efektifitas ekstrak madu dalam menghambat...
TRANSCRIPT
UJI EFEKTIFITAS EKSTRAK MADU KARET DALAM
MENGHAMBAT PERTUMBUHAN Staphylococcus aureus
Laporan Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk
memperoleh gelar SARJANA KEDOKTERAN
OLEH :
ARDIN SAHPUTRA
1111103000011
PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA
2014
ii
PERNYATAAN
DENGAN INI SAYA MENYATAKAN BAHWA SKRIPSI INI BENAR-BENAR
HASIL KARYA SAYA SENDIRI DAN BELUM PERNAH DIAJUKAN SEBAGAI
SKRIPSI. LAPORAN PENELITIAN INI UNTUK MEMENUHI PERSYARATAN
MEMPEROLEH GELAR STRATA 1 DI UIN SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA.
Ciputat, September 2014
Materai
Rp 6000
Ardin Sahputra
1111103000011
iii
UJI EFEKTIFITAS EKSTRAK MADU KARET DALAM MENGHAMBAT
iv
v
KATA PENGANTAR
Alhamdulillah, dengan mengucapkan syukur atas kehadirat Allah SWT, atas rahmat
dan hidayah-Nya akhirnya penulis dapat menyelesaikan dan menyusun skripsi ini
dengan judul “UJI EFEKTIFITAS EKSTRAK MADU KARET DALAM
MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI Staphylococcus aureus”. Disusun
sebagai syarat tugas akhir pada Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran
dan Ilmu Kesehatan, Universitas islam Negri Syarif Hidayatullah, Jakarta.
Selama penyusunan skripsi, berbagai pihak yang telah bersedia meluangkan
waktunya untuk memberikan petunjuk, bimbingan, nasehat-nasehat serta semangat yang
sangat berguna bagi penulis. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis
menyampaikan ucapan terimakasih kepada :
1. Prof. DR. (hc). dr. M.K. Tadjudin, Sp. And selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan
Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
2. dr. Witri Ardini, M.Gizi, SpGK selaku Ketua Program Studi Pendidikan Dokter
3. dr Erike, M.Pd selaku pembimbing pertama.
4. dr Aisyah, PhD selaku pembimbing kedua.
5. Orang tua (Drs. Arman Zebua dan Dra. Nirwana Malau)
6. Dr. P.A. Kodrat Pramudho, SKM, M. Kes selaku Kepala Balai Besar Teknik
Kesehatan Lingkungan dan Pencegahan Penyakit Menular Jakarta
7. Ibu Murni selaku staf Balai Besar Teknik Kesehatan Lingkungan dan Pencegahan
Penyakit Menular Jakarta
8. Dosen dan staf Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah
Jakarta
vi
9. Rekan-rekan seperjuangan PSPD 2011
Penulis berharap bahwa skripsi ini dapat berguna untuk pihak-pihak lain yang
memerlukan. Namun penulis juga mengharapkan kritik dan saran yang sifatnya
membangun untuk kemajuan wawasan ilmu pengetahuan.
Jakarta, September 2014
Penulis
vii
ABSTRAK
Ardin Sahputra. Program Studi Pendidikan Dokter. UJI EFEKTIFITAS EKSTRAK
MADU KARET DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN Staphylococcus
aureus. 2014.
Bakteri kelompok Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif yang dapat
menyebabkan penyakit. Staphylococcus aureus merupakan penyebab utama infeksi
nosokomial, keracunan makanan, dan sindroma syok toksik. Tujuan dari penelitian ini
adalah untuk melihat aktifitas antibakteri madu karet pada Staphylococcus aureus.
Metode yang digunakan adalah Cakram difusi. Madu karet diekstrak menggunakan 2
jenis pelarut, aseton dan n-heksana dengan hasil berupa ekstraksi madu karet residu dan
sedimen. Terbentuk zona hambat pada biakan Staphylococcus aureus yang diberikan
ekstrak madu karet dengan berbagai kosentrasi. Diukur dan data statistik mengunakan
uji one way-anova. Sampel Residu tidak memiliki efek penghambatan sementara sampel
sedimen dengan aseton dan madu karet alami kosentrasi 100% memiliki efektifitas baik
dengan zona hambatan pertumbuhan 23,5mm dan signifikansi 0,00 (P<0,05).
Kata Kunci : antibakteri, madu karet, Staphylococcus aureus.
Ardin Sahputra. Program Study Education Doctor. The EFFECTIVENESS OF
RUBBER HONEY EXTRAXT IN IN HIBITING Staphylococcus aureus GROWTH
2014
Staphylococcus aureus bacteria is a positive-Gram bacteria which can cause some
diseases. Staphylococcus aureus is a major cause of nosocomial infections, food
poisoning, and toxic shock syndrome. The aim of this research is to investigate
antibacterial activity of honey on Staphylococcus aureus. The method that had been
used in this experiment was diffused cakram. The research used 2 types of solvent,
acetone and n-hexane. nhibition zone formed in cultured Staphylococcus aureus were
given rubber honey extract with various concentrations. Measured and statistical data
using one way-anova test. The sample residue has no inhibitory effect while the sediment
samples with acetone and honey concentration of 100% natural rubber has good
effectiveness with growth inhibition zone 23,5mm and significance of 0.00 (P <0.05).
KEYWORDS : Antibacterial, Rubber Honey, Staphylococcus aureus.
viii
Daftar Isi
Lembar Judul......................................................................................................... i
Lembar Pernyataan Keaslian Karya.................................................................... ii
Lembar Persetujuan Pembimbing........................................................................ iii
Lembar Pengesahan.............................................................................................. iv
Lembar Pengesahan.............................................................................................. v
Kata Pengantar........................................................................................................ vi
Abstrak..................................................................................................................... viii
Daftar Isi.................................................................................................................. viii
Daftar Gambar......................................................................................................... xi
Daftar Tabel.............................................................................................................. xii
Bab 1 : Pendahuluan............................................................................................... 1
1.1. Latar Belakang................................................................................................... 1
1.2. Rumusan Masalah............................................................................................... 2
1.3. Hipotesis............................................................................................................. 2
1.4. Tujuan................................................................................................................. 2
1.4.1. Tujuan Umum.................................................................................................. 2
1.4.2. Tujuan Khusus................................................................................................. 3
1.5. Manfaat Penelitian.............................................................................................. 3
1.5.1. Bagi Peneliti..................................................................................................... 3
1.5.2. bagi masyarakat............................................................................................... 3
1.5.3. Instansi pendidikan.......................................................................................... 3
ix
Bab 2 : Tinjauan Pustaka........................................................................................ 4
2.1. Landasan Teori.................................................................................................... 4
2.1.1 Definisi Dan kandungannya.............................................................................. 4
2.1.2 Klasifikasi lebah penghasil madu..................................................................... 5
2.2. Staphylococcus aureus........................................................................................ 6
2.2.1 Penyakit-penyakit akibat Staphylococus aureus............................................... 8
2.3. Mekanisme Kerja Antibakteri............................................................................. 8
2.4. pengukuran Aktivitas Antibakteri...................................................................... 9
2.8. Kerangka konsep..................................................................................................12
2.9. Definisi Operasional............................................................................................ 13
Bab 3 : Metode Penelitian........................................................................................ 15
3.1. Desain Penelitian................................................................................................. 15
3.2. Lokasi dan Waktu Penelitian................................................................................15
3.3. Sampel Penelitian................................................................................................ 15
3.4 Variabel Penelitian.............................................................................................. 16
3.4.1.Variabel Bebas................................................................................................... 16
3.4.2. Variabel Terikat................................................................................................ 16
3.5. Alat dan Bahan Penelitian.................................................................................... 16
3.5.1. Bahan Penelitian................................................................................................16
3.5.2. Alat Penelitian.................................................................................................. 16
3.6. Cara Kerja Penelitian........................................................................................... 17
3.6.1. Sterilisasi alat dan bahan................................................................................... 17
3.6.2. Ekstraksi............................................................................................................17
3.6.3. Pembuatan medium.......................................................................................... 17
x
3.6.4. Pembuatan Variabel Konsentrasi ekstrak madu............................................. 17
3.6.5. Kultur bakteri.................................................................................................. 18
3.6.6. Metode difusi cakram...................................................................................... 18
3.7. Pengolahan dan Analisis Data............................................................................. 18
3.8. Alur Penelitian..................................................................................................... 19
Bab 4 : Hasil dan Pembahasan.............................................................................. 20
4.1. Ekstraksi Madu karet........................................................................................... 20
4.2. Uji antibakteri.................................................................................................... 20
4.4.2. Uji antibakteri dengan difusi cakram................................................................ 20
Bab 5 : Kesimpulan dan Saran................................................................................ 26
5.1. Kesimpulan........................................................................................................ 26
5.2. Saran.................................................................................................................... 26
Daftar Pustaka.......................................................................................................... 27
Lampiran................................................................................................................... 30
xi
Daftar Gambar
2.1 Gambar madu dan sarang madu................................................................ 4
2.2 Gambar lebah Apis Maliferaa....................................................................... 6
2.3 bentuk mikroskop elektron Staphylococcus aureus ...................................... 7
2.8 Kerangka konsep............................................................................................ 12
3.8 Alur penelitian................................................................................................. 19
xii
Daftar Tabel dan Diagram
2.4 Tabel Zona hambat berdasarkan CLSI guidelines 2011.............................. 10
4.2 Tabel Hasil Pengukuran Uji Zona Hambat.................................................. 21
4.2 Grafik pengukuran………............................................................................. 21
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Staphylococcus aureus merupakan penyebab utama infeksi nosokomial,
keracunan makanan, dan sindroma syok toksik. Infeksi oleh Staphylococcus
aureus ditandai dengan kerusakan jaringan yang disertai abses bernanah.
