1 (sr)

7/30/2019 1 (SR)

1/27

Uji Sterilitas Ruangan

Jafis Adha Ridha M. AndiNursing150 209 022

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Salah satu bagian yang penting dalam mikrobiologi adalah pengetahuan

tentang cara-cara mematikan , menyingkirkan, dan menghambat pertumbuhan

mikroorganisme. Cara yang digunakan untuk menghancurkan, menghambat pertumbuhan,

dan menyingkirkan mikroorganisme berbeda-beda tergantung pada spesies yang dihadapi

selain itu lingkungan dan tempat mikroba inipun berbeda-beda, misalnya. Dalam darah,

makanan, air, sampah, roil, dan tanah.

Ruangan steril sangat penting dalam bidang kesehatan, seperti ruangan steril

untuk bedah, ruangan pasca operasi, ruangan industri farmasi khususnya ruangan

produksi sediaan steril dan lain-lain. Ruangan dan peralatan industri farmasi tersebut

dibutuhkan pengujian sterilitas yang baku, dalam pengujian tersebut dibutuhkan alat dan

media yang khusus. Dalam sejarang bidang kesehatan atau kedokteran telah ditelaah

tentang wabah, sehingga timbul beberapa pendapat dari sejumlah besar orang yang

tentang peranan mikroorganisme dalam menyebabkan penyakit, bahkan disebutkan

bahwa dengan pembedahan ringan saja sudah dapat mengakibatkan kecepatan kematian

yang cukup tinggi, akibat terjadinya infeksi setelah dioperasi.

Oleh karena hal demikian, maka dilakukanlah proses penstreilan dan pengujian

keadaan steril dengan menggunakan Enkas, LAF (laminar Air Flow), dan UV (Ultraviolet),

dimana ketiga alat tersebut juga telah memiliki tersendiri dalam meminimalkan atau

membunuh mikroorganisme.

7/30/2019 1 (SR)

2/27



B. Rumusan Masalah

Bagaimana cara mennetukan tingkat sterilisasi dari ruangan LAF (Laminator Air

Flow), enkas dan ruang lampu UV ?

C. Maksud Praktikum

Adapun maksud dari percobaan ini adalah untuk mengetahui dan memahami

cara-cara uji sterilitas ruangan.

D. Tujuan Praktikum

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk menentukan sterilitas ruang yang

disterilkan dengan menggunakan lampu UV, enkas dan LAF (Laminator Air Flow).

E. Manfaat Praktikum

Adapun manfaat dari percobaan ini adalah mahasiswa dapat mengetahui

bagaimana cara mensterilkan suatu ruangan dan untuk mengetahui tingkat sterilitas dari

Enkas, LAF (Laminar Air Flow), dan UV (Ultra Violet)

7/30/2019 1 (SR)

3/27



BAB II

KAJIAN PUSTAKA

A. Teori Umum

Sterilisasi dalam mikrobiologi merupakan proses penghilangan semua jenis

organisme hidup, dalam hal ini adalah mikroornisme (Protozoa, fungi, bakteri,

mycoplasma, virus) yang terdapat pada/di dalam suatu benda. Proses ini melibatkan

aplikasi biocidal agent atau proses fisik dengan tujuan untuk membunuh atau

menghilangkan mikroorganisme (Sylvia, 2008).

Desinfektan adalah suatu proses untuk membunuh mikroorganisme yang bersifat

patogen yang sering digunakan adalah dengan cara kimia atau fisik, cara ini ditujukan

untuk pemakaian pada benda mati. Semua desinfektan efektif terhadap sel vegetatif, tetapi

tidak selalu efektif terhadap bentuk sporanya sedangkan antiseptis adalah suatu proses

untuk membunuh atau memusnahkan mikroorganisme atau jasad renik yang pada

umumnya menggunakan cara kimia, dan penggunaannyya ditujukan kepada benda hidup.

