uji mpn sesuai sni.pdf

9/1/2015 MikrobiologiPraktikBlogArchiveMostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

http://mikrobiologipraktik.com/mostprobablenumbermpnangkapalingmungkinapm/ 1/18

MikrobiologiPraktikSITUSPEMBELAJARANPERHITUNGANMIKROORGANISME

MostProbableNumber(MPN)/AngkaPalingMungkin(APM)

January26,2014Postedbyindrapradhika

1.SejarahperkembanganMPN

2.PrinsipmetodeMPN

3.CarakerjametodeMPN

3.1.Ujipendugaan

3.2.UjipenegasanuntukColiform

3.3.UjipenegasanuntukFecalColiform

3.4.UjipelengkapuntukE.coli

4.PemilihanjumlahseritabungMPN

5.PeluangdalammetodeMPN

6.Persyaratanpemilihankombinasitabungpositifdanpelaporannya

7.BatasbatasperhitungannilaiMPN

8.MenghitungMPNtanpatabel

9.AplikasilainMPNdalamperhitunganbakteri

10.PerhitunganMPNsecaraotomatis

11.HubunganMPNdanCFU

11.1.PerbandinganantaraMPNdanCFU

11.2.PerbedaanantaraMPNdanCFU

11.3.PengkonversiansatuanMPNkeCFU

12.KesalahanumumMPN

12.1.Kombinasiseritabungdiluartabel

12.2.Tabungnegatifpalsudanpositifpalsu

13.TabelMPN

Referensi

BabinimembahassecaradalambagaimanametodeMPN/APMtersebutbekerjasehinggadapatmenghitungmikroorganismedaridatapositifataunegatif tanpamenghitung koloni yang tumbuh.MetodeAngka PalingMungkin (APM) disebut sebagaimetodeMostProbableNumber (MPN)dalampenamaanselanjutnyatanpamengabaikankaidahpenyerapandalambahasaIndonesia.

1.SejarahperkembanganMPN

MetodeMPNmuncul sekitar awalabad20 sehinggadikenal sudah sangat lamadidalam ilmumikrobiologi.Estimasi akuratdari tabelMPNdipublikasikan oleh Mc Crady pada tahun 1915 kemudian dasar statistik dari metode MPN dikemukakan oleh Halvorson dan Ziegler (1933),EisenhartdanWilson(1943)danCochran(1950).Padatahun1957Woodwardmenyarankantentangpengabaianhasilpositif(banyaktabungpositifpadapengencerantinggidansebaliknya)yangdapatmeningkatkankesalahanlaboratoriumdalamtabelMPN.KemudianDeMannpadatahun1983mempublikasikan tentangmetodeperhitungan tingkatkepercayaan(convidenceinterval)dalam tabelMPN.Sampai sekarangmetodeMPNtelahmenjadisalahsatumetodestandarduntukmenghitungjenisColiform,FecalColiform,Escherichiacoli,danS.aureus.

2.PrinsipmetodeMPN

MPNadalahsuatumetodeperhitunganmikroorganismeberdasarkandatakualitatifhasilpertumbuhanmikroorganismepadamediumcairspesifikdalamseri tabunguntukmemperolehkisarandatakuantitatif jumlahmikroorganisme tersebut (MPN/ml (g)).MPNmerupakan suatumetodeujipengenceran bertingkat (serial dilution) untuk mengukur konsentrasi mikroorganisme target dengan perkiraan. SNI 012332.1 (2006:7)mendeskripsikan MPN sebagai metode untuk menghitung jumlah mikroba dengan menggunakan medium cair pada tabung reaksi yang padaumumnyasetiappengenceranmenggunakan3atau5seritabungdanperhitunganyangdilakukanmerupakantahappendekatansecarastatistik.

Prinsiputamametode iniadalahmengencerkansampelsampai tingkat tertentusehinggadidapatkankonsentrasimikroorganismeyangpas/sesuai



dan jika ditanam dalam tabungmenghasilkaan frekensi pertumbuhan tabung positif kadangkadang tetapi tidak selalu. Semakin besar jumlahsampelyangdimasukkan(semakinrendahpengenceranyangdilakukan)makasemakinseringtabungpositifyangmuncul.Semakinkeciljumlahsampelyangdimasukkan(semakintinggipengenceranyangdilakukan)makasemakinjarangtabungpositifyangmuncul.Semuatabungpositifyang dihasilkan sangat tergantung dengan probabilitas sel yang terambil oleh pipet saat memasukkannya ke dalam media. Oleh karena itu,homogenisasisangatmempengaruhimetodeini.Kombinasikemunculanpositif(ya)ataunegatif(tidak)inimenggambarkanperkiraankonsentrasimikroorganismepadasampelsebelumdiencerkan.Perubahandaridatapositifataunegatif sampaimenghasilkanangkadilakukandenganprosesperhitunganstatistik.JadinilaiMPNadalahsuatuangkayangmenggambarkanjumlahmikroorganismeyangmemilikikemungkinanpalingtinggi.

Gambar1.Kombinasitabungpositifyangdidapatadalah3tabungpositifdaripengenceran1/10,2tabungpositifdaripengenceran1/100dan1tabungpositifdaripengenceran1/1000.AngkaMPNyangdihasilkansetelahdicocokkandengantabeladalah150MPN/g.

AsumsiyangditerapkandalammetodeMPNadalah:

Bakteriterdistribusisempurnadalamhomogenatsampel.

Selbakteriterpisahpisahsecaraindividual,tidakdalambentukrantaiataukumpulan(bakteriColiformtermasukE.coli terpisahsempurnatiapselnyadantidakmembentukrantai).

Mediayangdipilihtelahsesuaiuntukpertumbuhanbakteritargetdalamsuhudanwaktuinkubasitertentusehinggaminimalsatuselhidupmampumenghasilkantabungpositifselamamasainkubasipadamediatersebut.

Jumlahyangdidapatkanmenggambarkanbakteriyanghidup(viable)saja.Selyangterlukadantidakmampumenghasilkantabungpositiftidakakanterdeteksi.

Setiapindividutabungmemilikidatayangberdirisendiri(independen).

MetodeMPNdinilaiberdasarkanperkiraanunittumbuh(GrowthUnit/GU)sepertiCFU,bukandariselindividu.MeskipunbegitubaiknilaiCFUatauMPNdapatmenggambarkanseberapabanyakselindividuyangtersebardalamsampel.FDABAMappendix2(2001)menyatakanbahwajikadalamMPNmenggunakantargetmikroorganismeyangdalampreparasisampeldanpengencerannyatetapmenunjukkanselyangtidakterpisahdanberkelompok, maka nilai MPN sebaiknya dapat dinyatakan dalam perkiraan GU (Growth Units) atau CFU (Colony Forming Units). NamunsebagianbesarmetodeMPNdigunakanuntukmenghitungmikroorganismetargetyangbenarbenarterpisahindividunyasepertiColiformdanE.coli.

PemilihanmediasangatberpengaruhterhadapmetodeMPNyangdilakukan.Umumnyamediayangdigunakanmengandungbahannutrisikhususuntukpertumbuhanbakteri tertentu.MisalnyadalammendeteksikelompokColiformdapatmenggunakanmediaBrilliantGreenLactose2%Bile(BGLB) broth. Di dalammedia ini mengandung lactose dan garam empedu (bile salt) yang hanya mengizinkan untuk tumbuh. Jika terdapatketidaksesuaianjenismediadanbakteriyangdiinginkanmakametodeiniakanmenghitungbukanbakteriyangdituju.UntukmenghitungColiformpadatahappendugaanumumnyamenggunakanLaurylSulphateTryptose(LST)broth,sedangkanuntukmenghitungE.colipadatahapkonfirmasidiperlukanmediaEC(Escherichiacoli)broth.

