6. rehana_fagositosis makrofag ok.pdf

8/11/2019 6. Rehana_Fagositosis makrofag ok.pdf

1/4

Acta Pharmaciae Indonesia

1(1) 32-35

32

Aktivasi Fagositosis Makrofag Menggunakan Ekstrak N-heksan Daun Lidah

Buaya (Aloe vera)

Activation Macrophage Phagocytosis UsingN-Heksan Extract Aloe vera

ABSTRAK

Rehana, Eka

Prasasti Nur

Rachmani,

Iskandar Sobri

Jurusan Farmasi Fakultas

Kedokteran dan IlmuIlmu Kesehatan UNSOED

e-mail:

[email protected]

Kata kunci:

Lidah buaya

Fagositosis

in vitro

Jus lidah buaya (Aloe vera) terbukti secara klinis meningkatkan sistem kekebalan tubuh yang

ditandai degan meningkatnya jumlah sel T CD4+yang berfungsi mengaktivasi fagositosis makrofag

terhadap HIV yang sudah berikatan dengan antiretrovirus. Penggunaan daun lidah buaya dalam

bentuk segar mudah ditumbuhi mikroorganisme .. Upaya yang dapat dilakukan untuk mengatasi hal

tersebut adalah menyari zat-zat yang berpotensi sebagai imunomodulator menggunakan pelarut

organik. Penelitian ini bertujuan mengetahui adanya peningkatan aktivitas dan kapasitas fagositosis

sel makrofag yang diinduksi ekstrak n-heksan daun lidah buaya.

Penelitian ini merupakan eksperimental laboratorium. Penyarian dilakukan dengan metode maserasimenggunakan metanol 99% dilanjutkan ekstraksi menggunakan n-heksan sehingga diperoleh 1,244

gram ekstrak n-heksan. Uji aktivasi fagositosis makrofag dilakukan secara in vitro dengan

pembanding ekstrakphyllantus niruri. Kemampuan aktivasi fagositosis makrofag dinyatakan dalam

nilai aktivitas dan kapasitas fagositosis.

Hasil penelitian menunjukan ekstrak n-heksn 125 dan 250 ppm dapat meningkatkan aktivitas dan

kapasitas fagositosis makrofag meskipum belum menunjukan perbedaan yang bermakna secara

statistik.

Keywords:

Aloe vera

Phagocytosis

in vitro

Aloe vera fresh juice is clinically proven to enhance the immune system marked by increase in the

number of CD4+T cells that function activates macrophage phagocytosis against HIV that has been

bonded to antiretroviral. The use of aloe vera leaves in fresh form easily overgrown

microorganisms, so that form can not be developed on an industrial scale. That problem can besolved by quote immunomodulatory potential substance use organic solvents. The objective of this

study was to determine the increase in phagocytosis activity and capacity of macrophages induced

n-hexan extract of aloe vera.

This is a laboratory experimental study. Extraction was done by maceration method using 99%

methanol followed by extraction with n-hexane to obtain 1.244 grams of n-hexan extract. Activation

of macrophage phagocytosis ability assay using in vitro method by comparison phyllantus niruri

extract. Activation of macrophages phagocytosis ability was expressed as phagocytosis activity and

capacity.

The results showed 125 dan 250 ppm of n-hexan extracts can enhance macrophage phagocytosis

activity and capacity whereas statistically not significant.

Pendahuluan

Lidah buaya (Aloe vera) merupakan tanaman yang

mudah tumbuh di negara tropis seperti Indonesia

(Jatnika, 2009). Uji klinik yang dilakukan pada 29

orang yang positif terinfeksi HIV menunjukan

konsumsi jus yang mengandung 500 gram daun lidah

buaya segar dengan frekuensi pemberian sekali dalam

sehari sebagai tambahan dalam terapi HIV selama 180

hari meningkatkan sistem kekebalan tubuh dengan

naiknya jumlah sel limfosit T CD4+ dan berkurangnya

replikasi HIV yang ditandai dengan turunnya jumlah

antigen P24 (Pulse andUhlig, 1990). Imunomodulator

merangsang tubuh memproduksi sel T CD4+ yang

berfungsi mengaktivasi fagositosis makrofag terhadap

HIV yang sudah berikatan dengan antiretrovirus

(Bratawidjaja, 2002).

