disaring menggunakan corong
buchner yang telah dialasi dengan kertas saring
5. Hasil dari penyaringan kemudian dimasukkan ke dala, rotary
evaporator agar etanol menguap selama 4 – 5 jam, sehingga
didapatkan ekstrak kental yang siap digunakan.
6. Berdasarkan hasil ekstraksi didapatkan bahan ekstrak dengan berat
100 gram yang dilarutkan dalam 500 ml etanol 96% atau dengan
konsentrasi 20% atau 200000 ppm.
3.2.4 Pengenceran Ekstrak Daun Sirih (Piper betle Linn)
Selanjutnya, daun sirih yang sudah di ekstraksi di LIPI, kemudian
diencerkan di Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran dan Ilmu
Kesehatan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta.
3.3 Populasi dan Sampel Penelitian
3.3.1 Populasi Penelitian
Populasi dalam penelitian ini adalah larva Culex sp instar III atau IV
yang didapat dari hasil rearing larva Culex sp. Pertimbangan menggunakan
23
larva instar III dan IV berdasar kepada penjelasan dari Departemen Kesehatan
RI bahwa:
1. Larva instar III dan IV relatif stabil pada pengaruh faktor ekternal
2. Larva instar III dan IV sudah memiliki tubuh yang lengkap.
3.4 Jumlah Sampel
Penentuan besar sampel dihitung dengan rumus Federer.
Keterangan :
n = besar sampel
t = jumlah kelompok perlakuan
Oleh karena penelitian ini terdiri dari 6 kelompok perlakuan, maka
(n-1) (t -1) > 15
(n-1) (6-1) > 15
5n-5 > 15
5n > 20
n > 20/5
n > 4
Berdasar pada hasil dari perhitungan diatas besar sampel minimal yang
digunakan pada penelitian ini sebanyak 4 ekor. Didalam percobaan ini
digunakan sebanyak 10 sampel agar hasil yang didapat akurat.
.
Banyaknya jumlah replikasi atau pengulangan yang harus dilakukan
pada setiap masing-masing konsentrasi dapat dihitung dengan rumus:
Keterangan :
(t-1) (r-1) > 15
(n-1) (t-1) > 15
24
t : jumlah perlakuan
r : jumlah replikasi
(6-1) (r-1) > 15
5r-5 > 15
5r > 20
r > 20/5
r > 4
Maka dari hasil perhitungan rumus, didapatkan bahwa jumlah
replikasi atau pengulangan minimal dilakukan sebanyak 4 kali. Dan pada
percobaan ini replikasi dilakukan sebanyak 5 kali. Sehingga, jumlah seluruh
besar sampel yang dibutuhkan adalah
10 x 5 x 6 = 300 larva. Maka, jumlah larva Culex sp instar III dan IV
yang dibutuhkan pada penelitian ini adalah sebanyak 300 larva.
3.5 Kriteria Sampel
Kriteria Inklusi
1. Larva Culex sp
2. Larva Culex sp instar III/IV
2. Larva yang masih hidup
Kriteria Eksklusi
1. Larva yang telah dijadikan penelitian sebelumnya
2. Larva yang diambil dari air yang bersih
Jumlah larva per container x jumlah replikasi x jumlah perlakuan
25
3.6 Alur Penelitian
Uji Eksplorasi dengan jenis larva Culex sp
Culex
sp
Kelompok
1
10 larva
+
air
aquades
(kontrol)
Kelompok
2
10 larva
+
Ekstrak
0,4%
Kelompok
3
10 larva
+
Ekstrak
0,6%
Kelompok
4
10 larva
+
Ekstrak
0,8 %
Kelompok
5
10 larva
+
Ekstrak
1,0%
Kelompok
6
10 larva
+
Ekstrak
1,2%
Perlakuan selama 24 jam
Dihitung jumlah larva yang mati
dalam 24 jam
Rearing larva Culex sp di lab.
nyamuk FKIK UIN Jakarta
Dihitung jumlah larva yang mati
dalam 24 jam
Pengambilan larva Culex sp di
selokan Ciputat
Didapatkan lethal concentration
50
Membuat konsentrasi baru sesuai
dengan perhitungan deret ukur
dimana nilai tengah adalah LC50
yang didapatkan pada saat uji
eksplorasi
26
3.7 Alat dan Bahan
1. Pembuat Ekstrak
a. Bahan
1) Daun Sirih (Piper betle Linn)
2) Etanol 96%
2. Rearing larva
a. Alat
1) Wadah tempat rearing
b. Bahan
1) Air Gula
2) Aquades
3. Perlakuan
a. Alat
1) Gelas plastik 36 buah
2) Gelas Ukur 100 ml
3) Mikropipet 100 – 1000 mikro
4) Pipet tetes
b. Bahan
Analisis data yang telah didapat
Uji One Way ANOVA dan Post-
Hoc LSD
Uji alternatif (Kruskal-Wallis
dan Mann-Whitney)
Analisis Probit
27
1) Ekstrak daun sirih
2) Larva Culex sp instar III/IV
3) Aquades yang diambil dari laboratorium riset
3.8 Cara Kerja
3.8.1 Rearing Larva
1. Mempersiapkan wadah yang berisi air selokan
2. Menaruh larva pada wadah tersebut
3. Meletakkan wadah yang berisi larva dan air selokan di dalam lab parasit
nyamuk yang telah di-desaign khusus untuk larva dan nyamuk.
