efek antibakteri ekstrak etanol batang …/efek... · dengan ini saya menyatakan bahwa tugas akhir...

perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id

commit to user

i

EFEK ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL

BATANG PEPAYA(Carica papaya Linn.) TERHADAP

PERTUMBUHAN BAKTERI PADA PLAK GIGI

TUGAS AKHIR

Diajukan untuk memenuhi salah satu persyaratan

memperoleh gelar Ahli Madya D3 Farmasi

Oleh:

HATMININGDYAH WULANDARI

NIM. M3509032

PROGRAM STUDI D3 FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS SEBELAS MARET

SURAKARTA

2013


commit to user

ii


commit to user

iii

PERNYATAAN

Dengan ini saya menyatakan bahwa tugas akhir EFEK

ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL BATANG PEPAYA (Carica papaya

Linn.)TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI PADA PLAK GIGI adalah

hasil penelitian saya sendiri dan tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk

memperoleh gelar apapun disuatu perguruan tinggi, serta tidak terdapat karya atau

pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali secara

tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.

Apabila di kemudian hari dapat ditemukan adanya unsur penjiplakan maka

gelar yang telah diperoleh dapat ditinjau dan/atau dicabut.

Surakarta, Desember 2012

Hatminingdyah Wulandari NIM. M3509032


commit to user

iv

EFEK ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL

BATANG PEPAYA (Carica papaya Linn.) TERHADAP

PERTUMBUHAN BAKTERI PADA PLAK GIGI

Hatminingdyah Wulandari

Jurusan D3 Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Sebelas Maret Surakarta

INTISARI

Penyakit gigi dan mulut merupakan penyakit yang sering dikeluhkan dan disebabkan adanya plak gigi.Obat kumur dan pasta gigi dengan bahan kimia sintetik dapat menimbulkan efek samping berupa fluorosis email.Sehingga diperlukan adanya antibakteri alami dari ekstrak etanol batang pepaya (Carica papaya Linn.), karena berdasarkan penelitian, ekstrak etanol batang pepaya dapat menghambat beberapa bakteri.

Penelitian ini termasuk penelitian eksploratif dan dilakukan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol batang pepaya (Carica papaya Linn.) terhadap pertumbuhan bakteri pada plak gigi.Bakteri uji yang digunakan adalah hasil isolasi dari plak gigi, kemudian dilakukan pengecatan Gram bakteri, dan diamati morfologinya.Ekstrak batang pepaya diperoleh dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 95%.Pengujian aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi padat dengan seri konsentrasi ekstrak10-100%. Sebagai kontrol, digunakanlarutan CMC-Na 0,1%, etanol 95%, dan Amoksisilin 0,03%.

Hasil isolasi dari plak gigi diperoleh tiga bakteri yaitu Streptobacillus Gram positif, Staphylococcus Gram positif, dan Streptococcus Gram positif.Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak etanol batang pepaya optimum menghambat Streptobacillus pada konsentrasi 100% dengan DDH radikal sebesar 5,46mm, DDH irradikal sebesar 16,78mm. Pada konsentrasi 80% dengan DDH radikal sebesar 2,02mm dan irradikal sebesar 23,09 mm optimum menghambat Staphylococcus, dan pada konsentrasi 90% dengan DDH sebesar 12,85mm menghambat Streptococcus.

Kata kunci : ekstrak batang pepaya, antibakteri, plak gigi.


commit to user

v

ANTIBACTERIAL EFFECTS OF ETHANOL EXTRACT

PAPAYA STEM (Carica papaya Linn.)

TROUGH BACTERIAL GROWTH IN DENTAL PLAQUE


Department of Pharmacy Faculty of Mathematics and Science

Sebelas Maret University

ABSTRACT

Tooth and mouth disease complained and caused by dental plaque. Mouthwash and toothpaste with synthetic chemical substance have side effect enamel fluorosis. So, a natural antibacterial from ethanol extract of Carica papaya stem because according to research, an ethanol extract of papaya stem can inhibit several bacteria.

This is an explorative research, has a purpose tofind out ethanol extract of Carica papaya stem as an antibacterial with observed growth bacteria at dental plaque. Bacteria test is getting from dental plaqueisolation, those performed Gram staining of bacteria, and then observed the morphology forming. Ethanol extract of Carica papaya stem obtained using maceration method with ethanol 95%. In antibacterial test used diffusion method, usingthe concentrations of extractwere 10 up to 100%andusing control such as CMC-Na 0,1%, ethanol 95% and Amoxicillin 0,03%

From dental plaque bacteria that can be isolated three bacterial; its areStreptobacillus Gram positive, Staphylococcus Gram positive, and Streptococcus Gram positive bacteria. The test results suggest that the antibacterial activity of the ethanol extract of Carica papaya stem can inhibit Streptobacillus in 100% concentration at 5.46 mm of radical clear zone, irradical clear zone at 16.78 mm. In concentration 80% can inhibit Staphylococcus at 2.02 mm of radical clear zone and 23.09 mm ofirradical clear zone, and in concentration 90% was effective inhibitStreptococcus at 12.85 mm of radical clear zone.

Keyword :Carica papaya extract, antibacterial, dental plaque.


commit to user

vi

MOTTO

Many people live in the past through regrets,

many more people live in the future through worries,

only very view live in the now,

living in the now is the only way to live.

What you are doing is never bigger than what God is planning for you.

-Mario Teguh-


commit to user

vii

PERSEMBAHAN

Tugas Akhir ini saya persembahkan untuk Bapak dan Ibu.

Thank you for everything Mom, Dad

there always a great Mom beside a great Dad

proud to be your daughter.


commit to user

viii

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan atas kehadirat Allah SWT sehingga penulis

dapat menyelesaikan Tugas Akhir yang berjudul

Etanol Batang Pepaya (Carica papayaLinn.)terhadap Pertumbuhan Bakteri

dengan lancar,sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Ahli Madya D3 Farmasi pada Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Sebelas Maret Surakarta.

Tugas Akhir ini tidak akan selesai tanpa bantuan dan dukungan dari

berbagai pihak, untuk itu penulis mengucapkan terima kasih kepada:

1. Prof. Ir. Ari Handono Ramelan, M.Sc.(Hons), Ph.D, selaku dekan Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sebelas Maret

Surakarta.

2. Ahmad Ainurofiq, M.Si., Apt., selaku Ketua Program Studi D3 Farmasi,

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sebelas

Maret Surakarta.

3. Nestri Handayani, M.Si., Apt., selaku dosen Pembimbing Akademik.

4. Estu Retnaningtyas N., STP., M.Si., selaku dosen pembimbing Tugas

Akhir yang selalu memberikan bimbingan dan pengarahan dalam

menyelesaikan Tugas Akhir.

5. Bapak Amir, Ibu Sri Sulastri, dan Adik Safitri, yang selalu memberi doa,

dukungan, dan motivasi.


commit to user

ix

6. Dian Rina Puspitaningtyas, Kharisma Qonitah, Riva Sabrina Ayunastiti,

yang telah membantu, berbagi ilmu dan semangat selama melakukan

penelitian di Laboratorium.

7. Sahabat-sahabat dekat yang selalu mendampingi dalam setiap tangis dan

tawa.

8. Teman-teman D3 Farmasi Universitas Sebelas Maret angkatan 2009, yang

telah selama tiga tahun menjalani masa perkuliahan yang sangat

menyenangkan bersama.

9. Semua pihak yang tidak dapat penulis tulis satu per satu yang telah

membantu dalam menyelesaikan Tugas Akhir.

Penulis mengharapkan adanya kritik dan saran yang membangun dari

semua pihak untuk melengkapi Tugas Akhir ini. Selain itu, penulis juga berharap

agar Tugas Akhir ini bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan terutama

ilmu kefarmasian.

Surakarta, Desember 2012



commit to user

x

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ....................................................................................

HALAMAN PERSETUJUAN......................................................................

HALAMAN PERNYATAAN ......................................................................

INTISARI ......................................................................................................

ABSTRACT .................................................................................................

MOTTO ........................................................................................................

PERSEMBAHAN .........................................................................................

KATA PENGANTAR ...................................................................................

DAFTAR ISI ................................................................................................

DAFTAR TABEL..........................................................................................

DAFTAR GAMBAR .................................................................................. .

DAFTAR LAMPIRAN .............................................................................