USDA/FSIS (2008:1) menyebutkan bahwa nilai MPN sangat berguna untuk menentukan jumlah mikroorganisme dengan konsentrasi rendah(



Larutkandenganakuadessampai1L,stokpelarutsimpandalamrefrigerator.Larutkan1,25mldaristokpelarutkedalam1LH2Olalusterilisasimenggunakanautoklaf.

Cairkansampelbekupadasuhu25Cselama18jamatausuhu45Cselama15menitpadawaterbathdenganagitasi.Timbangsecaraaseptissebanyak50g.

Masukkansampelkedalamkontainerblenderyang telahdisterilisasi.Tambahkan450mlbutterfieldphosphatediluent (dihitungpengenceranpertama50:450atau1:9).Kemudianhancurkanselama2menit.Volumetotalyangterdapatpadawadahblenderharusmenutupipisaublender.Jikasampeltersediakurangdari50g(x)makapengenceranpertamanyaadalahx.9ml.

Ambil1mlhomogenatsampel(pengenceran1/10)daripreparasisampellalumasukkanke9mldiluent (pengenceran1/100).Ambil1mldaritabungpengenceran1/100untukdimasukkanke9mldiluent (pengenceran1/1000).Padasetiap transfersampelyangdilakukan, tabungdikocokberayun25kalidenganketinggianayunanpengocokan30cmatauvorteksselama7detik.

Siapkan3seritabungMPNberisimasingmasing10mlLaurylSulphateTryptose(LST)brothdengantabungdurhamdidalamnya(total9tabungyangdibagimenjadi3seri).

Masukkan1mldaripengenceran1/10ke3tabungpertama,masukkan1mldaripengenceran1/100ke3tabungkedua,danmasukkan1mldaripengenceran1/1000ke3tabungketiga.

Inkubasisemua tabungpadasuhu350,5oCselama242 jam.Amati terbentuknyagaspada tabungdurham lalucatathasilnya. Inkubasi lagimenjadi483jamtabungyangtidakterbentukgas.

Interpretasihasilpositifjikamediakeruhdanterbentukgas(haruskeduaduanya)padainkubasi242jamatau483jam.Interpretasihasilnegatifjika tidak terdapat pertumbuhan dan tidak terbentuk gas. Gas yang diproduksi dapat terjebak dalam tabung durham ataupun berbentuk buih(effervescence)yangtimbulsaatdikocok.

PerkiraankonsentrasiberdasarkantabelyangdidapatadalahnilaidugaanadanyaColiform,FecalColiformatauE.coli.

3.2.UjipenegasanuntukColiform

Siapkantabungberisi10mlBrilliantGreenLactoseBile(BGLB)brothdengantabungdurhamdidalamnya.

MasukkansatuulasaninokulumdaritiaptabungLSTbrothyangmenghasilkanujipositifkedalamtiaptabungBGLBbroth.

Inkubasisemuatabungpadasuhu350,5oCselama483jam.

Interpretasihasilpositifjikamediakeruhdanterbentukgas(haruskeduaduanya).Interpretasihasilnegatifjikatidakterdapatpertumbuhandantidakterbentukgas.

TentukanjumlahColiform(MPN/gatauml)denganmenghitungtabungpositifkemudiancocokkandengantabelMPN(tabel10)berdasarkandariperhitunganujidugaan.PerkiraankonsentrasiberdasarkantabelyangdidapatadalahnilaipenegasanadanyaColiform.

3.3.UjipenegasanuntukFecalColiformdanE.coli

Siapkanberisimasingmasing10mlECbrothdengantabungdurhamdidalamnya

MasukkansatuulasaninokulumdaritiaptabungLSTbrothyangmenghasilkanujipositifkedalamtiaptabungECbroth.

Inkubasi semua tabungpada suhu45,5 oC (FecalColiformuntukpangandilakukanpada45,50,2 oC, uji air, kerangkerangan 44,50,2 oC)selama242jam.Amatiterbentuknyagaspadatabungdurhamlalucatathasilnya.Inkubasilagimenjadi482jamtabungyangtidakterbentukgas.

Interpretasihasilpositifjikamediakeruhdanterbentukgas(haruskeduaduanya).Interpretasihasilnegatifjikatidakterdapatpertumbuhandantidakterbentukgas.

Tentukan jumlah Fecal Coliform (MPN/g atau ml) dengan menghitung tabung positif kemudian cocokkan dengan tabel MPN (tabel 10)berdasarkandariperhitunganujidugaan.PerkiraankonsentrasiyangdidapatberdasarkantabeladalahnilaipenegasanadanyaFecalColiformdanE.coli.UntukmengetahuiapakahpadatabungECbrothadalahFecalColiformatauE.colimakadilanjutkanujipenegasanuntukE.coli.

3.4.UjipelengkapuntukE.coli

TabungpositifyangmengandunggasdariECbrothdikocokkemudianinokulasikankedalamcawanLEMBagardaninkubasipada350,5oCselama1824jam.

InterpretasikansebagaidugaanE.colijikamemilikiciricirikolonidatar,berwarnahitamditengahkolonidenganatautanpawarnakilatlogam(metallic sheen). Inokulasikan sampai 5 koloni tersangka ke PCA dan inkubasi pada 350,5 oC selama 1824 jam untuk kultur uji penegasanselanjutnya.

SatudarilimakoloniyangteridentifikasipositifE.colicukupuntukmenyatakanbahwatabungECbrothtersebutterkonfirmasipositifE.coli.

Ujikulturdugaandenganujipewarnaangramdanmorfologisel.Semuakulturyangmencirikangramnegatifdanselberbentukbatangpendekselanjutnyadiujidengantahapselanjutnya.InokulasikankembalikulturdugaantersebutkemediaLSTlaluinkubasipada350,5oCselama482jamuntukmengkonfirmasiulangterbentuknyagas.KemudiankultursangkaanyangsamadilakukanujiIMViC.

UjiIMViC(ujiproduksiindole,ujiMethylRed,ujiVogesProskauer,ujipenggunaanCitrate).

oUjiproduksiindoleujiiniakanmembedakanbakteriyangmampuatautidakmampumemproduksiindoledariTryptone.

Inokulasikan kultur sangkaan keTryptone broth lalu inkubasi pada 350,5 oC selama 242 jam. Tambahkan 0,20,3ml reagen Kovacs. Jika



terbentuk cincin merah pada bagian atas tabungmaka bakteri dapat memproduksi indol (indol positif) dan bila terbentuk cincin kuningmakadisimpulkansebagaiindolnegatif.JikakulturdugaanadalahE.colimakaseharusnyamenunjukkanhasilpositifdanselberbentukbatangpendek.

oUjiVogesProskauerujiinidapatmembedakanbakteriyangmampumemproduksiacetylmethylcarbinolatautidak.Senyawatersebutdideteksidenganpenambahanpotassiumhydroxideyangakanmembentukdiacetylyangbereaksidenganpeptonemenghasilkanwarnamerah.

InokulasikankultursangkaankeMRVPbroth lalu inkubasipada350,5oCselama482 jam.Setelahwaktu24 jampindahkan1mlkedalamtabungkosong(13100mm)lalutambahkan0,6mllarutanlarutannaphtholdan0.2ml40%KOH.Tambahkanbeberapakristalcreatine.Kocokkemudianbiarkanselama2jam.UjiVPdinyatakanpositifbilawarnaberubahmenjadimerah.JikakulturdugaanadalahE.colimakaseharusnyamenunjukkanhasiltidakadaperubahanwarna/negatif.

oUjiMethylRedujiiniakanmembedakanbakteriyangmampumemproduksiasamdariglukosadanMethylRedsebagaiindikatorpenurunanpH.

Inkubasi kembali tabung MRVP pada 350,5 oC selama 482 jam. Tambahkan 5 tetes larutanMethyl Red ke dalam tabung MRVP broth.Terbentuknyawarnamerahmenandakanhasilujipositif,sedangkangberwarnakuningmenunjukkanhasilnegatif.JikakulturdugaanadalahE.colimakaseharusnyamenunjukkanhasilpositif.

oUjipenggunaanCitrateujiiniakanmembedakanbakteriyangmampumenggunakanCitratesebagaisumbernutrisinya.

