efek hepatoprotektif jangka panjang ekstrak …repository.usd.ac.id/13869/2/148114033_full.pdf ·...

i

EFEK HEPATOPROTEKTIF JANGKA PANJANG EKSTRAK

METANOL 95% AKAR PASAK BUMI TERHADAP PENURUNAN

KADAR LAKTAT DEHIDROGENASE TIKUS JANTAN GALUR

WISTAR TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA

SKRIPSI

Di ajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Bella Anggelina

NIM : 148114033

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2017

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

ii


iii


iv

HALAMAN PERSEMBAHAN

Let your hope make you glad. Be patient in time of trouble and never stop praying.

( Romans 12 : 12 )

When God guides, He provides.

( Isaiah 58 : 11 )

Success doesn’t come from what you do occasionally. It comes from what you do

consistently.

Ku persembahkan keberhasilan dalam studi ini kepada

Tuhan Yesus Kristus sumber segala kebenaran, kekuatan, dan

pengharapan dalam masa-masa sulit dalam hidup ini

Mama, Papa dan saudaraku Vano yang telah mendukungku

Teman-teman dan sahabat terkasih

Almamaterku tercinta Universitas Sanata Dharma


v


vi


vii


viii


ix

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL .................................................................................. i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ....................................... ii

HALAMAN PENGESAHAN .................................................................. iii

HALAMAN PERSEMBAHAN .............................................................. iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................... v

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI................... vi

PRAKATA .............................................................................................. vii

DAFTAR ISI ............................................................................................ ix

DAFTAR GAMBAR ................................................................................ x

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................ xi

ABSTRAK .............................................................................................. xii

ABSTRACT ............................................................................................. xiii

PENDAHULUAN .................................................................................... 1

METODE PENELITIAN .......................................................................... 3

BAHAN .................................................................................................... 3

ALAT ........................................................................................................ 4

JALANNYA PENELITIAN ..................................................................... 4

HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................. 6

KESIMPULAN ....................................................................................... 15

SARAN ................................................................................................... 15

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................. 16

LAMPIRAN ............................................................................................ 19

BIOGRAFI PENULIS ............................................................................ 39

Halaman


x

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Akar Pasak Bumi ................................................................ 25

Gambar 2. Serbuk Akar Pasak Bumi ................................................... 25

Gambar 3. Hasil ekstrak metanol 95% Akar Pasak Bumi (EMAPB) .. 25

Gambar 4. Suspensi CMC-Na 1% ....................................................... 27

Gambar 5. Suspensi EMAPB ............................................................... 27

Gambar 6. Pemberian secara per oral .................................................. 28

Gambar 7. Pemberian secara intraperitoneal ....................................... 28


xi

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat Ethical Clearance dari Fakultas Kedokteran UGM ............ 19

Lampiran 2. Surat pengesahan determinasi Akar Pasak Bumi (Eurycoma

longifolia Jack.) .............................................................................. 20

Lampiran 3. Surat keterangan tanaman dari Merapi Farma .............................. 21

Lampiran 4. Surat keterangan penetapan kadar air serbuk dari LPPT UGM ..... 22

Lampiran 5. Surat legalitas analisis data oleh Pusat Kajin CE&BU dari Fakultas

Kedoktern UGM ............................................................................ 23

Lampiran 6. Perhitungan konversi dosis dari tikus ke manusia ......................... 24

Lampiran 7. Akar Pasak Bumi ; serbuk Akar Pasak Bumi ; hasil ekstrak metanol

95% Akar Pasak Bumi (EMAPB) .................................................. 25

Lampiran 8. Perhitungan persen rendemen Akar Pasak Bumi .......................... 26

Lampiran 9. Suspensi CMC-Na 1% ; suspensi EMAPB ; pemberian secara per

oral ; pemberian secara intraperitoneal ........................................... 27

Lampiran 10. SOP Pemeriksaan sampel darah di Laboratorium Patologi Klinik

Rumah Sakit Bethesda Yogyakarta ............................................... 29

Lampiran 11. Hasil analisis statistik aktivitas ALT dan AST pada uji pendahuluan

waktu pencuplikan darah setelah induksi CCl4 ............................. 30

Lampiran 12. Hasil analisis statistik kadar LDH pada kontrol CMC-Na 1%, kontrol

CCl4, kontrol EMAPB, dan kelompok perlakuan EMAPB 75 ; 150 ;

300 mg/kgBB.................................................................................. 32


xii

ABSTRAK

Steatosis merupakan akumulasi lemak yang abnormal di hepatosit

utamanya adalah trigliserida, karena ketidakseimbangan antara pengambilan

trigliserida extrahepatik dan sekresi trigliserida hepatik yang mengandung

lipoprotein dan katabolisme asam lemak yang dapat disebabkan oleh karbon

tetraklorida. Akar Pasak Bumi yang memiliki kandungan utama Quasinoid

diharapkan dapat memproteksi kerusakan hati.

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pemberian ekstrak metanol 95%

akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack.) selama 6 hari dapat menurunkan

kadar laktat dehidrogenase (LDH) terhadap tikus jantan galur Wistar terinduksi

karbon tetraklorida (CCl4) dan mengetahui hubungan kekerabatan antara dosis

pemberian ekstrak metanol 95% akar Pasak Bumi (EMAPB) terhadap penurunan

kadar LDH pada tikus jantan galur Wistar terinduksi CCl4.

Penelitian ini bersifat eksperimental murni dengan rancangan acak

lengkap pola searah dengan menggunakan 30 ekor tikus dibagi ke dalam 6

kelompok secara acak. Kelompok I (kontrol negatif) diberi CMC-Na 1%.

Kelompok II (kontrol hepatotoksin) diberi CCl4 2 mL/kgBB. Kelompok III diberi

EMAPB dosis 300 mg/kgBB tanpa induksi CCl4. Kelompok IV-VI diberi EMAPB

dengan dosis 75, 150, dan 300 mg/kgBB secara peroral selama 6 hari dan pada hari

ke-7 diberi CCl4. Pengambilan darah dilakukan pada jam ke-24 melalui sinus

orbitalis untuk pengukuran kadar LDH. Kadar LDH yang terukur dianalisis

menggunakan metode Shapiro-Wilk dan diperoleh data terdistribusi normal

kemudian dilanjutkan dengan uji One Way ANOVA taraf kepercayaan 95% dan uji

levene kemudinan diperoleh variansi data tidak diasumsikan sama (p<0,005)

sehingga dilanjutkan dengan uji Games-Howell.

Hasil dari penelitian ini, EMAPB 75 mg/kgBB secara jangka panjang 6 hari

mampu menurunkan kadar LDH. Namun, dosis 150 dan 300 mg/kgBB tidak dapat

menurunkan kadar LDH terhadap tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon

tetraklorida dan tidak adanya hubungan kekerabatan antar dosis pemberian

EMAPB terhadap penurunan kadar LDH pada tikus galur Wistar terinduksi CCl4.

Kata kunci : jangka panjang, laktat dehidrogenase, karbon tetraklorida, ekstrak

metanol 95%, akar pasak bumi


xiii

ABSTRACT

Steatosis is an abnormal fat accumulation in the hepatocytes primarily

triglycerides, due to an imbalance between taking extrahepatic triglycerides and

the secretion of hepatic triglycerides containing lipoproteins and the fatty acid

catabolism that caused by carbon tetrachloride. The Pasak Bumi Root which

predominantly has Quasinoid expected to protect the liver damage.

The aim of this study were to investigate administration of methanol extract

of 95% Pasak Bumi Roots (Eurycoma longifolia Jack.) for six days to decrease level

of lactate dehydrogenase (LDH) in male Wistar rats induced carbon tetrachloride

(CCl4) and to perceive the correlation between methanol extract 95% of Pasak

Bumi Roots (EMAPB) doses toward decrease level of LDH in male Wistar rats

induced CCl4.

The study was purely experimental with randomized complete direct

sampling design using 30 rats divided into 6 groups randomly. Group I (negative

control) was given CMC-Na 1%. Group II (control of hepatotoxins) was given CCl4

2 mL / kgBW. Group III was given an EMAPB dose of 300 mg / kgBW without CCl4

induction. Group IV-VI was given an EMAPB with doses of 75, 150, and 300

mg/kgBW orally for six days and on 7th day was given CCl4. Blood sampling was

accomplished on 24th hour by sinus orbitalis to measure LDH level. The measured

LDH level was analyzed using Shapiro-Wilk method and distribution data of each

group was normal distributed data then continued with One Way ANOVA test at

95% confidence level and levene test obtained data variance not assumed equal (p

<0,005). Therefore continued with Games-Howell test.

The results of this study showed EMAPB 75 mg/kgBW in the long term 6

days can decrease LDH level. However, the doses of 150 and 300 mg/kgBW were

not able to decrease LDH level in male Wistar rats induced carbon tetrachloride

and no colleration between methanol extract 95% of Pasak Bumi Roots (EMAPB)

doses toward decrease level of LDH in male Wistar rats induced CCl4.