DAFTAR SINGKATAN ...............................................................................

BAB I. PENDAHULUAN ...........................................................................

A. Latar Belakang Masalah ....................................................................

B. Perumusan Masalah ..........................................................................

C. Tujuan Penelitian .............................................................................

D. Manfaat Penelitian ...........................................................................

BAB II. LANDASAN TEORI ......................................................................

A. Tinjauan Pustaka ...............................................................................

1. Pepaya....................................................................................

2. Plak Gigi ................................................................................

3. Bakteri ..................................................................................

4. Pewarnaan Gram Bakteri .......................................................

5. Antibakteri .............................................................................

6. Uji Aktivitas Antibakteri ......................................................

7. Ekstrak ..................................................................................

B. Kerangka Pemikiran ................................................................. ........

i

ii

iii

iv

v

vi

vii

viii

x

xiii

xiv

xv

xvi

xvi

1

1

3

3

3

5

5

5

7

8

9

10

11

13


commit to user

xi

C. Keterangan Empiris .......................................................................... 15

BAB III. METODE PENELITIAN .............................................................. 17

A. Kategori Penelitian ............................................................................ 17

B. Waktu dan Tempat Penelitian .......................................................... 17

C. Alat dan Bahan .................................................................................. 17

1. Alat ............................................................................................. 17

2. Bahan .......................................................................................... 18

D. Cara Kerja ......................................................................................... 19

1. Determinasi dan Preparasi Sampel ............................................ 19

2. Preparasi dan Ekstraksi .............................................................. 19

3. Pengujian Aktivita Antibakteri Ekstrak Batang Pepaya ............ 20

a. Penyiapan Alat ...................................................................... 20

b. Pembuatan Media .................................................................. 20

c. Pengambilan Apusan dan Isolasi Bakteri .............................. 20

d. Pengecatan Gram Bakteri ...................................................... 20

e. Pembuatan Stok Bakteri ........................................................ 21

f. Pembuatan Suspensi Bakteri ........................... ................ ..... 21

g. Pembuatan Susupensi CMC-Na ............................................ 22

h. Pembuatan Seri Konsentrasi Ekstrak Etanol Batang Pepaya22

i. Pembuatan Larutan Kontrol .................................................. 22

j. Uji Aktivitas Antibakteri ....................................................... 22

4. Analisis Data.............................................................................. 23

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................... 24

A. Pengumpulan dan Determinasi Tanaman.......................................... 24

B. Ekstraksi Batang Pepaya ................................................................... 24

C. Pengambilan Apusan Plak Gigi, Kultur, dan Isolasi Bakteri ............ 25

D. Uji Aktivitas Antibakteri ................................................................... 30

BAB V. PENUTUP ....................................................................................... 35

A. Kesimpulan ....................................................................................... 35

B. Saran .................................................................................................. 35


commit to user

xii

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................... 36

LAMPIRAN .................................................................................................. 39


commit to user

xiii

DAFTAR TABEL

Tabel I. Reaksi Dinding Sel Bakteri terhadap Reagen yang Digunakan dalam

Pewarnaan Gram Bakteri..........................................................................

Tabel II. KomposisiPembuatan Seri Konsentrasi Ekstrak Batang Pepaya .......

Tabel III. Hasil Pengecatan Gram BakteriGram Bakteri..................................

Tabel IV. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Batang Pepaya terhadap

Pertumbuhan Streptobacillus, Staphylococcus, dan Streptococcus...

10

22

26

31


commit to user

xiv

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Tanaman Pepaya .............................................................................

Gambar 2. ......................................................

Gambar 3. Biakan Bakteri dari Plak Gigi ........................................................

Gambar 4. Hasil pengecatan Gram Bakteri ..................................................

Gambar 5. Pertumbuhan Koloni Pada Media Diferensial...............................

Gambar 6.Pengecatan Streptobacillus...........................................................

Gambar 7. Koloni Streptobacillus...................................................................

Gambar 8.Pengecatan Staphylococcus ...........................................

Gambar 9. Koloni Staphylococcus ..............................................................

Gambar 10.Pengecatan Streptococcus............................................................

Gambar 11. Koloni Streptococcus...................................................................

Gambar 12. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Batang Pepaya terhadap

Pertumbuhan Streptobacillus, Staphylococcus, dan

Streptococcus......................................................................................

5

15

26

27

28

28

28

29

29

29

29

33


commit to user

xv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1.Alur Cara Kerja Preparasi dan Ekstraksi Batang Pepaya .......... 40

Lampiran 2. Alur Cara Kerja Pengambilan Apusan Plak Gigi dan Isolasi

Bakteri ............................................................. 41

Lampiran 3.Alur Cara Kerja Pengecatan Gram Bakteri ............................... 42

Lampiran 4.Alur Cara Kerja Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol

Batang Pepaya terhadap Bakteri Hasil Isolasi dari Plak

Gigi.. .................................................................................... 43

Lampiran 5. Hasil Determinasi Tanaman Pepaya......................................... 44

Lampiran 6. Seri Konsentrasi Ekstrak Etanol Batang Pepaya ...................... 45

Lampiran 7. Pindahan Biakan Koloni Bakteri pada Plak Gigi ..................... 46

Lampiran 8. Hasil Pengecatan Gram Bakteri dari Plak Gigi ........................ 47

Lampiran 9. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Batang Pepaya

(Carica papaya Linn.) terhadap Streptobacillus Gram Positif 49

Lampiran 10. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Batang

Pepaya (Carica papaya Linn.) terhadapStaphylococcus

Gram Positif ............................................................................. 50

Lampiran 11. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Batang

Pepaya (Carica papaya Linn.) terhadap Streptococcus Gram

Positif ....................................................................................... 51


commit to user

xvi

DAFTAR SINGKATAN

µL : mikroliter

mm : milimeter

cm : centimeter

CMC-Na : Natrium Carboxymetilcellulose

DDH : Diameter Daya Hambat

LAF : Laminar Air Flow

MHA : Muller Hinton Agar

NA : Nutrient Agar

NB : Nutrient Broth

NaCl : Natrium Clorida


commit to user

1

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Masalah

Penyakit gigi dan mulut menduduki urutan pertama dari daftar 10 besar

penyakit yang paling sering dikeluhkan masyarakat Indonesia (Anonim,

2010).Plak gigi adalah suatu lapisan lunak yang terdiri atas kumpulan

mikroorganisme yang berkembang biak yang terbentuk dan melekat erat pada

permukaan gigi yang tidak dibersihkan,sehingga memicu munculnya penyakit

gigi dan mulut yang lain seperti karies (lubang gigi), kalkulus (karang gigi),

gingivitis (radang pada gusi), dan periodontitis (radang pada jaringan penyangga

gigi). Pembentukan plak tidak dapat dihindari sehingga mengurangi akumulasi

plak adalah hal yang sangat penting untuk mencegah terbentuknya panyakit gigi

dan mulut.

Pembentukan plak dapat dikontrol dengan penggunaan obat kumur dan

juga menyikat gigi. Tetapi penggunaan obat kumur memiliki beberapa

kekurangan antara lain diskolorisasi gigi dan lidah, gangguan pengecapan setiap

kali setelah berkumur, dan relatif mahal (Soeherwin, dkk., 2000). Sedangkan

kandungan flourida pada pasta gigi selama kurun waktu tertentu dan jumlah besar

memiliki efek samping fluorosis email yaitu email gigi yang berbintik-bintik.

Email gigi menjadi rapuh dengan warna cokelat kehitaman yang irreversible

karena telah mengenai jaringan keras gigi(Paine et al., 2001 dalam Asari, 2012).

Oleh karena itu, penggunaan bahan obat tradisional lebih dipilih karena harganya

relatif murah dan mudah didapatkan.Selain itu, obat tradisional memiliki efek


commit to user

2

samping, tingkat bahaya, dan resiko yang lebih rendah jika dibandingkan dengan

obat kimia.