Inokulasikan kultur sangkaan ke medium Kosers Citrate broth lalu inkubasi pada 350,5 oC selama 96 jam. Reaksi positif jika terdapatpertumbuhanmediayangberwarnahijauberubahmenjadibiru,reaksinegatifjikatidakadapertumbuhandanmediatetaphijau.JikakulturdugaanadalahE.colimakaseharusnyamenunjukkanhasiltidakadaperubahanwarna/negatif.

InterpretasikanhasilujiIMViCdengantabelberikut.

Kriteria Biotipe1 Biotipe2Morfologidangram Batangpendektidak

bersporaBatangpendektidakberspora

Sifatgram Gramnegatiif GramnegatifGaspadatabungLST + +Ujiindole + UjiMR + +UjiVP UjiCitrate

Tabel1.KarakteristikE.colipadaujimorfologisel,gram,produksigasdanIMViCuntukbiotipe1dan2.

Hasil yangmencirikanbiotipe 1 dan biotipe 2 disimpulkan sebagaiE.coli (positif).Tentukan jumlahE.coli (MPN/g atauml) berdasarkantabungECpositifyangterkonfirmasidariujipenegasanberdasarkantabelMPN(tabel10).

UjiIMViCjugadapatdilakukanmenggunakantestkitsepertiAPI20E.

UjiMPNuntukColiformdanE.coliselengkapnyadapatmengaculangsungkeBAMdenganalamat:

(http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm064948.htm)

4.PemilihanjumlahseritabungMPN

Telah diketahui bahwaMPNmemiliki beberapa pilihan cara dalamperhitungannya berdasarkan jumlah tabung setiap serinya sesuai tabel yangtersedia yaitu 3, 5, 8 dan10 seri tabung. Inti darimetodeMPNadalahmendapatkan tingkat pengenceranyangkadangkadang tapi tidak selalumengandungmikroorganismehidup.AlasaninilahyangsangatmempengaruhipemilihanjumlahseritabungpadametodeMPNtersebut.MenurutISO7218(2007:45)pemilihankonfigurasiseri tabungini jugadipengaruhiolehjumlahmikroorganismeyangdiperkiraan,persyaratanperaturanyangberlaku,presisiyangdibutuhkandanpertimbanganpraktiklainnya.

SistemmetodeMPNyangpalingbanyakdigunakanadalahSymmetricdilutionsystemyaitumetodeMPNyangmenggunakanbanyaktabungsecaraparalel setiap pengencerannya. Semakin banyak jumah tabung yang digunakan setiap serinya maka semakin presisi nilai yang dihasilkan.Disarankanuntukmenggunakan5ataulebihtabungsetiapserinyajikamenginginkanpresisiyanglebihbaik(ISO7218,2007:45).FDABAMCh.4(2002)menyatakanbahwa3seritabungumumnyadigunakanuntuksampelpangan,5seritabunguntuksampelairdankerang,sedangkan10seritabungdipakaiuntukmengujiairdalamkemasan(bottledwater) atau sampel lainyangdiperkirakan jarang terkontaminasi (mengandungsedikitmikroorganisme).

Untukpengujianairdalamkemasan(bottledwater)digunakanmetode10tabung.Diambil100mlsampelairdaninokulasikanmasingmasing10mlsampelyangtidakdiencerkankedalam10tabung2xLST(doublestrength)dantiaptabungberisi10mlmedia.Tabungdiinkubasipada35C.selama242jam.Jikahasilnegatifmakatabungdiinkubasilagiselama24jam.Semuatabungpositifdiujidengantahapkonfirmasiyaitudenganmenanamkannya pada BGLBmenggunakan jarum inokulasi. Kemudian tabung diinkubasi pada 35C. selama 482 jam.HasilMPN diketahuimenggunakantabelMPN10tabung(tabel14)(FDABAMCh.4,2002).

UNEP/WHO(1996:7)menyarankanjumlahsampelyangdiinokulasikandanjumlahseritabungyangdipakaiuntukanalisaberbagaijenissampelairpadatabelberikut.

Jenissampel 50ml 10ml 1ml 0,1ml0,01ml

Airminumolahan(treateddinkingwater) 1 5 Airminumolahansebagian(partiallytreateddinkingwater) 5 5 5

Airyangdimungkinkanterjadinyakontaklangsung(Recreationalwater) 5 5 5

Sumberairyangdilindungi(Protectedsourcewater) 5 5 5



Airpermukaan(Surfacewater) 5 5 5

Tabel2.TabelseritabungdanvolumesampelyangdigunakanuntukanalisaMPNberbagaijenissampelair(UNEP/WHO,1996:7)

MenurutUSDA/FSIS(2008:3)untukmengantisipasijikajumlahmikroorganismedalamsampel>10GrowthUnit/g(ml)makadisarankanmenanamsampel10mlpada3seritabung,1mlpada3seritabunglaluselanjutnyadilakukanpengenceransampai1/104dantiappengenceranditanam1mlpada3seritabung.

Gambar2.SkemapenanamanmetodeMPNyangdisarankanolehUSDA/FSIS(2008:3).Jikamengikutipetunjukinimakakemungkinanmemperolehtabungpositifyangkadangkadangtapitidakselalusemakinbesar.

BanyakmetodelainyangdapatdiacuuntukanalisaMPNColiformdanatauE.coli.Umumnyaterdiridaribeberapatahappengujian.BerikuttabelperbandinganmetodeanalisaMPN.

Referensimetode ISO4831:2006 ISO7251:2005 AOACOM966.24APHA,AWWA,WEF9221

Uji Coliform E.coli ColiformdanE.coliColiformdanE.coli

Matriks Pangandanpakan Pangandanpakan Pangan Air

Inokulasidanjumlahseritabung

Padat:

33seritabung:

10mldari1/10pada3seritabungDS

1mldari1/10pada3seritabungSS


Cair:

Dari1,1/10,1/100

Padat:

33seritabung:

10mldari1/10pada3seritabungDS



Cair:

Dari1,1/10,1/100

33seritabung:

1mldari1/10pada3seritabung



Airminum:

110seritabung:@10ml

15seritabung:@20ml

11seribotol:@100ml

Bukanairminum:

Sampeldiencerkanterlebihdahulu.

UjipendugaColiformdanE.coli

LST(DS)30/37oC242jam

LST(SS)30/37oC24+242jam

LST(DS+SS)37oC24+242jam

LST350,5oC24+242jam

LST(DS)350,5oC(242)+(243)jam

UjipenegasanColiformBGLB30/37oC24+242jam ()

BGLB350,5oC482jam

BGLB350,5oC483jam

atau

LESEndoAgar

McConkey

Pewarnaangram

LST



UjipenegasanFecalColiform () ECbroth44oC

24+242jam

ECbroth45,50,02oC482jam

ECbroth45,50,2oC242jam

UjipelengkapE.coli ()Ujiindol:peptonewater44oC482jam

PewarnaanGram

PenanamanLST

Ujiindol

Ujimethylred

UjiVogesProskauer

Ujipenggunaancitrate

ECMUG45,50,2oC242jam

atau

UjiGAD(glutamatedecarboxylase)

UjiIndol

Tabelyangdigunakan

TabelMPN3seritabungdenganinokulum0,1g,0,01g,dan0,001g.atau1g,0,1gdan0,01g.

TabelMPN3seritabungdenganinokulum0,1g,0,01g,dan0,001g.atau1g,0,1gdan0,01g.

TabelMPN3seritabungdenganinokulum0,1g,0,01g,dan0,001g.

TabelMPN10tabungdenganinokulum10ml

TabelMPN5tabungdenganinokulum20ml

InterpretasiP/A.