4. Memberikan air gula sebagai makanan untuk nyamuk dan pemberian
darah (Blood Feeding) dengan memasukkan tangan pada kandang
nyamuk dan membiarkannya sampai nyamuk betina menggigit dan
menghisap darah untuk proses pematangan telur nyamuk
5. Kemudian telur diambil dari dinding wadah serta larva juga diambil dan
dilihat dibawah mikroskop, kemudian setelah benar Culex sp maka larva
didiamkan dalam wadah yang berisi air selokan yang sudah baru
6. Larva dibiarkan berkembang biar di dalam wadah yang berisi air
selokan dan larva diberikan makanan ikan yang dihaluskan.44
7. Setelah itu, larva yang sudah berkembang kita ambil, akan tetapi hanya
larva instar III atau IV, dengan menentukan larva yang panjangnya
sekitar 4-6 mm.33
3.8.2 Uji Eksplorasi
Uji eksplorasi dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui pada
konsentrasi berapakah yang dapat mematikan 50% sampel larva uji (10 ekor).
Konsentrasi inilah yang nantinya akan menjadi pedoman dalam penentuan
konsentrasi pada uji utama.
28
Kelompok kontrol negatif M1 x V1 = M2 x V2
200000 x V1 = 0 x 100
V1 = 0 ml
Kelompok 1 ( 2400 ppm ) M1 x V1 = M2 x V2
200000 x V1 = 2400 x 100
V1 = 1,2 ml
Kelompok 2 ( 2000 ppm ) M1 x V1 = M2 x V2
200000 x V1 = 2000 x 100
V1 = 1,0 ml
Kelompok 3 ( 1600 ppm ) M1 x V1 = M2 x V2
200000 x V1 = 1600 x 100
V1 = 0,8 ml
Kelompok 4 ( 1200 ppm ) M1 x V1 = M2 x V2
200000 x V1 = 1200 x 100
V1 = 0,6 ml
Kelompok 5 ( 800 ppm ) M1 x V1 = M2 x V2
200000 x V1 = 800 x 100
V1 = 0,4 ml
a. Untuk pengenceran pada konsentrasi 0,08% (800 ppm) dilakukan
dengan cara mengambil ekstrak dengan mikropipet sebanyak 400 mikro
dan dilarutkan dengan menggunakan aquades sampai batas gelas ukur
menunjukkan angka 100ml, cara ini dilakukan pada 4 perlakuan sisanya
dan pada setiap konsentrasi lainnya. Bila 0,12% maka diambil 600
mikro ekstrak, 0,16% diambil ekstrak 800 mikro, 0,20% diambil ekstrak
1000 mikro, dan 0,24% diambil ekstrak sebanyak 1200 mikro dan
semuanya dilarutkan dengan aquades sampai batas gelas ukur
menunjukkan angka 100ml.
b. Pada masing-masing gelas plastik yang sudah diisikan masing-masing
berbagai ekstrak, dimasukkan larva sebanyak 10 ekor larva Culex sp
instar III atau IV dengan menggunakan pipet tetes, termasuk kontrol
negatif yaitu aquades.
c. Jumlah larva yang mati dihitung pada selama 24 jam, dan dicatat
hasilnya.
29
3.8.3 Uji Utama
Kelompok kontrol negatif M1 x V1 = M2 x V2
200000 x V1 = 0 x 100
V1 = 0 ml
Kelompok 1 ( 3200 ppm ) M1 x V1 = M2 x V2
200000 x V1 = 3200 x 100
V1 = 1,6 ml
Kelompok 2 ( 1600 ppm ) M1 x V1 = M2 x V2
200000 x V1 = 1600 x 100
V1 = 0,8 ml
Kelompok 3 ( 800 ppm ) M1 x V1 = M2 x V2
200000 x V1 = 800 x 100
V1 = 0,4 ml
Kelompok 4 ( 400 ppm )
M1 x V1 = M2 x V2
200000 x V1 = 400 x 100
V1 = 0,2 ml
Kelompok 5 ( 200 ppm ) M1 x V1 = M2 x V2
200000 x V1 = 200 x 100
V1 = 0,1 ml
a. Menghitung konsentrasi yang akan digunakan dengan mencari kematian
larva 50% (LC50) pada hasil uji eksplorasi.
b. Menentukan konsentrasi untuk uji utama dengan mengambil beberapa
nilai konsentrasi pada kisaran dibawah dan diatas daripada LC50.
c. Ekstrak diambil sebanyak yang dibutuhkan oleh setiap konsentrasi dan
dilarutkan dengan aquades sampai batas gelas ukur menunjukkan angka
100ml.
d. Pada masing-masing gelas plastik yang sudah diisikan masing-masing
berbagai ekstrak, dimasukkan larva sebanyak 10 ekor larva Culex sp
instar III atau IV dengan menggunakan pipet tetes, termasuk kontrol
negatif yaitu aquades.
e. Jumlah larva yang mati dihitung pada selama 24 jam, dan dicatat
hasilnya.