Bahkan antiseptik dapat bersifat bakterisid atau fungisid yang dapat membunuh bakteri

atau fungi dan dapat pula bersifat bakteriostatik dan fungistatik yaitu hanya dapat pula

menghambat pertumbuhan bakteri atau fungi (Djide, 2008).

Pengujian sterilitas terutama ditujukan terhadap bahan alat atau sediaan obat

yang digunakan secara parenteral maupun bahan atau sediaan lainnya misalnya obat

mata steril, pasta steril, zat radioaktif maupun alat-alat kedokteran yang dipakai dalam

operasi pembedahan (chirugin)m sedangkan benang jahit operasi, kapas dan lain-lain

sebagainya. Bahkan juga termasuk ruang operasi atau ruang-ruang lainnya di rumah sakit,

yang diisyaratkan untuk dilakukan pengujian sterilitas ruangan tersebut (Irrianto, 2006).

7/30/2019 1 (SR)

4/27



Ruang steril merupakan suatu keadaan ruang yang bebas dari semua bentuk

kehidupan mikroba yang patogen maupun yang non-patogen termasuk sporanya. Ruang

steril sangat penting dalam bidang kesehatan. Seperti pada ruang steril antara lain ruang

bedah,ruang pascaoperas termasuk dalam bidang industri farmasi, terkhusus pada sediaan

steril contohnya injeksi. Ruang-ruang tersebut dibutuhkan pengujian sterilisasi yang baku.

Mikroorganisme dapat hidup dimana-mana bukan hanya di ruang terbuka, ruang tertutup.

Kehidupan mikroorganisme dapat dikendalikan, maka ruangan tersebut dapat

dikategorikan ruang steril, sehingga perlu dilakukan pencegahan atau pengendalian dari

kontaminasi mikroorganisme yang dapat mempengaruhi secara langsung proses industri

farmasi atau produk yang dihasilkan dari industri farmasi (Noer, 2010).

Yang dimaksud dengan steril dalam mikrobiologi ialah semua proses untuk

mematikan semua mikroorganisme yang terdapat pada atau di dalam suatu benda. Ketika

untuk pertama kalinya melakukan pemindahan biakan bakteri secara aseptik, seungguhnya

telah menggunakan salah satu cara sterilisasi yaitu pembakaran. Namun kebanyakan

peralatan dan media yang umum dipakai dalam pekerjaan mikrobiologis akan menjadi

rusak bila dibakar untungnya tersedia berbagai metode lain yang efektif (Noer, 2010).

Factor abiotik yang mempengaruhi mikroba. Factor alam antara lain

(waluyo.2004):

1. Pengaruh temperatureTemperature merupakan factor yang paling penting dalam kehidupan. Beberapa jenis

mikroba dapat tumbuh di daerah luas dan sebagiannya pada daerah terbatas. Pada

umumnya batas daerah mikroba terletak antara 00C 900C dan kita kenal ada

temperatur minimum, optimum dan maksimum.

7/30/2019 1 (SR)

5/27



2. Pengaruh pHMengenai pH medium kenapa berpengaruh terpengaruh terhadap daya tahan

mikroba terhadap pemanasan bahwa sedikit perubahan pH menuju asam atau basa

sangat berpengaruh terhadap pemanasan. Sehubungan hal ini maka buah yang

masam lebih mudah disterilkan dibandingkan dengan sayur mayor atau daging.

3. Pengaruh kebasahan dan KekeringanMikroba mempunyai nialai kelembaban optimum. Pada umumnya untuk pertumbuhan

bakteri dan ragi diperlukan kelembaban yang tinggi diatas 85%.

4. Pengaruh perubahan nilai osmoticPada umumnya hipertonik menghambat pertrumbuhan mikroaba kareana dapat

menyebabkan plasmolisis. Medium yang paling cocok pada pertumbuhan mikroba

adalah medium isotonic terhadap isi sel mikroba.

