oleh: purwadi, m.si
Post on 09-Jan-2016
67 Views
Preview:
DESCRIPTION
TRANSCRIPT
Oleh: Purwadi, M.Si.
Universitas Tulang Bawang, Bandar Lampung, 2009
Kromatografi Kolom TerbukaKromatografi Kolom Terbuka
ColorColorSistem pemasukan sampel: manual, tidak volumetrik Injector
Waktu analisis lama, mengandalkan gaya grafitasi dan kapiler pompa
Hasil pemisahan kurang baik pengemasan kolom
Kesulitan Pengamatan hasil pemisahan untuk analit tidak berwarna Detektor
Kesulitan penghitungan kadar integrator
KCKT dikembangkan dari kromatografi kolom terbuka untuk menjawab kekurang-kekurangan tersebut
Injector: Sistem pemasukan sampel: sample loop dan robotik injektor, sangat volumetrik
Pompa: Waktu analisis singkat, pengulangan/presisi baik
Kolom: baja, packing kompak, partikel sangat kecil, tekanan dapat dibuat besar Hasil pemisahan baik
Detektor: semua zat dapat diamati (tidak harus berwarna)
Integrator:dilengkapi komputer, bisa menghitung AuC mudah penghitungan kadar
Sehingga disebut: Kinerja Tinggi
BAGAN SISTEM KCKT
pompainjektor
kolom
oven
detektor
Wadahsolven
integrator
WADAH FASE GERAK
Merupakan tandon berisi fase gerakMempunyai sistem penyaring
POMPAMerupakan sistem agar fase gerak mengalir.Kinerja pompa yang diinginkan :Tekanan yang dihasilkan tinggi
Fluktuasi tekanan rendah
Kecepatan aliran fase gerak tepat
Column
Column
Pump
[LOAD][LOAD][INJECT][INJECT]
Pump
INJEKTOR: Alat untuk pemasukan sampel ke dalam sistem KCKT
kolom
posisi load Posisi injectpompa pompa kolom
sample loop
Sistem sample loop injektor
OVEN KOLOM – instrumen pemanas
Syarat :1. Keseragaman temperatur yang baik2. Kestabilan temperatur yang baik3. Ketepatan kontrol temperatur yang baik
Kolom pada KCKT
> Penampang: baja tahan karat, tahan tekanan tinggi
Ukuran partikel sangat kecil: pengepakan lebih kompak, hasil pemisahan lebih baik
Dapat dipakai berulang
Yang umum dipakai Detektor Ultraviolet / Visible (UV/VIS) Detektor Photodiode Array (PDA) Detektor Fluorescence (RF) Detektor Konduktivitas (CDD) Detektor Refraktive Indeks (RID) Detektor Elektrokimia (ECD) Detektor spektrometer massa
DETEKTOR HPLC
Ein
ACl= - log (Eout / Ein)
lHk.Lambert-Beer
kuvetkuvet
DETEKTOR SPEKTROFOTOMETER UV/VIS
Eout
Prinsip: penyerapan sebagian energi (hv) oleh molekul pada panjang gelombang tertentu => tereksitasi elektronik
Eksitasi elektronik
ACl= - log (Eout / Ein)
abso
rban
si
konsentrasi
Kisaran linear 1
275 nm275 nm
208 nm208 nm275 nm275 nm
208 nm208 nm
Pemilihan pjg gelb.: quantitative / preparative?
Detektor Photodiode Array
Sample Cell
512 Elements Photodiode Array
Grating
D2 / W lamp
satu elemen dapatMendeteksi absorban Pada satu pjg gelb..
Detektor Photodiode Array : Kromatogram 3D
waktu
Panj
ang
gelb
.
Ab
sorb
ans
i
kromatogramSpektrum
Detektor Photodiode Array
Puncak dapat di identifikasi dengan spektrum UV. Pemeriksaan kemurnian puncak dapat dilakukan.
--overlap 3 spektrum
--rasio kromatogram
--perbandingan threshold dan similarity index.
Detektor Spektrofluoresen
+ h1
h2+
*
A
A*
A
h1 h2
Excitation Wavelength
Emission Wavelength
FluorescenceFluorescence
*
Rancangan Cell untuk detektor Fluorescence
Reagen derivatisasiReagen OPA untuk amine primer
Reagen ADAM untuk asam lemak
CHN29-anthryldiazomethane(ADAM)
+ R-COOH
CH2OCOR
CHO
CHOo-phthalaldhyde(OPA)
+ R-NH2 N-R
A
A
Detektor Refraktive Indeks
Sistem optik
Detektor Refraktive Indeks
Kromatogram gula Analytical Conditions
Column : Shim-pack CLC-NH2
Mobile phase : Acetonitrile / water
= 7 / 3 Flow rate : 1.0 mL/min Temperature : Ambient
Peaks
1. Glycerol
2. Xylose
3. Fructose
4. Glucose
5. Sucrose
6. Manose
7. Lactose
BAGIAN DARI SISTEM HPLC
Detektor Konduktifitas
I
V
L
A A
K (conductivity) = I [A] / E [V] =A [cm2] / L [cm] * k (k : specific conductivity)
k= (I/E)*(L/A)k= (I/E)*(L/A)
elektroda
Detektor Konduktifitas Konduktifitas sangat dipengaruhi temperatur. Cell harus diletakkan pada kondisi temperatur
terkontrol
Kromatogram anion dalam air laut Analytical Conditions
Column : Shim-pack IC-A3 Mobile phase :
8.0 mM p-hydroxybenzoic acid
3.2 mM Bis-Tris * Flow rate : 1.5 mL/min Temperature : 40 C Injection Volume : 100 uL
Peaks 1. F (1.4 ppm) 2. Cl (10200 ppm) 3. NO2 (10 ppm) 4. Br (43 ppm) 5. NO3 (44 ppm) 6. SO4 (431 ppm)
Bis-Tris : bis (2-hydroxyethyl) iminotris (hydroxymethyl) methane
Perbandingan detektor
LOD : Limit deteksi (S/N=3)GC : Gradient Compatibility
UV/ VIS RF RID CDD ECD
LOD 10 ppb 10 ppt 100 ppb 10 ppb 100 ppt
GC Yes Yes No No No
top related