Key words : long-term, lactate dehydrogenase, carbon tetrachloride, ekstrak

methanol extract 95%, pasak bumi roots


1

Pendahuluan

Hati atau hepar adalah kelenjar terbesar di dalam tubuh, yang terletak di

bagian teratas dalam rongga abdomen sebelah kanan di bawah diafragma (Pearce,

2009). Hati merupakan organ yang memiliki peran penting dalam proses

metabolisme. Darah yang mengandung banyak nutrisi dari saluran gastrointestinal

melewati hati melalui vena portal, dimana nutrisi seperti karbohidrat, lemak, dan

vitamin dapat dikeluarkan dan disimpan hingga dibutuhkan. Hati mempunyai

banyak fungsi fisiologi penting yang memberi dampak bagi tubuh, namun 3 fungsi

utama hati yaitu penyimpanan, metabolisme, dan biosintesis (Hodgson, 2010).

Hati merupakan organ terbesar dalam tubuh yang sering menjadi target

kerusakan karena induksi zat kimia. Kebanyakan xenobiotik masuk ke dalam tubuh

melalui saluran gastrointestinal dan setelah terabsorpsi, dibawa oleh vena portal

hepatik ke hati sehingga hati merupakan organ pertama yang dialirkan oleh zat

kimia dan terpapar konsentrasi tinggi dari xenobiotik kemudian konsentrasi yang

tinggi dalam hati membuat xenobiotik melakukan metabolisme enzim-enzim,

utamanya cytochrome P450-dependent monooxygenase. Beberapa reaksi oksidatif

dapat memproduksi metabolit-metabolit reaktif yang dapat menstimulasi

pembentukan lesi pada hati. Kerusakan hati menyebabkan melemahnya fungsi hati

dan penurunan kualitas hidup yang diamati secara histopatologi sebagai steatosis

(perlemakan hati), kolestasis, fibrosis, dan nekrosis atau apoptosis (Hodgson,

2010). Steatosis adalah akumulasi lemak yang abnormal di hepatosit utamanya

adalah trigliserida, karena ketidakseimbangan antara pengambilan trigliserida

extrahepatik dan sekresi trigliserida hepatik yang mengandung lipoprotein dan

katabolisme asam lemak (Hodgson, 2010). Karbon tetraklorida merupakan salah

satu senyawa yang dapat digunakan sebagai model untuk induksi kerusakan hati.

Karbon tetraklorida dapat menyebabkan kerusakan hati dengan menginduksi

kerusakan sel hepar dan menyebabkan peroksida lipid (Kumar et al., 2009) dengan

mengubahnya menjadi senyawa radikal bebas yaitu triklorometil yang dapat

bereaksi dengan oksigen membentuk triklorometilperoksid yang lebih reaktif

(Hodgson, 2010). Triklorometil dengan bantuan katalis enzim sitokrom P-450 dapat

menimbulkan terjadinya peroksidasi lipid. Hasil ini dapat menyebabkan kerusakan

sel berupa perlemakan hepar (steatosis) (Timbrell, 2008).


2

Laktat Dehidrogenase adalah enzim tetramerik, yang merupakan bagian

dari 2-hydroxy acid oxidoredutase yang meningkatkan laju konversi piruvat

menjadi laktat dan nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) menjadi NAD+

(Valvona, 2015). Pada kondisi normal, piruvat dihasilkan dari glukosa melalui

proses glikolisis dan memasuki siklus asam sitrat dalam mitokondria dimana

dekarboksilasi secara oksidatif terjadi untuk membentuk acetyl-CoA, yang

digunakan dalam fosforilasi oksidatif menghasilkan 36 adenosine triphosphate

(ATP) per molekul glukosa Namun, ketika oksigen berkurang, fosforilasi oksidatif

tidak dapat menghasilkan ATP. Ketika hal tersebut terjadi, glikolisis menjadi proses

utama untuk menghasilkan ATP yaitu 2 ATP per molekul glukosa. Namun, NAD+

diperlukan untuk mengaktifkan langkah keenam glikolisis. NAD+ biasanya

diregenerasi melalui fosforilasi oksidatif oleh rantai transpor elektron. Jadi bila

suplai oksigen terbatas, NAD+ diregenerasi dari NADH oleh LDHA untuk menjaga

proses glikolisis, menghasilkan laktat sebagai produk samping; yang dikenal

sebagai glikolisis anaerobik dan sebagian besar hepar akan mengabsorbsi laktat dan

mengoksidasinya untuk disintesis menjadi glukosa (Valvona et al., 2015). Namun,

bila terjadi kerusakan hepar, maka hepar tidak dapat mengabsorbsi laktat untuk

disintesis menjadi glukosa sehingga terjadi peningkatan laktat. Pada penelitian ini,

peneliti fokus terhadap parameter LDH. Hendra et al. (2017) dan Bishayee et al.

(1995) melaporkan kerusakan hepar karena karbon tetraklorida dapat meningkatkan

kadar LDH sebesar 1,8 kali.

Penggunaan obat tradisional di kalangan masyarakat telah lama digunakan

untuk mengobati penyakit karena penggunaan obat modern yang memiliki risiko

efek samping yang tinggi dan keterbatasan dari segi biaya membuat penggunaan

obat tradisional masih sangat diminati dan dipercaya memiliki khasiat yang baik.

Di U.S dilaporkan bahwa sekitar 50% lansia masih menggunakan obat herbal atau

suplemen kesehatan (Shehu et al., 2016). Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack.)

merupakan salah satu tanaman yang digunakan untuk aktivitas terapetik (Effendy

et al., 2012). Pada Pasak Bumi komponen aktif dari daun, batang, dan kulit

berkontribusi terhadap efek farmakologi (Rehman et al., 2016). Menurut Kuo et

al. (2004) ; Bhat and Karim (2010) melaporkan bahwa kandungan utama dari Akar

Pasak Bumi adalah quassinoid. Komponen utama dari quassinoid adalah

eurycomanone, eurycomanol, 13α(21)-epoxyeurycomanone, eurycomanol-2-O-β-


3

ᴅ-dglucopyranoside, dan 13,21-dihydroeurycomanone (Teh et al., 2011).

Quassinoid merupakan senyawa fenolik yang dapat berperan sebagai donor proton

(Adikusuma dan Bachri, 2014). Oleh karena itu, senyawa quassinoid diharapkan

dapat memberi proteksi terhadap kerusakan hati.

Panjaitan et al. (2011) melaporkan bahwa ekstrak metanol 80% Akar

Pasak Bumi belum memiliki kemampuan dalam melindungi sel-sel hati dari efek

hepatoktoksik Karbon tetraklorida dengan dosis pemberian sediaan pasak bumi

yaitu 500 mg/kgBB tetapi pada ekstrak metanol 95% Akar Pasak Bumi dosis 75

dan 150 mg/kgBB memiliki aktivitas antihipertrigliserida pada tikus sedangkan

dengan dosis 105, 201, 420 mg/kgBB memiliki aktivitas antiinflamasi dan

analgesik pada mencit (Hendra et al., 2017). Berdasarkan uraian diatas dilakukan

penelitian untuk mengetahui efek hepatoprotektif terhadap penggunaan ekstrak

metanol 95% Akar Pasak Bumi dengan peringkat dosis 75, 150, dan 300 mg/kgBB

yang diberikan secara jangka panjang 6 hari terhadap penurunan kadar LDH pada

tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida.

Metode Penelitian

Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan

rancangan acak lengkap pola searah dan telah mendapat persetujuan Ethical

Clearance dengan nomor KE/FK/0794/EC/2017 dari The Medical and Health

Research Ethics Committe (MHREC) Faculty of Medicine Gadjah Mada

University.

Bahan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus jantan galur

Wistar, umur 2-3 bulan, berat badan 150-250 gram yang diperoleh dari Fakultas

Kedokteran Umum Universitas Gadjah Mada Yogyakarta, Akar Pasak Bumi

diperoleh dari CV Merapi Farma Herbal Yogyakarta, CMC-Na 1% (Dai-Ichi

Seiyaku Co), karbon tetraklorida (Merck), olive oil (Bertolli®), metanol (Merck),

aquades, reagen LDH (Thermo®).


4

Alat

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Timbangan analitik

(Mettler Toledo®), spuit injeksi oral (Terumo) dan spuit injeksi intraperitoneal

(Terumo), pipa kapiler, sendok, cawan porselin, alat-alat gelas (Pyrex Iwaki

Glass®) mortir, stamper, ayakan no. 40 dan no. 50 Mesh, oven (Memmert),

moisture balance, vacuum rotary evaporator, waterbath, corong buchner, shaker,

serta Chemical Auto Analyzer.