Metode sterilisasi yakni sterilisasi secara fisika (Scovilles, 1957) :

1. Pemanasan kering

Udara panas oven. Bahan yang karena karakteristik fisikanya tidak dapat

disterilisasi dengan uap dsetilasi dalam udara panas-oven. Yang termasuk dalam

bahan ini adalah minyak lemak, paraffin, petrolatum cair, gliserin, propilen glikol.

Serbuk steril seperti talk, kaolin dan ZnO dan beberapa obat yang lain. Sebagai

tambahan sterilisasi panas kering adalah metode yang paling efektif untuk alat-alat

gelas dan banyak alat-alat bedah (Scovilles, 1957).

Beberapa bahan yang tidak dapat disterilkan dengan uap, paling baik disterilkan

dengan panas kering. Misalnya petrolatum jelly, minyak mineral, lilin, wax, serbuk talk.

Karena panas kering kurang efisien dibanding panas lembab, pemaparan lama dan

7/30/2019 1 (SR)

6/27



temperatur tinggi dibutuhkan. Range luas waktu inaktivasi dalam temperatur bervariasi

telah diterapkan berdasarkan tipe tipe indikator steril yang digunakan, kondisi

kelembabam dan faktor lain. Jumlah air dalam sel mikroba diketahui mempengaruhi

resistensi terhadap inaktivasi panas kering. Ini jelas bahwa perhatian harus diberi untuk

mendisain siklus sterilisasi panas kering untuk produk-produk rumah sakit dan validasi

sistematis sterilisasi dengan metode sterilisasi standar. Oven digunakan untuk

sterilisasi panas kering biasanya secara panas dikontrol dan mungkin gas atau elektrik

gas (Gennaro, 1990).

Minyak dan penangas lain . Bahan kimia yang stabil dalam ampul bersegel

dapat disterilisasi dengan mencelupkannya, dalam penangas berisi minyak mineral

pada suhu 162o C. Larutan jenuh panas dari natrium atau ammonia klorida dapat juga

digunakan sebagai penstrerilisasi. Ini merupakan metode metode yang mensterilisasi

alat-alat bedah. Minyak dikatakan bereaksi sebagai lubrikan, untuk menjaga alat tetap

tajam dan untuk memelihara cat penutup (Scovilles, 1957).

Pemijaran langsung. Pemijaran langsung digunakan untuk mensterilkan spatula

logam, batang gelas, filter logam bekerfield dan filter bakteri lainnya. Mulut botol, vial

dan labu ukur, gunting, jarum logam dan kawat dan alat-alat lain yang tidak hancur

dengan pemijaran langsung. Papan salep, lumping dan alu dapat disterilisasi dengan

metode ini. Dalam semua kasus bagian yang paling kuat 20 detik. Dalam keadaan

darurat ampul dapat disterilisasi dengan memposisikan bagian leher ampul kearah

bawah lubang kawat keranjang dan dipijarkan langsung dengan api dengan hati-hati.

Setelah pendinginan, ampul harus segera diisi dan disegel (Scovilles, 1957).

7/30/2019 1 (SR)

7/27



2.Panas lembab

Uap bertekanan. Penggunaan uap bertekanan atau metode sterilisasi yang paling

umum memuaskan dan efektif yang ada. Ini adalah metode yang diinginkan untuk

sterilisasi larutan yang ditujukan untuk infeksi pada tubuh, pembawa pada sediaan

mata, bahan-bahan gelas. Untuk penggunaan darurat, pakaian dan alat kesehatan dan

benda-benda karet. Kerugian yang paling prinsip dan penggunaan uap ini adalah

ketidaksesuaiannya untuk penggunaan pada bahan sensitif terhadap panas dan

kelembaban. Metode ini tidak dapat digunakan untuk sterilisasi misalnya, produk yang

dibuat dari basis minyak dan serbuk. Uap lebih pada 120o C mampu membunuh secara

cepat semua bentuk vegetatif mikroorganisme hidup dalam waktu menit. Uap jenuh

ini dapat menghancurkan spora vegetstif yang tahan terhadap pemanasan tinggi.

