ELISA

( ENZYME- LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY )

Agar terjadi suatu reaksi warna pada elisa, maka dibutuhkan suatu antibodi yang dilabel enzym,

dan substrat yang diberi indikator warna yang dikenal dengan kromogen

Enzym yang digunakan untuk melabel antibodi antara lain :

Sedangkan substrat yang digunakan :

1. Alkalin fosfatase Alkali fosfat

2. Horseradish peroxidase peroksidase

3. Beta- galaktosidase Beta- galaktosa

Pada elisa ada beberapa metoda antara lain :

1. Direct elisa

2. Indirect elisa

3. Sandwich elisa

4. Compettitive elisa

Elisa( enzyme- linked immunosorbent assay )Agar terjadi suatu reaksi warna pada elisa, maka dibutuhkan suatu antibodi yang dilabel enzym, dan substrat yang diberi indikator warna yang dikenal dengan kromogenEnzym yang digunakan, sedangkan subtrat untuk melabel antibodi antara lain: yang digunakan1. Alakalin fosfatase alkali fosfat

2. Horseradish peroxidase peroksidase

3. Beta galaktosidase beta galaktosa

Pada elisa ada beberapa metoda antara lain : 1. Direct elisa2. Indirect elisa3. Sandwich elisa4. Compettitive elisaPada elisa bahan yang dideteksi sebelumnya harus ditempelkan pada fase padat (pada microtiter well). Bahan ( ag / ab) dapat menempl pada microtiter wells, karena wells ini telah dilapisi dengan polysterine/ polyvinylchloride. Prinsip dasar elisa terdiri dari : A. Fase coatingB. Fase reaksi ag-ab C. Fase reaksi kimiawiMetoda pemeriksaan mikroskopi elektronMikroskop elektron1. Mikroskop elektron transmisi ( tem)

A. Metoda directMetoda ini umumnya digunakan untuk pemeriksaan virus

B. Metoda indirect2. Mikroskop elektron scanning (sem)

1

2

Pada elisa bahan yang dideteksi sebelumnya harus ditempelkan pada fase padat ( pada microtiter well)

BAHAN ( ag / ab) DAPAT MENEMPL PADA MICROTITER WELLS, KARENA WELLS INI TELAH DILAPISI DENGAN

POLYSTERINE/ POLYVINYLCHLORIDE

1. Direct elisa :

Prinsip dasar elisa terdiri dari : A. Fase coatingB. FASE REAKSI ag-abC. Fase reaksi kimiawiPenjelasan

Bahan yang diperiksa

4° semalam

Cuci

Reaksi warna

Ukur pada elisa reader

: Kromogen: Substrat: Ab.Dilabel enzym

3

2. INDIRECT ELISA

BAHAN YANG DIPERIKSA

4°SEMALAM

CUCI

CUCI

REAKSI WARNA

UKUR PADA ELISA READER

3. DIRECT SANDWICH ELISA

Ab.SPECIFIC WELL COATED

CUCI

REAKSI WARNA

UKUR PADA ELISA

READER

Ag.YANG

DIUKUR

VIII. PEMERIKSAAN ELISA (CAIRAN)Pemeriksaan ELISA ( cairan ) dapat di lakukan pada beberapa penyakit, antara lain :

4

4. INDIRECT SANWICH ELISA

Ab.SPESIFIC WELLS COATED

CUCI PBS

CUCI PBS

CUCI PBS

BACA PADA ELISA READER

BAHAN YG AKAN

DITENTUKAN

Prinsip kerja elisa reader

Sumber cahaya (polikromatik)

Monokromator

SampelSinar

monokromatik

Sinar yg diteruskan

Galvanometer yg dipasang terbalik

Semakin sedikit sinar yang diteruskamaka angka pembacaan semakin besar

- HBV

- HCV

- HIV

- AIV

Dengan menggunakan wel elisa yang jumlahnya 96 lubang. Pada dinding wel terdapat bahan

yang disebut poli fenil klorida/ poli bromida sehingga virus dapat menempel. Proses penempelan

berlangsung semalam pada suhu 40C. Setelah itu baru dilakukan pemeriksaan elisa.

Gambar

serum

I. DIRECT

II. INDERCT

1.

2.

3.

5

ELISA40C semalam

Indirect

Direct

nempel

+

anti HIV dilabel peroksidase

+warna

subtrat

+ Stop Buffer HCL 0,1 N

+

Anti HIV

+

Enzim label( peroksidase )

+kromogen

Catatan : makin banyak/ gelap warnanya maka virusnya makin banyak.