Beberapa penyakit infeksi yang disebabkan oleh Staphylococcus aureus adalah
bisul, jerawat, impetigo, dan infeksi luka. Infeksi yang lebih berat diantaranya
pneumonia, mastitis, plebitis, meningitis, infeksi saluran kemih, osteomielitis, dan
endokarditis1.
Infeksi Saluran Pernapasan Akut (ISPA) adalah infeksi akut yang
menyerang salah satu bagian atau lebih dari saluran napas. Penyakit ini sering
terjadi pada anak. Berdasarkan laporan tahun 2013, lima provinsi dengan angka
kejadian ISPA tertinggi adalah Nusa Tenggara Timur (41,7%), Papua (31,1%),
Aceh (30,0%), Nusa Tenggara Barat (28,3%), dan Jawa Timur (28,3%).
Berdasarkan usia, karakteristik penduduk dengan ISPA tertinggi terjadi pada
kelompok umur 1- 4 tahun (25,8%) dan selanjutnya pada usia <1 tahun (22,0%).
Menurut jenis kelamin, tidak berbeda antara laki-laki dengan perempuan. Penyakit
ini lebih banyak dialami pada kelompok dengan ekonomi rendah atau menengah
kebawah2.
Pengobatan untuk penyakit infeksi ini adalah dengan pemberian agen
antibakteri yang dapat menghambat pertumbuhan dan atau membunuh bakteri
yang menginfeksi. Agen antibakteri telah banyak ditemukan sekarang ini, tetapi
beberapa diantaranya menjadi tidak efektif digunakan karena banyaknya bakteri
yang resisten dan efek sampingnya sangat merugikan penderita3. Oleh karena itu
pencarian antibakteri baru yang lebih efektif dan aman menjadi perlu untuk terus
dilakukan, terutama yang berasal dari bahan alam.
Banyak pengobatan secara medikamentosa untuk mengatasi Infeksi
Saluran Pernapasan Akut akibat infeksi mikroorganisme terutama Staphylococcus
aureus. Namun ada juga pengobatan alternatif menggunakan herbal dengan madu.
2
Terapi ini dianggap mempunyai efek antibakteri dan memiliki efek antiradang
yang membantu penyembuhan akibat infeksi mikroorganisme.
Madu (Mel millis) adalah cairan kental yang diproduksi oleh lebah madu
dari nektar bunga dan sejak zaman dahulu dipercaya berkhasiat dalam
menyembuhkan berbagai jenis penyakit yang berhubungan dengan infeksi dan
alergi. Madu telah digunakan untuk mengobati berbagai luka infeksi bahkan jauh
sebelum bakteri ditemukan sebagai penyebab infeksi. Pada tahun 50 Masehi,
Dioscorides telah mendeskripsikan bahwa madu cukup efektif untuk mengobati
berbagai luka ulcerasi. Beberapa penelitian terkini yang telah dilakukan
menunjukan bahwa madu dapat digunakan sebagai antibakteri pada luka termasuk
luka pasca operasi. Penelitian yang dilakukan terhadap pasien pasca operasi pada
luka yang tidak berhasil disembuhkan oleh antibiotik intravena, dengan
mengoleskan madu 5-10 mL dua kali sehari memperlihatkan terjadinya
penyembuhan luka pada 5 hari pemakaian4.
Dalam rangka usaha pengembangan dan pemanfaatan madu karet, maka
perlu dilakukan penelitian untuk menjadi dasar ilmiah penggunaan madu karet
sebagai obat antibakteri melalui pengujian aktifitas madu terhadap bakteri
Staphylococcus aureus secara in vitro.
1.2 Rumusan masalah
Apakah ekstrak madu karet efektif dalam menghambat pertumbuhan
Staphylococcus aureus.
1.3 Hipotesis
Madu karet Efektif menghambat pertumbuhan terhadap Staphylococcus
aureus.
1.4 Tujuan
1.4.1 Tujuan Umum
Untuk mengetahui efektifitas madu karet dalam menghambat
pertumbuhan bakteri Stahpylococus aureus.
3
1.4.2 Tujuan Khusus
1. Mengetahui adakah pengaruh ekstrak madu karet dalam menghambat
pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.
2. Mengetahui kadar ekstrak madu yang efektif menghambat
pertumbuhan bakteri Staphylococus aureus.
1.5 Manfaat Peneliti
1.5.1 Bagi Peneliti
Untuk memperoleh informasi yang jelas mengenai manfaat madu dalam
menghambat pertumbuhan Stahpylococus aureus.
1.5.2 Bagi Masyarakat
Untuk menambah pengetahuan khususnya bagi masyarakat yang ingin
mengetahui manfaat dari madu sebagi alternatif pengobatan penyakit yang
disebabkan oleh bakteri Staphylococcus aureus.
1.5.3 Instansi Pendidikan
Sebagai bahan masukan dan bahan bacaan bagi mahasiswa/i fakultas
kedokteran dan ilmu kesehatan Uin Syarif Hidayatullah Jakarta dan sebagai
referensi Pembanding untuk peneliti selanjutnya.
4
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Landasan Teori
2.1.1 Definisi Dan Kandungan madu
Madu adalah cairan alami yang mempunyai rasa manis dan dihasilkan oleh
lebah madu dari sari bunga tanaman (floral nektar) atau bagian lain dari tanaman
(ekstra floral nektar) atau ekskresi serangga5. pada jaman dahulu madu dipakai
untuk mengawetkan daging dan kulit. Orang mesir pada waktu itu
mempergunakan madu sebagai bagian dari ramuan rahasianya untuk
mengawetkan jenazah raja-raja. Madu juga digunakan untuk makanan kesehatan,
obat-obatan serta kosmetik. Banyak bukti yang mendukung madu dapat
digunakan untuk luka yakni sebagai antibakteri dan dapat mempercepat
pertumbuhan jaringan pada luka6.
Gambar 2.1: Lebah Dan Sarang Madu (http://yoshsolo.com)
Madu tidak mudah larut dalam air. Berdasarkan rendahnya kelarutan madu
asli disebabkan rheologi asli madu yang berbentuk kental dengan viskositas tinggi
serta adanya komponen-komponen lain dalam madu (meski dalam jumlah yang
sangat sedikit) seperti protein,vitamin dan mineral yang tidak dimiliki oleh madu
buatan atau madu palsu7.