Keefektifan sterilisasi uap bertekanan tergantung pada 4 sifat dari uap jenuh kering

yaitu suhu, panas tersembunyi yang berlimpah, kemampuan untuk membentuk

kondensasi air, kontraksi volume yang timbul selama kondensasi (Scovilles, 1957).

Uap panas 100o C. Uap panas pada suhu 100o C dapat digunakan dalam bentuk

uap mengalir atau air mendidih. Metode ini mempunyai keterbatasan penggunaan uap

mengalir dilakukan dengan proses sterilisasi bertingkat untuk mensterilkan media

kultur. Metode ini jarang memuaskan untuk larutan yang mengandung bahan-bahan

karena spora sering gagal tumbuh dibawah kondisi ini, bentuk vegetatif dari

kebanyakan bakteri yang tidak membentuk spora. Temperatur suhu titik mati bervariasi,

tetapi tidak ada bentuk non spora yang bertahan (Scovilles, 1957).

Pemanasan dengan bakterisida. Ini menghadirkan aplikasi khusus daripada uap

panas pada 100o C. Adanya bakterisida meningkatkan efektifitas metode ini. Metode ini

7/30/2019 1 (SR)

8/27



digunakan untuk larutan berair atau suspensi obat yang tidak stabil pada temperatur yang

biasa diterapkan pada autoklaf. Larutan yang ditumbuhkan bakterisida ini dipanaskan

dalam wadah bersegel pada suhu 100o C selama 20 menit dalam pensterilisasi uap atau

penangas air (Scovilles, 1957).

B. Uraian Bahan

1. Aquadest (Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : Aqua destillata

Nama lain : Aquadest, air suling

RM/BM : H2O/18,02

Pemerian : Cairan jernih, tidak berbau, tidak berwarna, dan tidak

berasa.

Kegunaan : Sebagai pelarut

2. Alkohol (Ditjen POM, 1997)

Nama resmi : Aethanolum

Nama lain : Alkohol, etanol

RM/BM : C12H6O/46,07

Pemerian : Cairan tak berwarna, jernih, mudah menguap dan

mudah bergerak, bau khas, rasa panas, mudah

terbakar dengan memberikan nyala biru yang tidak

berasap.

Kelarutan : Sangat mudah larut dalam air, dalam kloroform P,

dan dalam eter P.

7/30/2019 1 (SR)

9/27



Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat.

Kegunaan : Sebagai antiseptik.

3. Agar (Ditjen POM, 1995)Nama resmi : AGAR

Nama lain : Agar, agar-agar

Pemerian : Tidak berbau, atau bau lemah; berasa musilago pada lidah.

Kelarutan : Tidak larut dalam air dingin; larut dalam air mendidih.

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik

Kegunaan : Sebagai bahan pemadat medium

4. Dekstrosa (Ditjen POM, 1995)Nama resmi : DEKSTROSUM

Nama lain : Dekstrosa, Glukosa

BM / RM : 198,17 / C6H12O6 . H2O

Pemerian : Hablur tidak berwarna, serbuk hablur atau serbuk granul

putih; tidak berbau; rasa manis.

Kelarutan : Mudah larut dalam air; sangat mudah larut dalam air

mendidih; larut dalam etanol mendidih; sukar larut dalam

etanol.

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik.

Kegunaan : Sebagai nutrient karbon

5. Ekstrak beef (Ditjen POM, 1995)Nama resmi : EKSTRAK BEEF

Nama Lain : Ekstrak daging sapi

7/30/2019 1 (SR)

10/27



Pemerian : Kaldu daging sapi konsentrat diperoleh dengan mengekstraksi

daging sapi segar tanpa lemak, dengan cara merebus dalam

air dan menguapkan kaldu pada suhu rendah dalam hampa

udara sampai terbentuk residu kental berbentuk pasta.

Massa berbentuk pasta, berwarna coklat kekuningan sampai

coklat tua, bau dan rasa seperti daging, sedikit asam.