Catatan:

SS:singlestrength

DS:doublestrength

P/A:presence/absence

Tabel3.TabelperbandinganmetodeMPNuntukColiformdanatauE.coliberdasarkanbeberapastandardinternasional(ISO4831(2006),ISO7251(2005),AOACOM966.24(2005)danAPHA,AWWA,WEF9221(2006)).

Jika pengujian Coliform dan E.coli dilakukan sesuai standar baku maka memang diperlukan tahap konfirmasi yang bertingkat dan seringkalimembutuhkan waktu yang panjang. akir et al. (2002:1049) membuktikan bahwa tidak perlunya dilakukan beberapa uji konfirmasi saatperhitunganColiformdanE.coli.KonfirmasiyangdapatdiabaikanadalahujipadaBGLBuntukmengkonfirmasiColiformsetelahujiLSTdanujiindoluntukmengkonfirmasiE.colisetelahujiMUG.Ujikonfirmasiinitidakmemberikandampakyangsignifikanterhadaphasilakhirhitungan.

5.PeluangdalammetodeMPN

Brown(2001:224)memberipermisalanpembacaan tabungpositifuntukkombinasi310.Kombinasi inimenghasilkan indeksMPNsebesar4,3.Angkainimenunjukkansampelmemilikiperkiraan4,3organismepergramdengan95%kemungkinankeberadaannyadenganrentang0,9sampai18,1organismedenganmenggunakantabelMPN3seri.Angka4,3hanyalahnilaikemungkinansecarastatistik.

Gambar3.BagandistribusinormalsalahsatunilaiMPN.

FDABAMappendiks2(2001)memberikaninformasibahwahasildarimetodeMPNmemilikiderajatkepercayaankarenaprosesperhitungannyamerupakan hasil dari peluang. Arti dari 95% confidence intervals dalam tabel MPN adalah kemungkinan paling tidak 95% rentang derajatkepercayaan dari hasil akhir adalah sesuai dengan konsentrasi yang sebenarnya. Di dalam tabel MPN terdapat kolom derajat kepercayaan(confidenceinterval)95%denganbatasbawah(lowerlimit)danbatasatas(upperlimit).Angkainimenunjukkanbatasderajatkepercayaantersebut.Nilai indeksMPNdanderajatkepercayaandalamtabeldinyatakandalamduadigitsignifikan,misalnyanilai400adalahhasilpembulatanantara395 dan 405. Tidak diberikannya batas nilaiMPNuntuk semua tabung positif (333) yang ditandai dengan tanda > adalahmenggambarkankonsentrasilebihdarinilaiMPNuntukkombinasipalingtidakadasatutabungnegatifpadapengencerantertinggi(332).KetidakpastianinijugadijumpaipadaindeksMPNuntuksemuakombinasitabungnegatif.

(+) (+) (+) Conf.limit Conf.limit0,1 0,01 0,001 MPN/ml Batasbawah Batasatas5 3 0 79 22 220

5 3 1 110 34 2505 3 2 140 52 4005 3 3 180 70 4005 3 4 210 70 400



Tabel4.ContohpotongantabelMPN5seritabungdenganinokulum0,1g(ml),0,01g(ml)dan0,001g(ml).

Untukmemahamiperananpeluangdalammendistribusikanselsehinggamenghasilkantabungpositifmakajumlahtabungpositif(531)padatabeldicobauntukdirunutdandiilustrasikankembalidalamprosespenanamannyapadagambarberikut (dianggapbahwanilaiMPN/mlsamadengansel/ml(GU/ml)).Namunperludiingat,jumlahselyangterambiltidakselalusepertiitu,semuanyaadalahpeluangdanangkayangdidapatadalahangkayangkemungkinannyapalingbesar.

Gambar4.IlustrasipeluangsaatpenanamandanpengenceranpadametodeMPN.Satutitikmenggambarkansatuselataugrowthunit.

6.Persyaratanpemilihankombinasitabungpositifdanpelaporannya

Sepertimetode hitungan cawan, di dalamMPN jugamemiliki konsep pemilihan jumlah yangmasuk dalam kisaran hitung yaitu berdasarkanfrekuensi kemunculan tabung positif yang sebaiknya kadangkadang tapi tidak selalu. Kombinasi tersebut dipilih dari tiga tingkat pengencerantertentuyangdisebuttigatingkatpengenceranyangsignifikan.Syaratumumyangdipakaidalampemilihantabungpositifadalah:

Pilihpengenceranyangmemilikikombinasi tabungkategori1, jika tidakadamakapilihkombinasidarikategoriberikutnyayang lebihrendahberturutturut(2dan3)(tabel9).

Ataudenganketentuan:

Pilihpengenceranterendahyangtidaksemuatabungmenghasilkantabungpositif.

Pilihpengencerantertinggiyangpalingtidakmemilikisatutabungpositif.

Pilihsemuapengencerandiantaranya.

Kalikansetiapseritabungyangdipilihdenganpengenceranyangdiambil.

Misalnya:dariinokulum1,0,1,0,01,0,001dan0,0001menghasilkankombinasitabungpositif54310makadipilih54310bukan54310ataubukan54310sehinggadidapatnilaiMPN33/g.

1g 0,1g 0,01g 0,001g 0,0001g Kombinasitabungpositif NilaiMPN/g

5 4 3 1 0 431 33

Tabel5.Tabelcontohpemilihantabungpositifberdasarkansyaratyangberlaku.

Gambar5.Baganpemilihantabunguntukkombinasitabung54310.

Tidaksemuakeadaanmenggambarkankondisisepertidiatas.Dimungkinkanjugamendapatkansemuaseritabungmenghasilkantabungpositifdantidaksemuapengenceranmenghasilkantabungpositif.

Berikut contohpenentuan tabungpositif padabeberapakasus tertentuberdasarkan interpretasi peraturanSNI012332.1 (2006:8) dan ISO7218(2007:48).



Gambar6.BaganpemilihantabunguntukcontohA.Dipilihkombinasitabung5(1/10)1(1/100)0(1/1000).

Jikaterdapatlebihdarisatuseripengenceranyangmemilikiseluruhnyatabungpositif,makapilihpengencerantertinggiyangmenghasilkanseluruhtabungpositifdanduapengenceranberikutnya.

ContohA:55100.

Jikapadapengencerantertentumemilikitabungpositifseluruhnyadanpengenceransebelumnyatidakmemilikiseluruhtabungpositif,makadipilihpengenceranyangmemilikisemuatabungpositifdanduapengenceranberikutnya.

ContohB:45100.Bukandiambil451karenapadapengenceran1/1tidaksemuatabungpositif.

Jikapadatingkatpengenceranyanglebihtinggi(dariduapengenceranberikutnyasetelahpengenceranyangmemilikisemuatabungpositif)masihmenghasilkan tabungpositifmakayangdijadikanpengenceranpaling tinggiyangdiambiladalah tingkatpengenceran tertinggi tersebutdanduapengenceransebelumnya.

ContohC:54410.Bukandipilih410karenapada1/101tidakseluruhtabungpositif.Bukandipilih544karenapada1/103masihterdapatsatutabungpositif.

Jikapadatingkatpengencerantertentusemuamenghasilkantabungnegatiftetapipengenceranselanjutnyamasihterdapattabungpositif,makayangdinyatakantabungpositif(daripengenceranselanjutnyatersebut)adalahtingkatpengenceransebelumnya(tabungpositifbergeserkepengenceransebelumnya).

ContohD.54401.

Jikapadatingkatpengencerantertinggiyangdilakukanmasihterdapattabungpositif,makapilihpengencerantersebutdanduatingkatpengenceransebelumnya.

ContohE.55552.

Jika tingkat pengenceran tertentu menghasilkan tabung positif sedangkan pengenceran sebelumnya tidak, maka pilih dua tingkat pengenceransebelumnyadaripengenceranyangmemilikitabungpositiftersebut.

ContohF.00100.