Madu memiliki beberapa komposisi yaitu air (17,2%), zat gula (81,3%),
dan sisanya merupakan asam-asam amino, vitamin, mineral (besi, fosfor,
magnesium, alumunium, natrium, kalsium, dan kalium), enzim, hormon, zat
bakterisida, dan zat aromatik. Zat gula dalam madu memiliki komposisi yaitu
fruktosa (38,19%), glukosa (31,28%), sukrosa (5%), maltosa dan disakarida lain
(6,83%). Madu memiliki kandungan vitamin C (asam askorbat), vitamin B6
(piridoksin), thiamin (B1), riboflavin (B2), niasin, asam pantotenat, biotin,
5
asam folat, dan vitamin K. Selain itu madu memiliki kandungan asam organik
yaitu asam asetat, asam butirat, format, suksinat, glikolat, malat,
proglutamat, sitrat, dan piruvat8.
Madu juga memiliki beberapa jenis enzim yang terdapat didalamnya
seperti enzim peroksidase, lipase, diastase, invertase, dan glukosa oksidase. Enzim
yang terdapat pada madu murni memiliki keuntungan untuk kesehatan manusia,
tetapi dalam proses pemanasan dan penyimpanan yang terlalu lama dapat
mengurangi aktivitas enzim8.
Madu dapat menjadi agen antibakteri. Hal tersebut disebabkan kandungan
gula yang tinggi, pH madu yang relatif asam, dan kandungan protein yang rendah.
Dengan demikian madu dapat membatasi jumlah air yang tersedia untuk
menghalangi pertumbuhan bakteri9.
Banyak juga penelitian bahwa madu memiliki efek antibakteri terhadap
bakteri yang sudah resisten terhadap beberapa jenis antibiotik10
. Madu gunung
memiliki aktifitas antibakteri yang tinggi terhadap bakteri Gram negatif maupun
positif11
. Banyak penelitian yang sudah meneliti khasiat madu seperti
pengaruhnya sebagai agen antibakteri. Tingkat keasaman madu yang tinggi akan
mengurangi pertumbuhan, kehidupan bakteri dan terdapat senyawa hidrogen
peroksida (H2O2) yang membunuh mikroorganisme patogen10
. senyawa organik
dalam madu (polifenol, flavonoid, inhibin, alkaloid, dan glikosida) yang bersifat
antibakteri dapat merusak integritas dinding sel sehingga dapat menghambat atau
membunuh bakteri. Inhibinsi lebih sensitif terhadap bakteri Gram negatif daripada
Gram positif 12
.
2.1.2 Klasifikasi lebah penghasil madu
Kingdom : Animalia
Filum : Arthropoda
Kelas : Insecta
Ordo : Hymenoptera
Famili : Apidae
6
Genus : Apis
Spesies : Apis dorsata, Apis laboriosa, Apis mellifera, Apis
Cerana.
Sumber: Patra Ketut. Lebah untuk kesejahteraan masyarakat bekasi 20117.
Madu dihasilkan oleh lebah penghasil madu. Lebah madu adalah jenis
serangga yang berperan dalam menghasilkan madu. Lebah ini
tergolongkan menjadi 3 jenis yaitu lebah ratu, lebah pejantan, dan lebah pekerja.
Serangga ini mengubah nektar yang dihasilkan tanaman menjadi
madu selanjutnya madu akan disimpan dalam sarang lebah. hanya 6 jenis yang
tergolong lebah penghasil madu. 2 jenis lebah yang dapat diternakan yaitu Apis
mellifera dan Apis cerana. Jenis yang hidup di Asia, termasuk di Indonesia yaitu
Apis mellifera indica 8.
Gambar 2.1.2: Apis melifera (David Cappaert Photograph courtesy InsectImages.org)
2.2 Staphylococcus aureus
Kingdom : Eubacteria
Filum : Firmicutes
Kelas : Bacilli
Ordo : Bacillales
Famili : Sthapylococcoceae
Genus : Staphylococcus
Spesies : Staphylococcus aureus
7
Sumber: Jawetz, E., J.L. Melnick., Mikrobiologi Kedokteran. Edisi ke-201
Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif berbentuk bulat
berdiameter 0,7-1,2 μm, tersusun dalam kelompok-kelompok yang tidak teratur
seperti buah anggur, fakultatif anaerob, tidak membentuk spora, dan tidak
bergerak. Bakteri ini tumbuh pada suhu optimum 37 ºC, tetapi membentuk
pigmen paling baik pada suhu kamar (20-25 ºC). Koloni pada perbenihan padat
berwarna abu-abu sampai kuning keemasan, berbentuk bundar, halus, menonjol,
dan berkilau. Lebih dari 90% isolat klinik menghasilkan S.aureus yang
mempunyai kapsul polisakarida atau selaput tipis yang berperan dalam virulensi
bakteri1.
Fase pertumbuhan Staphylococcus aureus dengan menggunakan metode
turbidimetri pada medium Nutrient broth, diketahui fase adaptasi berlangsung dari
menit ke-0 sampai menit ke-360, selanjutnya diikuti dengan fase logaritmik pada
fase stasioner dimana jumlah sel yang tumbuh hampir sama dengan jumlah sel
yang mati dan akhirnya bakteri mengalami penurunan jumlah sel, hal ini
diakibatkan oleh nutrisi yang semakin berkurang atau terakumulasinya limbah
metabolisme14
.
Hanya jalur tertentu dari Staphylococcus aureus yang menghasilkan
enterotoksin. Pada umumnya jalur ini adalah koagulasi positif, yaitu mempunyai
kemampuan mengkoagulasi plasma darah yang diberi sitrat atau oksalat.
Enterotoksin ini tahan panas, tidak berubah walaupun telah didihkan selama 30
menit15
.
Keracunan makanan dapat disebabkan kontaminasi enterotoksin dari S.
aureus. Waktu onset dari gejala keracunan biasanya cepat dan akut, tergantung
pada daya tahan tubuh dan banyaknya toksin yang termakan. Jumlah toksin yang
dapat menyebabkan keracunan adalah 1,0 µg/gr makanan. Gejala keracunan
ditandai oleh rasa mual, muntah-muntah, dan diare yang hebat tanpa diseritai
demam1.
Gambar 2.3: Bentuk mikroskop elektron S. aureus (Ryan KJ, ray CG: Sherris Medical
microbiology, 5th Edition:www.accessmedicine.com).
8
2.2.1 Penyakit-penyakit akibat Staphylococcus aureus
Bakteri Stahpylococus aureus merupakan flora normal pada kulit, saluran
pernafasan, dan saluran pencernaan makanan pada manusia. Bakteri ini juga
ditemukan di udara dan lingkungan sekitar. Staphylococcus aureus yang patogen
bersifat invasif, menyebabkan hemolisis, membentuk koagulase, dan mampu
meragikan manitol1.
Staphylococcus aureus juga merupakan penyebab utama infeksi
nosokomial, keracunan makanan, dan sindroma syok toksik. Infeksi oleh
Staphylococcus aureus ditandai dengan kerusakan jaringan yang disertai abses
bernanah. Beberapa penyakit infeksi yang disebabkan oleh Staphylococcus aureus
adalah bisul, jerawat, impetigo, dan infeksi luka. Infeksi yang lebih berat
diantaranya pneumonia, mastitis, plebitis, meningitis, infeksi saluran kemih,
osteomielitis, dan endokarditis1. Keracunan makanan dapat disebabkan
kontaminasi enterotoksin dari Staphylococcus aureus. Waktu onset dari gejala
keracunan biasanya cepat dan akut, tergantung pada daya tahan tubuh dan
banyaknya toksin yang termakan. Jumlah toksin yang dapat menyebabkan
keracunan adalah 1,0 µg/gr makanan. Gejala keracunan ditandai oleh rasa mual,
muntah-muntah, dan diare yang hebat tanpa disertai demam1.
Staphylococcus aureus juga dapat menyebabkan Sindroma syok toksik
(SST) secara tiba-tiba dengan gejala demam tinggi, muntah, diare, mialgia, ruam,
dan hipotensi, dengan gagal jantung dan ginjal pada kasus yang berat. SST sering
terjadi dalam lima hari permulaan haid pada wanita muda yang menggunakan
tampon, atau pada anak-anak dan pria dengan luka yang terinfeksi Staphylococcus
aureus1.