Penyimpanan : Simpan dalam wadah tidak tembus cahaya, tertutup rapat

Kegunaan : Sebagai sumber protein

6. Pepton (Ditjen POM, 1995)Nama resmi : PEPTON

Nama lain : Pepton daging

Pemerian : Serbuk, kuning kemerahan sampai coklat, bau khas tidak busuk

Kelarutan : Larut dalam air, memberikan larutan berwarna coklat kekuningan

yang bereaksi sedikit asam, tidak larut dalam etanol (95 %) P dan

dalam eter P.

Kegunaan : Sebagai sumber protein

C. Prosedur Kerja (Rusli, 2011)

A. Menyiapkan Media

1. Disiapkan medium NA sebanyak yang dibutuhkan, kemudian disterilkan pada

suhu 121o C selama 15 menit.

7/30/2019 1 (SR)

11/27



2. Medium yang telah steril dituang kedalam cawan petri steril sebanyak yang

dibutuhkan sejumlah 15-20 mk/cawan petri. Kemudian diinkubasikan dalam

inkubator selama 24 jam suhu 37o C.

3. Dilakukan pengamatan, media yang tidak ditumbuhi mikroba disiapkan sebagai

media uji.

B. Pengujian Sterilisasi Ruangan (LAF, Enkas dan Ruang Lampu UV)

I. Pengujian Awal Ruangan

1. Disiapkan ruangan yang akan diuji kesterilannya tanpa penyemprotan

desinfektansia terlebih dahulu.

2. Diletakkan masing-masing satu cawan petri uji pada bagian tengah dan tiap

sudut ruangan uji, kemudian dibuka 1/3 bagian dari cawan petri, dibiarkan

selama 15 menit.

3. Selanjutnya cawan petri ditutup, kemudian diinkubasikan pada suhu 37o C

selama 24-48 jam dengan posisi terbalik.

II. Pengujian Akhir Ruangan

1. Sebelum dilakukan pengujian, terlebih dahulu ruangan uji disemprot dengan

desinfektansia, dibiarkan selama 15 menit.

2. Diletakkan masing- masing satu cawan petri pada bagian tengah dan tiap

sudut ruangan, kemudian dibuka 1/3 bagian dari cawan petriuji, dibiarkan

selama 15 menit.

3. Selanjutnya cawan petri ditutup, kemudian diinkubasikan pada suhu 37 o C

selama 24-48 jam dengan posisi terbalik.

4. Dilakukan pengamatan ada tidaknya kontaminasi mikroba di ruangan uji.

7/30/2019 1 (SR)

12/27



BAB III

KAJIAN PRAKTIKUM

A. Alat Yang Digunakan

Autoklaf, , bunsen, cawan petri, erlenmeyer, enkas, Hand sprayer, Hand scun,

inkubator, Laminar Air Flow(LAF), lampu UV, lampu spiritus, spoit 10 ml, Stop watch

B. Bahan Yang Digunakan

Alkohol 70%, aquadest, kapas, karet gelang, korek gas, kertas label, medium NA,

medium PDA, tissue roll .

C. Cara Kerja

1. Penyiapan Bahan Praktikum

Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan, disiapkan medium NA dan

PDA sebanyak yang dibutuhkan, kemudian disterilkan pada suhu 121C selama 15

menit, dituang secara aseptis medium NA dan PDA yang telah steril kedalam cawan

petri steril sebanyak yang dibutuhkan sejumlah 15-20 ml/cawan petri, kemudian

dibiarkan memadat, kemudian semua cawan petri tersebut diinkubasi dalam inkubator

secara terbalik pada suhu 37C selama 1 x 24 jam (untuk medium NA) dan selama 3

x 24 jam pada suhu 27C (untuk medium PDA), dilakukan pengamatan, media yang

tidak ditumbuhi mikroba disiapkan sebagai media uji.