Jikapadapengenceranyanglebihtinggidaripengencerantertinggiyangditentukanmasihmenghasilkantabungpositif,makatambahkantabungpositiftersebutketingkatpengenceransebelumnya(bergesermenambahkanjumlahtabungpositifpengenceransebelumnya).

ContohG.44110dipilihmenjadi442.

PelaporanMPN/g didapat dari angka indeksMPNyang harus disesuaikan dengan seri tabung darimana tingkat pengenceran tersebut diambil.MisalnyapadacontohEangkaindeksMPNuntukkombinasi552(inokulum0,1,0,01dan0,001)adalah540tetapikarenadiambilpengenceransignifikan0,01,0,001dan0,0001makanilaiharusdikalikan10.BegitupulasebaliknyauntukcontohGyangdiambildaripengenceransignifikan1,0,1dan0,01makanilai47harusdibagi10menjadi4,7.

contoh 1g 0,1g 0,01g 0,001g 0,0001g KombinasitabungpositifAngkaindeksMPN

NilaiMPN/g

A 5 5 1 0 0 510 33 33B 4 5 1 0 0 510 33 33C 5 4 4 1 0 441 40 40D 5 4 4 0 1 441 40 40E 5 5 5 5 2 552 540 5400F 0 0 1 0 0 001 1,8 0,18

G 4 4 1 1 0 442 47 4,7

Tabel6.Tabelcontohpemilihantabungpositifpadabeberapakasusberdasarkansyaratyangberlaku.AngkaindeksMPNdiambildaritabelMPN5seritabungdenganinokulum0,1g,0,01g,dan0,001g(SNI012332.1,2006:8).

Sedangkancontohpemilihantabungpositifuntuk3seritabungdapatdilihatpadatabelberikut.

contoh 1g 0,1g 0,01g 0,001g 0,0001g KombinasitabungpositifAngkaindeksMPN

NilaiMPN/g

A 3 3 2 1 0 332 110 110B 3 3 3 0 330 24 240C 2 2 1 1 0 110 0,74 74D 3 3 0 0 0 330 24 24



E 2 2 0 1 0 220 2,1 2,1

Tabel7.Tabelcontohpemilihantabungpositifpadabeberapakasusberdasarkansyaratyangberlaku.AngkaindeksMPNdiambildaritabelMPN3seritabungdenganinokulum1g,0,1g,dan0,01g(ISO7218,2007:49).

7.BatasbatasperhitungannilaiMPN

BatasbatasperhitunganMPNditentukanuntukmenghasilkandatayangdapatdipercayadanpresisi.PresisidarimetodeMPNdipengaruhiolehjumlahtabungparaleltiappengencerandankoefisienpengencerannya.

Batas praktik bawah dan atas dari prosedur MPN adalah jika hanya satu tabung dalam set deteksi (jumlah seri tabung, jumlah tabung,pengencerannya dll.) adalah positif atau negatif. Kisaran nyata dari 3 x 5 seri tabung adalah 1,8 sampai 1600 partikel / unit volume (denganinokulum0,1g,0,01g,dan0,001gtabel11).Padakonsentrasipartikelyangsangatrendahsuatumetodekuantitatifakanmenjadisepertimetodepresence/absenceyangmenghasilkandatayaatautidaksajaISO1348(2011:25).

Batas atas metode MPN dilampaui jika semua tabung dari semua pengenceran, misalnya 333 menghasilkan >1100. Namun ini tidakmenggambarkanbatas atas darimetode itu sendiri karena hanya kesalahan tingkat pengenceran yangdilakukan.Pengenceran yang cocokdapatdisesuaikan (digeser).Oleh karena itu tidak ada batas atas yang dapat diatur karena alasan statistik sebab presisi tidak tergantung pada jumlahpartikel (sel)yangdimasukkankedalamsetdeteksi.Hal inimerupakankarakteristikprosedurMPNyaitupresisinyadapatditingkatkandenganmengubahkonfigurasisetdeteksi(ISO13483,2011:20).

8.MenghitungMPNtanpatabel

MetodeyangtelahdijelaskansebelumnyaadalahmetodepenentuannilaiMPNberdasarkantabel.Selainmenggunakantabel,FDABAMapendiks2(2010)danISO7218(2007:46)menyatakanbahwanilaiMPNdapatdicaridenganrumusberikut(Thomasformula):

MPN/g=(gj)/(tjmj(tjgj)mj)()

gj:jumlahtabungpositifpadapengenceranyangdipilih

tjmj:jumlah(g/ml)darisampeldalamsemuatabungpadapengenceranyangdipilih

(tjgj)mj:jumlah(g/ml)darisampeldalamtabungnegatifpadapengenceranyangdipilih

Contoh1:

Didapatkanhasilkombinasitabung(10/10,10/10,4/10,2/10,0/10)dari10seritabungdenganinkokulum0,1,0,01,dan0,001.

Jikadigunakantabelmakadipilih(10/10,10/10,4/10,2/10,0/10)yaitukombinasi1042=70MPN/g.

Namundalamperhitunganhanyagunakan(10/10,10/10,4/10,2/10,0/10).

Gambar7.Bagantabungpositifdannegatif10seritabunguntukcontoh1.

gj=6

6didapatkandari4tabungpositif+2tabungpositif

tjmj=(10x0,01)+(10x0,001)=0,11

10adalahjumlahseritabung

0,01dan0,001adalahsampelyangdimasukkan(g)

(tjgj)mj=(6x0,01)+(8x0,001)=0,068

6adalahjumlahtabungnegatifpadapengenceran0,01

8adalahjumlahtabungnegatifpadapengenceran0,001

MPN/g=6/(0,068x0,11)

=6/0,086

=70/g



Contoh2:

Didapatkanhasilkombinasitabung(5/5,3/5,1/5,0/5)dari5seritabungdenganinkokulum0,1,0,01,dan0,001.

Jikadigunakantabelmakadipilih(5/5,3/5,1/5,0/5)yaitukombinasi531=110/g.

Namundalamperhitunganhanyagunakan(5/5,3/5,1/5,0/5).

DengancarayangsamamakaMPN/g.

=4/(0,024x0,055)1/2

=4/0,0363

=110/g

9.AplikasilainMPNdalamperhitunganbakteri

PrinsipMPNumumnyadikenaldiberbagaimetodestandaradalahsebagaimetodefermentasitabungseribertingkat.SelainyangtelahdisebutkandiataskonsepMPN jugaditerapkandalamperhitunganbakteridengannamaSimplate (BioControlSystems).MetodeSimplatemenggunakanbinarydetectiontechnologyuntukmenghitungmikroorganismeberdasarkanpertumbuhannyapadasumuran(wells)padapermukaancawanplastikkhusus yang telah disediakan. Kisaran perhitungan normalmenggunakan 84 sumuran. Sebagian volume sampel (10ml) yang disebarkan padacawan akan mengisi sumuran sedangkan sisa volume sampel dapat disingkirkan di kapas penyerap yang terletak di bagian pinggir cawan.Pertumbuhanyang terdapat di sumuran yangdiindikasikan perubahanwarna (tergantungmedia spesifik yangdigunakan) akanmenggambarkanjumlahmikroorganismepadasampel.Hasilyangdiperolehadalahadanyasumurpositifataunegatif.JumlahangkapositifkemudiandibandingkandengantabelsehinggadiperolehnilaiCFU/g(ml)sampel.PadaprinsipnyametodeinitetapmengadopsiperhitungankemungkinandarimetodeMPNyaitupositifataunegatifnyasetiapunitfermentasi.Peningkatanjumlahunit(sumuran)tersebuttentudapatmempertinggiakurasidanpresisimetodeini. Data akhir juga bukan dilaporkan sebagai MPN/ml(g) tapi diubah menjadi CFU/ml(g) walaupun dalam praktiknya tidak akan dijumpaiperhitungankolonipadacawan.Penggunaanmetodeinitelahdivalidasi,contohsalahsatunyatedapatdiAOACOM2005.03(AOAC,2005Ch.17,p.36)DetectionandConfirmedQuantitationofColiformandE.coliinFoods.SimPlateColiformandE.coliColorIndicator.