IX. ROS (Reaktif Oksigen Spesies)

ROS adalah suatu bahan yang dihasilkan oleh tubuh dalam bentuk Radikal Bebas dan

Oksidan,berfungsi untuk membunuh bakteri dan membunuh enzim resistem.

Alur :

Fagosit dicaplok makrofag → fagolisosom → sistem enzim ( lisosom ) + ROS → meng-

hancurkan bakteri.

- Secara fisiologis : Kelebihan radikal bebas atau oksidan dalam tubuh akan diredam oleh anti

radikal bebas atau anti oksidan.

- Secara patologis : Bila radikal bebas atau oksidan >> dari anti radikal bebas atau oksidan.

ROS dengan anti ROS harus seimbang

ROS > Anti ROS : stres oksidatif

ROS < Anti ROS : infeksi

Oksidatis stress : kondisi dimana ROS lebih besar dari anti ROS (O2- dan H2O2 meningkat yang

dapat merusak sel.

Contoh dari anti ROS : Scavenger enzym

Yang termasuk scavenger enzym : SOD (Super Oksid Dismutase), katalase, dan glutation.

SOD (Super Oksid Dismutase) berfungsi menguraikan radikal super oksid menjadi peroksida (O2-

H2O2)

SOD

Katalase berfungsi mengubah H2O2 menjadi H2O dan O2.

Glutation berfungsi mengubah H2O2 menjadi H2O.

Reaksi scavenger enzym :

O2- H2O2 H2O + O2

SOD Katalase

Glutation

H2O

6

substrat

Contoh dari ROS :

Radikal Bebas Super Okside ( O2¯ ),termasuk radikal bebas Sering

Radikal Bebas Hidroksil (OH*), termasuk oksidan memunculkan

Radikal Bebas Peroksil (ROO*),termasuk oksidan masalah pada

Hidrogen Peroksida (H2O2) manusia

Peroksida Lipid (LOOH)

Ion Hipoklorit (OCl¯ )

Radikal Bebas : Atom/gugus yang kulit luarnya memiliki elektron yang tidak berpasangan (unpired

electron).

Oksidan : Suatu senyawa yang dapat menerima elektron (electron aceptor).

Jadi, radikal bebas adalah oksidan tetapi tidak semua oksidan termasuk radikal bebas.

Yang bisa menetralkan ROS itu : vitamin C dan betakarotin (anti ROS) terdapat pada wortel.

Contoh :

O2 + e- O2-

O2- + e- + 2H+ H2O2

H2O2 + e- + H+ OH* + H2O

Catatan :

O2¯ dan H2O2 merupakan electron aceptor

O2¯ : Radikal Bebas

H2O2 : Oksidan,mudah disintesis

Apabila pada enzym scavenger terjadi penurunan, maka H2O2 dan O2- akan bereaksi dengan

membran sel,sehingga terbentuk suatu lipid perokside yang dikenal dengan Malon Dialdehide

(MDA) adalah lapisan lemak didalam sel karena O2- dan H2O2 meningkat sehingga memicu

kematian sel,yang menimbulkan respon imun.

Jika SOD dan katalase menurun maka O2- dan H2O2 akan tinggi dan akan mengakibatkan

oksidatif stress,terdapat pada pasien DM, Rotgen Toraks, Kemoterapi dan Olah raga yang

berlebihan bisa merusak jantung dan otak. Bila pasien habis dari radioterapi, jika badan merasa

panas pasien tidak boleh diberi air karena dapat merusak sel yang dapat menimbulkan radikal

bebas.

Alur :

ROS kerusakan sel akibat radikal bebas dibris fagositosis oleh makrofag masuk

sistem imun makrofag menjadi aktif berupa IL.6 dan TNF α merangsang hipothalamus

melepas prostaglandin menimbulkan reaksi panas.

7

Sedangkan OH* dapat menembus membran inti dan bereaksi dengan DNA, sehingga DNA

akan mengalami kecacatan/kerusakan dan akhirnya sel menjadi abnormal atau mengalami

kematian.

Proses pembentukan radikal hidroksil (OH*) ini dapat melalui dua jalur yaitu reaksi

haberweis dan reaksi venton sehingga dikenal dengan reaksi haberweis venton ( Reaksi HV).

Reaksi Haberweis : O2- + H2O2 O2 + OH*

Reaksi Venton : a. Fe2+ + H2O2 Fe3+ + OH* + OH-

b. Cu+ + H2O2 Cu2+ + OH* + OH-

X. HEMATOLOGI MALIGNANSIMalignant :

Penyakit keganasan yang memiliki multigene defect

(gen yang cacat karena faktor mutasi, mutasi karena efek radiasi dan virus (oncovirus) contohnya

EBV, HPV, bahan” kimia),

8

Khusunya gen yang mengatur siklus pembelahan sel

Tumor supressor gene (p15, p16, p53, p21, pRb, Bax),

menghambat siklus pembelahan sel, sel bermutasi (protein inaktif) dan

Protooncogene (Ras, BCl-2, C-myc), memicu pembelahan sel,sel bermutasi mengalami (protein

overaktif).