2. Pembuatan Medium

a. Medium NA (Natrium Agar)

Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan, ditimbang masing-

masing bahan ekstrak daging sebanyak 3 gram dan pepton 5 gram, bahan-bahan

7/30/2019 1 (SR)

13/27



tersebut kemudian dilarutkan dengan menggunakan air suling sebanyak 250 gram

kedalam erlenmeyer dan diaduk sampai homogen, dipanaskan dan ditambahkan

agar sebanyak 20 gram sambil diaduk selama 15 menit, Erlenmeyer kemudian

ditutup dengan menggunakan kapas, disterilkan dengan menggunakan autoklaf

pada suhu 121C selama 15 menit

b. Medium PDA (Potato Dextrosa Agar)

Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakanDitimbang bahan-bahan

yang akan, digunakanDipanaskan air didalam gelas kimia sebanyak 250 ml,

Dimasukkan kentang yang telah dipotong-potong dan dibersihkan sebanyak 200

gram setelah air mendidih selama 15 menit Airnya kemudian disaring kedalam

erlenmeyer, Dimasukkan dextrosa dan agar-agar dalam erlenmeyer dan diaduk

sampai homogenAirnya diaduk sampai 200 ml kemudian erlenmeyer ditutup

dengan kapas, Disterilkan dengan menggunakan autoklaf pada suhu 121C

selama 15 menit.

3. Pengujian Sterilitas Ruangan

a. LAF

Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan, Disemprot LAF dengan

alkohol 70 %, kemudian dinyalakan dan dibiarkan selama 15 menit, Diletakkan

cawan petri yang berisi medium steril NA dan PDA dalam LAF, kemudian tutup

cawan petri dibuka bagian, kemudian dibiarkan selama 15 menit, Cawan petri

dibungkus dan diinkubasi. Untuk cawan petri yang berisi medium NA diinkubasi

pada suhu 37C selama 1 x 24 jam dan untuk cawan petri yang berisi PDA

7/30/2019 1 (SR)

14/27



diinkubasi pada suhu 27C selama 3 x 24 jam, Diamati dan dihitung jumlah koloni

bakteri yang tumbuh.

b. Lampu UV

Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan

Disemprot Lampu UV dengan alkohol 70 %, kemudian dinyalakan dan

dibiarkan selama 15 menit, Diletakkan cawan petri yang berisi medium steril NA

dan PDA dalam Lampu UV, kemudian tutup cawan petri dibuka bagian,

kemudian dibiarkan selama 15 menit, Cawan petri dibungkus dan diinkubasi.

Untuk cawan petri yang berisi medium NA diinkubasi pada suhu 37C selama 1 x

24 jam dan untuk cawan petri yang berisi PDA diinkubasi pada suhu 27C selama

3 x 24 jam, Diamati dan dihitung jumlah koloni bakteri yang tumbuh.

3. Enkas

Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan, Disemprot enkas dengan

fenol 5 %, kemudian dinyalakan dan dibiarkan selama 15 menit, Diletakkan

cawan petri yang berisi medium steril NA dan PDA dalam enkas. Tutup cawan

petri dibuka bagian, kemudian dibiarkan selama 15 menit, Cawan petri

dibungkus dan diinkubasi. Untuk cawan petri yang berisi medium NA diinkubasi

pada suhu 37C selama 1 x 24 jam dan untuk cawan petri yang berisi PDA

diinkubasi pada suhu 27C selama 3 x 24 jam, Diamati dan dihitung jumlah koloni

bakteri yang tumbuh.