30
3.8.4 Pengumpulan Data
Data yang diambil pada penelitian ini adalah data primer yang
merupakan jumlah larva yang mati pada jam ke-24 setelah perlakuan pada
masing-masing konsentrasi ekstrak daun sirih (Piper betle Linn). Larva
yang mati dinilai dari larva yang tenggelam di dasar wadah, tidak bergerak,
dan tidak berespon terhadap rangsangan yang diberikan.
3.9 Analisis Data
Setelah semua data yang didapatkan dari jumlah larva Culex sp
instar III atau IV yang mati, selanjutnya dilakukan pengolahan dan analisis
data menggunakan software SPSS. Terdapat beberapa uji statistik yang
dilakukan, yaitu
1. Uji Analisis Varian (One Way ANOVA)
Digunakan untuk menemukan perbedaan jumlah kematian
larva Culex sp antar kelompok uji.
2. Uji Pst-Hoc Least Significance Difference (LSD)
Digunakan untuk menemukan perbandingan pasangan mean
yang perbedaannya signifikan.
3. Kruskal Wallis
Merupakan uji alternatif jika data tidak berdistribusi normal
dan homogen. Digunakan untuk menemukan perbandingan perbedaan
mean lebih dari dua kelompok.
4. Mann-Whitney
Merupakan uji alternatif jika data tidak berdistribusi normal
dan homogen. Digunakan untuk menemukan perbandingan perbedaan
mean antar kelompok.
31
5. Uji Korelasi Spearman
Merupakan uji alternatif jika data tidak berdistribusi normal.
Digunakan untuk menemukan korelasi antara konsenrasi ekstrak uji
dengan mortalitas larva.
6. Analisis Probit
Digunakan untuk menemukan efek mortalitas ekstrak daun
sirih (Piper betle Linn) terhadap larva Culex sp yang dinyatakan
dengan Lethal Concentration (LC).
32
BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Penelitian
4.1.1 Uji Eksplorasi
Berdasarkan hasil uji eksplorasi efektivitas daun sirih (Piper betle
Linn) terhadap larva Culex sp instar III atau IV selama 24 jam, didapatkan
bahwa pada ekstrak daun sirih (Piper betle Linn) dengan konsentrasi 0,08%
(800 ppm) dapat mematikan setengah daripada populasi larva yang berjumlah
10 ekor dngan rerata 5 ekor. Hasil uji eksplorasi dapat dilihat pada tabel 4.1
Tabel 4.1 Jumlah mortalitas larva Culex sp pada berbagai konsentrasi ekstrak
daun sirih (Piper betle Linn) setelah 24 jam perlakuan pada uji eksplorasi
Dari hasil uji eksplorasi pada tabel 4.1 menunjukkan bahwa kematian
sebesar 50% terdapat pada kisaran konsentrasi ekstrak daun sirih (Piper betle
Linn) 0.08% (800 ppm). Hasil ini digunakan sebagai dasar untuk uji utama.
4.1.2 Uji Utama
Berdasarkan hasil uji eksplorasi maka didapatkan LC50 (kematian
larva 50%) pada konsentrasi 0.08% atau dosis 800 ppm. Oleh karena itu,
berdasarkan LC50 ini ditetapkan interval konsentrasi yang digunakan untuk uji
utama dengan menggunakan deret ukur sebanyak 6 konsentrasi,
Konsentrasi jumlah larva yang mati
Rata-rata
I II III IV V Ekor %
0,24% 9 9 8 9 9 8,8 88%
0,20% 8 8 9 8 8 8,2 82%
0,16% 7 9 8 7 8 7,8 78%
0,12% 8 8 8 6 6 7,2 72%
0,08% 6 6 5 4 4 5 50%
Kontrol negatif 0 0 0 0 0 0 0%
33
yaitu 0% (kontrol), 0.02% (200 ppm), 0.04% (400 ppm), 0.08% (800
ppm), 0.16% (1600 ppm), dan 0.32% (3200 ppm).
Berdasarkan rumus replikasi yang telah didapat, maka replikasi pada
uji utama dilakukan sebanyak 5 kali replikasi dengan jumah larva pada
masing-masing perlakuan sebanyak 10 ekor. Dan setelah dilakukan uji utama
efektivitas daun sirih (Piper betle Linn) pada larva Culex sp instar III atau IV
selama 24 jam, didapatkan hasil sebagai berikut:
Tabel 4.2 Jumlah mortalitas larva Culex sp pada berbagai konsentrasi ekstrak
daun sirih (Piper betle Linn) setelah 24 jam perlakuan pada uji utama
Pada tabel 4.2 menunjukkan bahwa pada perlakuan kontrol negatif di
seluruh replikasi tidak ditemukan adanya larva yang mati. Pada nilai rata-rata
mortalitas larva menunjukkan bahwa nilai tertinggi terdapat pada konsentrasi
0.32% (3200 ppm) yaitu sebanyak 10 ekor (100%), sedangkan nilai terendah
terdapat pada konsentrasi 0.02% yaitu sebanyak 1,4 ekor (14%).
