294176545 isolasi enzim papain

7/25/2019 294176545 Isolasi Enzim Papain

1/4

ISOLASI ENZIM PAPAIN

Tujuan Percobaan Mengisolasi enzim papain dari getah buah papaya Menghitung aktivitas enzim papain Membandingkan aktivitas enzim papain sesuai variabel percobaan

Tinjauan Pustaka1. Pengertian UmumEnzim berasal dari kata en =in =dalam dan zim =yeast =khamir. Artinyadalam khamir yang maksudnya katalis dari zat hidup yang punya derajat efisiensitinggi. Enzim merupakan sejenis protein kompleks yang unik dan merupakan bahanantara yang penting untuk metabolisme dan berbagai perubahan kimia dalamtubuh.

2. Teori Enzim PapainEnzim papain banyak digunakan dalam pelunakan daging dan untuk

menghaluskan gandum dalam pembuatan kue kering. Papain berasal dari tumbuhanhijau dan Carica pepaya, kirakira 3 tahun pohon ini tumbuh tinggi untukmenghasilkan latex. Latex digumpalkan dengan membuat goresan pada buah padawaktu pagi sekali ketika buah itu berisi cairan. Latex itu mengalir sampai habisdanmembuat beku pada permukaannya.Pembentukan latex berjalan cepat dan segera menutupi buah seperti lilin danitulah yang dikumpulkan. Secara sederhana dikeringkan oleh matahari, tetapi untukhasil yang lebih baik pengeringan dilakukan dalam bejana. Latex beku dikumpulkan,dicairkan dengan cepat, disaring agar bebas dari serangga, dikeringkan dengan sp

raydryer. Latex kasar harus dikeringkan, saring dan dikeringkan lagi untukmendapatkan papain yang sempurna sesuai digunakan pada makanan.Papain sangat aktif pada range pH 3-7. Untuk melunakkan daging pada pH 7.Papain merupakan enzim pelunak pilihan, karena enzim ini dapat disuntikkan kedalam untuk menimbulkan enzim sedalam 4 cm pada permukaan daging sehinggadaging tetap lunak.

3. Isolasi EnzimUntuk mengisolasi enzim papain dari getah buah pepaya dilakukan 3 proses

pemisahana. Ekstraksi padat cairMerupakan salah satu metode pemisahan cairpadatan. Pada proses ini,komponen yang tidak larut dipisahkan dari bahan padatan dengan bantuansolvent. Ketika solvent dicampur dengan sampel, maka solvent akanmelarutkan ekstrak dengan difusi sampai terjadi keseimbangan konsentrasi.b. SentrifugasiMerupakan cara memisahkan bagian seperti partikel dalam medan gayasentrifugal partikel yang berukuran berbeda dalam berbagai ukuran. Densitasdan bentuk akan mengendap searah sentrifugal dengan kepentingan berbeda.c. PresipitasiBanyak agen pemisah yang digunakan untuk mengendapkan protein sepertigaram proteolitik, polimer, panas, pH, dan solvent organik.

4. Imobilisasi EnzimEnzim tidak dapat mengalami perubahan reaksi kimia, maka enzim dapat


2/4

digunakan berulangulang. Pada umumnya reaksi dan pemisahan enzim dari produkdengan menggunakan modifikasi pH, panas atau kedua-duanya. Penggunaan caraseperti ini mengakibatkan enzim kehilangan sebagian besar aktivitas katalitiknya,sehingga enzim dapat digunakan berulangulang. Agar dapat digunakan berulang-ulang pemisahan enzim dari produk harus dengan cara tertentu sehingga didapatkan

enzim dalam bentuk terimobilisasi tanpa mengurangi aktivitas katalitiknya.

5. Mekanisme Kerja Enzima. Enzim menyesuaikan diri di sekitar substrat untuk membentuk suatu kompleksenzim substrat.b. Karena adanya gaya tarik antara enzim dan substrat, ikatan substrat menjaditegang. Ikatan tegang ini mempunyai energi tinggi dan lebih mudah terpatahkan,sehingga reaksi lebih mudah dan membentuk kompleks enzimproduk.c. Karena produk dan substrat tidak sama, maka kesesuaian antara produ

k danenzim tidak sempurna.d. Bentuk produk menyebabkan kompleks berdisosiasi dan permukaan enzim siapuntuk menerima substrat lain. Teori aktivitas enzim ini disebut teori kesesuaianterimbas ( Induced-fit Theory )

