BAB III

METODOLOGI

A. Waktu dan Tempat

Waktu: Pukul 07.00 10.00 WIB.

Tanggal: 25 28 Maret 2015Tempat: Laboratorium Media dan Laboratorium Bakteriologi

B. Alat dan Bahan

1. Alat

Ose Bulat Ose Jarum Rak Tabung

Korek Api

Lampu Spirtus

Inkas

Inkubator

Tabung Khan

Tabung Durham

Tabung Reaksi Pipet Ukur 10 ml Pipet Ukur 1 ml Plate 12 cm

2. Bahan

Sampel Air Kran di Bandar Kidul yang sudah dimasak 200ml Media Pelarut PDF (Pepton Dilution Fluid) Media MCB (Mac Conkey Broth) Media BGLB (Brilliant Green Bile Lactosa Broth)

Media EMB (Eosin Methylen Blue)

Media IMVIC (Indol, MR-VP, Citrat) C. Prosedur dan Skema

Prosedur :

1. Hari Pertama

Pembuatan media (PDF, MCB, BGLB, EMB dan IMVIC) Pensterilan botol (wadah) sampel air kran dan pipet ukur

2. Hari Kedua (Presumtive Test) Sampel dipipet 10ml, dimasukkan dalam 90ml pelarut PDF (P = 10-1), dari PDF 90ml dipipet masing masing 1ml untuk 3 tabung media MCB

Dipipet 1ml dari PDF 90ml (P = 10-1), dimasukkan dalam 9ml PDF (P = 10-2), dari PDF 9ml (P = 10-2) dipipet masing masing 1ml untuk 3 tabung media MCB

Dipipet 1ml dari PDF 90ml (P = 10-2), dimasukkan dalam 9ml PDF (P = 10-3), dari PDF 9ml (P = 10-3) dipipet masing masing 1ml untuk 3 tabung media MCB

Semua pencampuran dikocok sampai homogen

Media MCB diinkubasi pada suhu 37o C selama 24 jam3. Hari Ketiga (Confirmed Test and Completed Test)

Dilihat hasil dari media presumtive test (MCB) dan dipilih yang menghasilkan gas (+) dan paling keruh untuk diteruskan pada media confirmed test and completed test (BGLB, EMB, dan IMVIC)

Dimasukkan semua alat dan bahan yang diperlukan kedalam inkase

Dipanaskan ose bulat sampai merah membara, dinginkan sebentar

Diambil satu masa ose dari hasil gas (+) media MCB pada media BGLB (sesuai nomor urut)

Dambil satu mata ose dari MCByang memiliki gas terbanyak dan paling keruh distreak pada media plate EMB sesuai zona yang sudah dibagi dan diinokulasi pada media IMVIC (Indol, MR-VP, dan Citrat)

Dipanaskan kembali ose bulat

Diinkubasi 37( C selama 24 jam.

4. Hari Keempat

Penambahan reagen pada media Indol, MR dan VP.

Media Indol ditambahkan reagen Kovac sebanyak 1 3 tetes.

Media MR ditambahkan indikator MR 1 tetes.

Media VP ditambahkan reagen KOH 40% dan Naftol dengan perbandingan 1 : 2.

Pembacaan hasil dari media BGLB, EMB, dan IMVIC . Skema :

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil

Media MCB

Media BGLB

Media EMB

Media IMVIC10ml

1ml

1ml

@1ml

@1ml

@1ml

PDF 9ml (P10-2)

PDF 90ml (P10-1)

PDF 9ml(P10-3)

Sampel

Presumtive Test (Tes Pendahuluan)

MCB 9ml

Inkubasi 37o C 24 Jam

Media yang memiliki gas terbanyak ditanam pada media BGLB (sesuai nomor urut). Media yang paling keruh ditanam pada media EMB dan IMVIC

2. Confirmed Test (Tes Penegasan)

BGLB 4 ml

3. Completed Test (Tes Pelengkap)

EMB

Indol, MR VP, Citrat

Inkubasi 37o C 24 Jam

Identifikasi dan Pembacaan Hasil

Escherechia coli : Metallic sheen. IMVIC : ++--

Coliform : Berlendir, Banyak. IMVIC : --++

Bentuk : BulatUkuran : Kecil

Warna : Keruh, Berlendir Tepi : Rata

Permukaan : CembungSifat: Mucoid

Fermentasi: Laktosa -

Indol, MR VP, Citrat

- + +