Berdasarkan hasil uji utama pada tabel 4.2 dibuat grafik untuk
menggambarkan respon mortalitas rerata larva terhadap ekstrak daun sirih
(Piper betle Linn)
Konsentrasi jumlah larva yang mati Rata-rata
I II III IV V Ekor %
0,32% 10 10 10 10 10 10 100%
0,16% 8 8 8 9 7 8 80%
0,08% 5 5 4 5 5 4,8 48%
0,04% 2 2 3 3 2 2,4 24%
0,02% 1 2 1 2 1 1,4 14%
Kontrol negative 0 0 0 0 0 0 0%
34
Grafik 4.1 Mortalitas rerata larva Culex sp terhadap berbagai konsentrasi
ekstrak daun sirih (Piper betle Linn) setelah 24 jam
Berdasarkan pada grafik diatas menunjukkan bahwa semakin tinggi
konsentrasi maka semakin tinggi pula nilai mortalitas rerata larva Culex sp.
4.2 Analisis Data
4.2.1 Uji Distribusi Data
Sebelum dilakukan uji One Way ANOVA, maka data yang didapat
harus memenuhi syarat yaitu data berdistribusi atau sebaran data normal.
Berdasarkan data yang didapat dari hasil uji utama pada tabel 4.2, selanjutnya
dilakukan uji normalitas Kolmogorov-Smirnov dengan menggunakan
program SPSS 16.0. Berdasarkan hasil uji normalitas tersebut menunjukkan
bahwa distribusi data yang didapat adalah berdistribusi normal (sig > 0,05).
1,42,4
4,8
8
10
-2,0
0,0
2,0
4,0
6,0
8,0
10,0
12,0
14,0
0,02% 0,04% 0,08% 0,16% 0,32%
Jum
lah
larv
a y
an
g m
ati
Konsentrasi ekstrak
Mortalitas Rerata
35
Tabel 4.3 Hasil Tes Distribusi Data
4.2.2 Uji One Way ANOVA
Selanjutnya, sebelum dilakukan uji One Way ANOVA, data harus
memiliki varian data yang sama atau homogen. Pada uji ini ditemukan bahwa
hasil uji varian data homogen (sig > 0,05) seperti pada tabel 4.4 dibawah ini.
Tabel 4.4 Hasil Tes Variasi Data
Berdasarkan hasil dari kedua uji diatas didapatkasn kesimpulan bahwa
data berdistribusi normal dan varian data homogen, sehingga selanjutnya
dapat dilakukan analisis hasil uji utama menggunakan uji One Way ANOVA.
Hasil perhitungan dapat dilihat pada tabel 4.5 dibawah ini.
Tabel 4.5 hasil uji One Way ANOVA
Dari hasil tabel diatas didapatkan bahwa nilai signifikan 0,000 (sig
<0,05). Sehingga didapatkan kesimpulan bahwa terdapat perbedaan mortalitas
larva Culex sp yang signifikan akibat perbedaan konsentrasi.
4.2.3 Uji Post-Hoc Least Significance Difference (LSD)
Berdasarkan hasil uji One Way ANOVA pada tabel 4.4 ditemukan
bahwa terdapat perbedaan yang signifikan. Kemudian dilanjutkan dengan uji
Post-Hoc LSD untuk melihat perbedaan atara setiap konsentrasi yang
dilakukan, seperti pada tabel 4.6 dibawah ini.
Kolmogrov-Smirnov
Statistic Sig.
Mortalitas .158 .107
Konsentrasi .156 .120
Levene Statistic Sig
2.505 .075
Mean Square Sig
Between Groups 66.560 .000
Within Groups 260
Total
36
Tabel 4.6 Hasil uji Post-Hoc LSD
Konsentrasi Perbedaan
Rerata
CI 95%
P value
Minimum Maksimum
0.32% vs 0.16% 2.000 1.33 2.67 <0.001
0.32% vs 0.08% 5.200 4.53 5.87 <0.001
0.32% vs 0.04% 7.600 6.93 8.27 <0.001
0.32% vs 0.02% 8.600 7.93 9.27 <0.001
0.16% vs 0.08% 3.200 2.53 3.87 <0.001
0.16% vs 0.04% 5.600 4.93 6.27 <0.001
0.16% vs 0.02% 6.600 5.93 7.27 <0,001
0.08% vs 0.04% 2.400 1.73 3.07 <0.001
0.08% vs 0.02% 3.400 2.73 4.07 <0.001
0.04% vs 0.02% 1.000 0.33 1.66 0.006
Berdasarkan dari tabel diatas didapatkan kesimpulan bahwa terdapat
perbedaan bermakna pada setiap masing-masing konsentrasi (sig < 0,05),
kecuali pada konsentrasi 0,04% dengan 0,02% karena hasil dari p value
adalah 0,006 dimana lebih daripada 0,005.
4.2.4 Analisis Probit
Untuk mengetahui konsentrasi yang dapat menyebabkan mortalitas
larva hingga 50% dan 90% selama 24 jam, maka dilakukan uji analisis probit
pada program SPSS 16.0. Dari hasil perhitungan didapatkan LC50 dan LC90
seperti pada tabel 4.7 dibawah ini.