Selainitu,TEMPO(bioMrieux)jugamenggunakanMPNdalammemperolehhasilperhitungannya.MPNterotomatisasiiniterdiridarivialyangmengandungmediumpadasebuahkartu.Kartumengandungtigaseri(set)sumuran(wells/vial)yaitukecil,menengahdanbesarmasingmasing16sumurandansemuaberjumlahtotal48sumuran.Setiapseridiinokulasikansampeldenganperbedaansetiapsetnya1/10,sepertihalnyametode3seritabung.Artinyametodeinimenggunakanseritabunglebihbanyakyaitu161616yangtentunyadapatmeningkatkanakurasidanpresisihasilperhitungannya.

10.PerhitunganMPNsecaraotomatis

NilaiMPNjikadihitungsecaramanualakansangatmerepotkan.OlehkarenaitudibangunsuatuperhitunganMPNyangtelahdiprogrampadasuatuperangkat lunak. Food and Drug Administration (FDA) menyediakan file perhitungan MPN yang dapat diunduh di:(http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm109656.htm).Beberapapehitunganotomatis lainnyadengannamaMPNCalculatorjugadapatditemuidialamat:(http://www.i2workout.com/mcuriale/mpn/).EnvironmentalProtectionAgency(EPA)jugamembangunsoftware untuk perhitungan MPN (MPN Calculator Version 3.0) dengan mempelajari manual pengoperasian dan instalasinya di alamat :(http://www.epa.gov/microbes/MPN_User_Manualvs3.pdf).

PerhitunganMPNotomatisinitentudapatmeniadakanpenggunaantabeldankombinasitabungyangtidakterdapatpadatabel(kombinasijarang,misalnya103)jugadapatdiketahuimelaluiperhitunganini.NamunperludiketahuibahwasebagianbesarmetodestandarumumMPN(misalnya,FDABAM,AOAC,ISO,SNI)sampaisekarangmasihmenggunakantabelMPNdalamtahapprosedurnya.

Gambar8.TampilanperhitunganMPNsecaraotomatisSpreadsheetMPNFDABAM,SpreadsheetMPNCalculator,dansoftwareMPNCalculator(VB6version).Contohperhitungan3seritabung(inokulum0,1,0,01dan0,001)dengankombinasi321.



11.HubunganMPNdanCFU

CFUdanMPNadalahsatuanyangasalnyaperhitungannyaterpisahwalaupunmenggambarkantujuanyangsamayaitumemperkirakanjumlahselsebenarnya.Keduasatuaninitidakberhubunganlangsung,yangartinyatidakselaluxCFU/mladalahxMPN/mlwalaupundataantaraCFU/mldanMPN/mlmenunjukkankorelasipositif.

11.1.PerbandinganantaraMPNdanCFU

Berikutadalahbeberapahasilperbandinganantarametodehitungancawan(spread/pourplatepadamediaagarselektifataumembranfiltrasi)danmetodefermentasitabungberseri/MPNyangdiambildaribeberapapublikasipenelitiansebelumnya.

Hildebrandt dan Schott (2001:453)melaporkan bahwametodeMPNmenghasilkan data positif Listeria spp. dan L.monocytgenes lebih banyakdibandingkandenganmetodehitungancawansehinggadapatdisimpulkanbahwaMPN lebih sensitifdibandingCFUdalamujiListeria.Namunmetode hitungan cawan lebih dipilih digunakan secara rutin karenamemiliki produktivitas yang sedikit lebih baik dan variasi hasil lebih kecil.meskipun begitumetodeMPNdapat dipilih untuk studi epidemiologi karenamemilikidetection limit (LOD) yang jauh lebih rendah dibandinghitungancawanyaitusekitar66%daribatasdeteksihitungancawan.

Paulsenetal.(2008:376)menyatakanbahwametodeMPN(terotomatisasi)menghasilkandatarataratalebihrendahdibandingkanhitungancawandengan metode yang bersumber dari ISO dan hitungan cawan dengan petrifilm untuk menghitung kelompok Enterobacteiaceae. Jadi dapatdisimpulkanbahwametodehitungancawanlebihbanyakmendeteksiEnterobacteiaceae(lebihsensitif)daripadaMPN.

Choet al. (2010:846) menyebutkan bahwa hasil perhitungan E.coli dalam menentukan kualitas air menggunakan metode MPN menghasilkankonsentrasilebihbesardibandinghitungancawan.NamunberbedadenganperhitunganEnterococciyangmenghasilkanmetodeMPNlebihrendahdaripadahitungancawan.

Kodakaetal.(2006:115)telahmembuktikanbahwametodehitungancawandenganpenanamanpadadryrehydratablefilmmedia(CompactDry)tidak memiliki variasi/perbedaan yang signifikan jika dibandingkan dengan metode MPN yang bersumber dari AOAC untuk menguji bakteriColiformpadadagingmentah.

Curialeetal.(1991:635)menyatakanbahwametodepenanamanpadadryrehydratablefilmmempunyaitingkatreprodusibilitasdanrepeatabilitasyangsamaataulebihbaikjikadibandingkandenganmetodeMPNyangbersumberdariAOACuntukmenghitungColiformdanE.coli.Penelitianinidilakukanpadaberbagaisampelpanganyangdiujioleh14laboratoriumdalamrangkastudikolaboratifuntukmengadopsimetodeinimenjadimetoderesmiAOAC.

ProsedurMPNmempunyaitingkatkeberagaman(variable)datalebihbesardibandingkandenganhitungancawanmenggunakanmembranfiltrasiuntukmenganalisajumlahColiformsehinggametodeMPNmenghasilkanjumlahratarataColiformlebihbesardaripadametodehitungancawan.Keberagaman tersebut tidakditentukanolehkesalahan analis (human error) tetapi lebihdipengaruhi olehdasar perhitunganmetodeMPNyaituprobabilitas(GronewolddanWolpert,2010:3327).

Padaanalisaperhitunganbakterirumendidapatkandatarataratajumlahbakterirumen(pemfermentasixylane,starchdanpectin)cenderungsamaantarametodeCFUmaupunMPN.Namunmetodehitungancawanmemberikanvariabelyanglebihkecilyaituantara45kalidarimetodeMPNsehingganilaiCFUmemberikanpresisidatayanglebihbaik(Kajikawaetal.1990:810).

Wohlsenetal.(2006:350)telahmelakukanperbandinganberbagaimetoderesmiuntukmengevaluasisetiapmetodenya.Metodemetodeyangdiujiadalahspreaddanpourplate(standardplatecount),filtrasimembran,MPN,danpetrifilmuntukmenghitungE.colidanColiformlain.Daristuditersebut dihasilkan metode yang paling baik dan konsisten adalah metode pour plate dan metode petrifilm. Metode lainnya mengindikasikantingginyakeberagamandataantarperulangandanrendahnyarecovery.

Beberapa literaturdiatasmenyebutkanhitungancawan (CFU)menghasilkandatayang lebihpresisi (Kajikawaetal.(1990:810),Wohlsen et al.(2006:350)danGronewolddanWolpert (2010:3327)).KemungkinankurangnyapresisipadaMPNinidisebabkanoleh terkumpulnyahasilpadatabelMPNdenganpembulatan (dua angka signifikan) yang cukupbesar dibandingkanperhitungankoloni.Variabilitas datametodeMPNyanglebihbesardapatdiperparahjikakehomogenansampeltidakdiperhatikandenganbaik(seltargetmasihmenggeromboldalampartikelbesarsampel)atauadanyatabungpositifpalsu.

