prinsip dasar kloning (4)
Post on 13-Jul-2015
958 Views
Preview:
TRANSCRIPT
Ana Indrayati
Pengertian teknologi DNA rekombinan (kloning)
Komponen kloning Vektor Enzim restriksi DNA ligase Sel kompeten DNA donor (sisipan)
Tahapan kloning
Cara seleksi hasil kloningKarakterisasi hasil kloning
Genomik/kromosom:
karena terdapat di dalamkromosom
Ekstrakromosom: terdapat diluar kromosom-PLASMID Sirkuler/ bulat Dapat bereplikasi
sendiri (karena mempunyai origin of replication /ori)
Rekayasa genetika
DNA kloning: perbanyakan gen di dalam suatu selyang bukan inang alamiah/aslinya Pembentukan molekul DNA baru yang disebut molekul
DNA rekombinan-penyisipan molekul DNA ke dalamsuatu vektor sehingga memungkinkan molekul rekombinan tersebut untuk terintegrasi dan mengalami
perbanyakan di dalam sel inang
ENZIM RESTRIKSI: ENZIM YANG DAPAT MEMOTONG DNA PADA URUTAN YANG SPESIFIK ENZIM DNA LIGASE: ENZIM YANG DAPAT MENYAMBUNGKAN POTONGAN DNA DNA REKOMBINAN: DNA YANG BERASAL DARI MOLEKUL DNA ASING YANG DISISIPKAN KE DALAM SUATU PLASMID/VEKTOR PLASMID: MOLEKUL DNA SIRKULER, EKSTRAKROMOSOM, DAPAT BEREPLIKASI SENDIRI TRANSFORMASI: PROSES MEMASUKKAN DNA REKOMBINAN KE DALAM SEL INANG
KLONING: PROSES PERBANYAKAN DNA REKOMBINAN DI DALAM SEL INANGKLON: KUMPULAN SEL YANG MEMBAWA PLASMID REKOMBINAN YANG SAMA
DNA DONOR: DNA YANG AKAN DIKLON ENZIM RESTRIKSI PLASMID/VEKTOR - VEKTOR KLONING: MEMPEBANYAK DNA DNA LIGASE SEL INANG
ISOLASI DAN PERBANYAKAN DNA: PCR PEMOTONGAN DENGAN ENZIM RESTRIKSI LIGASI DENGAN ENZIM DNA LIGASE TRANSFORMASI KE DALAM SEL INANG KARAKTERISASI KLON HASIL TRANSFORMASI
Sisi pengenalan
enzim restriksi
Urutan nukleotida rantai atas=urutan
nukleotida rantaibawah Sisi pengenalan enzim
restriksi
DNA (enzim restriksi) 5- NNNGAATTCNNN -3 3- NNNCTTAAGNNN -5 EcoRI 5- NNNG 3- NNNCTTAA AATTCNNN -3 GNNN -5
DNA (ligase) 5- NNNGOH 3- NNNCTTAAPPAATTCNNN
-3
OHGNNN
-5
ligase 5- NNNGAATTCNNN -3 3- NNNCTTAAGNNN -5
Sel yang siap
menerima DNAdari luar
CaCl2 meningkatkan permeabilitas membran sel bakteri
Heat shock/kejut panas 42oC. 90 detik
Analisis migrasi Analisis restriksi: enzim restriksi PCR DNA sekuensing
top related