Penggunaan daun lidah buaya dalam bentuk segar

mudah ditumbuhi mikroorganisme. Upaya yang dapat

dilakukan untuk mengatasi hal tersebut adalah

menggunakan pelarut organik untuk menyari zat-zat

yang berpotensi sebagai imunomodulator.
mailto:[email protected]:[email protected]:[email protected]


2/4

33 Rehana, E. P. N. Rachmani, I. Sobri

Daun lidah buaya mengandung berbagai senyawa

organik polar dan semipolar yang dapat tersari pada

maserasi menggunakan metanol yang perlu diteliti

aktivitas imunomodulatornya. Penelitian ini menguji

kemapuan ekstrak metanol daun lidah buaya dalammengaktivasi kemampuan fagositosis sel makrofag,

melalui pengujian aktivitas dan kapasitas fagositosis

makrofag.

Penelitian ini bertujuan mengetahui adanya

peningkatan aktivitas dan kapasitas fagositosis sel

makrofag yang diinduksi ekstrak n-heksan daun lidah

buaya.

Bahan dan Metode

Pengambilan sampel

Sampel daun lidah buaya diambil dari kelurahan

Pabuaran kecamatan Purwokerto Utara, Kabupaten

Banyumas, Jawa Tengah.

Determinasi sampel

Determinasi tanaman lidah buaya dilakukan di

Laboratorium Taksonomi Tumbuhan Fakultas Biologi

Universitas Jenderal Soedirman. Determinasi dilakukan

untuk memastikan bahwa sampel yang diambil

merupakan daun lidah buaya.

Ekstraksi sampel

Daun lidah buaya dicuci bersih dan dibebaskan dari

pengotor pengotor yang ada. Daun lidah buaya yang

sudah dicuci bersih dipotong tipis-tipis. Kemudian

dikeringkan menggunakan oven pada suhu 70oC.

Simplisia tersebut kemudian diblender hingga menjadi

serbuk kering.

Sebanyak 48,49 gram serbuk kering direndam

menggunakan 250 mL metanol 99% selama 24 jam.

Setelah 24 jam perendaman, filtrat disaring

menggunakan corong Buchner lalu ditampung

sedangkan ampasnya direndam kembali selama 24 jamdalam metanol dengan volume yang sama. Proses

perendaman dan penyaringan diulang hingga 3 kali.

Semua filtrat yang diperoleh dicampur dan dipekatkan

menggunakan rotary evaporator pada suhu 65oC

dengan kecepatan 30 rpm sehingga diperoleh 80mL

ekstrak cair pekat.

Sebanyak 80 mL ekstrak metanol ditambah 80 mL n-

heksan pa kemudian dikocok dan dibiarkan terpisah

sempurna membentuk dua lapis cairan yaitu fase

metanol pada lapisan bawah dan fase n-heksan pada

lapisan atas. Fase metanol dicuci lagi menggunakan n-

heksan dengan cara yang sama sebanyak 2 kali lagi.

Fase metanol dikumpulkan menjadi satu kemudian

diuapkan menggunakan rotary evaporator pada suhu

65oC dengan kecepatan 30 rpm sehingga diperoleh

1,244 gram ekstrak n-heksan.Pembuatan ekstrak n-heksan 125, 250, dan 500 ppm

Sebanyak 10,3 mg ekstrak n-heksan dilarutkan dalam

50 L DMSO kemudian ditambah 53 L RPMI 1640

FBS sehingga diperoleh ekstrak n-heksan dengan

konsentrasi 100.000 ppm. 22 L fraksi 100.000 ppm

ditambah 4378 L RPMI 1640 FBS sehingga

diperoleh ekstrak n-heksan 500 ppm. Fraksi 500 ppm

diencerkan 2 kali sehingga diperoleh ekstrak n-heksan

250 ppm. 2,2 mL fraksi 250 ppm ditambah 2,2mL

RPMI 1640FBS sehingga diperoleh ekstrak n-heksan

125 ppm.

Pembuatan suspensi Phyllantus niruri 125 ppm

5,5 L suspensi Phyllantus niruri 5mg/mL ditambah

2145 RPMI 1640 FBS sehingga diperoleh suspensi

125 ppm.

Pembuatan suspensi sel makrofag

Mencit dimatikan menggunakan eter atau dislokasi

leher. Mencit diletakan pada posisi terlentang, kulit

bagian perut dibuka dan selubung peritoneumnya

dibersihkan dengan alkohol 70%. Sebanyak 10 mlmedium RPMI 1640 diinjeksikan secara intra peritoneal

menggunakan spuit 27G. Kemudian dibiarkan selama 3

menit sambil ditekan tekan perlahan supaya medium

menyebar ke seluruh bagian peritoneal dan sel

makrofag terbentuk. Cairan peritoneum diaspirasi

dengan cara menekan organ dalam dengan 2 jari

kemudian cairan diambil menggunakan jarum spuit

25G secara intra peritoneal pada bagian yang tidak

berlemak dan jauh dari usus.