Jalannya Penelitian

2.1 Pengumpulan dan determinasi Akar Pasak bumi

Pengumpulan Akar Pasak Bumi diperoleh dari CV Merapi Farma Herbal

Yogyakarta dan determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Farmakognosi

Bagian Biologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta

dengan mencocokan ciri-ciri tanaman Akar Pasak Bumi dengan literatur.

2.2 Pembuatan ekstrak metanol 95%Akar Pasak Bumi (EMAPB)

Serbuk kering yang telah diayak, ditimbang sebanyak 1,2 kg dan

diekstraksi secara maserasi dengan melarutkan serbuk ke dalam 400 mL metanol

95% pada masing-masing erlenmeyer pada suhu kamar selama 48 jam. Maserasi

dilakukan dengan bantuan shaker dengan kecepatan pengadukan 140 rpm. Maserasi

diulangi sebanyak 2 kali. Hasil maserasi dan remaserasi disaring sehingga diperoleh

ekstrak metanol 95% Akar Pasak Bumi. Proses penyaringan dilakukan

menggunakan kertas saring serta menggunakan bantuan corong buchner dan pompa

vakum untuk mempercepat proses penyaringan. Larutan hasil penyaringan

dievaporasi pada suhu 60oC untuk menguapkan metanol, kemudian ekstrak kental

yang diperoleh dituang ke dalam cawan porselin dan diletakan pada waterbath

untuk menguapkan sisa pelarut lalu ekstrak dimasukkan ke dalam oven dengan suhu

50oC selama ±96 jam hingga diperoleh bobot penyusutan 0%.

2.3 Penetapan waktu pencuplikan darah

Uji pendahuluan dilakukan untuk menetapkan waktu pencuplikan darah

dengan menggunakan 3 ekor tikus jantan galur Wistar kemudian diambil darah

menggunakan pipa kapiler pada sinus orbitalis pada jam ke-0 sebelum pemejanan


5

karbon tetraklorida dalam olive oil dosis 2 mL/kgBB jam ke-24, dan 48 setelah

pemejanan larutan karbon tetraklorida dalam olive oil secara intraperitoneal

kemudian dilakukan pengukuran aktivitas serum ALT dan AST.

2.4 Penentuan peringkat dosis perlakuan

Berdasarkan penelitian Hendra et al. (2017) melaporkan dosis yang

digunakan untuk mengetahui aktivitas antihiperlipidemia pada tanaman Akar Pasak

Bumi yaitu 75 dan 150 mg/kgBB sehingga menjadi acuan yang digunakan dalam

penelitian ini dan digunakan dosis 300 mg/kgBB yang merupakan kelipatan 2 dari

dosis sebelumnya.

2.5 Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji

Sebanyak 30 ekor tikus dibagi secara acak ke dalam 6 kelompok.

Kelompok I sebagai kontrol negatif diberi perlakuan CMC-Na 1% secara per oral

selama 6 hari berturut-turut dengan waktu pemberian yang sama dan dilakukan

pengukuran darah pada jam ke-24, kelompok II sebagai kontrol positif diberi

perlakuan larutan karbon tetraklorida dala olive oil dengan perbandingan 1:1 dosis

2 mL/kgBB secara intraperitoneal (Janakat dan Al-Merie, 2002) dan dilakukan

pengukuran darah pada jam ke-24, kelompok III sebagai kontrol ekstrak metanol

95% Akar Pasak Bumi (EMAPB) dosis tertinggi yaitu 300 mg/kgBB secara per oral

selama 6 hari, kelompok IV, V dan VI diberi perlakuan tiga peringkat dosis

EMAPB yaitu 75, 150, dan 300 mg/kgBB secara per oral selama 6 hari berturut-

turut dengan waktu pemberian yang sama dan pada hari ke-7 diberi larutan karbon

tetraklorida secara intraperitoneal dosis 2 mL/kgBB. Pengambilan darah dilakukan

pada jam ke-24 dan penetapan kadar LDH yang dilakukan di Laboratorium

Bethesda Yogyakarta dengan menggunakan instrumen Chemical Auto Analyzer

lalu reagen yang digunakan adalah reagen LDH (Thermo®). Prinsip kerja dari

chemical auto analyzer yaitu serum di sentrifugasi pada kecepatan 3000 rpm selama

10 menit lalu jarum yang berada dalam instrumen akan menarik serum dari tabung

dengan minimal ketinggian serum 1 cm. Bila terlalu pekat, maka akan dilakukan

pengenceran dengan menggunakan larutan dilusi bawaan alat. Pengenceran yang

dilakukan menyesuaikan dari operator dan menyesuaikan dengan nilai yang keluar.


6

2.6 Analisis Statistika

Uji pendahuluan menggunakan uji normalitas Shapiro-Wilk dan kemudian

dilanjutkan dengan uji t berpasangan.

Hasil pengukuran kadar LDH menggunakan uji normalitas Shapiro-Wilk kemudian

dilanjutkan dengan uji Oneway ANOVA dan uji levene kemudian dilanjutkan

dengan uji Games-Howell.

Hasil dan Pembahasan

3.1 Hasil pengumpulan, determinasi dan rendemen Akar Pasak Bumi

Pengumpulan Akar Pasak bumi diperoleh dari pulau Kalimantan melalui

CV Merapi Farma Herbal Yogyakart kemudian determinasi yang dilakukan di

Laboratorium Biologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada

Yogyakarta menyatakan bahwa Akar Pasak Bumi yang digunakan dalam penelitian

ini benar dari jenis Eurycoma longifolia Jack. Adapun dari pembuatan EMAPB

dengan menggunakan 1,2 kg serbuk Akar Pasak Bumi menghasilkan ekstrak kental

sebanyak 22,68 g sehingga diperoleh rendemen sebesar 1,89%.

3.2 Penetapan Kadar Air Serbuk Akar Pasak Bumi

Menurut Kepala Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik

Indonesia Nomor 12 tahun 2014 dinyatakan bahwa persyaratan serbuk simplisia

yang baik yaitu jika serbuk simplisia memiliki kadar air kurang dari atau sama

dengan 10%. Pada penelitian ini penetapan kadar air dilakuan di Laboratorium

Penelitian dan Pengujian Terpadu Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Hasil

pengujian diperoleh bahwa kandungan air dari serbuk Akar Pasak Bumi sebesar

7,19% dengan metode Gravimetri sehingga telah memenuhi persyaratan serbuk

simplisia yang baik.

3.3 Hasil Penetapan Waktu Pencuplikan Darah (uji pendahuluan)

Penetapan waktu pencuplikan darah bertujuan untuk mengetahui waktu

dimana hepatotoksin Karbon tetraklorida dengan dosis 2 mL/kgBB memberi efek

atau respon maksimum mengalami perlemakan hepar (steatosis) ditandai dengan


7

peningkatan aktivitas serum Alanine Transaminase (ALT) dan Aspartate

Transaminase (AST). ALT dan AST merupakan enzim yang mengkatalis

perpindahan kelompok α-amino dari aspartat dan alanin ke kelompok α-keto asam

ketoglutarik untuk menghasilkan oxalacetic dan asam piruvat secara berturut-turut.

Kedua aminotransferase ini memiliki konsentrasi terbesar di hepar namun AST juga

terdapat di jantung, otot skeletal, ginjal, otak, dan sel darah merah sedangkan ALT

memiliki konsentrasi yang kecil pada otot skeletal dan ginjal dan utamanya berada

di hepar. ALT terletak hanya di sitoplasma selular dan AST terletak di sitosolik

(20%) dan di mitokondria (80%) (Giannini et al., 2005). ALT berkerja dengan

mengkatalisis perpindahan kelompok amino dari alanine (membentuk piruvat) ke

2-oxoglutarate (membentuk glutamate). Piruvat yang terbentuk akan dikatalisis

oleh LDH yang membutuhkan NADH menghasilkan laktat (Marshall, 2012).

Apabila terjadi peningkatan ALT karena kerusakan hepar maka piruvat yang

terbentuk juga semakin banyak dan LDH yang dibutuhkan untuk mengkatalisis

laktat juga semakin banyak. Oleh karena itu, jika terjadi kerusakan hepar akan

menyebabkan keluarnya enzim hepatoselular ke peredaran darah demikian pula

terjadi peningkatan ALT dan AST dalam darah (Pagana and Pagana, 2014)

sehingga parameter ini yang digunakan sebagai patokan dalam uji pendahuluan.

Sebelum pemejanan karbon tetraklorida dilakukan pengambilan darah

tikus pada jam ke-0 melalui sinus orbitalis yang bertujuan untuk membandingkan

sebelum dan sesudah perlakuan kemudian pemejanan karbon tetraklorida secara

intraperitoneal dan dilakukan waktu pencuplikan pada jam ke-24 dan 48.