37
Tabel 4.7 Nilai Lethal Concentration and Confidence Limits Ekstrak daun
sirih (Piper betle Linn) terhadap kematian larva Culex sp setelah 24 jam
perlakuan
No Point Exposure
Concentration 95% confidence limits
Concentration
(%)
lower
Upper
1 LC1 -785,9 -1363 -439,0
2 LC2 -585,7 -1095 -277,2
3 LC3 -458.7 -925,3 -174,0
4 LC4 -363,2 -798,0 -96,10
5 LC5 -285,4 -694,7 -32,44
6 LC10 -18,699 -342,6 188,6
7 LC20 304,3 74,01 466,0
8 LC30 537,3 360,3 680,2
9 LC40 736,3 587,5 880,6
10 LC50 922,3 781,1 1086
11 LC60 1108 958,5 1309
12 LC70 1307 1136 1559
13 LC80 1540 1334 1860
14 LC90 1863 1602 2287
15 LC95 2130 1819 2643
16 LC96 2207 1882 2747
17 LC97 2303 1959 2875
18 LC98 2430 2061 3046
19 LC99 2630 2222 3315
Berdasarkan tabel diatas dapat disimpulkan bahwa nilai LC50 yang
didapat adalah 0,092% (922.3 ppm) sedangkan untuk LC90 adalah 0,186%
(1863 ppm).
38
4.3 Pembahasan
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah terdapat perbedaan
yang signifikan pada larva Culex sp instar III atau IV yang telah diberi
perlakuan dengan ekstrak daun sirih (Piper betle Linn) dalam berbagai
konsentrasi terhadap larva yang tidak diberi perlakuan. Ekstrak daun sirih
(Piper betle Linn) ini didapatkan dengan metode maserasi dan menggunakan
pelarut etanol. Etanol dipilih sebagai pelarut karena sifat toksik yang dimiliki
lebih rendah bila dibandingkan dengan pelarut lain seperti eter dan metanol
serta bersifat semipolar sehingga dapat menarik zat yang bersifat polar
maupun non polar. Sedangkan, pemilihan daun sirih untuk menjadi ekstrak
dikarenakan tanaman tersebut memiliki senyawa alkaloid yang dapat
mengganggu sistem saraf, sehingga efek mortalitasnya tinggi.
Pada penelitian ini, larva yang digunakan adalah larva nyamuk Culex
sp instar III atau IV, instar ini dipilih karena pada stadium ini memiliki
ketahanan tubuh yang cukup baik terhadapa lingkungan eksternal. Larva
dikembangbiakkan di dalam Laboratorium Parasit Nyamuk Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
Pada penelitian ini digunakan 6 kelompok uji dengan konsentrasi yang
berbeda dengan masing-masing kelompok berisi 10 larva dalam 100 ml
aquades. Kelompok kontrol negatif adalah 0% (0 ppm), konsentrasi I adalah
0,02% (200 ppm), konsentrasi II adalah 0,04% (400 ppm), konsentrasi III
adalah 0,08% (800 ppm), konsentrasi IV adalah 0.16% (1600 ppm), dan
konsentrasi V adalah 0,32% (3200 ppm). Konsentrasi ini diambil berdasarkan
kelipatan dari LC50 0.08% (800 ppm) yang ditemukan pada uji eksplorasi.
Pada kelompok kontrol negatif setelah 24 jam tidak terdapat kematian larva
pada semua pengulangan. Hal ini menunjukkan bahwa tidak terdapat efek
larvasida dari aquades yang dijadikan medium pelarut dalam penelitian ini.
39
Berdasarkan tabel 4.2 menunjukkan bahwa pemberian ekstrak daun
sirih (Piper betle Linn) mempunyai efek larvasida terhadap larva Culex sp
terutama pada konsentrasi 0,08% (800 ppm), 0,16% (1600 ppm), dan 0.32%
(3200 ppm) dengan tingkat mortalitas semakin tinggi. Semakin tinggi
konsentrasi ekstrak maka jumlah mortalitas larva semakin meningkat pula
(Grafik 4.1). Kejadian ini disebabkan karena masuknya senyawa toksin ke
dalam tubuh larva dan merusak sistem saraf tubuh larva.
Berdasarkan hasil statistik yang dilakukan pada program SPSS,
dengan menggunakan uji One Way ANOVA pada tabel 4.5 menunjukkan
bahwa terdapat perbedaan yang signifikan terhadap 6 kelompok perlakuan.
Selanjutnya pada uji Post-Hoc LSD didapatkan adanya perbedaan yang
signifikan antara seluruh kelompok dengan p value <0,05, kecuali pada
kelompok konsentrasi 0,02% vs 0,04% dimana p value yang ditemukan 0,006
sehingga tidak ada perbedaan yang bermakna.
Kematian larva kemudian dianalisis dengan menggunakan analisis
probit untuk mengetahui LC50 dan LC90. Dan didapatkan hasil LC50 yang
adalah 0,092% (922.3 ppm) sedangkan untuk LC90 adalah 0,186% (1863
ppm).
Aktivitas larvasida pada daun sirih (Piper betle Linn) kemungkinan
besar disebabkan adanya berbagai senyawa aktif atau kandungan kimia
didalamnya. Beberapa senyawa aktif tersebut diantaranya adalah saponin,
tannin, flavonoid, steroid, alkaloid, dan fenol. Kandungan alkaloid yang
dimiliki oleh daun sirih hijau memiliki manfaat yang dapat mengganggu
sistem saraf nyamuk dan dapat menyebabkan kematian pada larva.