Kecacatan dapat terjadi karena mutasi, mutasi dapat disebabkan oleh radiasi, virus

(oncovirus) contohnya EBV : Ebsten Barr Virus (pada saluran napas atas) dan HPV : Human

Papiloma Virus (pada servix dan rektum), dan bahan kimia contohnya benzophynin, nitrosamin.

Mutasi : Perubahan susunan nukleotida pada DNA baik melalui belesi, insersi, maupun translokasi.

DNA membentuk mRNA protein

Bila DNA mengalami mutasi maka mRNA akan berubah.

Mutagen : bahan yang dapat memicu terjadi mutasi.

Contoh bahan kimia :

A. Alkylating Agents, misalnya

= dimethylsulfate

= ß-proplolactone

= Ethyl methane sulfonate (EMS)

B. Polycyclic dan heterocyclic aromatik hydrocabons

= benz (a) anthracene

= benzo (a) pyrene

= dibenz (a,h)anthracene

C. Aromatic amines

= 2-Naphtylamine (ß-naphthylamine)

= benzidine

= dimethylaminoazobenzene

Contoh Virus

9

EBV Masuk melalui mukosa orofaring dan B limfosit melalui reseptor

(CD-21/CR-2) atau kontak antara sel yang terinfeksi (limfosit-B/sel nasofaring)

interaksi antara integren ß-1 atau α.5-ß.1 dengan EBV BMRF-2 menembus lateral membran

pada epitel yang berdekatan mempengaruhi DNA host mutated (onkogen)

siklus pembelahan sel tidak terkendali (malignant).

Radiasi/radikal bebas, panas, dingin

Iosnisasi : sinar-X, sinar-V

Radiasi

Non ionisasi : ultra violet

Secara langsung

Efek radiasi ionisasi

Secara tidak langsung

Efek secara langsung : merusak inti sel

Efek tidak langsung :airnya yang dipengaruhi keganasan

Hematologi Malignasi Leukimia

A. Leukimia (Kanker darah)

Suatu penyakit yang ditandai adanya penimbunan sel darah putih yang abnormal.

Leukimia dibagi menjadi dua:

a. Leukimia Akut

> 50% terdiri dari myeloblast/limfoblast.

1. AML (Akut Myloblastik Leukimia)

Pada Leukimia ini umumnya sel dapat berupa : Myloblastik Derdeferensiasi baik dan

Myloblastik Derdeferensiasi jelek

Misalnya : - Promyelositik

- Myelomositik

10

2. ALL (Akut Limfoblastik Leukimia)

Pada Leukimia ini umumnya sel dapat berupa Limfoblast

3. Leukimia Kronik

1. CGL ( Kronik Granulositik Leukimia )

2. CLL ( Kronik Limfositik/limfatik leukemia )

Terapi : berupa penghambat DNA, contoh : Dosopisin, Disopesan.

DNA sintetis paling banyak ditemukan di embrional (rambut)

B.SLE (Systemic Lupus Erytromatosis)

Suatu penyakit yang melibatkan banyak sistem organ (autoimun) karena antibodi

muncul didalam tubuh dan merusak tubuhnya sendiri.

Sasaran utama :

Sistem Haemopoitik

Kulit

Sendi (Bengkak)

Ginjal (Gagal Ginjal)

Tulang

SLE : bersifat sistemik dan gejalanya bermacam-macam.

SLE Ab Ag

Tulang sis.darah kulit

KEMATIAN SEL

Ab menyerang pada tulang, system darah ( yang mengakibatkan terjadi anemia ), kulit, ginjal dan

akan mengakibatkan proses kematian sel.

Kematian sel :

Nekrosis

Onkosis

Apoptosis

Nekrosis, yaitu kematian sel karena kerusakan system membrane.

Penyebab nekrosis :

Aktivitas/aktivasi enzim proteolitik (lisosom). Didalam fagolisosom tewrdapat lisosim

Aktivitas ROS Radiasi, bisa menimbulkan lipid peroksin

11

Kemoterapi

Bakteri

Reaksi imunologik

Onkosis, yaitu kematian sel karena pembengkakan dan akan pecah sehingga terjadi lisis

karena terdapat faktor iskemia terjadi di membran sel.

Iskemik (kekurangan oksigen) ditemukan pada cardiac arrest (jantung berhenti).