Tabel I. Nilai rata-rata aktivitas serum ALT darah tikus setelah pemberian

karbon tetraklorida 2 mL/kgBB pada jam ke- 0, 24, dan 48 jam

Waktu Pencuplikan (jam) Rata-rata aktivitas serum ALT ± SE (U/L)

0 49,63 ± 10,35

24 226,20 ± 4,01

48 51,30 ± 4,90

Keterangan. SE : Standard Error

Tabel II. Hasil statistik dengan Uji t berpasangan nilai aktivitas serum ALT

setelah pemberian Karbon tetraklorida 2 mL/kgBB karbon tetraklorida pada

waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24, dan 48


8

Selang waktu (jam) 0 24 48

0 BB BTB

24 BB BB

48 BTB BB

Keterangan. BB : Berbeda Bermakna (p<0,05) dan BTB : Berbeda Tidak Bermakna

(p>0,05)

Pada tabel I merupakan hasil pengukuran aktivitas serum ALT jam ke-0

sebesar 49,63 ± 10,35 U/L, jam ke-24 sebesar 226,20 ± 4,01 U/L dan jam ke-48

sebesar 51,30 ± 4,90 U/L yang artinya terjadi peningkatan terbesar pada jam ke-24.

Kenaikan aktivitas serum ALT pada jam ke-24 sebesar 4,93 kali. Hasil uji t

berpasangan menunjukkan ada perbedaan yang bermakna antara jam ke-0 dan 24

(p=0,001) dimana pada jam ke-24 menunjukkan kerusakan hepar akibat karbon

tetraklorida. Apabila dibandingkan pada jam ke-48 ada perbedaan yang tidak

bermakna (p=0,957) dan antara jam ke-24 dan ke-48 ada perbedaan yang bermakna

(p=0,004) yang dapat disimpulkan aktivitas serum ALT setelah jam ke-24 telah

mengalami penurunan dan kembali normal.

Tabel III. Nilai rata-rata aktivitas serum AST darah tikus setelah pemberian

karbon tetraklorida 2 mL/kgBB pada jam ke- 0, 24, dan 48 jam

Waktu Pencuplikan (jam) Rata-rata aktivitas serum AST ± SE (U/L)

0 170,70 ± 16,38

24 859,33 ± 49,33

48 235,60 ± 18,01


Tabel IV. Hasil statistik dengan Uji t berpasangan nilai aktivitas serum AST

setelah pemberian karbon tetraklorida 2 mL/kgBB karbon tetraklorida pada

waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24, dan 48

Selang waktu (jam) 0 24 48

0 BB BTB

24 BB BB

48 BTB BB

Keterangan. BB : Berbeda Bermakna (p<0,05) dan BTB : Berbeda Tidak Bermakna

(p>0,05)


9

Selain ALT, AST juga diukur karena AST juga merupakan salah satu

penanda biokimia kerusakan hati. Pada tabel III merupakan hasil pengukuran

aktivitas serum AST jam ke-0 sebesar 170,70 ± 16,38, jam ke-24 sebesar 859,33 ±

49,33 U/L dan jam ke-48 sebesar 235,60 ± 18,01 U/L. Peningkatan terbesar terjadi

pada jam ke-24 dengan peningkatan sebesar 5,17 kali. Hasil uji t berpasangan

menunjukkan ada perbedaan yang bermakna antara jam ke-0 dan 24 dengan

(p=0,008) dimana pada jam ke-24 menunjukkan kerusakan hepar akibat karbon

tetraklorida. Apabila dibandingkan pada jam ke-48 ada perbedaan yang tidak

bermakna (p=0,199) dan antara jam ke-24 dan ke-48 ada perbedaan yang bermakna

(p=0,004) yang dapat disimpulkan aktivitas serum AST setelah jam ke-24 telah

mengalami penurunan mendekati jam ke-0. Janakat and Al-Merie (2002)

melaporkan pemejanan larutan karbon tetraklorida dalam olive oil secara

intraperitoneal dengan dosis 2 mL/kgBB mengalami peningkatan aktivitas serum

ALT dan AST pada jam ke-24 dan mengalami penurunan pada jam ke-48.

Berdasarkan hasil dari waktu pencuplikan darah ditandai dengan

peningkatan serum ALT dan AST yang terinduksi oleh karbon tetraklorida dosis 2

mL/kgBB diperoleh hasil jam ke-24 terjadi peningkatan paling besar. Oleh karena

itu, jam ke-24 digunakan sebagai waktu untuk pengambilan darah baik pada

kelompok kontrol dan perlakuan pada sinus orbitalis tikus jantan galur Wistar.

3.3 Hasil Pengukuran kadar LDH

Selain ALT dan AST masih terdapat parameter lain yang digunakan untuk

melihat terjadinya kerusakan hati, salah satu adalah Laktat Dehidrogenase (LDH).

Pada penelitian ini terdapat 6 kelompok hewan uji yaitu kelompok kontrol negatif

(CMC-Na 1%), kelompok positif atau hepatotoksin (karbon tetraklorida),

kelompok EMAPB 300 mg/kgBB, kelompok perlakuan 75, 150 dan 300 mg/kgBB.

Pada kelompok perlakuan diberikan EMAPB selam 6 hari dan pada hari ke-7 diberi

karbon tetraklorida secara intraperitoneal kemudian pengambilan darah dilakukan

pada jam ke-24 melalui sinus orbitalis untuk pengukuran kadar LDH

Berdasarkan hasil analisis data dengan uji Shapiro-Wilk diperoleh data

yang terdistibusi normal (p>0,05) sehingga dilanjutkan dengan uji Oneway ANOVA

dengan taraf kepercayaan 95% untuk melihat adanya perbedaan antar kelompok.

Hasil dari uji Oneway ANOVA menunjukkan perbedaan yang bermakna (p=0,000)


10

lalu dilanjutkan dengan uji levene. Hasil uji levene menunjukan variansi data tidak

diasumsikan sama dengan signfikansi (p=0,035) sehingga analisis dilanjutkan

dengan uji Games-Howell.

Tabel V. Rata-rata kadar LDH pada tikus jantan galur Wistar pada kontrol

CMC-Na 1%, kontrol karbon tetraklorida, kontrol EMAPB, kelompok

perlakuan EMAPB 75, 150 dan 300 mg/kgBB

Kelompok Perlakuan Rata-rata kadar LDH ±

SE (U/L)

I Kontrol Negatif CMC-Na 1% 529,00 ± 27,06

II Kontrol hepatotoksin karbon

tetraklorida (2 mL/kgBB) 1511,60 ± 136,10

III Kontrol EMAPB dosis tertinggi (300

mg/kgBB) 1446,20 ± 96,78

IV EMAPB 75 mg/kgBB + karbon

tetraklorida 851,00 ± 31,50

V EMAPB 150 mg/kgBB + karbon


VI EMAPB 300 mg/kgBB + karbon




11

Tabel VI. Hasil statistik dengan Uji Games-Howell kadar LDH pada kontrol

CMC-Na 1%, kontrol karbon tetraklorida, kontrol EMAPB, kelompok

perlakuan EMAPB 75, 150 dan 300 mg/kgBB

Kontrol

CMC-

Na 1%

Kontrol

CCl4 (2

mL/kgB

B)

Kontrol

EMAPB

300

mg/kgB

B

EMAPB

75

mg/kgB

B + CCl4

EMAPB

150

mg/kgB

+ CCl4

EMAPB

300

mg/kgB

+ CCl4

Kontrol

CMC-Na 1%

BB BB BB BTB BB

Kontrol CCl4

(2 mL/kgBB) BB BTB BB BTB BTB

Kontrol

EMAPB 300

mg/kgBB

BB BTB BB BTB BTB

EMAPB 75

mg/kgBB +

CCl4

BB BB BB BTB BTB

EMAPB 150

mg/kgBB +

CCl4

BTB BTB BTB BTB BTB

EMAPB 300

mg/kgBB +

CCl4

BB BTB BTB BTB BTB

Keterangan. BB : Berbeda Bermakna (p<0,05) BTB : Berbeda Tidak Bermakna

(p>0,05), CCl4 : Karbon Tetraklorida

3.3.1 Kontrol Negatif

Pada penelitian ini digunakan Sodium-Carboxymethyl Cellulosa 1%

(CMC-Na 1%) yang merupakan pelarut dari EMAPB. CMC-Na 1% digunakan

sebagai kontrol negatif karena dapat dijadikan sebagai nilai normal yang akan

dibandingkan dengan kelompok perlakuan dosis. Clichici et al. (2014) melaporkan


12

bahwa tidak terjadi peningkatan kadar LDH pada tikus yang diberikan CMC

kemudian Rao and Kumar (2015) melaporkan hasil histopatologi pemberian CMC

pada tikus menunjukkan hasil sel hati yang normal. Dari penelitian ini diperoleh

hasil pengukuran kadar LDH pada kelompok CMC-Na 1% sebesar 529,00 ± 27,06

U/L.