2.3 Mekanisme Kerja Antibakteri
Mekanisme penghambatan dan perusakan mikroorganisme oleh senyawa
antibakteri berbeda-beda. Penghambatan bakteri oleh senyawa antibakteri secara
umum dapat disebabkan oleh: (1) ganguan pada komponen penyusun sel;
9
terutama komponen penyusun dinding sel, (2) reaksi dengan membran sel yang
dapat mengakibatkan perubahan permeabilitas dan kehilangan komponen
penyusun sel, (3) penghambatan terhadap sintesis protein dan (4) ganguan fungsi
material genetik16
. Mekanisme terjadinya proses tersebut disebabkan oleh adanya
perlekatan senyawa antibakteri pada permukaan sel bakteri dan senyawa tersebut
berdifusi ke dalam sel17
.
2.4 Pengukuran Aktifitas Antibakteri
Pengukuran aktifitas antibakteri dapat dilakukan dengan metode difusi dan
metode pengenceran. Metode difusi merupakan salah satu metode yang sering
digunakan, metode difusi dapat dilakukan 3 cara yaitu metode silinder, lubang dan
cakram kertas. Metode pengenceran dengan mengencerkan zat antibakteri dan
dimaksukan ke dalam tabung-tabung reaksi steril. Kedalam masing-masing tabung
itu ditambahkan sejumlah mikroba uji yang telah diketahui jumlahnya. Pada
interval waktu tertentu, dilakukan pemindahan dari tabung reaksi kedalam tabung-
tabung berisi media steril yang lalu di inkubasikan dan diamati penghambatan
pertumbuhan18
.
Seleksi aktivitas antibakteri dengan difusi sumur dan difusi cakram
digunakan sebagai uji pendahuluan. Metode ini dipengaruhi oleh ketebalan
lapisan agar dan volume ekstrak yang terserap dalam cakram19
. Metode cakram
kertas yaitu meletakan cakram kertas yang telah direndam larutan uji di atas
media padat yang telah diinokulasi dengan bakteri. Setelah diinkubasi,
pertumbuhan bakteri diamati untuk melihat ada tidaknya daerah hambatan
disekeliling cakram18
.
Metode disk difusi digunakan untuk menentukaan aktivitas antibakteri.
Metode ini dilakukan dengan meletakan piringan (blank disk) yang sudah diisi
dengan suatu zat antibakteri diatas media agar yang telah ditanami
mikroorganisme. Efektifitas zat antibakteri ditunjukan oleh zona hambatan. Zona
hambatan tampak sebagai area jernih/bersih yang mengelilingi cakram dimana zat
dengan aktivitas antibakteri terdifusi. Diameter zona bisa dihitung dengan
penggaris dan jangka sorong.
10
Ukuran dari zona hambatan dapat dipengaruhi oleh kepadatan atau
vikositas dari media biakan, kecepatan difusi zat antibakteri. Konsentrasi zat
antibakteri. Sensitivitas mikroorganisme terhadap zat antibakteri dan interaksi zat
antibakteri dengan media.
Fase pertumbuhan bakteri berpengaruh terhadap sensitifitas antibakteri
terhadap senyawa antibakteri. Bakteri pada fase stasioner lebih sensitif terhadap
antibakteri20
. Pengujian antibakteri dilakukan pada fase midlog yaitu pertengahan
fase logaritmik (eksponesial), yaitu dimana bakteri sedang aktifnya membelah
diri, sehingga pengaruh senyawa antibakteri dapat dilihat dengan adanya kematian
atau hambatan pada pertumbuhan bakteri. Zona hambat agen antibakteri dapat
dibedakan berdasarkan CLSI guidelines 2011. Dapat dilihat dalam tabel 2.4
dibawah ini.
Tabel 2.4 Klasifikasi Zona Hambat Pada Uji Ekstrak Madu berdasarkan
CLSI guidelines 2011
Zona hambat agen antibakteri berdasarkan CLSI guidelines 2011
Antibiotik Dosis Perlakuan Susceptible Intermedietly
susceptible
Resistant
Amoksisilin 20/10
ug
Enterobacteriaceae ≥ 18 mm 14-17 mm ≤ 13 mm
Haemophilus
influenza
≥ 20 mm ≤ 19 mm
Staphylococcus
aureus
≥ 20 mm ≤ 19 mm
Terdapat bermacam-macam metode uji antibakteri yang dapat dilakukan
selain Difusi Cakram untuk mengukur respon pertumbuhan populasi
mikroorganisme terhadap agen antibakteri:
Metode Dilusi
Terdapat dua cara untuk melakukan metode ini, metode dilusi cair (broth
dilution) dan metode dilusi padat (solid dilution test)21
. Metode dilusi digunakan
untuk menentukan konsentrasi hambat minimum atau konsentrasi bunuh
minimum dari antibakteri terhadap bakteri yang diujikan. Cara yang dilakukan
11
adalah dengan membuat seri pengenceran agen antibakteri pada medium cair yang
ditambahkan dengan bakteri uji. Larutan uji agen antibakteri pada kadar terkecil
yang terlihat jernih tanpa adanya pertumbuhan bakteri uji ditetapkan sebagai
kadar hambat minimum. Selanjutnya larutan tersebut dikultur ulang pada media
cair tanpa penambahan mikroba uji maupun agen antibakteri dan diinkubasi
selama 18-24 jam. Setelah diinkubasi media cair yang tetap jernih ditetapkan
sebagai kadar bunuh minimum18
.
E-test
Metode E-test digunakan untuk menentukan konsentrasi minimal suatu agen
antibakteri yang dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Cara yang
dilakukan menggunakan strip plastik yang mengandung agen antibakteri dari
kadar terendah hingga tertinggi dan diletakkan pada permukaan media Agar yang
sudah ditanami mikroorganisme21
.
Ditch-plate technique
Metode ini dilakukan dengan meletakkan agen antibakteri pada parit yang
telah dibuat dengan cara memotong media Agar dalam cawan petri pada bagian
tengah secara membujur kemudian mikroba uji digoreskan ke arah parit yang
berisi agen antibakteri21
.
Cup-plate technique (Metode lubang)
Cup-plate technique memiliki prinsip yang serupa dengan metode disk
difusi. Pada metode ini, media Agar yang telah ditanami dengan mikroorganisme
dibuat lubang yang kemudian diisi dengan zat antibakteri yang akan diuji21
.
12
2.8 Kerangka Konsep
Gambar 2.8: kerangka konsep penelitian
Madu memiliki kandungan senyawa organik dalam madu (polifenol,
flavonoid, inhibin, alkaloid, dan glikosida) yang bersifat antibakteri dapat
merusak integritas dinding sel sehingga dapat menghambat atau membunuh
bakteri. Inhibinsi lebih sensitif terhadap bakteri Gram negatif daripada Gram
positif. Efektifitas zat antibakteri ditunjukan oleh zona hambatan. Zona hambatan
tampak sebagai area jernih/bersih yang mengelilingi cakram dimana zat dengan
aktivitas antibakteri terdifusi.
Madu
Senyawa
antibakteri
Etiologi :
staphylococcus
aureus patogen
Pertumbuhan
koloni
staphylococcus
aureus terhambat
Bakteriosidal Bakteriostatik
Sediment Residu
N-heksan
(non polar)
Aseton (polar) Pelarut
Alkaloid
Falvanoid
Merusak
dinding sel
Merusak
membran sel
Bakteri
13
2.9 Definisi Operasional
Variabel Definisi Operasional
Skala Cara
pengukuran Kategori
Variabel Terikat (dependent)
Zona Hambat
Diameter zona hambat
pada pertumbuhan
bakteri Staphylococcus
aureus secara in vitro
Numerik
Metode Difusi
cakram
antibakteri Numerik/angka
Variabel Tidak Terikat (independent)
Madu Karet
Konsentrasi madu karet
tanpa proses ekstraksi
Kategorik
Metode Difusi
cakram
antibakteri
100%
50%
25%
20%
Residu (Madu Karet
+ Aseton)
Konsentrasi residu madu
karet dengan proses
ekstraksi menggunakan
pelarut aseton
Kategorik
Metode Difusi
cakram
antibakteri
100%
50%
25%
20%
Sedimen (Madu
Karet + Aseton)
Konsentrasi sedimen
madu karet dengan
proses ekstraksi
menggunakan pelarut
aseton.