Batang pepaya merupakan salah satu contoh bagian tanaman yang dapat

dimanfaatkan sebagai antibakteri. Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan

oleh Oladimeji et al. (2007), ekstrak etanol batang pepaya memiliki aktivitas

antibakteri secara in vitro terhadap bakteri Bacillus subtilis, Staphylococcus

aureus, Escherichia coli, Salmonella typhi, dan Klebsiella pneumonia dengan

metode difusi padat cakram berdiameter 6 mm. Hasil penelitian menunjukkan

bahwa kadar 1,5% dan 3% ekstrak etanol batang pepaya sudah mampu

menghambat pertumbuhan bakteri Bacillus subtilisdengan zona hambat sebesar

masing-masing 13,0 mm dan 14,0 mm, Staphylococcus aureus dengan zona

hambat sebesar 14,0 mm dan 15,0 mm, Escherichia coli dengan zona hambat

sebesar 11,5 mm dan 12,0 mm, Salmonella typhi dengan zona hambat sebesar

12,0 mm dan 13, 0 mm, dan Klebsiella pneumonia zona hambat sebesar 11,0 mm

dan 11,5 mm (Oladimeji et al., 2007).Hasil uji fitokimia pada batang pepaya

mengandung senyawa metabolit sekunder saponin, antrakuinon, alkaloid, tanin,

flavonoid.Diduga adanya senyawa saponin dan antrakuinon adalah senyawa yang

beraktivitas sebagai antibakteri (Oladimeji et, 1999, Setyawan, 2009).

Berdasarkan uraian di atas, peneliti terdorong untuk untuk melihat

bagaimana bentuk sel, susunan sel, dan sifat Gram dari bakteri yang diisolasi dari

plak gigi, mengetahui apakah ekstrak etanol batang pepaya (Carica papaya Linn.)

memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri yang terdapat pada plak gigi, dan

berapa konsentrasi optimum dalam menghambat pertumbuhannya.


commit to user

3

B. Rumusan Masalah

1. Bagaimana sifat Gram, bentuk, dan susunan sel dari bakteri pada plak gigi?

2. Apakah ekstrak etanol batang pepaya (Carica papaya Linn.) memiliki

aktivitas antibakteri terhadap bakteri pada plak gigi?

3. Berapa konsentrasi optimum ekstrak etanol batang pepaya (Carica papaya

Linn.) yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri pada plak gigi?

C. Tujuan

1. Mengetahui sifat Gram, bentuk, dan susunan sel dari bakteri pada plak gigi.

2. Mengetahui aktivitas antibakteri dari ekstrak etanol batang pepaya (Carica

papaya Linn.) terhadap bakteri pada plak gigi.

3. Mengetahui konsentrasi optimum ekstrak etanol batang pepaya (Carica

papaya Linn.) yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri pada plak

gigi.

D. Manfaat

1. Dapat memberi informasi tentang manfaat ekstrak batang papaya (Carica

papaya Linn.) terhadap bakteri pada plak gigi.

2. Dapat memberikan gambaran tentang pemanfaatan ekstrak batang papaya

(Carica papaya Linn.) sebagai bahan antiseptik mulut seperti obat kumur

atau pasta gigi.


commit to user

4

BAB II

LANDASAN TEORI

A. Tinjauan Pustaka

1. Pepaya

a. Klasifikasi

Kingdom : Plantae

Subkingdom : Tracheobionta

Superdivisio : Spermatophyta

Divisio : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Subkelas : Dilenidae

Ordo : Violales

Familia : Caricaceae

Genus : Carica

Spesies : Carica papaya

(Steenis, 1992).

Gambar 1. Tanaman Pepaya (Anonim, 2011).

b. Deskripsi Tanaman

Pepaya merupakan semak berbentuk pohon dengan batang lurus, bulat

silindris, di bagian atas bercabang atau tidak bercabang, sebelah dalam berupa

spons dan berongga, di luar terdapat tanda bekas daun yang banyak, tinggi

2,5 10 meter. Daun berjejal pada ujung batang dan ujung cabang, tangkai

daun bulat silindris, berongga, panjang 71 82 cm, helaian daun bulat telur,

bertulang daun menjari, bercangap menjari, ujung runcing, pangkal berbentuk


commit to user

5

jantung, garis tengah kurang lebih 70 cm, taju selalu berlekuk menyirip tidak

beraturan. Bunga berkelamin betina, daun mahkota 5, berlepasan, warna putih

kekuningan, bakal buah beruang satu, kepala putik 5, duduk (Steenis, 1992).

Sinonim: Pepaya (Indonesia) dan Kates (Jawa).

c. Kandungan Kimia dan Khasiat

Menurut (Krishna et al.,2008), kandungan beserta khasiat tanaman

pepaya adalah sebagai berikut:

1) Daun

Mengandung alkaloid carpain, pseudocarpain dan dehydrocarpain I

dan II, choline, carposide, vitamin C, dan E. Penggunaannya sebagai

antibakteri, asma, beri-beri dan demam serta membalut luka. Daun pepaya

muda digunakan sebagai sayuran.

2) Buah

Buah pepaya mengandung protein, lemak, serat, karbohidrat,

mineral, tiamin, riboflavin, niasin, karoten, vitamin C, dan komponen

-

glukosida, dan karpain.Buah pepaya masak penggunaannya sebagai

diuretik, karminatif, disentri, diare, dan ekspektoran.Sedangkan untuk

buah mentah penggunaannya sebagai laksatif, diuretik, dan antibakteri.

3) Biji

Biji pepaya mengandung asam lemak, protein kasar, serat kasar dan

minyak pepaya.Selain itu terkandung juga karpain, benzylisothiocyanate,

-sitosterol, karikin dan enzim mirosin.


commit to user

6

4) Batang

Batang pepaya mengandungsaponin, antrakuinon, alkaloid, tanin,

flavonoid(Oladimeji et, 1999, Setyawan, 2009).Getah pada batang pepaya

mengandung asam amino dan alkaloid, biasa digunakan digunakan sebagai

obat demam, keracunan, bengkak, dan kurap (Oladimeji et al., 2007).

2. Plak Gigi

Plak gigi adalah suatu lapisan lunak yang terdiri atas kumpulan

mikroorganisme yang berkembang biak dan melekat pada permukaan gigi yang

tidak dibersihkan. Plak gigi memegang peranan penting dalam suatu proses karies

dan inflamasi pada jaringan lunak gigi (Panjaitan, 1997).

Komposisi plak gigi adalah mikroorganisme.Lebih dari 500 spesies bakteri

ditemukan di dalam plak gigi. Bakteri bentuk bulat Gram positif merupakan jenis

yang paling banyak dijumpai seperti Streptococcus mutans, Streptococcus

sanguis, Streptococcus mitis, Streptococcus salivarius, Actinomyces viscosus dan

beberapa strain lainnya (Daliemunthe, 2008).

Faktor-faktor yang mempengaruhi terjadinya plak gigi:

a. Lingkungan fisik, meliputi anatomi gigi dan posisi gigi, anatomi jaringan

sekitar gigi, struktur permukaan gigi, gesekan oleh makanan dan jaringan

sekitar, tindakan kebersihan mulut.

b. Hadirnya nutrisi yang meliputi makanan, cairan gusi, sisa epitel dan

leukosit, saliva.

Dari faktor-faktor tersebut salah satu faktor yang terpenting adalah tindakan

kebersihan mulut (Sriyono, 2005).


commit to user

7

Kontrol plak gigi adalah pengangkatan plak gigi dan pencegahan

akumulasi plak pada gigi dengan cara semua plak gigi terangkat, jumlah plak gigi

bekurang sampai di bawah batas ancaman terjadinya penyakit akibat plak gigi dan

patogenesitas plak gigi hilang. Ada dua cara untuk mengontrol plak gigi yaitu

secara mekanis dan kimiawi. Cara mekanis dilakukan dengan cara menyikat gigi

sedangkan cara kimiawi dilakukan dengan menggunakan bahan kimia yang pada

umumnya dikombinasikan dalam bentuk sediaan pasta gigi dan obat kumur

(Addy, 1986, Haake et al., 2002).

3. Bakteri

Bakteri adalah organisme uniseluler yang tidak memiliki klorofil, sel

bakteri mirip dengan sel tumbuhan atau hewan terdiri atas sitoplasma dan dinding

sel. Bakteri berkembang biak dengan cara pembelahan diri, dan karena ukuran

yang renik ini bakteri hanya akan tampak dengan mikroskop (Dwijoseputro,

1994). Bentuk dan ukuran bakteri bervariasi ukuran berkisar 0,4 2 µm (Pelczar

dan Chan, 1988). Bakteri dapat diklasifikasikan berdasarkan morfologi, biokimia

dan perwarnaan (bakeri Gram positif dan bakteri Gram negatif).