Gambar9.GrafikdiatasdapatmenjelaskanbahwametodeMPNmemilikikeberagamandatayanglebihbesardanhasilratarataMPNlebihtinggidibandingCFUsehinggamenjadikanpresisimetodeMPNlebihrendah.GrafikAadalahdatahasilmetodeMPN(MPN/100ml)yangdibandingkandengandatajumlahmikroorganismetargetyangsebenarnyasedangkangrafikBadalahuntukmetodefiltrasimembran(CFU/100ml)(Gronewold

danWolpert,2008:3329).

11.2PerbedaanantaraMPNdanCFU



PerbedaanantaraCFUdanMPNdapatdiringkaspadatabelberikut.

Pembeda MPN CFU(hitungancawan)Objekyangdihitung Tabungpositif SetiapkoloniJenismetode Semikuantitatif KuantitatifMetodeyangdilingkupi MetodeMPN:3seri,5seri,8

seri,atau10seritabung.MetodeMPNterotomatisasi.

Spread/pourplatepadamediaagar,membranfiltrasi,penanamanpadadryrehydratablefilm,spiralplatecount.

Dasarperhitungan Teoriprobabilitasberdasarkanpositifnegatif.

Presisikurang.

Satukolonimenggambarkansatusel(unittumbuh).

Lebihpresisi.

Dasarpemilihanpengenceran

Frekuensitabungpositifyangkadangkadangtetapitidakselalu.

Kisaranjumlahkoloniyangmemenuhisyaratstatistik(25250,30300,



perubahanitudengansuaturumusyangtelahtervalidasi.JikamemangantaraCFUdanMPNdapatdiubahdenganhasilyangpasti,makaakandapatditemukanrumuspengkonversinyadenganmudahdireferensimetoderesmiinternasional.BaikMPNatauCFUsebaiknyadiperolehsecaraterpisahsesuaimetodenyamasingmasing. Seperti analogimenembak dengan busur panah tidak dapat disamakan dan diubah sepertimenembak denganpistolmengenaitingkatakurasidanpresisinya,karenasetiapcaramemilikikelebihandankekurangannyasendiri.

12.KesalahanumumMPN

12.1.Kombinasiseritabungdiluartabel

BerdasarkanprinsippengenceranpadaMPNmakaseharusnyaatausebaiknya jumlah tabungpositifpadapengenceran lebihpekatakansemakinbanyak(1/10>1/100>1/1000),misalnya531.Hal inidikarenakansetiappengenceraanmengurangi jumlahmikroorgansimetargetdanakibatnyasemakin kecil kesempatannyauntukmembuat tabungmenjadi positif.Namun seringkali hasil yangdidapat tidak sesuai dengan logika peluang,sepertikombinasi534yangmenghasilkannilai210.Bisasajabanyakseltidaksengajaterambildanmemperbanyaktabungpositifdipengenceranselanjutnyaatauhomogenisasitidakberlangsungsempurna.USDA/FSIS(2008:2)menyarankanuntukmengulangianalisajikadiperolehkombinasitabungyangtidakterdapatdalamtabel(misalnyauntuk3seritabung:023,123,213dll.).Diasumsikanbahwahasil tersebutmencurigakankarenakontaminasiataukesalahanpraktiklainnya.

Dalam tabel MPN dalam metode MPN yang diterbitkan AOAC (AOAC OM 966.24, 2005:Ch.17,p5) mengenai kombinasi tabung seperti inidiberikan catatankhusus.Misalnyauntukkombinasi 012, 132, 203dll.Catatan inimenyarankanbahwa terdapat aspekketidakemungkinanyangtinggijikamendapatkankombinasiiniyangmengindikasikanbahwanilaiMPNyangdiperolehdapatlebihrendahdibandingkankonsentrasisebenarnya.

ISO7218(2007:61)menjabarkantentangpembagiankategorikemungkinannilaiMPNberdasarkankombinasitabungpositifdaritabelMPN.NilaiMPNyangdiperolehdibagimenjadiempatkategoriyaitukategori1,kategori2,kategori3dankategori0.Kategori1memilikikemungkinanpalingtinggi untuk diperoleh, berturutturutmenurun sampai kategori 0. Disarankan untuk ditentukan terlebih dahulu kategorimana yang dinyatakanditerima (acceptable), misalnya hanya kategori 1, 1 dan 2 atau 1,2,dan 3. Jika hasilMPN digunakan untukmenentukan keputusan yang lebihpentingmakasebaiknyadipakaikategori1atau1dan2sajasebagaibataskeberterimaan.Sedangkankategori0dapatdipertimbangkansebagainilaiyangmencurigakan.Tedapatpolamengenaikombinasitabungdanpengelompokankategorinya.SemakinbaikkategorinilaiMPNmakakombinasitabungpositifyangterjadiakansemakinlogis(mendekatikenyataan).

12.2.Tabungnegatifpalsudanpositifpalsu

Tabungnegatifpalsumungkinterjadijikamikroorganismetargetyangterdapatpadatabunggagalmenghasilkanindikasiyangdisyaratkanmetodeuntukdinyatakansebagaitabungpositif.Beberapasebabyangdapatdiidentifikasidiantaranyaadalah:(1)Terdapatbahanyangdapatmematikandanmenghambatmikroorganismeatauberinterferensidenganmedia,misalnyaChlorinepadaair.(2)Gagalnyaujipenegasdanpelengkapdalammengidentifikasimikroorganisme terkaitkarena tidak semua (100%) strainmampudideteksimetabolismenyadenganprosedur tertentu sehinggatabung penduga yang semula positif dinyatakanmenjadi negatif,misalnya padametode ISO 7251: 2005 terdapat catatan bahwa strain patogenE.colitidakmamputumbuhpadasuhu44CsaatdikonfirmasidenganpadaECbroth.(3)Tabungdurhamdilingkupiatautenggelamolehsubstratsampel padat dari homogenat sampel sehingga gas tidakmampu terperangkap.Disarankan tetapmelihat pembentukangas denganmenggoyangtabungsehinggatimbulbuih(effervescence).

Sedangkantabungpositifpalsudapatdisebabkanoleh(1)Terjadinyatabungpositifolehmikroorganismenontarget,misalnyamenurutHussongetal. (1981:35) beberapa strain Bacillus spp. dan Aeromonas spp. mampu pada membentuk gas pada tahap penduga. Oleh karena itu pellicle(substansilengketbakterifilm)tidakbolehterambilsaatdiinokulasikanlagipadatahappenegasdanColiformumumnyatidakmembentukpellicle.(2)Kontaminasi oleh bakteri lain termasuk oleh isolat kontrol uji, sehingga disarankan penanaman isolat kontrol dilakukan setelah analisa. (3)Kontaminasisilangdaritabungyanglain.Olehkarenaitulebihtepatmenggunakaninoculationsticksekalibuangsaatujipenegasjikapembakaranjaruminokulumberkalikalidirasakurangmenjaminsterilisasi.(4)Masihterdapatnyaudarapadatabungdurhamkarenakesalahanpreparasimedia.Jikaterdapatudarapadadurhamdantidaktimbulbuihmakaumumnyaadalahreaksinegatif.

13.TabelMPN

TabelMPNberbagaiseritabungdapatdilihatpadatautanberikut:http://mikrobiologipraktik.com/tabelmpn/

Disusunoleh:IndraPradhika,2014

Referensi:

AOAC (Asociation ofOfficialAnalyticalChemistry). 2005.AOACOM966.24.ColiformGroup andEscherichia coliMicrobiological (MPN)Method.AOACOfficialMethodofAnalysisMicrobiologicalMethodsCh.17:5.

AOAC.2005.AOACOM983.25.TotalColiforms,FecalColiformsandE.coli inFoods,HydrophobicGridMembraneFilterMethod.AOACOfficialMethodofAnalysisMicrobiologicalMethodsCh.17:40.

AOAC.2005.AOACOM991.14.ColiformandEscherichiacoliCountinFood,DryRehydratableFilm(PetrifilmTME.coli/ColiformCountPlateTMandPetrifilmTMColiformCountPlateTM)Methods.AOACOfficialMethodofAnalysisMicrobiologicalMethodsCh.17:32.