6. Sifat Sifat Enzima) Dalam jumlah kecil dapat mengkatalis substrat dalam jumlah besar.b) Enzim bereaksi optimum pada 40C dan tekanan normal.c) Reaksi enzimatis berlangsung pada pH netral.

d) Tidak dapat menghidrolisis disakarida dan polisakarida.e) Umumnya dipakai koenzimf) Enzim biasanya merusak zat yang dapat mengurangi keaktifannya.g) Biasanya diperlukan energi aktifasi

7. Inhibitor Enzim Inhibitor KompetitifInhibitor yang bersaing dengan substrat dengan cara meniru bentuk substratsehingga dapat berikatan dengan sisi aktif enzim. Inhibitor non KompetitifTidak bersaing langsung dengan substrat tetapi menempel pada bagian lainenzim sehingga bentuk enzim berubah.E +S ES EP E +P

8. Faktor yang Mempengaruhi Konsentrasi substrat Pengaruh pH Konsentrasi Enzim Temperatur Racun Enzim

9. Fungsi Reagena) Getah buah pepaya : sumber enzim papain.

b) NaOH : pengatur pH.c) Garam : mengendapkan enzim, membentuk gugus mikro (dapatberupa NaCl atau (NH4)2SO4 )


3/4

d) Celite : memecah dinding sel pembungkus enzim.e) Cystein HCl : mengikat protein, mengikat enzim sehingga bisa menembuskertas saring, melarutkan enzim yang telah diendapkan.

f) Kasein : penyedia protein untuk diendapkan.g) Aquadest : melarutkan protein enzim.h) Solvent : sebagai tenaga pemisah dalam ekstraksi cair-padat untukmendapatkan enzim dari getah (Aceton, Formaldehid,

Etanol).

10. Kegunaan Produka) Sebagai pelunak daging.b) Sebagai bahan antidingin pada pembuatan beer.c) Sebagai pelunak kulit pada industri penyamakan kulit.

Metodologi Percobaan Bahan- Getah buah pepaya

- Aseton / ethanol / formaldehid- Celite- Cystein- NaCl atau (NH4)2SO4- NaOH- Aquadest- Casein

Cara KerjaISOLASI ENZIMa. Haluskan getah pepaya yang diperoleh dengan mortar, setelah halus timbangsesuai variabel, masukkan dalam beaker glass.

b. Tambahkan ke dalam beaker glass tersebut celite, cystein, aquadest, dan solv

entsesuai variabel lalu atur pH nya sampai 7.

c. Aduk dengan magnetic stirrer campuran tersebut selama 15 menit pada suhukamar atau sesuai variabel.

d. Saring dengan kertas saring sehingga didapat filtrat I dan endapan I. Buangendapannya.

e. Pada filtrat I tambahkan garam sebagai tenaga pengendap.f. Masukkan pada cuvet lalu disentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan1500 rpm atau sesuai variabel.

g. Saring hasil sentrifugasi sehingga didapatkan endapan II dan filtrat II.h. Keringkan dan timbang endapan II (misal beratnya a gram), simpan endapan II.i. Tambahkan garam pengendap pada filtrat II, lalu simpan 1 malam dalam lemaries.

j. Saring filtrat II dengan kertas saring sehingga didapat filtrat III dan endapan III.k. Keringkan dan timbang endapan III (misal beratnya b gram).l. Ambil endapan II, campurkan dengan endapan III, jika jumlah dari endapan IIdan III (a +b gram) lebih besar dari 1 gram, ambil 1 gram endapan tersebut,larutkan dalam air sampai 10 ml (larutan ini adalah enzim).

m. Jika a +b kurang dari 1 gram, ambil 1 ml filtrat III, encerkan sampai 10 ml(larutan ini adalah enzim).

REAKSI ENZIMATISa. Buat larutan casein / susu sesuai variabel percobaan.

b. Ambil 1 ml larutan enzim dan 9 ml larutan casein.c. Panaskan larutan casein tersebut sampai suhu 50o


4/4

C, dan 70oC.d. Setelah mencapai suhu tersebut, tuangkan larutan enzim ke dalam larutan casein.e. Catat waktu sampai terjadinya penggumpalan pertama.f.

GetahAquadest pH =7Solvent t=Celite T=Cystein Endapan I buangFiltrat I+garamt =

=Endapan II =a gr

Filtrat II

+garam

Endapan III =b grFiltrat III

Beaker GlassMagnetic StirrerCentrifugeLemari Es

294176545 isolasi enzim papain

Documents