Bakteri dapat didefinisikan secara morfologi yaitu dengan mempelajari

bentuk, ukuran dan susuan sel. Bentuk dasar bakteri, yaitu bulat (tunggal: coccus,

jamak: cocci), batang atau silinder tunggal: bacillus, jamak: bacilli), dan spiral

yaitu berbentuk melingkar-lingkar atau batang melengkung (Pratiwi , 2008).

Berdasarkan pewarnaan Gram, bakteri dibedakan menjadi bakteri Gram

positif dan Gram negatif.


commit to user

8

a. Bakteri Gram Negatif

Bakteri Gram negatif terdiri dari dinding sel yang mengandung satu

atau beberapa lapis peptidoglikan tipis dan membran luar, membran dalam

dan membran sitoplasma.

b. Bakteri Gram Positif

Bakteri Gram positif terdiri dinding sel yang mengandung banyak

lapisan peptidoglikan dengan membentuk struktur tebal dan kaku, membran

dalam, membran sitoplasma (Pratiwi, 2008).

4. Pewarnaan Gram Bakteri

Pewarnaan bakteri pada dasarnya adalah prosedur mewarnai bakteri

dengan menggunakan zat warna yang dapat menonjolkan struktur tertentu dari

bakteri yang akan diamati. Sebelum bakteri dapat diwarnai, bakteri tersebut harus

terlebih dahulu difiksasi agar terikat atau menempel pada kaca objek.Tanpa

adanya fiksasi, maka pemberian zat warna pada bakteri yang dilanjutkan

denganprosedur pencucian zat warna dengan air mengalir dapat menyebabkan

bakteri ikut tercuci.

Perbedaan warna antara bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif

disebabkan oleh adanya perbedaan struktur pada dinding selnya. Dinding bakteri

Gram positif mengandung lapisan peptidoglikan yang tebal, sedangkan dinding

bakteri Gram negatif memiliki tiga lapisan yaitu peptidoglikan yang tipis di

lapisan dalam, lipopolisakarida dan lipoprotein di lapisan luar (Irianto, 2002).

Reaksi dinding sel bakteri terhadap reagen yang digunakan dalam

pewarnaan Gram adalah sebagai berikut (Irianto, 2001):


commit to user

9

Tabel I. Reaksi Dinding Sel Bakteri terhadap Reagen yang Digunakan dalam Pewarnaan Gram Bakteri

No Reagen Reaksi Bakteri

Gram Positif Gram Negatif 1 Kristal Violet Sel berwarna ungu Sel berwarna ungu

2 Larutan iodium

Kompleks kristal violet-iodium terbentuk di dalam sel, sel tetap berwarna ungu

Kompleks kristal violet-iodium terbentuk di dalam sel, sel tetap berwarna ungu

3 Alkohol

Dinding sel mengalami dehidrasi, pori-pori menciut, komplek kristal violet-iodium tak dapat keluar dari sel, sel tetap berwarna ungu

Lipid terekstraksi dari dinding sel, pori-pori mengembang, kompleks kristal violet-iodium keluar dari sel, sel menjadi tak berwarna

4 Safranin Sel tak terpengaruhi, tetap berwarna ungu

Sel menyerap zat pewarna safranin, menjadi berwarna merah

5. Antibakteri

Antibakteri adalah senyawa atau zat yang dapat membunuh atau

menghambat pertumbuhan bakteri. Antibakteri harus bersifat toksisitas selektif,

artinya suatu obat berbahaya bagi parasit tetapi tidak membahayakan inang

(Ganiswarna S,G., 1995).

Berdasarkan sifat toksisitas selektif, antibakteri terbagi menjadi 2, yaitu

bakteriostatik (menghambat prtumbuhan bakteri) dan bekterisidal (membunuh

bakteri). Kadar minimal yang diperlukan untuk menghambat pertumbuhan bakteri

dikenal sebagai kadar hambat minimal (KHM), sedangkan kadar minimal yang

diperlukan untuk membunuh bakteri disebut dengan kadar bunuh minimal (KBM)

(Jawetz et al., 2007).


commit to user

10

Mekanisme kerja obat antibakteri:

a. Penghambatan sintesis dinding sel

Antibakteri ini bekerja pada dinding sel. Oleh karena tekanan osmotik

dalam sel bakteri lebih tinggi daripada diluar sel maka kerusakan dinding sel

bakteri akan menyebabkan terjadinya lisis.

b. Penghambatan fungsi membran sel

Sitoplasma semua sel hidup dibatasi oleh selaput sitoplasma, yang

bekerja sebagai penghalang dengan permeabilitas selekif, melakukan fungsi

pengangkutan aktif, dan dengan demikian mengendalikan susunan dalam dari

sel. Bila integritas fungsi selaput sitoplasma terganggu, makromolekuler dan ion

akan lolos dari sel, dan terjadilah kerusakan atau kematian sel.

c. Penghambatan sintesis protein

Antibakteri ini bekerja dengan mengganggu sintesis protein yang

dilakukan oleh mRNA dan tRNA yang berlangsung di ribosom.

d. Penghambatan sintesis asam nukleat

Antibakteri ini bekerja menghambat sintesis RNA bakteri atau DNA

bakteri (Jawetz et al., 2007).

6. Uji aktivitas Antibakteri

Uji aktivitas antibakteri antara lain:

a. Metode Difusi

Metode difusi dapat dilakukan 3 cara yaitu metode silinder, lubang dan

cakram kertas. Metode silinder yaitu meletakkan beberapa silinder yang terbuat

dari gelas atau besi tahan karat di atas media agar yang telah diinokulasi


commit to user

11

dengan bakteri. Tiap silinder ditempatkan sedemikian rupa hingga berdiri di

atas media agar, diisi dengan larutan yang akan diuji dan diinkubasi. Setelah

diinkubasi, pertumbuhan bakteri diamati untuk melihat ada tidaknya daerah

hambatan di sekeliling silinder.Metode lubang yaitu membuat lubang pada agar

padat yang telah diinokulasi dengan bakteri. Jumlah dan letak lubang

disesuaikan dengan tujuan penelitian, kemudian lubang diisi dengan larutan

yang akan diuji. Metode cakram kertas yaitu meletakkan cakram kertas yang

telah direndam larutan uji di atas media padat yang telah diinokulasi dengan

bakteri (Kusmiyati, 2007).

Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan dengan mengukur zona

hambat yang berwarna bening.Makin besar zona hambatan, makin besar

aktivitas antibakteri isolat tersebut(Jawetz et al., 2007).

Macam-macam zona hambat:

1) Zona Radikal

Merupakan suatu daerah di sekitar disk dimana sama sekali

tidak ditemukan pertumbuhan bakteri. Potensi antibakteri tersebut

diukur dengan menggunakan diameter zona radikal tersebut.

2) Zona Irrradikal

Merupakan suatu daerah di sekitar disk dimanaterlihat

pertumbuhan yang kurang subur dibanding dengan daerah di luar

pengaruh antibakteri tersebut (Pelczar et al., 1988).

Menurut Davis dan Stout (1971) bila diameter daerah hambatan 5 mm

atau kurang maka aktivitas penghambatannya dikategorikan lemah, 5-10 mm


commit to user

12

dikategorikan sedang, 10-19 mm dikategorikan kuat, dan 20 mm atau lebih

dikategorikan sangat kuat.

b. Metode Dilusi

Metode kuantitatif untuk mengukur kepekaan dari agen antibakteri

yaitu dengan tes Minimal Inhibitory Concenctration (MIC), dimana

menentukan konsentrasi terrendah dari agen antibakteri yang akan

menghambat pertumbuhan secara in vitro. Dalam tes MIC, sebuah seri

pengenceran dari satu agen antibakteri disiapkan dalam broth. Setelah 24 jam

diinkubasi dengan temperatur 37ºC, dilusi tertinggi dimana tidak ada

pertumbuhan yang terlihat dicatat sebagai MIC (Anonim, 1993).

7. Ekstrak

Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat

aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang

sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan (Anonim, 1995).