Aspirat yang diperoleh disentrifugasi dengan kecepatan

750 rpm pada suhu 4C selama 10 menit. Endapandisuspensikan dalam medium RPMI 1640-FBS.

Sebanyak 10 L suspensi sel diteteskan ke dalam

haemositometer kemudian dihitung jumlah sel pada 5

bilik. Kepadatan sel dihitung dengan rumus:

Jumlah sel/mL = ( sel bilik A + sel bilik B + sel

bilik C + sel bilik D)/4 x 5 x 104. Diperoleh

kepadatan 7,75 x 106sel/ml.

Sebanyak 1,620 mL suspensi sel diencerkan

menggunakan medium RPMI 1640-FBS sehingga


3/4

Acta Pharmaciae Indonesia

1(1) 32-35

34

diperoleh 5 mL suspensi sel dengan kepadatan

2.500.000 sel/mL

Uji fagositosis makrofag

Suspensi sel dikultur pada sumuran microplate 24 yang

sudah dilapisi cover slips bulat, setiap sumuran berisi

200L (500.000 sel). Sel diinkubasi dalam incubator

CO2 5% pada suhu 37C selama 30 menit. Kemudian

ditambah 0,8 mL medium RPMI 1640-FBS dan

inkubasi dilanjutkan selama 21 jam. Inokulum dicuci

menggunakan medium RPMI 1640 sebanyak 2 kali

kemudian ditambah : 1) 1 mL ekstrak n-heksan dengan

konsentrasi 500 ppm; 2) 1 mL ekstrak n-heksan dengan

konsentrasi 250 ppm; 3) 1 mL ekstrak n-heksan dengan

konsentrasi 125 ppm; 4) 1 mL ekstrak Phyllantus

niruri dalam RPMI 1640-FBS dengan konsentrasi 125

ppm pada kelompok kontrol positif; 5) 1 mL RPMI

1640-FBS pada kontrol negatif.

Semua kelompok diinkubasi pada kondisi yang sama

selama 4 jam. Inokulum dicuci 2 kali menggunakan

medium RPMI 1640. Setiap sumuran ditambah 200 L

suspensi lateks dalam RPMI 1640 - FBS dengan

kepadatan 2,5x107/mL atau 5x10

6 sumuran, kemudian

diinkubasi lagi selama 30 menit. Inokulum dicuci

dengan PBS sebanyak 2 kali kemudian dibiarkan kering

pada suhu ruang. Masing masing sumuran difiksasi

dengan metanol absolute selama 30 detik. Metanol

dibuang dan inokulum dibiarkan kering. Masing

masing sumuran diwarnai dengan larutan Giemsa 10 %

selama 20 menit. Hasil pewarnaan dicuci 2 kali dengan

aquadest. Cover slips diangkat dan dikeringkan pada

suhu ruang. Sel makrofag yang telah terwarnai oleh

giemsa akan berwarna merah berbentuk menyerupai

monosit jika sel dalam keadaan dorman, berbentuk

amoeboid jika sel dalam keadaan aktif dan adanya

badan inklusi jika sel telah memfagositosit lateks.

Jumlah sel dihitung menggunakan mikroskop dengan

perbesaran 400 kali. Pengujian dilakukan dalam 3 kali

pengulangan. Selanjutnya dihitung aktivitas dan

kapasitas fagositosit dari tiaptiap perlakuan.

Hasil dan Pembahasan

Daun lidah buaya dideterminasi untuk memastikan

kebenaran taksonominya, selanjutnya dikeringkan pada

suhu 70C. Pengeringan dilakukan pada suhu tersebut

bermaksud untuk menghindari tumbuhnya mikroba jika

dikeringkan pada suhu ruang dan mengghindari

rusaknya metabolit jika dikeringkan pada suhu diatas

70C. Simplisia kering diserbukan supaya luas

permukaan kontak simplisia dengan pelarut maserasi

menjadi semakin besar dan proses maserasi menjadi

lebih efektif.

Metabolit yang terkandung dalam simplisia disari

menggunakan metanol 99%. Metanol dipilih sebagai

penyari dikarenakan polaritasnya berada ditengah tengah sehingga dapat menyari metabolit yang relatif

polar maupun non polar. Filtrat yang diperoleh

dipekatkan terlebih dahulu sebelum dilakukan ekstraksi

menggunakan n-heksan. Pemekatan dimaksudkan

untuk meningkatkan efektifitas pemisahan mengingat

metanol dapat melarutkan senyawa polar dan non polar,

pada konsentrasi rendah senyawa non polar dapat larut

dalam n-heksan dan metanol tetapi pada konsentrasi

yang lebih tinggi akan larut dalam n-heksan. N-heksan

dipilih sebagai pencuci karena tidak dapat campur

dengan metanol.