Kategorik
Metode Difusi
cakram
antibakteri
100%
50%
25%
20%
14
Residu (Madu Karet
+ n-Heksan)
Konsentrasi residu madu
karet dengan proses
ekstraksi menggunakan
pelarut n-heksan
Kategorik
Metode Difusi
cakram
antibakteri
100%
50%
25%
20%
Sedimen (Madu
Karet + n-Heksan)
Konsentrasi sedimen
madu karet dengan
proses ekstraksi
menggunakan pelarut
n-heksan
Kategorik
Metode Difusi
cakram
antibakteri
100%
50%
25%
20%
Kontrol Negatif
Pelarut dalam proses
ekstraksi yang
digunakan sebagai
kontrol pertumbuhan
Staphylococcus aureus
Kategorik
Metode Difusi
cakram
antibakteri
Aseton
n-heksan
Kontrol Positif
Antibiotik yang
digunakan sebagai
kontrol pertumbuhan
Staphylococcus aureus
Kategorik
Metode Difusi
cakram
antibakteri Amoksisilin 25 ug
15
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Desain Penelitian
Penelitian ini mengunakan jenis penelitian uji eksperimental dengan teknik
disc diffusion secara in vitro dengan melihat hasil setelah perlakuan terhadap
pengaruh ekstrak madu karet terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus
aureus.
3.2 Lokasi dan Waktu Penelitian
Madu karet yang digunakan pada penelitian ini dibeli dan dilakukan proses
determinasi di taman Wisata Lebah madu Cibubur daerah Bumi Perkemahan
Pramuka Cibubur. Balai Penelitian Tanaman Rempah dan Obat (Balittro) Jl.
Tentara Pelajar No. 3 Bogor–Jawa Barat 16111 Indonesia. Sedangkan uji
sensitivitas madu karet dan Perlakuan pengekstrakan dilakukan di Balai Besar
Teknik Kesehatan Lingkungan dan Pengendalian Penyakit Jakarta. Penelitian
dilakukan pada bulan juni-september 2014.
3.3 Sample Penelitian
Penelitian ini mengunakan kultur Bakteri Staphylococcus aureus. Bakteri
ini dikultur pada media Nutrein agar yang di inkubasi pada suhu 37OC selama 24
jam.
Berdasarkan penelitian yang pernah dilakukan sebelumnya (Agil
Dananjaya, FK UB). menggunakan jumlah kelompok sebanyak 7 kelompok. Madu
karet 100%, ekstrak madu karet dengan variasi konsentrasi 20%, 25%, 50%, dan
100%, serta kontrol positif menggunakan antibiotik amoksisilin 25ug maupun
kontrol negatif menggunakan pelarut aseton dan n-heksan.
Penentuan jumlah sample mengunakan rumus feder
Oleh karena itu digunakan rumus Federer : (k-1).(n-1) ≥ 15
Keterangan :
k = jumlah kelompok perlakuan
n = jumlah sample dalam tiap kelompak
Sehingga berdasarkan penghitungan menghasilkan sampel sebagai berikut :
16
(k-1).(n-1) ≥ 15
(7-1).(n-1) ≥ 15
6.(n-1) ≥ 15
6n - 6 ≥ 15
6n ≥ 21
n ≥ 21/4
n ≥ 4 (hasil pembulatan)
Maka jumlah pengulangan yang digunakan pada penelitian ini berjumlah 4
pengulangan.
3.4 Variabel Penelitian
3.4.1. Variabel Bebas
Variabel bebas adalah Ekstrak Madu karet dengan berbagai konsentrasi
(20,%,25%,50%,100%, kontol positif dan kontrol negatif). Kontrol negatif
mengunakan pelarut aseton dan n-heksan yang menghasilkan sedimen dan residu
madu karet. Kontrol positf dengan antibiotik amoksisilin 25ug.
3.4.2. Variabel Terikat
Pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus di medium Agar darah yang
diukur dengan berbagai diameter zona hambat (zona bening) dalam satuan
milimeter (mm).
3.5 Bahan dan Alat
3.5.1. Bahan
Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah madu karet asli, madu karet
dengan ekstrasi,madu karet dengan pelerut aseton dan n-heksana, aquades steril,
nutrein agar dan bakteri Staphylococcus aureus.
3.5.2. Alat
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah alkohol, pengaris,
inkubator, kapas swab, jam, cawan petri, jangka sorong, bunsen, alumunium foil,
tabung reaksi, flacon, mikro pipet, autoclav, label, tibangan, vortex, korek api,
pinset dan alat tulis.
17
3.6 Cara Kerja Penelitian
3.6.1 Sterilisasi alat dan bahan
Seluruh peralatan yang akan digunakan selama penelitian harus
dibersihkan dengan cara dicuci kemudian dikeringkan lalu dibungkus dengan
kertas alumunium foil. Kemudian dilakukan sterilisasi di dalam autoclave selama
30 menit dengan mengatur tekanan sebesar 15 dyne/cm3 (1atm) pada suhu 121
o C.
3.6.2 Ekstrasi
Sampel madu karet sebanyak 150 mL di ekstraksi. menggunakan metode
maserasi dengan madu karet dan pelarut (aseton dan n-heksan) sebanyak 150 mL
perbandingan 1:1. Letakan pada 2 beaker glass dengan di berikan label. Tuangkan
madu karet dengan pelarut aseton di beaker glass A dan tuangkan juga madu karet
dengan pelarut n-heksan di beaker glass B. setelah tercampur, masing-masing
beaker glass masukan kedalam corong pisah yang berbeda untuk melakukan tahan
pengabungan dengan alat soker selama 3 jam. Hal ini dilakukan agar dapat kedua
senyawa dapat bercampur dan menghasilkan dua senyawa endapan dan cair setelah
di diamkan selama 12 jam di beaker glass yang berbeda dengan mengunakan pipet
tetes. Setelah itu diletakan didalam oven dengan suhu 80O agar ekstrak madu karet
menjadi lebih pekat Hingga terbentuk 2 bagian. Bagian yang bawah adalah endapan
sisa madu karet sedangkan bagian yang atas berwarna cokelat bening.
3.6.3 Pembuatan medium
Pembuatan medium Nutrein Agar sebanyak 11,5 Gram dilarutkan dalam
50mL aquades kemudian dipanaskan dan diaduk dengan menggunakan magnetik
stier sampai homogen dan bening. Media disterilisasikan dengan mengunakaan
autoklaf pada suhu 121OC, tekanan 1,5 atm dan selama 15 menit setelah
distrelisasikan. Medium Nutrient dimasukkan kedalam cawan petri sebanyak 15ml
dan dibiarkan mengeras.
3.6.4 Pembuatan variabel konsentrasi ekstrak madu
Uji antibakteri dengan variasi konsentrasi ekstrak madu karet asli, sedimen
madu karet+aseton maupun n-heksan, residu madu karet dengan pelarut aseton
maupun n-heksan yaitu 20%, 25 %, 50 %, 100 % dan kontrol. Masing masing
variasi konsentrasi ekstrak dengan pengulangan sebanyak 4 kali. Agar didapatkan
hasil rata-rata pada masing-masing variasi konsentrasi.
18
Keterangan : n = volume zat terlarut
3.6.5 Kultur bakteri staphylococcus aureus
Butiran cryo yang berasal dari microbank dengan suhu -700C dimasukkan
ke dalam media cair Brain heart infussion (BHI) di inkubasi pada suhu 37oC
selama 24 jam, keesokan harinya bakteri tersebut di isolasi pada nutrien agar
petri disk atau tabung di inkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam.