3.3.2 Kontrol Hepatotoksin karbon tetraklorida

Pada penelitian ini digunakan karbon tetraklorida sebagai senyawa yang

dapat menginduksi kerusakan hati dengan dosis 2 mL/kgBB dengan pemberian

secara intraperitoneal pada tikus. Pelarut yang digunakan adalah olive oil dengan

perbandingan Karbon tetraklorida : olive oil adalah 1:1 (Janakat dan Al-Merie,

2002). Tujuan dari kontrol positif adalah untuk mengetahui peningkatan kadar LDH

terhadap kerusakan hati berupa steatosis dan akan digunakan sebagai pembanding

dengan kelompok perlakuan dosis. Dari hasil penelitian diperoleh hasil pengukuran

pada jam ke-24 kontrol positif pada tabel V sebesar 1511,60 ± 136,10 U/L dan

terjadi kenaikan kadar LDH pada penelitian ini sebesar 2,8 kali.

Hasil statistik dari uji Games-Howell pada tabel VI diperoleh ada perbedaan

yang bermakna (p=0,010) antara kelompok karbon tetraklorida dan kelompok

CMC-Na 1% yang dapat disimpulkan terjadi peningkatan kadar LDH yang

signifikan setelah pemejanan hepatotoksin karbon tetraklorida dimana dengan dosis

2 mL/kgBB karbon tetraklorida menimbulkan kerusakan hati.

3.3.3 Kontrol EMAPB 300 mg/kgBB

Kontrol EMAPB 300 mg/kgBB bertujuan untuk melihat pengaruh

EMAPB pada tikus jantan galur Wistar yang dianggap memiliki kandungan

senyawa EMAPB paling tinggi yang dapat menurunkan kadar LDH. Dosis tertinggi

dipilih karena dapat mewakili respon dari dosis 75 dan 150 mg/kgBB dalam

menurunkan kadar LDH. Dari hasil penelitian diperoleh hasil pengukuran kontrol

EMAPB 300 mg/kgBB sebesar 1446,20 ± 96,78 U/L. Pada tabel VI menunjukkan

hasil uji Games-Howell antara kontrol EMAPB dan kontrol CMC-Na 1% ada

perbedaan yang bermakna (p=0,003). Apabila dibandingkan antara kontrol

EMAPB dan kontrol karbon tetraklorida ada perbedaan tidak bermakna (p=0,998).

Oleh karena itu, dosis 300 mg/kgBB dapat meningkatkan kadar LDH pada tikus


13

jantan Galur Wistar. Kontrol EMAPB 300 mg/kgBB diasumsikan terdapat

antioksidan yang berlebihan. Konsentrasi antioksidan yang tinggi atau berlebihan

memiliki efek prooxidan yang dapat meningkatkan reactive oxygen spesies (ROS)

yang tidak terkontrol dan menyebabkan terjadinya oxidative stress dalam sel salah

satunya ada kerusakan lipid (Bouayed and Bohn, 2010). Oleh karena itu, pada

kontrol EMAPB 300 mg/kgBB yang merupakan dosis tertinggi dapat

meningkatkan kadar LDH.

3.3.4 Kelompok EMAPB 75 ; 150 ; dan 300 mg/kgBB pada tikus jantan galur

Wistar terinduksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB

Pada penelitian ini digunakan 3 peringkat dosis yaitu 75, 150, dan 300

mg/kgBB. Setiap kelompok perlakuan dosis diberikan EMAPB selama 6 hari secara

peroral dan pada hari ke 7 diberikan karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB secara

intraperitoneal dan pengambilan darah 24 jam kemudian setelah pemberian karbon

tetraklorida. Berdasarkan tabel V diperoleh hasil pengukuran kadar LDH EMAPB

75 mg/kgBB sebesar 851,00 ± 31,50 U/L. Dari hasil uji statistik menunjukkan ada

perbedaan bermakna terhadap karbon tetraklorida (p=0,042) dan ada perbedaan

yang bermakna (p=0,001) terhadap CMC-Na 1%, ini berarti EMAPB 75 mg/kgBB

memiliki efek menurunkan kadar LDH pada tikus jantan galur Wistar terinduksi

karbon tetraklorida namun efeknya tidak cukup untuk mempertahankan kadar LDH

tetap normal.

Pada EMAPB 150 mg/kgBB kadar LDH sebesar 1247,60 ± 165,85 U/L.

Secara statistik menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna terhadap karbon

tetraklorida (p=0,812) tetapi ada perbedaan tidak bermakna (p=0,065) terhadap

CMC-Na 1%. Ini berarti EMAPB 150 mg/kgBB tidak dapat menurunkan kadar

LDH akibat karbon tetraklorida pada tikus jantan galur Wistar dan ketidak

bermaknaan terhadap kontrol CMC-Na 1 % diduga karena variansi data EMAPB

150 mg/kgBB yang cukup besar.

Pada EMAPB 300 mg/kgBB kadar LDH sebesar 1158,60 ± 102,67 U/L.

Secara statistik menunjukkan ada perbedaan yang tidak bermakna terhadap karbon

tetraklorida (p=0,389) akan tetapi ada perbedaan yang bermakna (p=0,017)

terhadap CMC-Na 1%. Ini berarti EMAPB 300 mg/kgBB tidak dapat menurunkan

kadar LDH akibat karbon tetraklorida pada tikus jantan galur Wistar.


14

Pada EMAPB 150 dan 300 mg/kgBB tidak dapat menurunkan kadar LDH

karena diasumsikan adanya antioksidan yang berlebihan yang memungkinkan

adanya aktivitas dari prooksidan. Oleh karena itu, perlu dilakukan pengukuran

terhadap kemampuan antioksidan dari quasinoid dalam memproteksi kerusakan

hepar. Hal ini pula selaras dengan kontol EMAPB dosis 300 mg/kgBB yang mampu

meningkatkan kadar LDH. Kondisi dimana adanya aktivitas antioksidan yang

tinggi karena adanya radikal bebas sering digambarkan dengan fase oksidatif stress

(Ling et al., 2010).

Hasil penelitian menunjukkan EMAPB 75 dan 150 mg/kgBB ada

perbedaan tidak bermakna (p=0,337) dan ada perbedaan tidak bermakna (p=0,198)

terhadap EMAPB 300 mg/kgBB kemudian antara EMAPB 150 dan 300 mg/kgBB

ada perbedaan tidak bermakna (p=0,996). Hal ini menunjukkan tidak ada pengaruh

tingkatan dosis yang bermakna terhadap respon yang ditimbulkan sehingga dapat

disimpulkan tidak adanya kekerabatan dosis EMAPB terhadap penurunan kadar

LDH tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida. Oleh karena itu, dapat

dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mencoba dosis yang lebih kecil dari 75

mg/kgBB. Saran untuk melakukan percobaan terhadap dosis yang lebih kecil ini

ingin melihat EMAPB dengan dosis yang lebih kecil mampu menurunkan kadar

LDH atau tidak dikarenakan tidak adanya hubungan kekerabatan antar dosis

EMAPB.

Pada dosis 75 mg/kgBB memiliki efek menurunkan kadar LDH karena

adanya kandungan senyawa Quasinoid yang merupakan senyawa fenolik yang

dapat melepaskan atom hidrogen untuk meredam aktivitas oksidan (Adikusuma dan

Bachri, 2014) sehingga memproteksi kerusakan hati akibat radikal bebas dari

karbon tetraklorida. Senyawa quasinoid diperoleh dari Akar Pasak Bumi yang

merupakan kandungan utamanya. Komponen utama dari quassinoid adalah

eurycomanone, eurycomanol, 13α(21)-epoxyeurycomanone, eurycomanol-2-O-β-

ᴅ-dglucopyranoside, dan 13,21-dihydroeurycomanone (Teh et al., 2011) sedangkan

pada dosis 150 dan 300 mg/kgBB tidak memiliki efek dalam menurunkan kadar

LDH karena diduga pada konsentrasi tinggi antioksidan dapat memiliki efek

prooxidan karena aktivitas dari natural compound yang berlebihan dapat

menurunkan aktivitas Gluthatione (GSH) yang merupakan penetral radikal bebas

dan merupakan kofaktor yang membantu enzim gluthatione transferase dalam


15

menetralkan molekul reaktif yang masuk dalam tubuh dan GSH juga dapat

berikatan secara langsung dengan Reactive Oxygen Species (ROS) untuk

menetralkan ROS (Bouayed and Bohn, 2010). Bila ikatan antara radikal bebas dan

antioksidan eksogen jenuh, makan antioksidan eksogen tersebut dapat berikatan

dengan GSH yang merupakan antioksidan dari dalam sistem pertahanan tubuh dan

GSH tidak dapat menetralkan ROS (Berger, 2005). Oleh karena itu, akan terjadi

oxidative stress dalam sel salah satunya adalah kerusakan lipid (Bouayed and Bohn,

2010).