Metode pembuatan ekstrak yang umum digunakan antara lain maserasi,

perkolasi, Soxhletasi, dan infundasi. Metode ekstraksi dipilih berdasarkan

beberapa faktor seperti sifat dari bahan dan penyesuaian dengan tiap macam

metode ekstraksi dan kepentingan dalam memperoleh ekstrak yang sempurna

(Ansel, 1989).

Maserasi merupakan proses paling tepat untuk simplisia yang sudah halus

dan memungkinkan direndam hingga meresap dan melunakkan susunan sel,

sehingga zat-zatnya akan larut (Ansel, 1989). Pada umumnya maserasi dilakukan

dengan cara 10 bagian simplisia dengan derajat kehalusan tertentu dimasukkaan


commit to user

13

dalam bejana bermulut lebar, kemudian dituang dengan 75 bagian cairan penyari.

Metode ini memiliki keuntungan yaitu cara pengerjaan yang mudah, alat yang

digunakan sederhana, cocok untuk bahan yang tidak tahan pemanasan namun

pelarut yang digunakan dalam jumlah banyak. Sedangan kerugiannya yaitu

diperlukan waktu pengerjaan yang lama dan hasil penyariannya kurang sempurna

(Anonim, 1986).Maserasi dilakukan dengan serbuk ditempatkan lalu ditambah

pelarut dan ditutup rapat, isinya diaduk berulang-ulang kemudian disaring. Proses

ini dilakukan pada temperatur kamar selama tiga hari (Ansel, 1989).

B. Kerangka Pemikiran

Plak gigi merupakan penyebab penyakit gigi dan mulut yang

pembentukannya dapat dikontrol dengan obat kumur dan menggosok gigi, tetapi

memiliki kekurangan dan efek samping, sehingga diperlukan adanya penggunaan

bahan obat tradisional dengan efek samping yang rendah.

Batang pepaya (Carica papaya Linn.) merupakan salah satu bagian

tumbuhan yang memiliki khasiat antibakteri dengan diketahui pada penelitian

sebelumnya bahwa ekstrak batang pepaya dapat menghambat pertumbuhan

bakteri Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella

typhi, dan Klebsiella pneumonia.Batang pepaya mengandung senyawa saponin

dan antrakuinon yang berperan dalam aktivitas antibakteri.

Penelitian ini akan dilakukan dengan mengisolasi bakteri dari plak gigi,

membuat ekstrak batang pepaya dengan cara maserasi menggunakan etanol 95%,

kemudian ekstrak batang pepaya dilakukan uji aktivitas antibakteri terhadap

bakteri hasil isolasi dari plak gigi.


commit to user

14

Alur kerangka pemikiran dapat dilihat pada Gambar 2.

Gambar 2. Alur Kerangka Pemikiran.

C. Keterangan Empiris

Tanaman pepaya (Carica papaya Linn.) dapat digunakan sebagai obat

tradisonal.Secara empiris, getah pada batang pepaya dapat dimanfaatkan sebagai

antibakteri, obat demam, keracunan, bengkak, dan kurap.

Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan oleh Oladimeji dkk. (2007),

ekstrak etanol batang pepaya memiliki aktivitas antibakteri secara in vitro

terhadap bakteri Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli,

Salmonella typhi, dan Klebsiella pneumonia (Oladimeji dkk., 2007). Hasil

Antibakteri Alternatif

Aktivitas Antibakteri Metode Difusi Padat

Pewarnaan Gram Bakteri

Bakteri Gram Positif

Bakteri Gram Negatif

Isolasi Bakteri Apusan Plak Gigi

Plak Gigi

Simplisia

Ekstrak Etanol Batang Pepaya(Carica papaya Linn.)

Maserasi dengan Etanol 95%

Batang Pepaya (Carica papaya Linn.)


commit to user

15

tersebut karena batang pepaya mengandung tanin, alkaloid, dan flavonoid yang

diduga memiliki aktivitas antibakteri.


commit to user

16

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

A. Kategori Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian eksploratif laboratorium dengan

melakukan isolasi bakteri dari apusan plak gigi, mengamati sifat morfologinya

dengan melakukan pengecatan Gram bakteri, dan menguji aktivitas antibakteri

ekstrak etanol batang pepaya (Carica papaya Linn.) terhadap isolasi bakteri

tersebut dengan menggunakan metode difusi padat.

B. Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dilakukan selama 5 bulan di Laboratorium Biologi Pusat Sub

Lab Mikrobiologi UNS dan Labroratorium Teknologi Farmasi FMIPA UNS.

C. Alat dan Bahan

1. Alat

Alat yang digunakan untuk untuk membuat ekstrak batang pepaya

adalah timbangan analit(Mettler Toledo®), toples kaca, pengaduk kayu, kain

flanel, gelas beker(Pyrex®), corong kaca, gelas ukur(Pyrex®), labu

ukur(Pyrex®), alat penggiling, ayakan nomor 40 dan 60, batang pengaduk,

cawan porselen, rotary evaporator (Bibby RE 200®), waterbath, eksikator.

Alat untuk preparasi alat dan pembuatan media adalah erlenmeyer

(Pyrex®), gelas ukur (Pyrex®), batang pengaduk, timbangan analit (Mettler

Toledo®), autoklaf(Sturdy®), Laminar Air Flow (LAF)cabinet

(Labconco®),oven(Memmert®).


commit to user

17

Alat untuk pengambilan apusan, pembiakan, dan isolasi bakteri uji

adalah flakon, cotton bud steril, handscoon, masker, bunsen burner, jarum

ose, inkubator (P-Selecta®), cawan petri, tabung reaksi(Pyrex®), Laminar Air

Flow (LAF)cabinet (Labconco®), rak tabung reaksi, kertas label, jarum ose,

object glass, degglass,pipet tetes, gelas beker(Pyrex®), spidol, mikroskop

(Olympus CX-21®).

Alat yang digunakan dalam pengecatan Gram bakteri adalah kertas

label, spidol,handscoon, masker, jarum ose, object glass, degglass, tabung

reaksi (Pyrex®), pipet tetes, bunsen burner, mikroskop(Olympus CX-21®).

Alat yang digunakan untuk uji aktivitas antibakteri adalah shaker

(IKA Labortechnik®), erlenmeyer (Pyrex®), flakon, rak tabung reaksi, tabung

reaksi(Pyrex®), cawan petri, jarum ose, yellow tip, mikro pipet, bunsen

burner, gelas ukur, pelubang gabus, autoklaf (Sturdy®), Laminar Air Flow

(LAF) cabinet(Labconco®), inkubator suhu 4°C (J.P. SELECTA Hotcold

M®), inkubator suhu 37°C (J.P. SELECTA Hotcold M®), jangka sorong.

2. Bahan

Bahan utama yang digunakan adalah batang pepaya (Carica papaya

Linn.) dengan bahan penyari etanol 95% untuk ekstraksi.

Bakteri uji yang digunakan adalah bakteri dari apusan plak gigi yang

diambil dari pasien oleh Dokter Gigi di Medical Centre (MC) UNS.

Bahan yang digunakan dalam pengambilan apusan, kultur, dan isolasi

bakteri uji antara lain alkohol 70%, cotton bud steril, larutan garam fisiologis

(NaCl 0,9%), cat gram A (kristal violet), cat gram B (lugol atau iodin), cat


commit to user

18

gram C (etanol 96%), cat gram D (safranin), tissue, akuades, media NA

(Nutriebt Agar) (Merck®), media agar darah.

Bahan yang digunakan pada isolasi dan uji aktivitas antibakteri yaitu

ekstrak etanol batang pepaya (Carica papaya Linn.), NB (Nutrient Broth)

(Merck®), media MHA (Muller Hinton Agar) (Merck®), suspensi CMC-Na

0,1 %, antibiotik spektrum luas (Amoksisilin 0,03%), etanol 95%, akuades,

kapas.

D. Cara Kerja

1. Determinasi Tanaman

Determinasi tanaman pepaya (Carica papaya Linn.) dilakukan di

Lembaga Penelitian dan Pengabdian pada Masyarakat (LPPM) Universitas Setia

Budi Surakarta.

2. Preparasi dan Ekstraksi

Batang pepaya dicuci bersih di bawah air mengalir, dipotong tipis,

dijemur di bawah matahari dengan ditutup kain warna hitam, simplisia batang

pepaya kering diserbuk dengan menggunakan mesin penggiling.