Kandungan lainnya adalah minyak atsiri yang mampu menghambat
perkembangan serangga. Selain itu, adanya kandungan saponin juga dapat
menyebabkan kematian pada larva, dengan meningkatkan permeabilitas tubuh
larva, yang diakibatkan oleh rusaknya membran sel sehingga banyak toksin
40
dapat masuk ke dalam tubuh larva. Selain itu, saponin memiliki sifat sebagai
inhibitorik dari enzim asetilkolinesterase yang dapat menyebabkan kejang otot
dan paralisis. Aktivitas enzim pencernaan dan proses absorbsi pada larva juga
mengalami penurunan sehingga larva mengalami anoreksia. Kutikula pada
tubuh larva-pun dapat rusak akibat efek dari saponin yang menyebabkan
hilangnya cairan tubuh larva. Perubahan-perubahan ini dapat menyebabkan
kematian pada larva.
Senyawa lain yang dapat mengakibatkan kematian pada larva adalah
steroid dan tannin. Steroid dapat menghambat proses pergantian kulit pada
larva. Tannin dapat mempengaruhi penurunan aktivitas pengikatan protein
dan penyerapan makanan di saluran cerna. Berdasarkan mekanisme ini
perkembangan larva instar III menjadi instar IV atau menjadi pupa akan
terhambat.
Resistensi terhadap larvasida Malathion sudah terjadi di berbagai
Kabupaten di Wilayah Yogyakarta, Solo, dan Semarang. Maka dari itu
penggunaan larvasida lebih baik dan tidak menyebabkan adanya resistensi
pada nyamuk, baik pada nyamuk Aedes aegyptii maupun pada nyamuk Culex
sp.45
41
BAB 5
PENUTUP
5.1 Kesimpulan
Bedasarkan hasil penelitian, dapat disimpulkan bahwa:
1. Ekstrak daun sirih (Piper betle Linn) efektif sebagai larvasida terhadap
larva Culex sp instar III atau IV
2. Persentase kematian larva Culex sp pada konsentrasi 0,02% adalah 14%,
pada konsentrasi 0,04% adalah 24%, pada konsentrasi 0,08% adalah 48%,
pada konsentrasi 0,16% adalah 80%, dan pada konsentrasi 0.32% adalah
100%,
3. Konsentrasi ekstrak daun sirih (Piper betle Linn) berpengaruh terhadap
mortalitas larva Culex sp instar III atau IV selama 24 jam dengan
diperoleh nilai LC50 adalah 0,092% (922,3 ppm) sedangkan untuk LC90
adalah 0,186% (1863 ppm).
5.2 Saran
1. Penelitian dapat dikembangkan dengan menggunakan ekstrak lain.
2. Penelitian dapat dikembangkan pada larva nyamuk lainnya seperti Aedes
spataupun Anopheles sp
3. Penelitian dapat ditambahkan dengan kontrol positif yaitu dengan abate
dan kontrol negatif berupa etanol 96%
4. Uji pada penelitian ini dapat ditambahkan seperti dengan melakukan uji
pearson untuk mengetahui hubungan kematian larva dengan pemberian
ekstrak.
42
Daftar Pustaka
1. Hanafiah W.S, Nannya K.O, Nurlaila Z. Penelitian Dientil-Karbamazin
Sebagai Sediaan Diagnostik Limfatik Filariasis Evaluasi Non-Klinis.
Bandung: Badan Teknologi Nuklir Nasional; 2012
2. Subdit Filariasis dan Schistomiasis Direktorat P2B2, Ditjel PP &
PL.2010. Rencana Nasional Program Akselerasi Eliminai Filariasis di
Indonesia. Jakarta: Kementerian Kesehatan RI; 2011
3. Soepardi J et al. Buletin jendela epidemiologi filriasis di Indonesia.
Jakarta: Pusat Data dan Surveilans Epidemiologi Kementerian Kesehatan
RI; 2010
4. Dyah, H.S, Didik T.S. Laporan Lokakarya Nasional Penyakit Zoonosis:
Dinamika Filariasi di Indonesia. Bogor: Balai Penelitian Veteriner; 2007.
5. Irianto, Koes. Parasitologi Medis. Bandung. Penerbit Alfabeta; 2013:
262-263
6. Triono, Soendoro. Laporan Hasil Riset Kesehatan Dasar Provinsi Banten
Tahun 2007. Jakarta: Balitbangkes Depkes RI; 2008
7. Tadjoedin, Abdullah Hamdani. Gambaran Epidemiologi Filariasis di Kota
Tangerang Selatan. Jakarta: Fakultas Kedokteran dan Ilmu Lesehatan
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta; 2014
8. Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia. Penanggulangan
Filariasis. Jakarta: Menteri Kesehatan Republik Indonesia; 2014. Dapat
diunduh di: http://www.depkes.go.id/resources/download/info-
terkini/PMK%20No.%2094%20ttg%20Penanggulangan%20Filariasis.pdf
9. Marwan, Surachman P. 2007. Wilayah Rawan Filariasis di Kabupaten
Lebak Provinsi Banten. Jakarta: Fakultas Matematika dan IPA UI
10. Chandra B. Ilmu Kedokteran Pencegahan dan Komunitas. Jakarta: EGC;
2009
11. Direktorat Jenderal Pengendalian Penyakit dan Penyehatan Lingkungan.
2012. Pedoman Penggunaan Larvasida (pestisida) dalam Pengendalian
Vector. Jakarta: Kementerian Kesehatan RI; 2012
43
12. Westy Ayu, Tinni Rusmartini, Ratna Dewi. Uji Resistensi Nyamuk Aedes
Aegyptii terhadap Larvasida Transfultrin 25% dan Metoflutrin 3,5%
Tahun 2015. Bandung: Universitas Islam Bandung; 2015
13. Made Oka, Sri Rahayu, I Made Sulaksana, Ida Ayu. Aktivitas Minyak
Atsiri pada Daun Sirih terhadap Larva Nyamuk Aedes Aegyptii.
