biounnes_elektroforesis
Post on 19-Aug-2015
11 Views
Preview:
TRANSCRIPT
ELEKTROFORESIS KELOMPOK 3 BIOLOGI
ROMBEL 2 SOFIAN AZALIA HUSAIN 4411411036
ITA DWI RAFITA 4411411050
Biology Non EducationSecond Group
Semarang State University
Instrumentasi
PENGERTIAN
ELEKTROFORESIS
TUJUAN
STANDAR PRODUSER KERJA ALAT
ELEKTROFORESIS
• Elektroforesis adalah suatu proses berpindahnya partikel sol karena pengaruh medan listrik. Pada elektroforesis, terjadi partikel-partikel koloid bermuatan sehingga jika dalam sistem koloid dimasukkan dua elektrode yang dihubungkan dengan sumber arus listrik, maka partikel koloid yang bermuatan positif bergerak ke katode (elektrode negatif) dan partikel koloid negatif bergerak ke anode (elektrode positif).
ELEKTROFORESIS GEL AGAROSA
Elektroforesis DNA merupakan teknik untuk memisahkan sampel DNA berdasarkan atas ukuran (berat molekul) dan struktur fisik molekulnya. Gel yang biasa digunakan antara lain agarosa. Elektroforesis gel agarosa dapat dilakukan untuk memisahkan sampel DNA dengan ukuran dari beberapa ratus hingga 20.000 pasang basa (bp/base pairs).
Teknik ini digunakan untuk analisa : - DNA - RNA - Protein
GAMBAR ELEKTROFORESIS
-ffffff
Electrode -
Electrode +
Gel agarose
buffer
tutup
Pandangan Samping Electroforesisi
Kawat electrode (+)
Marker DNA
Sumur gel untuk sample DNA
Kawat electrode (-)
Pandangan Atas Gel
Sumur
Fragmen DNA Arah electroforesis
Membrane selulose
Setelah Fragmen DNA menempel di membran selulose, berikutnya diresuspensi
TUJUAN
Melakukan elektroforesis DNA menggunakan teknik elektroforesis gel agarosa
BAHAN DAN ALAT
•Horizontal Agarosa gel electrophoresis apparatus •Larutan buffer TAE 50x di encerkan 1 kali.•Akuades •Gelas Ukur 1000 ml •Labu Erlenmeyer 50 ml •UV transiluminator / gel •Microwave•Power supply•Sisir pembentuk sumur
•Tabung mikrosentrifuga •Sarung tangan •Seperangkat mikropipet beserta tipnya (Bio-Rad dan Axygen Scientific) •Kertas parafilm •seperangkat alat elektroforesis •Loading dye•larutan Etidium Bromid (EtBr)
STANDAR PROSEDUR CARA KERJA
Pembuatan Gel Agarose Dan Proses Elektroforesis
Tentukan konsentrasi gel agarose yang diinginkan,
misal konsentrasi
0,8% Timbang agarose sesuai dengan
kebutuhan, larutkan dalam 1X buffer TAE
(dalam bekerglass atau
tabung erlenmeyer),.
Panaskan dalam
microwave kurang lebih 1-2 menit,
sampai mendidih dan
larutan menjadi jernih.
Larutan agarose di dinginkan
sampai kira-kira 60°C
dan tambahkan 5µl EtBr, campur
sampai rata. Larutan dituang
kedalam try dan pasang
sisir pembentuk
sumur.
Biarkan sampai gel mengeras
kurang lebih 30 menit. Lepaskan
sisir pelan-pelan, gel
agarose siap digunakan.
Pembuatan Gel Agarose
• Letakkan Try yang berisi gel agarose kedalam alat elektroforesis, tuangkan 1X buffer TAE kedalam alat sampai gel agarose terendam.
•Ambil sampel DNA menggunakan mikropipet kira-kira 4 µl, letakkan/ teteskan pada parafilm dan tambahkan loading day 1 µl, di aduk.
•Setelah semua sampel DNA masuk dalam sumur, alat elektroforesis di tutup, hubungkan dengan power supply tegangan listrik yang digunakan biasanya 80-100 volt.
•Ambil larutan DNA dengan mikropipet dan masukkan ke dalam sumur gel agarose.
PROSES ELEKTROFORESIS
Proses elektroforesis
siap dijalankan,
lama elektroforesis
tergantung konsentrasi agarose dan
ukuran DNA.
Setelah proses selesai ,
matikan arus listrik dan ambil try dengan
menggunakan sarung tangan.
Taruh di atas UV
transiluminator untuk diamati,
bisa didokumentasi
dengan fotopolaroid.
KARAKTERISASI DNA DAN RNA : ELEKTROFORESIS
1. Untuk mencek apakah proses isolasi DNA atau RNA berhasil2. Mengetahui ukuran dan bentuk suatu partikel baik DNA, RNA dan protein3. Untuk Elektroforesis digunakan untuk mengamati hasil amplifikasi dari DNA. (mencek produk PCR)4. Mencek hasil restriksi DNA
Hasil elektroforesis yang terlihat adalah terbentuknya band yang merupakan fragmen DNA hasil amplifikasi dan menunjukkan potongan-potongan jumlah pasangan basanya
Secara prinsip, teknik ini mirip dengan kromatografi: memisahkan campuran bahan-bahan berdasarkan perbedaan sifatnya.
Teknik elektroforesis mempergunakan medium yang terbuat dari gel Perpindahan partikel pada medium gel tersebut dipengaruhi oleh faktor-faktor seperti - ukuran partikel, - komposisi dan konsentrasi gel, - densitas muatan, - kuat medan listrik dan sebagainya.
Semakin kecil partikel tesebut, maka pergerakan atau migrasinya akan semakin cepat, karena matriks gel mengandung jaringan kompleks berupa pori-pori sehingga partikel-partikel tersebut dapat bergerak melalui matriks tersebut
• Tyas : hasil akhir pembuatan gel..apakah setiap kita akan menggunakan gel,,apakah sekali atau tidak??hasil membaca uji elektroforesis??
• Ratna : 80-100 kenapa??di video 130??fungsi EtBr??
• Indah: apa kelebihana fotopolaroid seperti apa?
• Tiwi : fungsi plester??
top related