Kesimpulan

1. Pemberian EMAPB 95% dosis 75 mg/kgBB secara jangka panjang 6 hari mampu

menurunkan kadar LDH terhadap tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon

tetraklorida.

2. Tidak ada hubungan kekerabatan antara dosis EMAPB 95% terhadap penurunan

kadar LDH pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida.

Saran

1. Dapat dilakukan pengukuran terhadap kemampuan dari antioksidan Quasinoid.

2. Penelitian lebih lanjut untuk mencoba dosis yang lebih kecil dari 75 mg/kgBB.


16

Daftar Pustaka

Adikusuma, W., dan Bachri, M.S., 2014. Efek Hepatoprotektif Serbuk Akar Pasak

Bumi (Eurycoma longifolia Jack.) Dilihat dari Aktivitas SGPT-SGOT Tikus

Jantan yang Terinduksi Karbon tetraklorida, Pharmaciana, 4(2), 166.

Berger, M.M., 2005. Can Oxidative damage be treated nutritionally?, Clinical

Nutrition, 24, 172-178.

Bhat, R., dan Karim, A.A., 2010. Tongkat Ali (Eurycoma Longifolia Jack.):

A review on It’s Ethnobotany and Pharmacological Importance, Fitoterapia,

81, 669-679.

Bouayed, J., and Bohn, T., 2010. Exogenous antioxidants-Double-edged Swords in

Cellular Redox State, Oxidative Medicine and Celluar Longevity, 3(4), 228-

237.

Clichici, S., Olteanu, D., Nagy, Andras-Laszlo, Oros, A., Filip, A., and Mircea A.P.,

2014. Silymarin Inhibits the Progression of Fibrosis in the Early Stages of Liver

Injury in Karbon tetraklorida-Treated Rats. J Med Food., 1-9.

Effendy, N.M., Mohamed, N., Muhammad, N.,

Mohamad, I.N., dan Shuid, A.N., 2012. Eurycoma longifolia : Medical Plant

in the Prevention and Treatment of Male Osteoporosis due to Androgen

Deficiency, Department of Pharmacology, Faculty of Medicine, The National

University of Malaysia, 2.

European Association for the Study of the Liver, 2016, The Burden of Liver Disease

in Europe.

http://www.easl.eu/medias/EASLimg/Discover/EU/54ae845caec619f_file.p

df, accessed 4 May 2017.

Hendra , P., Fenty, Andreani, R.P., dan Pangestuti, E.M.P., 2017. Evaluation of

Antihyperlipidemic, Anti-Inflammatory, and Analgesic Activities of

Eurycoma Longifolia in Animal Models, International Journal of Pharmacy

and Pharmaceutical Sciences, 9(3), 1-2.


17

Giannini, G.E., Testa, R., and Savarino, V., 2005. Liver Enzyme Alteration: A

Guide for Clinicians.

Hendra, P., Jamil, A.O., Maharani, A.D., Suhadi, A.M., Putri, Y., Fenty, dan

Julianus, J., 2017. Antihyperlipidemic and Hepatoprotective Studies on

Leaves of Macaranga Tanarius, Asian Journal of Pharmaceutical and

Clinical Research, 10(1), 240.

Hodgson, E., 2010. The Textbook of Modern Toxicology.

Janakat, S., and Al-Merie, H., 2002. Optimization of The Dose and Route of

Injection, and Characterization of Rhe Time Course of Carbon Tetrachloride-

Induced Hepatotoxicity in The Rat, J. Pharmacol. Toxicol. Methods, 48, 41-

44.

Kepala Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2014.

Peraturan Kepala Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik

Indonesia Nomor 12 Tahun 2014 Tentang Persyaratan Mutu Obat

Traditional, Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia,

Jakarta.

Kumar V., Abbas K., A., dan Fausto N., 2005. Robbins & Cotran Pathologic Basis

Disease.

Kuo, P. C., Damu, A. G., Lee, K. H., dan Wu, T. S., 2004. Cytotoxic and

Antimalarial Constituents from The Roots of Eurycoma longifolia,

Bioorganic and Medicinal Chemistry, Vol. 12, 537–544.

Ling, T.L., Palanisamy, D.U., and Cheng, M.H., 2010. Prooxidant/Antixidant

Ratio (ProAntidex) as a Better Index of Net Free Radical Scavenging Potential.

Molecules.7884-7892.

Marshall, W., 2012. Association of Clinical Bichemistry,

http://www.acb.org.uk/Nat%20Lab%20Med%20Hbk/ALT.pdf accessed 21

August 2017.

Pagana, D.K. and Pagana, J.T., 2002. Mosby’s Manual of Diagnostic and

Laboratory Tests.


18

Panjaitan, P.G.R., Handharyani, E., Chairul, dan Manalu, W., 2013.

Hepatoprotective Acitivity of Eurycoma longifolia Jack. Roots. Indian Journal

of Traditinal Knowledge. 12(2), 225-230.

Panjaitan, P.G.R., Manalu W., Handharyani, E., dan Chairul, 2011. Aktivitas

Hepatoprotektor Ekstrak Metanol Akar Pasak Bumi dan Fraksi-Fraksi

Turunannya, Jurnal Veteriner, 12(4), 322.

Pearce, C.P., 2009. Anatomi dan Fisiologi untuk Paramedis.

Rao, R.R., and Kumar, J.V., 2015. A Study to Evaluate Prophylactic

Hepatoprotective Effect of Phyllanthus Niruri Against the Paracetamol

Induced Liver Toxicity in Albino Rats. International Journal of Basic and

Applied Medical Sciences. 5(1), 308-315.

Rehman, S.U., Choe, K., dan Yoo, H.H., 2016. Review on a Traditional Herbal

Medicine, Eurycoma longifolia Jack (Tongkat Ali): Its Traditional Uses,

Chemistry, Evidence-Based Pharmacology and Toxicology, Molecules, 3-4.

Schwimmer, J.B., Deutsch, R., Kahen, T., Lavine, J.E., Stanley, C., dan Behling,

C., 2006. Prevalence of Fatty Liver in Children and Adolescents, Medline,

118 (4).

Shehu, I.A., Ma, Xiacha, dan Venkataramanan, R., 2016. Mechanism of Drug

Induced Hepatotoxicity.

Stine K., dan Brown M., T., 1996. Principles of Toxicology.

Teh, C., Murugaiyah, V., dan Chan, K., 2011. Developing a validated liquid

chromatography-mass spectrometric method for the simultaneous analysis

of five bioactive quassinoids markers for the standardization of

manufactured batches of Eurycoma longifolia Jack extract as antimalarial

medicaments. Journal of Chromatography A. Issue 1218, 1861-1877.

Timbrell J., A., 2008. Principles of Biochemical Toxicology.


19

Lampiran 1. Surat Ethical Clearance dari Fakultas Kedokteran UGM


20

Lampiran 2. Surat pengesahan determinasi tanaman Akar Pasak Bumi

(Eurycoma longifolia Jack.)


21

Lampiran 3. Surat keterangan tanaman dari Merapi Farma


22

Lampiran 4. Surat keterangan penetapan kadar air serbuk Akar Pasak Bumi

dari LPPT UGM


23

Lampiran 5. Surat legalitas analisis data oleh Pusat Kajian CE&BU dari

Fakultas Kedokteran UGM


24

Lampiran 6. Perhitungan konversi dosis dari tikus ke manusia

Faktor konversi dosis tikus 200 g ke manusia 70 kg = 56,0

Dosis untuk manusia = dosis untuk tikus 200 g x nilai konversi

Sehingga diperoleh dosis EMAPB untuk manusia sebagai berikut :

1. Dosis EMAPB 75 mg/kgBB

Dosis untuk tikus 200 g = 75 mg/kgBB = 15 mg

Dosis untuk manusia 70 kg = 15 mg x 56,0 = 840 mg

Dosis untuk manusia = 840 mg / 70 kg = 12 mg/kgBB










25

Lampiran 7. Akar Pasak Bumi ; serbuk Akar Pasak Bumi ; hasil ekstrak

metanol 95% Akar Pasak Bumi (EMAPB)

Gambar 1. Akar Pasak Bumi

Gambar 2. Serbuk Akar Pasak Bumi

Gambar 3. Hasil ekstrak metanol 95% Akar Pasak Bumi (EMAPB)


26

Lampiran 8. Perhitungan persen rendemen Akar Pasak Bumi

Total berat Serbuk = 1200 gram

Total berat Ekstrak Pekat = 22, 68 gram

% rendemen =𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑝𝑒𝑘𝑎𝑡

𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑠𝑒𝑟𝑏𝑢𝑘𝑥 100% =

22,68 𝑔𝑟𝑎𝑚

1200 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑥 100% = 1,89%


27

Lampiran 9. Suspensi CMC-Na 1% ; suspensi EMAPB ; pemberian secara per

oral ; pemberian secara intraperitoneal

Gambar 4. Suspensi CMC-Na 1%

Gambar 5. Suspensi EMAPB


28

Gambar 6. Pemberian secara per oral

Gambar 7. Pemberian secara intraperitoneal


29

Lampiran 10. SOP pemeriksaan sampel darah di laboratorium Patologi

Klinik Rumah Sakit Bethesda Yogyakarta

1. Sentrifuge: 3000 rpm selama10 menit

2. Alat/Instrumen: Chemical Auto Analyzer

Minimal ketinggian serum 1 cm, jarum dari instrumen akan langsung tarik

dari tabung. Jika ketinggian serum <1 cm, operator mengambil secara

manual dan dimasukkan dalam tabung yang lebih kecil (seperti effendorf).