Denpasar: Universitas Udayana; 2011
14. Handayani, Hasanuddin I, Anwar. Efektivitas Ekstrak Daun Sirih Sebagai
Biolarvasida terhadap Kematian Larva Nyamuk Aedes Aegyptii.
Makassar: Universitas Hasanuddin; 2013
15. Mardiyah, Nisrina. Uji Efektivitas Ekstrak Daun Sirih (Piper betle Linn)
sebagai Larvasida pada Nyamuk Aedes aegyptii Instar III/IV. Jakarta:
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah
Jakarta; 2014
16. University of Michigan Museum of Zoology. Culex quinquefasciatus.
Available
from:http://animaldiversity.ummz.umich.edu/accounts/Culex_quinquefas
ciatus/classification/.
17. Prianto J. 2000. Atlas Parasitologi Kedokteran. Jakarta: PT. Gramedia
18. New Zealand Biosecure Entomology Laboratory. Culex quinquefasciatus.
New Zealand; 2008
19. Stephanie H dan Roxanne C. Southern House Mosquito Culex
quinquefasciatus Say. US: Institute of Food and Agricultural Sciences,
University of Florida. May; 2013.
20. American Mosquito Control Association. 2014. Available
from:www.mosquito.org/life-cycle Diunduh pada tanggal 17 oktober
2016 pukul 21.00
21. Kent, S Littig. Characteeristics of Anophelines and Culicines. 2014
Avaible from: http://www.cdc.gov Diunduh pada tanggal 17 oktober 2016
pukul 21.00
44
22. Molaei G et al. Host feeding pattern of Culex quinquefasciatus (Diptera:
Culicidae) and its role in transmission of west nile virus in Harris County,
Texas. The American Society of Tropical Medicine and Hygiene. 77(1);
2007: 73-81.
23. Manimegalai K, Sukanya S. Biology of the filarial vector, Culex
quinquefasciatus (Diptera:Culicidae). Int.J.Curr.Microbiol.App.Sci. 3(4);
2014: 718-724.
24. Gani, Yogi Ismail. Efek Residu Bacillus thuringiensis israelensis
terhadap Aedes albopictus dan Culex quinquefasciatus di dalam bak fiber
glass, keramik, dan semen. Depok: Fakultas Kedokteran Universitas
Indonesia. 2011
25. Natadisastra D, Agoes R. Parasitologi kedokteran ditinjau dari organ
tubuh yang diserang. Jakarta: EGC; 2005
26. Staf Pengajar Departemen Parasitologi FK UI. Parasitologi kedokteran 4th
ed. Jakarta: Balai Penerbit FK UI; 2009.
27. Sumber:University of Michigan Museum of Zoology. Culex 2016.
Avaible from: http://animaldiversity.ummz.umich.edu Diunduh pada
tanggal 17 oktober 2016 pukul 21.00
28. NSW Arbovirus Surveillance and Vector Monitoring Program Avaible
from:http://medent.usyd.edu.au Diunduh pada tanggal 17 oktober 2016
pukul 21.00
29. Gough Harrold. A culex mosquito egg raft & irritating flies; 2013.
Available from: http://photomacrography.net
30. Mosquitoes of Actual and Potential Medical and Military Significance.
Avaible from: http://www.phsource.us Diunduh pada tanggal 17 oktober
2016 pukul 21.00
31. Littig KS, Stojanovich CJ. Mosquitoes: characterictics of Anophelines
and Culicines: 134-166
32. Farajollahi A, Fonseca DM, Kramer LD, Kilpatrick AM. 2011. “Bird
biting” mosquitoes and human disease: a review of the role of Culex
45
pipiens complex mosquitoes in epidemiology. National Institutes of
Health. Infect Genet Evol: 11(7): .1577-1585.