ATP ase : memecah ATP, ATP dibentuk dari karbohidrat dan oksigen.

Apoptosis, yaitu kematian sel karena kerusakan perangkat genetic. Pada mulanya apoptosis

dikenal dengan “ Program cell death “ (program kematian sel), dimana membran utuh tetapi isi sel

rusak.

Telomeres : untuk melindungi kromosom agar tidak terjadi fragmentasi/kerusakan.

Telomere akan berkurang dalam sel apabila terjadi pembelahan sel, pada sel normal telomere akan

memendek. Enzym telomerase : membuat telomere menjadi imortal (hidup terus) pada sel ganas.

Jadi apoptosis tidak terjadi kerusakan membran dan isi sel tidak keluar sehingga tidak terjadi

inflamasi, sedangkan pada onkosis dan nekrosis terjadi kerusakan membran sel dan isi sel keluar

sehingga terjadi inflamasi atau radang.

Apoptosis :

Apoptosis fisiologik : tergantung pada telomere

Apoptosis patiologik : faktor lingkungan (karena ROS, Radiasi, Enzym, Hormon dan

Ligan- Fas (LF)).

Intra sel komponen cairan keluar inflamasi

1. ROS

Contoh : pada penuaan akan mengalami disfungsi mitokondria

Semi otonomi DNA membentuk protein BNIP3,dalam mitokondria terdapat poros

pt.pore (permeabilitas transision pore) didalam pt.pore ada pintu ANT protein

(bertanggung jawab sebagai pintu untuk selalu menutup)

BNIP-3 menonaktifkan ANT protein agar bisa membuka mengeluarkan Cytrokome

mengaktifkan APOF-1 (Apoptosis Protease Activing Tactor) mengaktifkan caspase

masuk intisel merusak DNA sel akan mati mengeluarkan ROS (O2 dan H2O2)

bereaksi membentuk OH* (radikal hidroksin) pindah ke inti sel memutuskan rantai DNA

merusak DNA

2. Radiasi (R)

Dalam sel menimbulkan H 2O O2- H2O2 OH* merusak DNA dan menimbulkan

apoptosis dan malinansi

12

Radiasi

3. Enzym dan LF (ligant fas)

Enzym sitotoksin memacu apoptosis.

NK sel + CTL : menghasilkan ligant

Makrofag + IFN γ : menghasilkan fas

Sitotoksin :

a. Perfosin : Melubangi sel, setelah terjadi pelubangan sitotoksin mengeluarkan granzym.

b. Granzym : Mengeluarkan caspase dan DNAse yang mematikan sel

Fas mengeluarkan FADD (Fas Associated protein Death Domain) : Mengaktifkan caspase dan

DNAse yang mematikan sel.

4. Faktor Hormon

Contoh : Hormon seks dan Endometrosis

Hormon seks mematikan sel (Apoptosis)

Wanita Menstruasi darah bisa keluar di Ovarium sebagian keluar di Cavum Peritonis dan

sebagian masuk Peritonium darah tersebut akan dihancurkan NK sel aktif (rusak).

Apabila NK sel tidak aktif akan memunculkan Makrofag yang memakan Debris. Makrofac

tersebut menjadi aktif dan mengeluarkan IL, IL6, IL8, IL1, TNF α, TNFß .

IL1, IL6 : Membuat sel menjadi banyak

IL8 : Berperan membentuk Angiogenesis (pembentukan pembuluh darah)

TNF ß : Merangsang pembentukan Fibrous yang membuat masa tumor.

Proses infertil pada Wanita:

Endometrosis : Timbul tumor di dalam jaringan Endometrium

Sel-sel tumor yang berkembang Aromatisasi dan menghasilkan Estrogen apabila dibuahi pada

folikel premerdial folikel graft, serta Estrogen menekan FSH yang membuat infertil.

FSH

Aromatisasi : Suatu proses dimana sel tersebut menghasilkan estrogen.

FSH : Folikel Stimuliti Hormon

Angiogenesis : Pembentukan pembuluh darah.

Fibrous : Jaringan Ikat

Folikel Premordial Folikel Graft yang dibuahi sperma

TNF

Menekan FSH Tidak matur, infertil (Mandul).

13

Pada pria:

Ners cell : merawat spermatogenium sampai menjadi spermatozoa, dan menghasilkan ligan

sedangkan sertoli menghasilkan fas.

Sel Leyding : menghasilkan testosteron (prostat, spermatogenesis). Sel Leyding dapat terganggu

karena torsi (testis terpeluntir) testosteron tidak dapat menghasilkan spermatogenesis dan ners cell

terganggu.