3.6.6 Metode Difusi cakram
Buat suspensi bakteri terlebih dahulu dengan metode four plate, dengan
mengambil bakteri Staphylococcus aureus yang telah diremajakan dalam bentuk
cair, dengan mikropipet dan diletakan kedalam cawan petri yang telah di
sterilisasikan, kemudian dicampurkan nutrien agar dalam bentuk cair, aduk hingga
rata dan diamkan sampai menjadi padat. Selama menunggu rendam blank disk
didalam wadah yang berisi ekstrak madu karet, sedimen madu karet dengan pelarut
aseton dan n-heksan, residu madu karet dengan pelarut aseton dan n-heksan, pelarut
aseton dan n-heksan selama 15 menit pada suhu 370C. Lalu disk yang sudah
terendam ekstrak diletakkan di cawan petri yang sudah berisi suspensi bakteri
Staphylococcus aureus dan nutrien agar. Lalu diinkubasi didalam inkubator pada
suhu 37o selama 24 jam. Keesokan harinya diamati dan diukur diameter zona
hambat diukur dengan menggunakan penggaris dengan satuan milimeter (mm) dan
dibandingkan dengan zona hambat pada kontrol.
3.7 Pengolahan dan Analisis Data
Analisis data yang digunakan adalah uji statistik one way ANOVA untuk
mengatahui pengaruh ekstrak madu karet.Sebelumnya dilakukan pengujian
distribusi normal atau tidak. Jika hasil menunjukan distribusi normal maka
langsung mengunakan uji statistik one way anova melihat adakah terdapat
perbedaan signifikan pada tiap konsentrasi terhadap zona hambat.Analisis data
menggunakan program SPSS (Statistical Product of Service Solution) for
Windows.
19
3.8 Alur Penelitian
Gambar 3.8: alur kerja penelitian
Rerata tiap
kelompok
Uji static
dengan Anova kesimpulan
Pembelian
Madu lebah
apis mellifera
Dertiminasi
Madu
Ekstrasi Madu
dengan pelarut
Pembelian
Medium MHA
Kultur Bakteri
Staphylococcus aureus
Pembuatan Cakram
Uji dengan
Staphylococcus
aureus
Kelompok C
dengan
kosentrasi 50
Kelompok B
dengan kosentrasi
25
Kelompok A
dengan kosentrasi
12,5
Kelompok D
dengan kosentrasi
100
Kelompok
Kontrol
Pembiakan Bakteri
Staphylococcus aureus
Pengukuran Zona
Hambat
Staphylococcus
aureus
Inkubasi 24 jam
di oven
20
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Ekstraksi Madu Karet
Pelarut yang digunakan dalam penelitian adalah Aseton dan n-heksan.
Pelarut aseton dapat menarik zat aktif yang bersifat polar sementara pelarut
n-heksana dapat menarik zat aktif bersifat non polar. Aseton (dimetil keton) adalah
senyawa cair mudah terbakar dan menguap. Ditemukan alami pada tubuh manusia
dalam kendungan kecil. Sementara n-heksana adalah mengestrak lemak dari air.
Sering digunakan farmasi tapi telah dihapus karena toksisitas jangka panjang
menyebabkan kegaglan system syaraf. Pengunaan n-heksana diganting dengan
pelarut n-heptana yang lebih aman. Dari hasil pemisahan menghasilkan dua zat
cair(residu) berwarna bening krem dan endapan(sedimen) dengan warna krem
namun kental.
4.2 Uji Antibakteri
4.4.2 Uji Antibakteri Menggunakan Difusi Cakram
Metode difusi cakram adalah uji yang dilakukan melihat aktivitas
antibakteri dari ekstrak madu karet asli, sedimen madu karet aseton, sedimen
madu karet n-heksan, residu madu karet aseton dan residu madu karet n-heksan
terhadap bakteri uji Gram positif Staphylococcus aureus. Aktifitas antibakteri
diketahui dengan melihat ada tidaknya zona hambat disekitar cakram dengan
konsentrasi (20%,25%,50%,100%) pada koloni bakteri dibandingkan dengan zona
hambat disekitar cakram yang berisi kontrol positif amoksisilin 25ug. Semakin
besar diameter zona hambat yang diukur dengan menggunakan jangka sorong
yang memakai satuan milimeter (mm), maka semakin besar aktivitas antibakteri.
Penggunaan kontrol negatif bertujuan untuk memastikan bahwa tidak ada
pengaruh dari pelarut terhadap zona hambat yang dihasilkan oleh ekstrak madu.
Apabila kontrol negatif memiliki zona hambat/bening maka efek antibakteri pada
ekstrak akan berkurang validitasnya. Hasil uji aktifitas antibakteri pada madu
karet terdapat pada tabel 4.2.
21
Tabel 4.2 Hasil Pengukuran Uji Zona Hambat Ekstrak Madu Karet
Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus.
Sampel Uji
Rata-rata Zona Hambat (mm)
20% 25% 50% 100%
Madu Karet 0 0 17,5 22,5
Residu/cairan
(Madu Karet +
Aseton) 0 0 0 0
Sedimen (Madu
Karet + Aseton) 0 0 15,1 23,5
Residu/cairan
(Madu Karet +
n-Heksan) 0 0 0 0
Sedimen (Madu
Karet +
n-Heksan) 0 0 15,4 21,9
Kontrol Negatif
(Aseton maupun
n-heksan) - - - 0
Kontrol Positif
(Amoksisilin 25
ug)
- - - 17,1
Diagram 4.2: Hasil pengukuran
0,00
5,00
10,00
15,00
20,00
25,00
30,00
Madu karet
10 0%
Madu karet
50 %
Sedimen
(madu karet +
Aseton) 1 00%
Sedimen
(madu karet +
Aseton) 5 0%
Sedimen
(madu karet +
N-Heksan)
10 0%
Sedimen
(madu karet +
N-Heksan) 5 0%
Amoksisilin
25 ug
Zona
Ham
bat (
mm
)
Parameter Uji
22
Dari hasil tabel dan diagram pengukuran diameter zona hambat. Peneliti
melihat Sedimen (Madu Karet + Aseton) konsentrasi 100% memiiki nilai rata-rata
sebanyak 23,5 mm. Tetapi pada konsentrasi 50% memiliki nilai 15,1 mm.
Sedangkan konsentrasi 25% dan 20% memiliki nilai 0. Jadi dapat disimpulkan
jika ekstrak Sedimen (Madu Karet + Aseton) pada konsentrasi 100% bersifat
Susceptible,sementara konsentrasi 50%,25% dan 20% bersifat Resistant sesuai
dengan CLSI guidline 2011. Sedangkan Hasil dari kontrol negatif berupa pelarut
yang digunakan n-heksan dan aseton tidak menunjukan zona hambat (0 mm) yang
berarti pelarut aseton dan n-heksan tidak memiliki pengaruh.
Hasil Diagram menunjukan gambaran rerata dari setiap kelompok uji.
Sedimen (madu karet+aseton) konsentrasi 100% memiliki angka tertinggi
dibandingkan kelompok lain, namun standar defisiasi yang cukup tinggi. Hal ini
berarti dari setiap pengulangan terjadi perbedaan hasil yang cukup berbeda.
Ekstrak madu karet asli tanpa pelarut dengan konsentarisi 100% memiliki
konsentarasi dibawah sedimen ekstrak madu karet dengan pelarut aseton. Jika
mengacu pada pandangan keefektifan suatu zat antibakteri dalam menghambat
pertumbuhan tergantung pada sifat bakteri uji, konsentrasi dan lamanya waktu
kontak22.
. Sedangkan residu madu karet dengan pelarut aseton maupun n-heksan
tidak mempunyai zona hambat. Berarti dalam hal ini residu madu karet tidak
memiliki senyawa antibakteri.
Hal ini diduga berkaitan dengan pemberian pelarut aseton yang bersifat
polar, sehingga menarik senyawa yang memiliki tingkat kepolaran tinggi dalam
madu karet bekerja lebih efektif. senyawa yang memiliki tingkat kepolaran lebih
tinggi yaitu flavonoid,alkaloid, glycosides dan aglycones22
.
Efek antibakteri pada madu berasal dari flavonoid. Jenis-jenis flavonoid yaitu
apigenin, galangin, pinocembrin, ponciretin, genkwanin, sophoraflavanone G dan
derivatnya, naringin, naringenin, epigallocatechin gallate dan derivatnya, luteolin,
luteolin 7-glucoside, quercetin, 3-O-methylquercetin, quercetin glycosides,
kaempferol dan derivatnya. Jenis flavonoid lainnya adalah flavone glycosides,
isoflavones, flavanones, isoflavanones, isoflavans, flavonols, flavonol glycosides,
dan chalcones22
.