33. Sirait, M, Loohu, E, dan Sutrisno. Materi Medika Indonesia jilid IV.
Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Badan Penelitian dan
Pengembangan Kesehatan Jakarta; 1992
34. Qisthina, Tizani. Aktivitas Ekstrak Etanol Daun Sirih Hijau dalam
Mempercepat Proses Persembuhan pada Luka Tikus. Bogor: Fakultas
Kedokteran Hewaan IPB. 2013. Diunduh pada tanggal 18 oktober 2016
pukul 20.00
35. Pradhan, D., Suri, K.A., Pradhan, D.K., dan Biswasroy, P. Golden Heart
of the Nature: Pioer betle L. India: Journal of Pharmacognosy and
Phytochemistry Vol 1; 2013: 148-152. Avaible from:
http://www.phytojournal.com/vol1Issue6/Issue_march_2013/19.pdf
36. Hidayaningtyas, P. Perbandingan Efek Antibakteri Air Seduhan Daun
Sirih (Piper betle Linn) terhadap Streptococcus mutans pada Waktu
Kontak dan Konsentrasi yang Berbeda. Semarang: Fakultas Kedokteran
Universitas Diponogoro; 2008: 5
37. Kaihena, M., Lalihatu, V., dan Nindatu, M. Efektivitas Ekstrak Etanol
Daun Sirih (Piper betle Linn) terhadap Mortalitas Larva Anopheles sp
dan Culex sp. Molluca Medica Vol 4 No 1; Oktober 2012: 88-105
38. Sastroamidjojo. Obat Asli Indonesia. Jakarta: PT. Dian Rakyat; 2001
39. Rosman, R dan S. Suhirman. Sirih tanaman obat yang perlu mendapat
sentuhan teknologi budaya. Warta penelitian dan Pengembangan
Tanaman Industri Vol 12 No 1; 2006: 13-15
40. Ilmu Kimia. Struktur Senyawa-Senyawa Kimia. 2013. Diunduh pada
tanggal 19 oktober 2016
41. Morais, S.M., Facundo, V.A., Bertini, L.M., Cavalcanti, E.S.B., et al..
Chemical Composition and Larvasidal Activity of Essential Oils from
Piper Species. Biochemical Systematic and Ecology Vol. 35; 2007: 607 -
675
46
42. Fahmi, M, dan Gondo, F. 2006. Perbandingan Efektivitas Abate dengan
Ekstrak Daun sirih (Piper betle L.) dalam menghambat Pertumbuhan
Larva Aedes Aegyptii. Semarang: Universitas Diponogoro
43. Shivakumar, M.S., Srinivasan, R., dan Natarajan, D. Larvacidal Potential
of Some Indian Medical Plant Extracts Against Aedes aegypti. Asian
Journal of Pharmaceutical and Clinical Research Vol. 6; 2013: 77-80.
44. Turk FM. Saponins versus plant fungal pathogens. J Cell Mol Biol. 5:13-
17. Francis G, Kerem Z, Makkar HPS, Becker K. 2002. The biological
action of saponins in animal systems: a review. British J Nutrition; 2006.
88:587-805.
45. Haditomo, I. .Efek Larvasida Ekstrak Daun Cengkeh (Syzygium
aromaticum L.) Terhadap Aedes aegypti L.Skripsi dari Fakultas
Kedokteran Universitas Sebelas Maret; 2010
46. Kuddus MR, Rumi F, Masud MM. Phytochemical screening and
antioxidant activity Studies of Cerbera odollamGaetrn. Int J Pharm Bio
Sci. 2(1); 2011: 413-418
47. Hagerman, A.E., The Tannin Handbook. Miami University; 2002
48. Gunawan, E. Efek Potensial Larvasida Kombinasi Ekstrak Daun Kemangi
(Ocimum sanctum Linn) dan Biji Jarak (Ricinus communis Linn) terhadap
Aedes Aegypti. Surakarta: Universitas Sebelas Maret; 2011: 16-19
49. World Health Organization. Guidelines for Laboratory and Field Testing
of Mosquitos Larvacides. Geneva; 2005
50. Lulus Susanti dan Hasan Boesri. Isektisida Sipermethrin 100G/L
Terhadap Nyamuk dengan Metode Pengasapan. Indonesia: Balai Besar
Badan Pengembangan Vektor dan Reservoir Penyakit Salatiga; Januari
2012: 156-163. Avaible from: http://journal.unnes.ac.id/index.php/kemas
Lampiran 1
Surat Permohonan Izin Penelitian dan Pengambilan Data
47
Lampiran 2
Surat Izin Penelitian
48
Lampiran 3
Surat Keterangan Identifikasi
49
Lampiran 4
Surat Keterangan Ekstraksi
50
Lampiran 6
Gambar Kegiata
51
Tempat Menaruh Air
Selokan dan Larva
Rearing Nyamuk dalam
Kandang Nyamuk
Pengambilan Larva
Nyamuk di Selokan
Tempat Larva
Air Gula untuk Makanan
Nyamuk
Lampiran 6
Gambar Kegiata
52
Daun Sirih Kering yang Akan
Dilakukan Ekstraksi
Pemisahan Larva Nyamuk
dengan Pupa
Telur Nyamuk Culex sp di
Bawah Mikroskop
Larva Nyamuk Culex sp
Larva Nyamuk Culex sp Instar
III/IV
Larva Nyamuk Culex sp Instar
III/IV Dihitung dengan
Penggaris
Lampiran 7
Gambar Kegiatan
53
Alat-alat Untuk Melakukan Pengenceran
Ekstrak Daun Sirih
Pengenceran Ekstrak
Daun Sirih dengan
Menggunakan Aquades
Ekstrak Daun Sirih dengan bermacam-
macam Konsentrasi
Pengenceran Ekstrak
dengan Aquades
Lampiran 8
Hasil Perhitungan SPSS
54
Lampiran 9
Hasil Perhitungan SPSS
55
Lampiran 10
Hasil Perhitungan Probit
56
Lampiran 10
Hasil Perhitungan Probit
57