14

PENYAKIT KEGANASAN

MEMILIKI MULTI GENE

DEFECTKHUSUSNYA GEN YANG

MENGATUR SIKLUS

PEMBELAHAN SEL

SEPERTI: TUMOR SUPRESSOR GENE: p53,p21,pRb, Bax PROTOONCOGENE : Ras,BCl-2,C-myc.

MALIGNANT

15

TRANSKRIPSI

TRANSLASI

SINTASA PROTEINDN

ADNA

PROTEIN mR

NAPROTEIN

PURINPYRIMIDIN

ADENIN , GUANINURASIL , CITOSIN

BASA- N PADA RNA

Kode genetik

Mutasi : perubahan susunan nukleotida pada DNA, baik melalui delesi, insersi maupun translokasi

16

BAHAN KIMIA :A. Alkylating Agents = dimethyl sulfate= β-Propiolactone = Ethylmethane sulfonate (EMS)B. Polycyclic dan heterocyclic Aromatik Hydrocabons

= benz(a)anthracene = benzo(a)pyrene = dibenz(a,h)anthracene

C. Aromatic Amines= 2-Naphtylamine (β-naphthylamine) = benzidine = dimethylaminoazobenzene

17

Bila tumor supressorgene yang mengalami mutasi

Maka protein yang disandinya akan bersifat inaktif

Bila protoonkogen mengalami mutasi

Maka protein yang disandinya akan bersifat over aktif

ANTARA LAIN : BAHAN KIMIA,VIRUS, RADIASI/ RB

MUTAGEN

RADIASI/ RADIKAL BEBASRadiasi, radikal bebas, panas, dinginRadiasi : = iosnisasi : sinar-x,sinar-γ = non ionisasi : ultra violet Efek radiasi ionisasi : = secara langsung = tidak langsung Efek secara langsung : merusak inti sel

18

EBV

MASUK MELALUI MUKOSA

OROFARING DAN B

LIMFOSIT

MELALUI RESEPTOR

(CD-21/CR-2)

ATAU : KONTAK ANTAR SEL YANG TERINFEKSI ( LIMFOSIT-B/ SEL NASOFARING) INTERAKSI ANTARA INTEGRIN β-1 ATAU α.5-β-1 DENGAN EBV BMRF-2 MENEMBUS LATERAL MEMBRAN PADA EPITEL YANG BERDEKATAN

MEMPENGARUHI DNA HOST

MUTATED (ONKOGEN )

SIKLUS PEMBELAHAN

SEL TIDAK TERKENDALI ( MALIGNANT )

HAEMATOLOGI MALIGNANSI LEUKEMIADEFINISI :LEUKIMIA : suatu penyakit yang ditandai adanya penimbunan sel darah putih abnormal.

LEUKIMIA AKUT : > 50% terdiri dari myeloblast atau limfoblast1. AML ( Akut Myeloblastik Leukemia)

19

EFEK SECARA TIDAK LANGSUNG

MASUK KE INTI SEL

MEMUTUS RANTAI DNA SEL

MATI

MUTASI

MALIGNANT

Pada leukemia ini umumnya sel dapat berupa .. = myeloblastik berdeferensiasi baik = myeloblastik berdeferensiasi jelek misalnya : - promyelositik - myelo monositik2. ALL ( akut limfoblastik leukemia) Pada Leukemia Ini Umumnya Sel Dapat Berupa

= limfoblast

LEUKEMIA KRONIK1. CGL ( Kronik Granulositik Leukemia)

2. CLL ( Kronik Limfositik/Limfatik Leukemia)

SLE (SYSTEMIC LUPUS ERYTROMATOSIS)SLE : suatu penyakit yang melibatkan banyak sistem organSasaran utama : sistem haemopoitik, kulit, sendi, ginjal

Pada penyakit ini banyak melibatkan auto antibodiSeperti antibodi terhadap : eriytrosit, leukosit, trombosit

Selain itu juga timbul antibodi terhadap : nukleus

antigen-antigen lain yang tidak diketahui asalnya.

SISTEM IMUN DAN PENGENDALIAN KANKER.

20

21

IMUNOLOGI INFEKSI

22

Respons hospes terhadap agent infeksiBerdasarkan dari reaksi hospes tentunya setiap agen infeksi akan memberikan respon imun

yang berbeda, yaitu :1. Jenis mikro organisme

Seperti : - virus : hiv, dhv- Parasit : toxocra

- Bakteri : mb. Lepra

- Jamur : trichophyton, candida

2. Kondisi host stress

Virus misal : v. Hepatitis, v dengue, hiv, aiv, ebv, hpv

Istilah yang perlu diketahui :1. Kapsid : Mantel protein yang membunkus genum asam nukleat

2. Kapsomer : Unit morfologi yang terlihat dengan mikroskop elektron (icisahedral)

3. Amplop : Sebuah membran lipid yang mengellingi partikel virus

23

Stres dapat menimbulkan respon psikologis berupa general adaptation syndrome (GAS) Yang meliputi

beberapa tingkatan

Alarm and mobilitatio

n phase

Resistance (Adaptif phase)

Exhaustion

phase

Aktivitas individu masih

nampak meningk

at

Individu sudah kehabisan

energi sehingga,

terlihat individu mulai banyak keluhan dan aktivitasnya

mulai menurun.