AOAC.2005.AOACOM2005.03.DetectionandConfirmedQuantitationofColiformandE.coli inFoods.SimPlateColiformandE.coliColorIndicator.AOACOfficialMethodofAnalysisMicrobiologicalMethodsCh.17:36.

APHA(AmericanPublicHealthAssociation),AWWA(AmericanWaterWorksAssociation)danWEF(WaterEnvirontmentFederation).2006.StandardMethodforExaminationofWaterandWastewater9221:MultipletubefermentationtechniqueformembersoftheColiformgroup.

Brown, AE, 2001. Benson : Microbiological Application, Laboratory Manual in General Microbiology, Ed ke8. New York: Mc Graw HillCompanies.

BSN(BadanStandardisasiNasional),2006.SNI012332.12006,Caraujimikrobiologibagian1:penentuanColiformdanEscherichiacoli pada



produkperikanan.

akir,I,HBDoan,EBapinar,FKiven,danAKHalkman.2002.TheneedforconfirmationinColiformandE.colienumerationinfood.TurkJVet&AniSci26:10491053.

Cho,KH,HanD, ParkY, Lee SW,Cha SM,Kang JH, danKim JH. 2010. Evaluation of the relationship between two differentmethods forenumerationfecalindicatorbacteria:colonyformingunitandmostprobablenumber.JEnvSci(China)22(6):846850.

Curiale,MS,TSons,DMcIver,JSMcCallister,BHasley,DRoblee,danTCFox.1991.DryrehydratablefilmforenumerationtotalColiformandEscherichiacoliinfoods:collaborativestudy.JAOACIntl74(4):635648.

FDA(FoodandDrugAdministration).2001.BacteriologicalAnalyticalManualAppendix2:Mostprobablenumberfromserialdilution.

FDA.2002.BacteriologicalAnalyticalManualChapter4:EnumerationofEscherichiacoliandtheColiformbacteria.

Hildebrandt,GdanWSchott. 2001.Comparison of direct colony countmethods and theMPNmethod for quantitative detection ofListeria inmodelandfieldconditions.BerlinerundMnchenertierrztlicheWochenschrift114(1112):45364.

Hussong,D,JMDamar,RMWeiner,danRRColwell.1981.BacteriaassociatedwithfalsepositivemostprobablenumberColiformtestresultsforshellfishandestuaries.ApplEnvironMicrobiol41(1):3545.

ISO(InternationalStandardOrganization).2001.ISO/TR13843:2001.Waterqualityguidanceonvalidationofmicrobiologicalmethods.

ISO.2005.ISO7251:2005.MicrobiologyoffoodandanimalfeedingstuffshorizontalmethodsforthedetectionandenumerationofpresumptiveEscherichiacolimostprobablenumbertechniques.

ISO.2006.ISO4831:2006.MicrobiologyoffoodandanimalfeedingstuffshorizontalmethodsforthedetectionandenumerationofColiformsmostprobablenumbertechniques.

ISO. 2007. ISO 7218:2007(E) Microbiology of food and animal feeding stuffs general requirements and guidance for microbiologicalexaminations.

Gronewold,ADdanRLWolpert.2008.Modelingtherelationshipbetweenmostprobablenumber(MPN)andcolonyformingunit(CFU)estimatesoffecalcoliformconcentration.WaterRes42(13):33273334.

Kajikawa,H,YNagasakidanAAbe.1990.Comparisonbetweencolonycountingmethodandmostprobablenumbermethodinenumerationofrumenbacteriafermentingspecificsubstrates.Jpn.JournalZootech.Sci61(9):810814.

Kodaka,H,HTeramura, TNirazuka, SMizuochi. 2006. Comparison of the compact dryCFwith themost probable numbermethod (AOACOfficialMethod966.24)forenumerationofColiformbacteriainrawmeats.JAOACIntl89(1):115126.

OblingerJLdanJAKoburger.1975.Understandingandteachingthemostprobablenumbertechnique.JMilkFoodTechnol38(9):540545.

Paulsen, P, CBorgetti, E Schopf, dan FJM Smulders. 2008. Enumeration of Enterobacteriaceae in various foodswith a new automatedmostprobablenumbermethodcomparedwithpetrifilmandinternationalorganizationforstandardizationprocedures.JFoodProt71(2):376.

Sutton, Scott. 2006. Counting Colonies. Pharmaceutical Microbiology Forum Newsletter. 12(9).http://www.microbiol.org/white.papers/WP.count.colony.htm.[2Oktober2009].

UNEP(UnitedNationsEnvironmentProgramme) /WHO(WorldHealthOrganization).1996Waterqualitymonitoringapracticalguide to thedesignandimplementationoffreshwaterqualitystudiesandmonitoringprogrammes,Chapter10Microbiologicalanalyses.

USDA(UnitedStatesDepartementofAgriculture)/FSIS(FoodSafetyandInspectionService).2008.Mostprobablenumberprocedureandtables.

Wohlsen, T, J Bates, GVesey,WARobinson danMKatouli. 2006. Evaluation of themethods for enumerating coliform bacteria fromwatersamplesusingprecisereferencestandards.Jcompilation2006TheSocietyforAppMicrobiol,LettersinAppMicrobiol42:350356.

3M. 2004. 3M petrifilm E. coli count plate results from most probable number (MPN) results conversion table.http://www.microlabscr.com/resources/MPN+to+PEC+Conversion+Table+Dec03.pdf.[3Januari2013].

Aboutindrapradhika

beginnermicrobiologistViewallpostsbyindrapradhikaTags:NotagsCategories:MostProbableNumberYoucanleavearesponse,ortrackbackfromyourownsite.

LeaveaReply

Youremailaddresswillnotbepublished.

Name

Email

Website

UjiTuringPublikTerotomatisasiPenuhuntukmembedakanKomputerdanManusia*



two =2

Comment

YoumayusetheseHTMLtagsandattributes:

PostComment

MesinPencari

UntukPembaca

SitusinididedikasikanuntukmempermudahpendidikandiIndonesiadalambidangilmumikrobiologidanditujukanuntukmahasiswa,analisdanprofesiterkaitlainnya.Situsinidibangunsecaraprofesionaldanberisimateriyanglengkapdanvalidsehinggadapatmeningkatkankepercayaanpembacaterhadapkontenyangdisuguhkan.Jikaterdapatpertanyaan,dapatdiajukandikolomkomentar.Diharapkanuntukparaahlidapatmemberisaranjikamenemukankesalahanpadawebini.

Semogabermanfaat.

email:[email protected]

DaftarIsiSitus

KataPengantarTentangPenulisSterilisasiMediaPertumbuhanMikroorganismeMostProbableNumber(MPN)TabelMPN

KomentarTerbaru

indrapradhikaonTabelMPNadeonTabelMPNpuspaonSterilisasiindrapradhikaonTabelMPNgeoonTabelMPN

survey

ApakahlatarbelakangAnda?

BiologiumumBakteriologiBioteknologi/GenetikaFarmasiPertanianPeternakanTeknologipanganKedokteran/Kesehatankimialainnya

Vote

ViewResults

ApakahprofesiAnda?

pelajarmahasiswasarjanamahasiswapascasarjanaguru/dosenpeneliti/asistenpenelitianalis/laboranQA/QCoperator



lainnya

Vote

ViewResults

tautanMetodeStandardMikrobiologi

FDABAMmicrobiologymethodsISO/TC147/SC4MicrobiologicalmethodsISO/TC34/SC9MicrobiologyOfficialMethodsofAnalysisofAOACINTERNATIONALStandardMethodsAPHAAWWAWEF

tautansitusbidangilmulain

chemistry.orgsicencebiotech.net

histat

kamimengucapkan:

ataskunjungananda



MikrobiologiPraktik

ThemebyW3blog

Copyright2015mikrobiologipraktik.com.AllRightsReserved.PremiumWPPlugins

uji mpn sesuai sni.pdf

Documents