Metode penyarian yang digunakan adalah maserasi, yaitu serbuk

simplisia batang pepaya sebanyak 1 kg dimasukkan dalam toples kaca dan

ditambahkan etanol 95% hingga terendam selama 3 hari tanpa diganti pelarutnya

sambil sesekali diaduk. Maserat yang didapat disaring dengan menggunakan kain

flanel.Filtrat yang didapat dipisahkan pelarutnya dengan rotary

evaporator.Setelah itu dipekatkan dengan menggunakan waterbath sampai

didapatkan ekstrak kental, ekstrak ditimbang dan disimpan dalam


commit to user

19

eksikator.Diagram alir preparasi sampel dan ekstraksi dapat dilihat pada

Lampiran 1.

3. Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak Batang Pepaya

a. Penyiapan Alat

Alat yang akandigunakan dalam uji aktivitas antibakteri disterilisasi

b. Pembuatan Media

Media NA dibuat dengan cara melarutkan 2 gram NA dalam 100ml

akuades. Media NB dibuat dengan cara melarutkan 0,8 gram NB dalam 100 ml

akuades. Media MHA dibuat dengan cara melarutkan 38 gram bubuk media

MHA dilarutkan dalam 1 liter akuades. Pembuatan semua media dilakukan

dengan memanaskan akuades di atas penangas dan kemudian dicampur dengan

serbuk media.Selanjutnyamedia disterilisasi menggunakan autoklaf selama 15

menit pada suhu 1210Cdan tekanan 1 atm.

c. Pengambilan Apusan Plak Gigi dan Isolasi Bakteri

Plak gigi diambil dari pasien secara aseptis. Plak diambil dengan cara

mengusap plak gigi menggunakan cotton bud steril, dilarutkan ke dalam NaCl

fisiologis steril, dikultur pada media NA dengan metode streak dan kemudian

diinkub

gigi dan isolasi bakteri dapat dilihat pada Lampiran 2.

d. Pengecatan Gram Bakteri

Object glass yang bersih diteteskan 1 tetes akuades di daerah bulatan

berdiameter ± 1cm, kemudian diambil 1 ose biakan bakteri diletakkan di daerah


commit to user

20

bulatan, lalu diratakan.Object glass dilakukan fiksasi, yaitu melewatkannya di

atas nyala api hingga noda akuades mengering.

Preparat ditetesi cat gram A dan dibiarkan 1-3 menit, cat gram A

dibuang, dicuci di bawah air mengalir dan dikeringkan. Preparat digenangi cat

gram B dan dibiarkan selama 1 menit kemudian dicuci dengan air mengalir dan

dikeringkan. Object glass dimiringkan dan ditetesi cat gram C selama 30 detik

atau hingga warna hilang, kemudian dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan.

Preparat digenangi cat gram D dan dibiarkan selama 2 menit kemudian dicuci

dengan air mengalir dan dikeringkan.Preparat diamati di bawah mikroskop untuk

mengetahui jenis Gram pada bakteri yaitu berwarna ungu untuk bakteri Gram

positif dan merah untuk bakteri Gram negatif.Diagram alir pengecatan Gram

dapat dilihat pada Lampiran 3.

e. Pembuatan Stok Bakteri

Bakteri hasil pemisahan koloni dan pengecatan Gram, diambil tiap koloni

tunggal untuk dibuat stok bakteri dengan cara menanam 1 ose bakteri pada media

NA miring dalam tabung reaksi. Kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu

f. Pembuatan Suspensi Bakteri

Dari stok bakteri diambil 1-2 ose dicampurkan ke dalam 25 ml media NB

untuk kemudian diinkubasi selama 24 jam.


commit to user

21

g. Pembuatan Suspensi CMC-Na 0,1%

0,05 gram CMC-Na dilarutkan ke dalam 50 ml akuades dan kemudian

disterilkan dengan menggunakan autoklaf selama 15 menit pada suhu 1210Cdan

tekanan 1 atm.

h. Pembuatan Seri Konsentrasi Ekstrak Etanol Batang Pepaya

Ekstrak etanol dibuat konsentrasi 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%,

70%, 80%, 90%, dan 100% dengan cara melarutkan sejumlah ekstrak batang

pepaya ke dalam suspensi CMC-Na sampai volume 3 ml. Adapun komposisinya

adalah sebagai berikut:

Tabel II. KomposisiPembuatan Seri Konsentrasi EkstrakBatang Pepaya Konsentrasi (%)

(b/v) Ekstrak Batang Pepaya

(gram) CMC-Na 0,1%

(mL) 10 0,3 sampai 3 20 0,6 sampai 3 30 0,9 sampai 3 40 1,2 sampai 3 50 1,5 sampai 3 60 1,8 sampai 3 70 2,1 sampai 3 80 2,4 sampai 3 90 2,7 sampai 3 100 3 sampai 3

i. Pembuatan Larutan Kontrol

Kontrol yang digunakan pada uji aktivitas antibakteri ini terdiri atas

kontrol larutan CMC-Na 0,1%, kontrol etanol 95 %, dan kontrol antibiotik

Amoksisilin 0,03 %.

j. Uji Aktivitas Antibakteri

Uji aktivitasantibakteri dilakukan dengan metode difusi padat dengan

langkah sebagai berikut:


commit to user

22

1) Media MHA disterilisasi di autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit

kemudian dibiarkan hingga mencapai suhu ±40°C.

2) Suspensi bakteri diambil 1% dari volume total MHA dan dicampurkan ke

dalam media MHA yang bersuhu ±40°C kemudian dihomogenkan.

3) Media dituangke dalam cawan petri sebanyak 15 ml dan dibiarkan

memadat.

4) Membuat lubang sumuran dengan menggunakan pelubang gabus dengan

diameter lubang sebesar 6 mm.

5) Memasukkan 25µL seri konsentrasi ekstrak ke dalam masing-masing

lubang, kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Sebagai

kontrol digunakan masing-masing 25µL kontrol etanol 95%, CMC-Na, dan

antibiotikAmoksisilin 0,03%.

6) Mengukur diameter daya hambat dengan replikasi sebanyak 2 kali tiap

lubang dengan 3 kali pengukuran menggunakan jangka sorong, kemudian

nilainya dirata-rata.

Diagram alir pengujian aktivitas antibakteri dapat dilihat pada Lampiran 4.

4. Analisis Data

Data yang diperoleh dari penelitian ini ada dua yaitu bakteri hasil isolasi

dari plak gigi beserta sifat Gram, bentuk, dan susunan selnya.Data kedua berupa

diameter daya hambat pertumbuhan dari masing-masing bakteri uji terhadap seri

konsentrasi ekstrak etanol batang pepaya (Carica papaya Linn.).Makin besar

diameter daya hambat menunjukkan bahwa ekstrak etanol batang pepaya(Carica

papaya Linn.) memiliki aktivitas antibakteri yang semakin kuat.


commit to user

23

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Pengumpulan dan Determinasi Tanaman

Batang pepaya diambil dari perkebunan pepaya di Kecamatan Teras

Kabupaten Boyolali, kemudiandilakukan determinasi tanaman di Lembaga

Penelitian dan Pengabdian pada Masyarakat (LPPM) Universitas Setia Budi

Surakarta untuk memastikan kebenaran sampel tanaman pepaya dengan

mencocokkan ciri-ciri morfologis yang ada pada batang pepaya (Carica

papayaLinn.) terhadap acuan pustaka

bahwa jenis tanaman yang diteliti adalah benar Carica papayaLinn., sehingga

tidak terjadi kesalahan dalam pemilihan bahan sampel.Hasil determinasi dapat

dilihat pada lampiran 5.

B. Ekstraksi Batang Pepaya

Sebanyak 10,5kg batang pepaya disortasi basah, yaitu memisahkan batang

pepaya dari pengotor-pengotor, kemudian dicuci di bawah air mengalir, diiris

tipis, dikeringkan, dan dijemur di bawah sinar matahari secara tidak langsung

yaitu dengan ditutup kain hitam. Hal tersebut dilakukan agar pemanasan lebih

maksimal, cepat, dan juga menghindari terjadinya kerusakan bahan karena sinar

UV. Tujuan pengeringan adalah untuk mengurangi kadar air sehingga

pertumbuhan jamur dan mikroorganisme dapat dicegah, menghentikan reaksi

enzimatis, serta mencegah terjadinya perubahan kimiawi dalam sel. Selanjutnya

simplisia diserbuk dengan cara digiling. Pembuatan serbuk bertujuan memperluas

permukaan simplisia sehingga kontak antara permukaan simplisia dengan cairan


commit to user

24

penyari menjadi lebih besar.Serbuk simplisia dikemas dan diperoleh sejumlah

1,4kg.

Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi.Serbuk simplisia sebanyak

1kg dimaserasi dengan menggunakan pelarut etanol 95% selama 3 hari dengan

sesekali diaduk agar kontak antara pelarut dan serbuk simplisia terjadi lebih

optimal. Pengadukan dapat membantu kontak pelarut dengan rongga sel

tumbuhan, sehingga senyawa-senyawa yang terkandung didalamnya dapat ditarik

keluar oleh pelarut (Darwis, 2000).Etanol merupakan pelarut yang tidak selektif,

sehingga dengan menggunakan etanol diharapkan metabolit sekunder yang ada di

dalam simplisia sebagian besar terambil.Etanol merupakan pelarut universal yang

baik untuk ekstraksi semua golongan senyawa metabolit sekunder (Kristanti,

2008). Penggunaan konsentrasi 95% berdasarkan penelitian Oladimeji et al.,

(2007) bahwa ekstrak batang pepaya dengan pelarut etanol 95% dapat

menghambat pertumbuhan beberapa jenis bakteri.

Hasil maserasi disaring menggunakan kain flanel dan diuapkan pelarutnya

menggunakan rotary evaporator dan dipekatkan di atas waterbath sehingga

didapatkan ekstrak kental sebanyak 52,34 gram berupa pasta lengket, berbau khas,

dan berwarna hijau kehitaman. Ekstrak yang didapat disimpan di eksikator.

C. Pengambilan Apusan Plak Gigi, Kultur, dan Isolasi Bakteri

Pengambilan apusan plak dari gigi pasien dilakukan dengan bantuan

Dokter Gigi di Medical Centre UNS. Plak yang didapat kemudian dilarutkan

dalam larutan NaCl fisiologis (NaCl 0,9%) yang bertujuan untuk menumbuhkan

dan mengaktifkan bakteri yang terdapat pada plak gigi. Suspensi plak ini


commit to user

25

dikulturkan pada media NA dengan metode streak dan diinkubasi selama 24 jam

. Hasil inkubasi dapat dilihat pada Gambar 3.

Gambar 3.Biakan Bakteri dari Plak Gigi. Keterangan : a, b, c, d, e, f, g adalah Koloni yang Diambil untuk Dibuat Kultur Lanjutan

pada Media yang Terpisah.

Dari kultur bakteri di atas, dilakukan pengamatan terhadap bentuk dan

warna koloninya, kemudian dipindahkan dan dibiakkan menjadi 7 kultur terpisah

pada media NA. Selanjutnya, untuk mengetahui bentuk sel dan sifat Gram dari

koloni yang telah dipisah, dilakukan pengecatan Gram. Hasil pengecatan Gram

dari 7 kultur bakteri tersebut adalah sebagai berikut:

Tabel III. Hasil Pengecatan Gram Bakteri

Tabung Hasil Pengecatan Bentuk sel Susunan Sel Sifat Gram

1 Bulat Bulat

Bergerombol Berderet

+ +

2 Bulat Bulat


+ +

3 Bulat Bulat


+ +

4 Bulat Bulat


+ +

5 Bulat Berderet +

6 Bulat Batang

Berderet Berderet

+ +

7 Bulat Berderet +


commit to user

26

Sesuai Pratiwi (2008), penamaan bakteri bentuk bulat berderet adalah

Streptococcus, bakteri bentuk bulat bergerombol adalah Staphylococcus, dan

bakteri bentuk batang berderet adalah Streptobacillus.

(a)

(b) (c) Gambar 4.Hasil Pengecatan Gram Bakteri.

Keterangan: a. Dua jenis bakteri yaitu Streptococcus danStaphylococcus. b. Dua jenis bakteri yaitu Streptobacillus dan Streptococcus. c. Satu jenis bakteri yaitu Streptobacillus. Koloni yang masih bercampur dilakukan pemisahan untuk mendapatkan

koloni tunggal dengan menggunakan media agar darah dan NA.Media agar darah

adalah media diferensial yang digunakan untuk membedakan Streptococcus dan

Staphylococcus.Di mana menurut Jawetz et al (2005), Streptococcus mempunyai

sifat spesifik mampu menghemolisa darah sehingga pada media agar ini

pertumbuhan bakteri dapat diamati yaitu dengan adanya zona bening di sekitar

pertumbuhan koloni bakteri.Sedangkan Staphylococcus bentuk bulatbergerombol

tidak memiliki kemampuan untuk menghemolisa darah.

Campuran bakteri Streptobacillus dengan Streptococcus dipisahkan

menggunakan media NA, karena pada media ini Streptobacillus menunjukkan

bentuk dan warna koloni yang spesifikdengan tepian yang berombak seperti

ditunjukkan pada Gambar 5.


commit to user

27

(a)

(b) Gambar 5.Pertumbuhan (a) Koloni pada Media Agar Darah (Streptococcus dan

Staphylococcus) dan (b) Pertumbuhan Koloni pada Media NA (Streptobacillus dan Streptococcus).

Setelah didapatkan koloni tunggal kemudian dibuat stok bakteri pada

an

morfologi bakteri dari hasil isolasi adalah sebagai berikut:

1. Bakteri Streptobacillus.

Gambar 6. Pengecatan StreptobacillusPerbesaran 1000x

Gambar 7. Koloni Streptobacillus

Bentuk dan susunan sel : Batang dan berderet

Bentuk koloni : Bulat dengan tepian bergelombang

Warna koloni : Krem keputihan

Hasil Pengecatan : Ungu ( sifat Gram positif).


commit to user

28

2. Bakteri Staphylococcus.

Gambar 8. Pengecatan Staphylococcus Perbesaran 1000x

Gambar 9. Koloni Staphylococcus

Bentuk dan susunan sel : Bulat dan bergerombol

Bentuk koloni : Bulat dengan tepian rata

Warna koloni : Krem keputihan

Hasil Pengecatan : Ungu (sifat Gram positif).

3. Bakteri Streptococcus.

Gambar 10. Pengecatan Streptococcus Perbesaran 1000x

Gambar 11. Koloni Streptococcus.

Bentuk dan susunan sel : Bulat dan berderet

Bentuk koloni : Bulat dengan tepian rata

Warna koloni : Putih kekuningan

Hasil Pengecatan : Ungu (sifat Gram positif).


commit to user

29

Melalui pengecatan Gram, bakteri dikelompokkan menjadi 2 sifat Gram

yaitu Gram positif dan Gram negatif.Prinsip dari pengecatan Gram adalah

kemampuan dinding sel bakteri mengikat zat warna yang didasarkan pada

perbedaan struktur dinding sel bakteri.Pada bakteri Gram positif memiliki lapisan

peptidoglikan yang tebal dan kandungan lemak yang tipis, sementara pada dinding

sel bakteri Gram negatif memiliki lapisan peptidoglikan yang tipis dan lapisan

lemak yang tebal (Beveridge, 1999).

Terdapat 4 tahap pewarnaan Gram yaitu pertama, pemberian pewarnaan

dasar kristal violet, semua sel akan berwarna ungu. Kedua, pemberian warna

penguat yaitu iodium, terbentuk komplek kristal violet-iodium sehingga sel tetap

berwarna ungu. Ketiga, pemberian pencuci warna dasar yaitu alkohol, untuk Gram

positif dinding sel mengalami dehidrasi, pori-pori menciut, komplek kristal violet-

iodium tak dapat keluar dari sel, sel tetap berwarna ungu, sedangkan bakteri Gram

negatif lipid terekstraksi dari dinding sel, pori-pori mengembang, kompleks kristal

violet-iodium keluar dari sel, sel menjadi tak berwarna. Keempat, pemberian

pewarna pembanding untuk menggantikan warna dasar dengan diberikan safranin.

Gram positif tidak terwarna karena tetap mempertahankan warna ungu, Gram

negatif akan menyerap zat pewarna sehingga berwarna merah (Irianto, 2001).