Individu malas dan

sering mengalami kesakitan.

4. Nucleocapsid : Suatu kompleks protein asam nukleat yang mewakili bentuk bungkus gen

virus

5. Virion : Partikel virus yang lengkap

Virus adalah agen infeksi terkecil yang hanya memiliki satu jenis asam nukleat (rna atau dna) sebagai genom mereka. Asam nukleat tebungkus dari mantel protein yang dikelilingi dari membran lipid.

Unit virus yang infektif disebut sebagai virion

Di lingkungan ekstra seluler virus dalam keadaan inert ( diam)

Virus akan mengalami replikasi bila berada dalam sel ( intra seluler)

Setiap replikasi akan menghasilkan asam nukleat dan mantel protein virus dalam jmlh

banyak. Mantel protein virus bergabung bersama-sama membentuk kapsid yang berfungsi

membungkus dan menjaga stabilitas asam nukleat virus terhadap pengaruh lingkungan.

Infeksi virus terhadap sel inangnya bersifat spesifik

Sel inang yang dimasuki virus bisa berefek ringan, tidak berefek sama sekali atau dapat

merusak sel iang sampai mati

Klasifikasi virus :Dalam taksonomi untuk membedakan keluarga virus berdasarkan pada :

Morfologi virion

Bagian fisiko kimia ( banyak molekul, bj, atau stabilitas ph

Bagian gene virus meliputi jenis asam nukleat ( dna/rna)

Contoh DNA-virus :A. Parvo virus : parvoirus-b.19

B. Adeno virus : aviadenovirus., mastadenovirus

C. Herpes virus : herpes simplex

D. Pox virus : variola., vaccinia

E. Hepadna virus : hepatitis-b

Contoh MA-virus :A. Picorna virus : hepatovirus(vha).

B. Rotavirus

C. Hiv

D. Aiv

Ekologi dan Cara Penularan Virus

24

Aiv (avian influenza virus )

Famili/ genus : orthomyxoviridae

Virus influenza a dan b

Aiv (avian influenza virus )

Ukuran : 80-120 nm Genom MA Memiliki dua macam membran antigen :

1). Mayor antigen yaitu : haemaglutinin ( h ), Ag ini yang mengalami perubahan yang dominan

2). Antigen neuraminidase (n ) Ag pada ”aiv ”: h5n1

Aiv : menginfeksi epitel saluran nafas

Haemaglutinin dari virus menempel pada “n-acetyl

Neuramic acid” pada permukaan sel yang berupa

Glikoprotein dan glycolipid

Neuraminidase dapat mempengaruhi neuramic acid pada membran sel, sehingga sel dapat

menempel.

25

ARTHROPODAARTHROPODA

MANUSIA

MANUSIA

VERTEBRATA LEBIH RENDAH

MANUSIA

A.

B.

MISAL : DENGGUEMISAL : HIV, HBV, HERPESC

MANUSIA

MANUSIA

MANUSIA

?MISAL : AIV

BABI

Menempelnya MA Pada Sel

Patogenesis

Imuno defisiensiImuno defisiensi terjadi karena adanya kecacatan genetik dari sel imunokompeten.

Kecacatan ini dapat terjadi karena adanya faktor tertentu seperti radiasi, infeksi virus atau suatu radikal bebas.

Untuk memahami terjadnya imunodefesiensi coba diperhatikan konsep dasar respons imun

26

SIKLUS

VIRUSMENGINFEK

SI SELEFEK LITIK SEL

PERTAHANAN ADAPTIF

( HUMORAL IMUN RESPONS)

INFLAMASI

SALURAN NAFAS BAWAH

REAKSI IMUNOPATOLOGIK

GANGGUAN SISTEM

PERNAFASAN

XI. Pengiriman Bahan Pemeriksaan

Patologi

a. Patologi anatomi yaitu mempelajari penyakit yang mempengaruhi berbagai sistem penyusun

tubuh.

b. Patologi klinik yaitu perubahan resiko biokimia tubuh.

Contoh :

BUN, kreatinin → serum → darah → ( jangan sampai terjadi goncangan keras karena akan

terjadi lisis dan jangan disuhu panas ) → dikirim.