3. Pada instrumen yang digunakan ada 2 port (port untuk reagen dan port untuk

sampel). Banyaknya sampel dan reagen yang ditarik sudah otomatis dari

instrumen (biss lihat brosur, setiap parameter berbeda).

4. Penyimpanan reagen sama dpada suhu 2-8oC.

5. Sampel yang sudah disentrifuge tahan disimpan 1 minggu di freezer, setelah

itu pihak lab tidak menyarankan utk dilakukan pengukuran karena hasilnya

berpotensi tidak sesuai dengan kondisi sebenarnya.

6. Merk reagen:

LDH (Thermo®) alasan pilih Thermo karena kit-nya kecil, sehingga bisa

lebih hemat, karena LDH jarang permintaan pemeriksaan, resiko Exp. Date

lebih tinggi jika pilih kit besar.

7. Kalibrasi ada 2:

Kalibrasi instrumen termasuk tahapan QC, dilakukan oleh teknisi,

sebelum alat digunakan untuk pemeriksaan pasien, dilakukan berkala,

biasanya setiap bulan.

Kalibrasi reagen ada kit tersendiri, namanya “multi calibrator”

bawaan instrumen. Secara otomatis instrumen akan memberitahu ke

operator jika butuh kalibrasi dan untuk tiap parameter berbeda, sesuai

dengan seberapa sering reagen digunakan. semakin sering digunakan,

notifikasi kalibrasi dari instrumen juga semakin sering.

8. Pengenceran di Bethesda sudah ada larutan dilusi bawaan alat. Mengenai

seberapa besar pengenceran tergantung operatornya, menyesuaikan

dengan nilai yang muncul.

9. Maintenance instrumen harian dilakukan oleh analisis setiap pagi sebelum

alat digunakan. Pencucian otomatis oleh instrumen dengan larutan

pembersih bawaan alat.

Maintenance instrumen bulanan dilakukan oleh teknisi.


30

Lampiran 11. Hasil analisis statistik aktivitas ALT dan AST pada uji

pendahuluan waktu pencuplikan darah setelah induksi karbon

tetraklorida (CCl4) 2 mL/kgBB

Tests of Normality

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

ALT1_0_24 .270 3 . .948 3 .562

ALT1_0_48 .257 3 . .961 3 .621

ALT2_0_24 .217 3 . .988 3 .790

ALT2_0_48 .287 3 . .930 3 .487

AST0_24 .350 3 . .830 3 .187

AST0_48 .239 3 . .975 3 .698

a. Lilliefors Significance Correction

Paired Samples Statistics

Mean N

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

Pair 1 ALT1_0 61.1333 3 13.88752 8.01797

ALT1_24 227.4667 3 6.93277 4.00264

Pair 2 ALT1_0 61.1333 3 13.88752 8.01797

ALT1_48 60.6667 3 20.89242 12.06225

Pair 3 ALT1_24 227.4667 3 6.93277 4.00264

ALT1_48 60.6667 3 20.89242 12.06225

Pair 4 ALT2_0 49.6333 3 17.93498 10.35476

ALT2_24 226.2000 3 6.94190 4.00791

Pair 5 ALT2_0 49.6333 3 17.93498 10.35476

ALT2_48 51.3000 3 8.49294 4.90340

Pair 6 ALT2_24 226.2000 3 6.94190 4.00791

ALT2_48 51.3000 3 8.49294 4.90340

Pair 7 AST_0 170.7000 3 28.36353 16.37569

AST_24 859.3333 3 85.45071 49.33499

Pair 8 AST_0 170.7000 3 28.36353 16.37569

AST_48 235.6000 3 31.19760 18.01194

Pair 9 AST_24 859.3333 3 85.45071 49.33499

AST_48 235.6000 3 31.19760 18.01194


31

Paired Samples Test

Paired Differences

t df

Sig. (2-

tailed)

95% Confidence

Interval of the

Difference

Mean

Std.

Deviatio

n

Std. Error

Mean Lower Upper

Pair

1

ALT1_0 -

ALT1_24

-

166.333

33

7.75263 4.47599 -

185.5919

4

-

147.0747

2

-

37.16

1

2 .001

Pair

2

ALT1_0 -

ALT1_48

.46667 13.31177 7.68556 -

32.60161

33.53495 .061 2 .957

Pair

3

ALT1_24 -

ALT1_48

166.800

00

18.30328 10.56740 121.3321

4

212.2678

6

15.78

4

2 .004

Pair

4

ALT2_0 -

ALT2_24

-

176.566

67

13.17928 7.60906 -

209.3058

0

-

143.8275

3

-

23.20

5

2 .002

Pair

5

ALT2_0 -

ALT2_48

-

1.66667

16.85477 9.73111 -

43.53624

40.20291 -.171 2 .880

Pair

6

ALT2_24 -

ALT2_48

174.900

00

4.37150 2.52389 164.0406

0

185.7594

0

69.29

8

2 .000

Pair

7

AST_0 -

AST_24

-

688.633

33

106.2806

3

61.36115 -

952.6490

7

-

424.6176

0

-

11.22

3

2 .008

Pair

8

AST_0 -

AST_48

-

64.9000

0

59.44047 34.31797 -

212.5583

2

82.75832 -1.891 2 .199

Pair

9

AST_24 -

AST_48

623.733

33

65.46162 37.79428 461.1176

6

786.3490

1

16.50

3

2 .004


32

Lampiran 12. Hasil analisis statistik kadar LDH pada kontrol CMC-Na 1%,

kontrol CCl4, kontrol EMAPB, dan kelompok perlakuan dosis

EMAPB 75 ; 150 ; 300 mg/kgBB

Case Processing Summary

KELOMPOK

Cases

Valid Missing Total

N Percent N Percent N Percent

LDH KONTROL CMC-NA

1% 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

KONTROL CCl4 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

KONTROL EMAPB

300 mg/kgBB 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

PERLAKUAN

EMAPB 75 mg/kgBB 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

PERLAKUAN

EMAPB 150 mg/kgBB 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

PERLAKUAN

EMAPB 300 mg/kgBB 5 100,0% 0 0,0% 5 100,0%

Descriptives

KELOMPOK Statistic Std. Error

LDH KONTROL CMC-NA

1%

Mean 529,0000 27,06289

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 453,8614

Upper

Bound 604,1386

5% Trimmed Mean 528,8333

Median 534,0000

Variance 3662,000

Std. Deviation 60,51446

Minimum 462,00

Maximum 599,00

Range 137,00

Interquartile Range 119,50

Skewness -,038 ,913

Kurtosis -2,576 2,000


33

KONTROL CCl4 Mean 1511,6000

136,1038

6

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 1133,7151

Upper

Bound 1889,4849


Median 1352,0000

Variance 92621,300


Minimum 1290,00

Maximum 2003,00

Range 713,00


Skewness 1,410 ,913

Kurtosis 1,244 2,000

KONTROL EMAPB

300 mg/kgBB

Mean 1446,2000 96,77882

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 1177,4989

Upper

Bound 1714,9011


Median 1486,0000

Variance 46830,700


Minimum 1093,00

Maximum 1650,00

Range 557,00


Skewness -1,357 ,913

Kurtosis 2,055 2,000

PERLAKUAN

EMAPB 75 mg/kgBB

Mean 851,0000 31,49762

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 763,5486

Upper

Bound 938,4514


Median 865,0000


34

Variance 4960,500


Minimum 754,00

Maximum 929,00

Range 175,00


Skewness -,482 ,913

Kurtosis -1,177 2,000

PERLAKUAN

EMAPB 150

mg/kgBB

Mean 1247,6000

165,8465

0

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 787,1363

Upper

Bound 1708,0637


Median 1268,0000

Variance 137525,30

0


Minimum 860,00

Maximum 1789,00

Range 929,00


Skewness ,615 ,913

Kurtosis -,273 2,000

PERLAKUAN

EMAPB 300

mg/kgBB

Mean 1158,6000

102,6652

8

95% Confidence

Interval for Mean

Lower

Bound 873,5555

Upper

Bound 1443,6445


Median 1072,0000

Variance 52700,800


Minimum 940,00

Maximum 1451,00

Range 511,00


35


Skewness ,525 ,913

Kurtosis -2,549 2,000

Tests of Normality

KELOMPOK

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilka

Statisti

c df Sig. Statistic df Sig.