23
Flavonoid dapat merusak membran sel dengan cara menghambat sintesis
makromolekul22
. Flavonoid juga dapat mendepolarisasi membran sel dan
menghambat sistesis DNA, RNA, maupun protein yang sudah diobservasi pada
Staphylococcus aureus 22
. Selain itu flavonoid juga dapat menghambat sintesis
asam nukleat, menghambat fungsi membran sitoplasma, dan menghambat
metabolisme energi pada bakteri23
.
Staphylococcus aureus salah satu Bakteri Gram positif. kandungan
peptidoglikan yang tinggi (dapat mencapai 50%) dan kandungan lipid dinding sel
bakteri lebih rendah di bandingkan bakteri Gram negatif24
. Sedimen madu karet
dengan pelarut aseton diduga mengandung senyawa antibakteri bersifat polar
dalam madu selain flavonoid yaitu alkaloid. Alkaloid juga memiliki kemampuan
sebagai antibakteri. Mekanismenya diduga adalah dengan cara mengangu
komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri sehingga dinding sel tidak
terbentuk secara utuh, tergangunya sintesis peptidoglikan membuat pembentukan
sel tidak sempurna karena tidak mengandung peptidoglikan dan dinding selnya
hanya meliputi memberan sel25
.
Kerusakan dinding sel terjadi karena proses perakitan dinding sel bakteri
yang diawali pembentukan rantai peptida yang akan membentuk jembatan silang
peptida yang menggabungkan rantai glikan dari peptidoglikan pada rantai yang lain
sehingga menyebabkan dinding sel terkait sempurna. Keadaan ini menyebabkan
kematian sel bakteri mudah mengalami lisis, baik berupa fisik maupun osmotik dan
menyebabkan kematian sel bakteri Staphylococcus aureus yang memiliki
peptidoglikan yang tebal25
.
Diduga kerja alkaloid terlebih dahulu merusak dinding sel dan dilanjutkan
kerja flavonoid yang merusak membran sel bakteri. Rusaknya dinding sel akan
menyebabkan terhambatnya pertumbuhan sel bakteri dan akhirnya bakteri akan
mengalami perubahan-perubahan yang mengarah pada kerusakan hingga
terhambatnya pertumbuhan25
.
Flavonoid dapat menghambat fungsi membran sel dengan menganggu
tingkat kestabilan lapisan membran sel yang bersifat hidrofobik maupun hidrofilik.
Beberapa kandungan lain seperti Epigallocatechin gallate dapat menginduksi
terjadinya kebocoran pada ruang intraliposomal sehingga molekul-molekul kecil
24
dapat memasuki ruang membran lipid sehingga menganggu fungsi dari lapisan
membran dengan Cathechins. Cathechinis dapat juga menyebabkan fusi pada
membran luar dan dalam sehingga terjadi kebocoran dan agregasi dari meterial.
Semua mekanisme tersebut pada akhirnya dapat meningkatkan permeabilitas sel
sehingga sel akan lisis23
.
Pada metode ini digunakan antibiotik golongan beta-laktam yaitu
Amoksisilin (25ug) sebagai kontrol positif untuk pengujian aktivitas antibakteri,
karena merupakan salah satu antibiotika spektrum kerja luas. Efek antibiotik yang
bereaksi pada subunit 50S ribosom dan menghalangi aktivitas enzim peptidil
transferase. Fungsi enzim dapat menghentikan sintesis protein bakteri dengan cara
membentuk ikatan peptida antara asam amino baru melekat pada tRNA dengan
asam amino yang masih berkembang. Secara keseluruhan mekanisme kerja
antibiotik golongan beta-laktam yaitu merusak dinding sel bakteri14
.
Hasil pengukuran zona hambat dihubungkan dengan klasifikasi zona
hambat berdasarkan tabel CLSI guidelines 2011. dosis peneliti (25 ug) yang
digunkaan tidak sama dengan CLSI guidelines 2011 namun dengan perbedaan
dosis sekitar 25% maka dapat dianggap mendekati CLSI guidelines 2011. Bakteri
yang digunakan Staphyococcus aureus.
Hasil peneliti jika dibandingkan dengan penelitian lain yang menggunakan
variasi konsentrasi 5%, 10%, 25%, dan 50% dengan diameter zona hambat
berturut-turut 22,8; 26,9; 28,8 dan 28,7 mm dari madu yang diproduksi oleh lebah
Apis mellifera dan dilakukan oleh Hendri Wasito, Sani Ega dan Yani Lukmayani
di Farmasi FMIPA Universitas islam Bandung(2009). Pada penelitian tersebut
didapatkan hasil yaitu pada konsentrasi 25% merupakan konsentrasi terendah
ditemukan zona hambat. Tetapi pada penelitian ini, pada konsentrasi 25% tidak
ditemukan zona hambat dan zona Hambat minimum di konsentrasi 50%26
.
Pada penelitian lain yang dilakukan oleh (Yugo Berri, Djamal Aziz, Asterina)
pada tahun (2012). Pada penelitian tersebut dilakukan perbandingan antara madu
Asli Sikabu dan madu Lubuk Minturun dengan variasi konsentrasi 5%, 10%,
25%, dan 50% dalam menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus,
Penelitian tersebut menghasilkan bahwa madu Asli Sikabu dan madu Lubuk
Minturun dan zona hambat terkecil ada pada konsentrasi 10%. pada peneliti tidak
25
dilakukan uji zona hambat pada konsentrasi 50% (3,03mm) dan madu minturun
zona hambat pada kosentrasi 50% (2,9mm) tetapi pada konsentrasi terkecil yang
dilakukan oleh peneliti yaitu 5% di kedua madu (madu sikabu dan lubuk
minturun) sudah tidak mengindikasikan adanya zona hambat. Hal ini terjadi
karena efek agent antibakteri dengan konsentrasi terkecil yang terdapat pada madu
Sikabu maupun madu lubuk minturun pada peneliti tersebut lebih kecil
dibandingkan oleh madu karet yang diteliti oleh peneliti mengunakan madu karet
yang memiliki zona hambat (23,5mm) terhadap bakteri Staphylococcus aureus27
.
Pada penelitian lain yang dilakukan oleh (Rostinawati Tina) pada tahun
(2009). Pada penelitian tersebut dilakukan perbandingan antara madu amber dan
madu putih dengan konsentrasi 50% dalam menghambat pertumbuhan
Staphylococcus aureus, Penelitian tersebut menghasilkan bahwa madu amber
memiliki zona hambat (36,5mm) dan madu putih (31,5). Jika di bandingkan
dengan madu karet yang digunakan peneliti memiliki zona hambat (17,5mm) pada
kosentrasi 50%28
.
Peneliti melakukan pengolahan data statistik menggunakan SPSS. Uji
nomalitas menghasilkan signifikansi 0,006 (p>0,05) dan homogenitas dengan
signifikansi 0,083 (p>0,05) yang mengindikasi bahwa normal.. sehingga
selanjutnya melakukan uji one way anova menghasilkan signifikasi 0,000
(p<0,05) yang mengindikasikan bahwa terdapat perbedaan signifikan pada tiap
konsentrasi terhadap zona hambat. Hasil uji Post Hoc menunjukkan bahwa
kelompok sedimen (madu karet + aseton) dengan konsentrasi 100% memiliki
peran dalam menghambat pertumbuhan bakteri stapylococcus aureus lebih baik
daripada kelompok yang lain sebesar perbandingan rerata 8.4 dan signifikansi
0,000.
26
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan
1. Sebagian besar ekstrak madu karet, memiliki efek daya hambat terhadap
bakterti Staphylococcus aureus.
2. Ekstraksi sedimen madu karet dengan pelarut aseton dan madu karet alami
konsentrasi 100% memiliki daya hambat yang baik terhadap bakteri
Staphylococcus aureus.
3. Residu madu karet semua konsentrasi tidak memiliki zona hambat terhadap
bakteri Staphylococcus aureus
4. Hasil uji pengolahan data statistik menggunakan SPSS. Uji nomalitas
menghasilkan signifikansi 0,006 (p>0,05) dan homogenitas dengan
signifikansi 0,083 (p>0,05).