( darah boleh dikirim apabila sudah dibentuk menjadi centritosa )

Pemeriksaan dilakukan melalui susunan pada DNA/RNA, protein, sel, jaringan.

1. Jaringan ada 2 macam :

a. Jaringan keras, contoh : tulang gigi → fiksasi → dekalsifikasi.

b. Jaringan lunak, contoh : otak, saraf, dan sebagianya.

Tujuan fiksasi :

- Mempertahan morfologi sel seperti semula.

- Mencegah otolisis ( lisis dengan sendirinya ).

27

APC

IL-12

TH-2

TH-1

TH-0

CTL

LIMF-B

SEL PLASMA

SEL MEMORISEL

-NK

SEL MATI SEL

TUMOR / SELTERINF.VIRUS

L

FAS

IL-2 ,IFN-γ

IL-2 IFN-

IL-1TNF-β

IFN-γIFN- γ

IL-5

IL-4

IL-6

ANTIBODIIL-

10

: Defect mengakibatkan respons imun tidak berlangsung

- Mencegah terjadinya pertumbuhan bakteri / jamur.

Ex. Larutan fiksasi :

- Formalin 37 – 40 % identik dengan 100%.

- Larutan Zenker, helly.

- Metanol, dll.

Supaya bahan fiksasi dengan mudah menyerap kedalam jaringan maka jaringan harus

dipotong dengan ketebalan sekitar 0,5 mm. Lama pemberian fiksasi min. 15 – 24 jam.

Untuk memperoleh hasil yang optimal maka jaringan terlebih dahulu harus diperoses,

melalui beberapa tahapan :

Seperti : Dehydrasi, Clearing, Impregnasi, Embedding

Catatan :

Bahan impregnasi harus sama dengan bahan embedding

Dekalsifikasi, yaitu penarikaan kalsium dari dalam jaringan.

Larutan dekalsifikasi, yaitu HNO3, EDTA, PERINYI, FORMICACID.

Perbandingan larutan dekalsifikasi 1 : 50.

Cara dekalsifikasi sempurna ( menghilangkan kalsium ) :

a. Radiologi

b. Fisika : jaringan di dekalsifikasi dengan ditusuk.

c. Kimiawi : jaringan di dekalsifikasi di pindah kan ditempat lain dan bila ada gelembung

berarti masih ada kalsium.

2. Sel Exvoliative ( pelepasan spontan )

Dapat ditemukan atau diperiksa :

a. Sputum, cairan urine, cairan asites, cairan pleura, cairan sendi, cairan tubuh.

Urine

} Pemeriksaan Secara Basah dan Secara

KeringSputum

Cairan asites, pleura, dan sendi

Urine

Secara Basah : urine dengan larutan 50% ethanol dicampur dan dimasukan kedalam

wadah.

Alkohol konsentrasi tinggi dapat membuat degenerasi sel dan tidak dapat untuk hapusan.

28

Urine diputar dengan kecepatan 2000rpm dan dimsukan kedalam wadah lalu

dikeringkan di suhu kamar 5 – 10 menit kemudian difiksasi.

Pengambilan untuk memeriksa kelainan pada buli – buli di sistem urinaria dan dalam

pengambilan urin pasien disuruh loncat – loncat kemudian urin di tampung.

Sputum

Cara pemeriksaannya,

Sputum secara langsung ( basah dan kering ) : sputum yang lansung di keluarkan oleh

penderita dan dapat dikirim.

Secara Basah : sputum dilarutkan dalam larutan fiksasi yaitu ethanol 70% kemudian

diambil daerah yang padat.

Secara Kering : sputum yang padat ditempelkan di double glass lalu di fiksasi

dengan ethanol 95% selama 25 menit.

Sputum yang ditampung selama 24 jam disebut sputum koleksi.

Sputum koleksi dipakai untuk mendapatkan sputum dari bronkus paru, untuk

mendapatkan dalam 3 hari diberi ekspetoransia lalu 3 hari berikutnya ditampung dan

diberi ethanol 70%.

Tujuan pemeriksaan sputum :

Untuk menentukan adanya peradangaan atau keganasaan dalam baru.

Kelebihan : dapat diperikasa dengan sputum banyak.

Kelemahan : tidak dapat menentukan kelainan paru kiri atau kanan.

Cairan asites

Cara pemeriksaannya,

1. Basah

Cairan di fiksasi dengan ethanol 70% dengan volume yang sama kemudian diberi

label.

2. Kering

Cairan asites diputar 2000rpm → sedimen → hapusan.

Tujuan pemeriksaan : untuk menentukan adanya metastase atau penyebaran sel – sel

kanker.