LDH KONTROL CMC-

NA 1% ,218 5 ,200* ,913 5

,489

KONTROL CCl4 ,300 5 ,161 ,813 5 ,104

KONTROL EMAPB

300 mg/kgBB ,250 5 ,200* ,896 5

,391

PERLAKUAN

EMAPB 75

mg/kgBB

,179 5 ,200* ,964 5

,833

PERLAKUAN

EMAPB 150

mg/kgBB

,191 5 ,200* ,944 5

,692

PERLAKUAN

EMAPB 300

mg/kgBB

,247 5 ,200* ,877 5

,295

*. This is a lower bound of the true significance.

a. Lilliefors Significance Correction

Oneway

Descriptives

LDH

N Mean

Std.

Deviation

Std.

Error

95% Confidence

Interval for Mean

Minim

um

Maxim

um

Lower

Bound

Upper

Bound

KONTROL CMC-

NA 1% 5

529,000

0 60,51446

27,0628

9 453,8614 604,1386 462,00 599,00

KONTROL CCl4 5

1511,60

00 304,33748

136,103

86 1133,7151 1889,4849

1290,0

0

2003,0

0

KONTROL

EMAPB 300

mg/kgBB

5 1446,20

00 216,40402

96,7788

2 1177,4989 1714,9011

1093,0

0

1650,0

0


36

PERLAKUAN

EMAPB 75

mg/kgBB

5 851,000

0 70,43082

31,4976

2 763,5486 938,4514 754,00 929,00

PERLAKUAN

EMAPB 150

mg/kgBB

5 1247,60

00 370,84404

165,846

50 787,1363 1708,0637 860,00

1789,0

0

PERLAKUAN

EMAPB 300

mg/kgBB

5 1158,60

00 229,56655

102,665

28 873,5555 1443,6445 940,00

1451,0

0

Total 30

1124,00

00 408,89152

74,6530

4 971,3174 1276,6826 462,00

2003,0

0

Test of Homogeneity of Variances

LDH

Levene

Statistic df1 df2 Sig.

2,890 5 24 ,035

ANOVA

LDH

Sum of

Squares df

Mean

Square F Sig.

Between

Groups 3495373,600 5 699074,720 12,399 ,000

Within Groups 1353202,400 24 56383,433

Total 4848576,000 29

Post Hoc Tests

Multiple Comparisons

LDH

Games-Howell

(I) KELOMPOK (J) KELOMPOK

Mean

Differenc

e (I-J)

Std.

Error Sig.

95% Confidence

Interval

Lower

Bound

Upper

Bound

KONTROL

CMC-NA 1%

KONTROL CCl4 -

982,6000

0*

138,768

37 ,010

-

1615,514

9

-

349,6851


37

KONTROL

EMAPB 300

mg/kgBB

-

917,2000

0*

100,491

49 ,003

-

1360,898

6

-

473,5014

PERLAKUAN

EMAPB 75

mg/kgBB

-

322,0000

0*

41,5271

0 ,001

-

474,6072

-

169,3928

PERLAKUAN

EMAPB 150

mg/kgBB

-

718,6000

0

168,040

05 ,065

-

1494,296

2

57,0962

PERLAKUAN

EMAPB 300

mg/kgBB

-

629,6000

0*

106,172

31 ,017

-

1101,615

6

-

157,5844

KONTROL CCl4 KONTROL

CMC-NA 1%

982,6000

0*

138,768

37 ,010 349,6851

1615,514

9

KONTROL

EMAPB 300

mg/kgBB

65,40000 167,004

19 ,998

-

561,8025 692,6025

PERLAKUAN

EMAPB 75

mg/kgBB

660,6000

0*

139,700

97 ,042 31,2601

1289,939

9

PERLAKUAN

EMAPB 150

mg/kgBB

264,0000

0

214,544

45 ,812

-

527,5229

1055,522

9

PERLAKUAN

EMAPB 300

mg/kgBB

353,0000

0

170,482

90 ,389

-

281,9946 987,9946

KONTROL

EMAPB 300

mg/kgBB

KONTROL

CMC-NA 1%

917,2000

0*

100,491

49 ,003 473,5014

1360,898

6

KONTROL CCl4 -65,40000

167,004

19 ,998

-

692,6025 561,8025

PERLAKUAN

EMAPB 75

mg/kgBB

595,2000

0*

101,775

44 ,015 154,8895

1035,510

5

PERLAKUAN

EMAPB 150

mg/kgBB

198,6000

0

192,018

75 ,891

-

547,8111 945,0111

PERLAKUAN

EMAPB 300

mg/kgBB

287,6000

0

141,089

69 ,399

-

228,3598 803,5598

PERLAKUAN

EMAPB 75

KONTROL

CMC-NA 1%

322,0000

0*

41,5271

0 ,001 169,3928 474,6072


38

mg/kgBB KONTROL CCl4 -

660,6000

0*

139,700

97 ,042

-

1289,939

9

-31,2601

KONTROL

EMAPB 300

mg/kgBB

-

595,2000

0*

101,775

44 ,015

-

1035,510

5

-

154,8895

PERLAKUAN

EMAPB 150

mg/kgBB

-

396,6000

0

168,811

02 ,337

-

1168,981

3

375,7813

PERLAKUAN

EMAPB 300

mg/kgBB

-

307,6000

0

107,388

36 ,198

-

776,1079 160,9079

PERLAKUAN

EMAPB 150

mg/kgBB

KONTROL

CMC-NA 1%

718,6000

0

168,040

05 ,065 -57,0962

1494,296

2

KONTROL CCl4 -

264,0000

0

214,544

45 ,812

-

1055,522

9

527,5229

KONTROL

EMAPB 300

mg/kgBB

-

198,6000

0

192,018

75 ,891

-

945,0111 547,8111

PERLAKUAN

EMAPB 75

mg/kgBB

396,6000

0

168,811

02 ,337

-

375,7813

1168,981

3

PERLAKUAN

EMAPB 300

mg/kgBB

89,00000 195,051

84 ,996

-

660,8289 838,8289

PERLAKUAN

EMAPB 300

mg/kgBB

KONTROL

CMC-NA 1%

629,6000

0*

106,172

31 ,017 157,5844

1101,615

6

KONTROL CCl4 -

353,0000

0

170,482

90 ,389

-

987,9946 281,9946

KONTROL

EMAPB 300

mg/kgBB

-

287,6000

0

141,089

69 ,399

-

803,5598 228,3598

PERLAKUAN

EMAPB 75

mg/kgBB

307,6000

0

107,388

36 ,198

-

160,9079 776,1079

PERLAKUAN

EMAPB 150

mg/kgBB

-89,00000 195,051

84 ,996

-

838,8289 660,8289

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.


39

Biodata Penulis

Penulis skripsi dengan judul “Efek Hepatoprotektif Jangka Panjang Ekstrak

Metanol 95% Akar Pasak Bumi Terhadap Penurunan Kadar Laktat

Dehidrogenase Tikus Jantan Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida”

memiliki nama lengkap Bella Anggelina, merupakan anak kedua dari dua

bersaudara pasangan Irwan Tanharjo dan Cenny Ciptomo. Penulis lahir di Sabang,

30 Januari 1997 dan mengawali pendidikan formal di TK Pertiwi Toli-toli (2000-

2002) kemudian melanjutkan pendidikan ke Sekolah Dasar di SDN Inpress Talaga

(2002-2008). Pendidikan tingkat Sekolah Menengah Pertama dilanjutkan penulis

ke SMP Katolik Santo Paulus Palu (2008-2011) kemudian melanjutkan pendidikan

tingkat Menengah Atas di SMA Katolik Santo Andreas Palu (2011-2014). Penulis

kemudian melanjutkan pendidikan sarjana di Fakultas Farmasi Universitas Sanata

Dharma pada tahun 2014. Selama masa studi di Fakultas Farmasi Universitas

Sanata Dharma, penulis pernah menjadi asisten dosen pada Praktikum

Mikrobiologi (2016 dan 2017). Penulis juga aktif dalam beberapa kegiatan, seperti

Desa Mitra 1 sebagai sie konsumsi (2016), Kampanye Informasi Obat sebagai

koordinator divisi konsumsi (2016), dan Seminar Nasional sebagai sie konsumsi

(2016).


efek hepatoprotektif jangka panjang ekstrak …repository.usd.ac.id/13869/2/148114033_full.pdf ·...

Documents