5.2. Saran
1. Dibutuhkan penelitian selanjutnya secara in vivo dan klinis untuk bisa
digunakan sebagai pengobatan alternatif.
2. Sebaiknya pengunaan pelarut n-heksana di ganti dengan pelarut yang lebih
aman seperti n-heptana.
3. Dibutuhkan penelitian jenis madu lain yang lebih spesifik terhadap
Staphylococcus aureus
4. Diperlukan penelitian selanjutnya menggunakan pelarut yang bersifat semi
polar seperti etil asetat.
27
DAFTAR PUSTAKA
1. Jawetz, E., J.L. Melnick., E.A. Adelberg., G.F. Brooks., J.S. Butel., dan
L.N. Ornston.Mikrobiologi Kedokteran. Edisi ke-20 (Alih bahasa
:Nugroho & R.F.Maulany). Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.
hal.211,213,215. 1995.
2. Kepala Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kementrian
Kesehatan RI. 2013. Riset Kesehatan Dasar: Jakarta (27/04/2014)
www.Riskesdas.com.
3. Soemiati, A., dkk, uji aktivitas antimikroba ekstrak aseton dan ekstrak
n-Heksan kulit batang Garcinia porrecta wall terhadap bakteri
staphylococcus aureus ATCC 29213, bacillus subtilis ACTT 6633 dan
salmonella typhosa ATCC 14028, jamur microsporum gypsum dan
candida albicans, proseding kongres ilmiah ISFI pusat, jakarta. 2007.
4. Vardi dkk.local application of honey for treatment of neonatal ostoperative
wound infection, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9628301. 1998.
5. Sumoprasto, RM dan Agus Suprapto, R. Berternak lebah madu
modern,Bhratara-jakarta. 1993.
6. Molan P. Potential of honey in treatment of wounds of honey on some
microbial isolates. J Sci Res Med Sci. 2000.
7. Patra Ketut. Lebah untuk kesejahteraan masyarakat bekasi: Gaceca Exact.
2011
8. Suranto Adji. Khasiat dan Manfaat Madu Herbal. Jakarta : Agromedia
Pustaka. 2004.
9. National Honey Board. pH and acid in honey. http://www.nhb.org. 1997.
[14 agustus 2014].
10. Patton T, Barrett J, Brennan J, Moran N. "Use of a spectrophotometric
bioassay for determination of microbial sensitivity to manuka honey". J.
Microbiol. Methods 64(1):84-95. 2006.
11. Mekawey, AAI. Evaluation the inhibitory action of Egyptian honey from
various sources on fungal and bacterial growth and aflatoxins production.
Ann. Agric. 55(2):221-223. 2010.
28
12. M Motior Rahman, Allan Richardson, & M Sofian-Azirun. Antibacterial
Activity of Propolis and Honey Against Staphylococcus aureus and
Escherichia coli. African Journal of Microbiology Research Vol.4(16) pp.
1872-1878, 18 September, 2010
13. Bilsel, Y., Bugra, D., Yamaner, S., Bulut, T. and Cevikbas, U. (2002).
Could honey have a place in colitis therapy? Effects of honey,
prednisolone and disulfiram on inflammation, nitric oxide and free radical
formation. Dig.Surgery 19:306-311
14. Khotimah, F.K.isolasi senyawa aktif antibakteri dariminyak atsiri jahe
(zingber offcinale). Skripsi. Program studi kimia fakultas sains dan
teknologi UIN syarif hidayatullah jakarta. 2010.
15. Irianti, K. Mikrobiologi menguak tentang mikroorganisme jilid 2. Yrama
widya. Bandung. 2006.
16. Davidson P.M. Chemical preserveratives and natural antimicrobal
compounds. Food microbiology. ASM press, Washington DC. 2001.
17. Kanazama, A.T.Ikeda T, Endo. A novel approach to made of action on
cationic biocides: morfological effecton antibacterial activity. J Appl.
Bacterial, 78:55-60. 1995.
18. Kusmiyati dan N.W.S. Agustini. Uji aktivitas senyawa antibakteri dari
mikroalga porphyridium cruentum. Pusat penelitian bioteknologi, lembaga
ilmu pengetahuan indonesia (LIPI), cibinong. Biodiversitas, 8:48-53.
2006.
19. Dorman, H. J. D. dan Deans, S. G., Antimicrobial Agents
from Plants:Antibacterial Activity of Plant Volatile Oils, Journal
of Applied Microbiology, 88, 308-310. 2000.
20. Thompson dan hinton. inhibition of growth of mycotoxigenic fusarium sp.
By buthylated hydroxyanisole and/or carvacrol. Journal food protect, 59:
412-415. 1996.
21. Pratiwi, S. T. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta: Penerbit Airlangga. Hal
188-190.2008.
22. Jean Paul Dzoyem, Hiroshi Hamamoto, Barthelemy Ngameni,
Bonaventure Tchaleu Ngadjui, Kazuhisa Sekimizu. Antimicrobial action
29
mechanism of flavonoids from Dorstenia Species. Drug Discoveries &
Therapeutics. 2013; 7(2):66-72. 2013.
23. T.P. Tim Cushnie, Andrew J. Lamb. Review Antimicrobial Activity of
Flavonoids. International Journal of Antimicrobial Agents 26 (2005)
343–356. Elsevier. 2005.
24. Lay, B. W dan sugyo, H. Analisis mikroba di laboratorium. PT. Raja
Grasindo persada jakarta. 1992.
25. Retnowati yuliana, bialangi N, Posamgi W.N. Pertumbuhan bakteri
Stapylococcus aureus pada media yang diekspos dengan infus daun
sambiloto. Jurusan biologi dan pendidikan kimia universitas Negeri
Gorontalo. 2011.
26. Wasito A, dkk. Uji aktivitas antibakteri madu terhadap bakteri
staphylococcus aureus. Farmasi FMIPA Universitas Islam bandung. 2009.
27. Yugo Berri Putra Rio, Aziz Djamal, Asterina. Perbandingan Efek
Antibakteri Madu Asli Sikabu dengan Madu LubukMinturun terhadap
Staphylococcus aureus secara In Vitro. Fakultas kedokteran universitas
andalas padang. 2012
28. Rostinawati Tina. Aktivitas antibakteri madu amber dan madu putih
terhadap bakteri pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus.
Fakultas farmasi universitas padjadjaran jatinangor.2009
30
LAMPIRAN 1
Hasil SPSS
LAMPIRAN 3
31
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic Df Sig. Statistic df Sig.
Zona_hambat .200 28 .006 .935 28 .083
a. Lilliefors Significance Correction
Test one way Anova
Zona_hambat
Hasil
Parameter
N Mean Std. Deviation Std. Error
Madu karet
100% 4 22.5750 2.13600 1.06800
Madu karet 50% 4 17.5750 1.21484 .60742
Sedimen (madu
karet + Aseton)
100%
4 23.5750 3.31700 1.65850
Sedimen (madu
karet + Aseton)
50%
4 15.1000 .61644 .30822
Sedimen (madu
karet +
N-Heksan)
100%
4 21.9500 1.74642 .87321
Sedimen (madu
karet +
N-Heksan) 50%
4 15.4500 1.56098 .78049
Amoksisilin
25ug 4 17.1000 .00000 .00000
Total 28 19.0464 3.71249 .70159
32
LAMPIRAN 2
Hasil Uji Disk Difusi
Madu Asli 100% Residu (madu + aseton)
Sedimen (madu + aseton) Sedimen (madu + n-heksan)
(aseton) n-heksana
Amoksisilin Madu Asli 100%
33
LAMPIRAN 3
CARA EKSTRAKSI MADU KARET
A
Shaker
B
C D
E F G H
34
Lampiran 4
Riwayat Penulis
Nama : Ardin Sahputra
Tempat, tanggal lahir : Medan 4, September 1993
Alamat : jln H.M Said no 16, medan. Sumatera utara
No HP : 089688002954
Email : [email protected]
Riwayat Pendidikan
1. TK Aisiyah Medan (1997-1999)
2. SDN 060874 Medan (1999-2005)
3. SMPN 27 Medan (2005-2008)
4. MAN 1 Medan (2008-2011)
5. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta (2011-sekarang)