Ekstrak n-heksan dikeringkan menggunakan rotary

evaporator pada 65C dengan kecepatan 30 rpm

sehingga diperoleh 1,244 gram ekstrak n-heksan berupa

ekstrak kental berwarna hijau kehitaman.

Ekstrak kental yang diperoleh diuji aktivitas dan

kapasitas fagositosisnya menggunakan metode in vitro.

Dalam metode ini sel makrofag diinkubasi terlebih

dahulu selama 30 menit dan 21 jam dalam incubator

CO2 5% pada suhu 37oC dengan tujuan untuk

mengadaptasikan sel dari kondisi in vivo di dalam

peritoneal mencit menjadi kondisi pengujian in vitro.

Sel makrofag diaktivasi dengan ekstrak metanol dengan

konsentrasi 125, 250 dan 500 ppm dengan pembanding

Phyllantus niruri sebagai imunomodulator alami yang

terbukti secara klinis berpotensi imunomodulator

mengandung zat aktif tanaman tersebut. Makrofag aktif

ditantang dengan lateks beads untuk melihat kapasitas

fagositosisnya. Lateks beads dipilih sebagai makanan

makrofag dikarenakan bentuknya homogen dan sangat

jelas terlihat pada hasil pewarnaan menggunakan

giemsa.

Sel yang telah diwarnai akan berwarna merah keunguan

terdiri atas vakuola dan inti sel. Inti sel lebih menyerap

warna sehingga warnanya lebih pekat daripada vakuola.

Sel berbentuk bulat jika dalam keadaan dorman dan

berbentuk tidak beraturan jika dalam keadaan aktif.

Lateks beads akan berwarna lebih pekat dan mengkilap

(Ellis, 2007).

Ekstrak n-heksan 125 dan 250 ppm dapat

meningkatkan aktivitas dan kapasitas fagositosis

makrofag meskipun belum menunjukan perbedaan

yang bermakna secara statistik pada taraf kepercayaan


4/4

35 Rehana, E. P. N. Rachmani, I. Sobri

95%. Ekstrak n-heksan 500 ppm menurunkan aktivitas

fagositosis karena banyaknya sel yang lisis (Mayer,

2008), sehingga perlu dilakukan penelitian lebih lanjut

untuk mengetahui dosis optimum yang dapat


makrofag. Optimasi dosis pemberian ekstrak n-heksan

dapat dilakukan pada kisaran dosis 250 hingga 500

ppm.

Gambar 1 Makrofag dorman Gambar 2 Makrofag aktif

Tabel 1Aktivitas dan kapasitas fagositosis makrofag

Kelompok Aktivitas Fagositosis Makrofag (%) Kapasitas Fagositosis Makrofag

Kontrol Positif 31,34436 75,66445

Kontrol Negatif 21,42995 75,10504

N-heksan 125 ppm 23,02774 98,53325

N-heksan 250 ppm 25,32903 128,57620N-heksan 500 ppm 17,48340 130,07945

Simpulan

Ekstrak n-heksan 125 dan 250 ppm dapat


makrofag .

Daftar Pustaka

Baratawidjaja, K.G., 2002, Imunomodulasi dalam :

Imunologi dasar, Edisi 5, Jakarta, Balai

Penerbit FKUI:372-390.

Ellis, R., 2007, Giemsas Staining Protocol for

Tissue Sections, IMVS Division of Pathology

Queen Elizabeth Hospital.

Jatnika, A., Saptoningsih, 2009, Meraup Laba dariLidah Buaya, Jakarta, Agro Media Pustaka:1-

26.

Mayer, G., 2008. Innate (Non-Spesifik) Immunity.

Microbiologi and Biology online. The Boardof Trustees of the University of South

Carolina.

Pulse, T.L., Uhlig, E.A., 1990, Significant

Improvement in a Clinical Pilot Study

Utilizing Nutritional Supplements, EssentialFatty Acids and Stabilized Aloe Vera Juice in

29 HIV Seropositive ARC and Aids Patients,

Journal of Advancement in Medicine 3(4):1-

16.

Palungkun, R., 1999, Sukses Beternak Cacing Tanah

Lumbricus rubellus, Penebar Swadaya,

Jakarta.

vakuola

Inti sel

Inti sel

vakuola

lateks

6. rehana_fagositosis makrofag ok.pdf

Documents