Cairan pleura

Tujuan untuk menentukan adannya metastase atau peradangan.

Cairan sendi

Tujuan untuk menentukan adanya radang atau keganasan

Cairan tubuh

29

PCR

↓

DNA ← Riverse Transkriptase RNA

Senyawa yang membantu PCR :

Enzim → ( tag enzym : enzym yang tahan 900C )

Primer → primerase

Nukleutida → A, G, T, C

Polymerase → rantai DNA berdasarkan enzym polimerase

b. Sel kerokan di dapat dari bucal, vagina.

Sel kerokan → dikerok ditempel dengan obyek gelas kemudian difiksasi, dikeringkan

dengan suhu ruangan 250C

Sel infrin didapat dari luka, secret genetalis pada laki – laki.

PENGIRIMAN BAHAN PEMERIKSAANPATOLOGI

Patologi anatomi patologi klinik

patologi anatomi

Patos : sakit urai tubuhLogos : ilmu

Mempelajari mempelajariPenyakit berbagai sistem

Penyusun tubuh

SISTEM PENYUSUN TUBUH MANUSIA

Tubuh manusia

Organ

Jaringan

Seluler

Tingkat ‘’dna’’Molekuler

30

Mempelajari penyakit yang mempengaruhi berbagai sistem penyusun tubuh

Perubahan reaksi bio kimiawi tubuh

Tingkat ‘’protein

Individu yang mengalami penyakit

Setelah di analisa

Terjadi perubahan pada sitem

molekuler seluler jaringan Organ

Tingkat ‘’dna’’ Tingkat ‘’protein’’

Patologi : Orientasnya penentuan ‘’dx’’ dari suatu penyakit dalam berbagai sistem ( jaringan atau cairan tubuh)Patobiologi : Orientasnya mempelajari proses penyimpangan suatu sistem yang memicu terjadinya dari suatu penyakit

Untuk menentukan suatu diagnostik sangat diperlukan

1. Cara pengambilan bahan, 1. proses pembuatan preparat2. Cara pengawetan bahan, 2. cara pemeriksaan bahan /serum3. Cara pengiriman bahan

31

Persiapan bahan :Jaringan yang diambil dari individu, harus segera dilakukan fiksasi

Supaya bahan fiksasi dengan mudah menyerap ke dalam jaringan maka jaringan harus dipotong dengan ketebalan sekitar 0,5 m m

Adapun tujuan fiksasi :1. Memepertahankan morfologi sel seperti semula

2. Mencegah otolisis

3. Mencegah pertumbuhan bakteri atau jamur

Contoh larutan fiksasi :1. Formalin2. Larutan zenker3. Metanol , dll

Untuk memperoleh hasil yang optimal maka jaringan terlebih dahulu harus diperoses, melalui beberapa tahapan Seperti :

A. DehydrasiB. ClearingC. ImpregnasiD. Embedding

Catatan : Bahan impregnasi harus sama dengan bahan embedding

Cara pewarnaan ( he ) yang progressive1. Xylol : 2 menit 2. Xylol : 2 menit 3. Etanol absolute : 1 menit 4. Etanol absolute : 1 menit 5. Etanol 95% : 1 menit 6. Etanol 95% : 1 menit 7. Etanol 80% : 1 menit 8. Cuci air : 10-15 menit 9. Mayer’s haematoxylin : 15 menit 10. Cuci air mengalir sekitar : 10-15 menit ( sampai berwarna biru)11.eosin : 15 detik – 2 enit 12. Etanol 95% : 1 menit 13. Etanol 95% : 1 menit 14. Etanol 100% : 1 menit 15. Etanol 100% : 1 menit 16. Etanol 100% : 2 menit 17.xylol : 2 menit 18. Xylol : 2 menit 19. Xylol : 2 menit 20 mounting dengan entelan / canada balsem

32

CARA PEWARNAANA.

B.

Gambar jaringan hati

Teknik imunologiImuno teknik : adalah suatu metoda yang dapat digunakan untuk mendeteksi adanya

suatu ag / ab baik pada bahan yang berupa cairan/ suspensi ataupun pada bahan yang berupa jaringan /sel

33

1

34

UNTUK PEMERIKSAAN BAHAN, YANG BERUPA

CAIRAN/SUSPENSIBERDASARKAN PADA KADAR DARI

ANTIGEN ATAU ANTIBODI YANG

DIPERIKSATINGGI SEDANG RENDAH

METODA METODA METODAPRESIPITASI AGLUTINASI AMPLIFIKASI MISAL: RID

MISAL: GRAVINDEX

ELISA/RIA (CAIRAN)

IHC(JARINGAN)