D. Uji Aktivitas Antibakteri

Ekstrak etanol batang pepaya dibuat seri konsentrasi 10-100% dengan

melarutkannya ke dalam suspensi CMC-Na 0,1 % sampai volume 3 mL. Ekstrak

etanol mempunyai sifat sukar larut dalam pelarut air, maka diperlukan suspending

agent agar didapatkan suatu suspensi yang baik yaitu dengan menambahkan


commit to user

30

CMC-Na.Pengujian ini menggunakan 2 kontrol yaitu kontrol pelarut (etanol 95%

dan CMC-Na 0,1%) dan kontrol antibiotik (Amoksisilin 0,03%). Amoksisilin

dengan kadar 0,03% sesuai dengan penelitian Castillo, ddk., (2006)yang

menyatakan bahwa Amoksisilin 0,03% dapat menghambat pertumbuhan beberapa

bakteri Streptococcus.

Bakteri dari stok dibuat suspensi dengan cara mengkulturkan bakteri ke

dalam media NB yang selanjutnya diinkubasi pada suhu 37

aktivitas antibateri dilakukan menggunakan metode difusi agar dalam media

MHA terhadap bakteri hasil isolasi yaitu Streptobacillus, Staphylococcus, dan

Streptococcus.Uji aktivitas antibakteri menghasilkan daerah hambatan di sekitar

sumuran yang menunjukkan ada tidaknya aktivitas antibakteri dari masing-masing

konsentrasi ekstrak.Kuat lemahnya aktivitas ini dapat dilihat dari diameter daerah

hambatan seperti yang tercantum pada tabel IV.

Tabel IV. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Batang Pepaya terhadap Pertumbuhan Streptobacillus, Staphylococcus, dan Streptococcus.

Konsentrasi (%b/v) Diameter Daya Hambat (mm)

Streptobacillus Straphylococcus Streptococcus

Radikal Irradikal Radikal Irradikal 10 - - - 11,26 6,91 20 - - - 14,96 5,84 30 - - - 17,67 7,39 40 - 11,67 - 18,09 8,42 50 3,73 12,83 - 19,34 9,79 60 3,55 13,84 - 17,97 10,64 70 3,86 14,98 - 20,15 10,35 80 4,11 13,52 2,02 23,09 12,36 90 4,83 15,03 0,78 21,17 12,85 100 5,46 16,78 - 17,04 12,62

Larutan Kontrol CMC-Na 0,1 % - - - - -

Etanol 95% - - - - - Amoksisilin 0,03% 7,17 - 3,29 - 33,89

Keterangan : : Diameter daya hambat terbesar.


commit to user

31

Hasil di atas menunjukkan bahwa ekstrak batang pepaya memiliki

aktivitas antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri Streptobacillus,

Staphylococcus, dan Streptococcus yang diambil dari plak gigi.Ekstrak batang

pepaya menghasilkan dua zona hambatan yaitu radikal dan irradikal terhadap

pertumbuhan Streptobacillus dan Staphylococcus sedangkan hanya satu daerah

hambatan pada Streptococcus yaitu radikal.Zona radikal yaitu suatu daerah di

sekitar sumuran di mana sama sekali tidak ditemukan adanya pertumbuhan bakteri

dengan ditandai adanya zona bening. Zona irradikal yaitu suatu daerah di sekitar

sumuran terlihat pertumbuhan yang kurang subur dibanding dengan daerah di luar

pengaruh ekstrak tersebutdan tidak terbentuk zona bening.Potensi antibakteri

diukur dengan mengukur diameter dari zona radikal (Anonim, 1993).

Ketentuan kekuatan daya antibakteri yaitu daerah hambatan 20 mm atau

lebih termasuk kategori sangat kuat, daerah hambatan 10-20 mm kategori kuat,

daerah hambatan 5-10 mm kategori sedang, dan daerah hambatan 5 mm atau

kurang termasuk kategori lemah(Davis dan Stout, 1971). Ekstrak batang pepaya

terhadap pertumbuhan Streptobacillus memiliki daya antibakteri kategori sedang

karena terbentuk zona radikal yaitu pada konsentrasi 100% dengan diameter daya

hambat 5,46 mm dan zona irradikal sebesar 16,78 mm. Ekstrak batang pepaya

terhadap pertumbuhan Staphylococcus memiliki kategori lemah yaitu pada

konsentrasi 80% dengan diameter daya hambat sebesar 2, 02 mm dan zona

irradikal sebesar 23,09 mm. Ekstrak batang pepaya terhadap pertumbuhan

Streptococcus memiliki daya antibakteri kuat yaitu pada konsentrasi 90% dengan

diameter daya hambat sebesar 12,85 mm. Larutan kontrol (etanol 95% dan CMC-


commit to user

32

Na 0,1%) tidak menunjukkan adanya diameter daya hambat, sehingga aktivitas

antibakteri ekstrak batang pepaya tidak dipengaruhi oleh pelarut-pelarut tersebut.

Kontrol antibiotik amoksisilin 0,03% memiliki diameter daya hambat sebesar

7,17mm terhadap Streptobacillus yang merupakan kategori sedang, terhadap

Staphylococcus diameter daya hambat sebesar 3,29 mm yang termasuk kategori

lemah, dan terhadap Streptococcus memiliki diameter daya hambat sebesar

33,89mm yang termasuk golongan kuat. Daya hambat amoksisilin kecil karena

dilarutkan ke dalam akuades steril, sedangkan menurut (Anonim, 1995),

amoksisilin sukar larut dalam air, sehingga daya hambat yang ditimbulkan kecil

karena digunakan akuades dalam melarutkannya.

Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak batang pepaya terhadap pertumbuhan

Streptobacillus, Staphylococcus, dan Streptococcus dapat dilihat pada Gambar 12.

(a) (b) (c) Gambar 12. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Batang Pepaya terhadap Pertumbuhan

(a) Streptobacillus, (b) Staphylococcus, dan (c) Streptococcus.

Pada umumnya, diameter daya hambat memiliki kecenderungan

meningkat dengan meningkatnya konsentrasi ekstrak, akan tetapi terhadap bakteri

bentuk bulat bergerombol dan bulat berderet, konsentrasi besar mengalami

penurunan diameter daya hambat. Hal ini dapat terjadi karena adanya perbedaan


commit to user

33

kecepatan difusi senyawa antibakteri pada media agar (Ambarwati, 2007, Noor

dkk., 2006).

Sesuai hasil di atas dapat dikatakan bahwa ekstrak batang pepaya mampu

menghambat pertumbuhan ketiga bakteri uji, yaitu Streptobacillus,

Staphylococcus, dan Streptococcus yang diambil dari plak gigi.Dengan demikian

dapat ekstrak batang pepaya mampu menghambat bakteri bentuk bulat maupun

batang dengan susunan yang berbeda pula.Sehingga ekstrak batang pepaya

berpotensi digunakan sebagai antibakteri alami atau sebagai bahan antiseptik

mulut alami pengganti bahan obat sintesis dalam obat kumur atau pasta gigi.


commit to user

34

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

1. Pada plak gigi terdapat beberapa bakteri yaitu bakteri Streptobacillus Gram

positif, Staphylococcus Gram positif, dan Streptococcus Gram positif.

2. Ekstrak etanol batang pepaya (Carica papaya Linn.) memiliki efek

antibakteri terhadap bakteri pada plak gigi.

3. Konsentrasi ekstrak etanol batang pepaya yang optimum menghambat bakteri

pada plak gigi adalah konsentrasi 100% terhadap Streptobacillus, konsentrasi

80% terhadap Staphylococcus, dan konsentrasi 90% terhadap Streptococcus.

B. Saran

1. Perlu dilakukan identifikasi lebih lanjut mengenai isolasi bakteri dari plak

gigi hingga didapat macam-macam spesies bakteri.

2. Perlu dilakukan partisi, isolasi, dan purifikasi terhadap golongan senyawa

ekstrak etanol batang pepaya untuk mengetahui senyawa aktif yang bertindak

sebagai antibakterinya.

3. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai mekanisme penghambatan

senyawa antibakteri ekstrak batang pepaya.

4. Perlu dibuat sediaan obat dari ekstrak etanol batang pepaya sebagai

antibakteri, khususnya sebagai alternatif obat kumur atau pasta gigi.

efek antibakteri ekstrak etanol batang …/efek... · dengan ini saya menyatakan bahwa tugas akhir...

Documents