7/30/2019 1 (SR)

15/27



BAB IV

KAJIAN HASIL PRAKTIKUM

A. Hasil Pengamatan

1. Gambar Pengamatan

KELOMPOK I

a. Uji Sterilitas Ruangan Enkas NA dan PDA

Keterangan :

b. Uji Sterilitas Ruangan Lampu UVKeterangan :

c. Uji Sterilitas Ruangan LAF (Laminar Air Flow)

Keterangan :

1. Koloni bakteri

2. Cawan petri

1. Koloni bakteri

2. Cawan petri

1. Koloni bakteri

2. Cawan petri

Medium NA Medium PDA



7/30/2019 1 (SR)

16/27



KELOMPOK 2

a. Uji Sterilitas Ruang Enkas/Lampu UV/LAFKeterangan :

1. Koloni2. Cawan Petri

b. Uji Sterilitas Ruang Enkas/Llampu UV/LAFKeterangan :

1. Koloni2. Cawan petri

KELOMPOK 3

a. Uji Sterilitas Ruang EnkasKeterangan :



Medium NA

Medium PDA


7/30/2019 1 (SR)

17/27



b. Uji Sterilitas Lampu UVKeterangan :


c. Uji Sterilitas Ruang LAFKeterangan :


KELOMPOK 4

a. Uji Sterilitas Ruang EnkasKeterangan :


b. Uji Sterilitas Ruang Lampu UVKeterangan :






7/30/2019 1 (SR)

18/27



c. Uji Sterilitas Ruang LAFKeterangan :

1. Koloni2. Cawan petri3. Label

2. Tabel Pengamatan

Kelompok

Jumlah Koloni

Enkas LAF Lampu UV

NA PDA NA PDA NA PDA

I 70 2 66 11 40 26

II 59 13 101 14 64 38

III 31 4 78 6 7 5

IV 37 5 85 8 27 8


7/30/2019 1 (SR)

19/27



B. Pembahasan

Steril adalah bebas dari mikroorganisme, sterilitas dalam mikrobiologi adalah

keadaan dimana suatu benda bebas dari mokroorganisme baik yang patogen maupun non-

patogen. semua proses untuk mematikan semua mikroorganisme yang terdapat pada atau

di dalam suatu benda merupakan sterilisasi. Ketika untuk pertama kalinya untuk melakukan

pemindahan biakan bakteri secara aseptis, sesungguhnya telah menggunakan salah satu

cara sterilisasi, yaitu pembakaran. Pada suatu sterilisasi maka suatu benda akan

dibebaskan dari suatu berbagai mikroorganisme hidup.

Pembagian sterilitas dibagi atas 3 kelompok. Yaitu secara fisik, mekanik dan

kimia. Secara fisik banyak digunakan cara pemanasan, yakni pemanasan langsung

misalnya mensterilkan alat-alat seperti ose, pinset dll, sterilisasi dengan panas kering

dengan menggunkan oven, misalnya peralatan rumah sakit seperti cawan petri,pipet, ruang

operasi bedah dll, sterilisasi ini tidak ditujukan untuk bahan yang terbuat dari karet atau

plastic. sterilisasi dengan cara panas basah dengan menggunakan autoklaf, sterilisasi ini

digunkan untuk bahan yang sensitive panas, sterilisasi fraksinasi (misalnya metode

pasteurisasi, metode tyndalisasi), sterilisasi radiasi (misalnya radiasi pengion sinar X dan

sinar UV).

Sterilisasi secara mekanik dibagi atas: filtrasi (misalnya cairan biologis)/ serum

hewan, enzim, vitamin dan antibiotika), membran filter (misalnya membran ester selullosa),

filter udara (misalnya HEPA (High Particulate Air Filter, LAF).

Sterilisasi secara kimia dibagi atas antiseptika, desinfektan (misalnya fenol,

halogen, alkohol, deterjen, aldehida, logam berat, khemosterilisatir gas).

Yang termasuk ruang steril meliputi :

7/30/2019 1 (SR)

20/27



Ruang Kelas I (White Area): jumlah partikel (non patogen) ukuran 0,5 m

maksimum 100/ft3, ruang Kelas II (Clean Area): jumlah partikel (non patogen) ukuran

0,5 m maksimum 10.000/ft3, ruang Kelas III (Grey Area): jumlah partikel (non

patogen) ukuran 0,5 m maksimum 100.000/ft3 dan ruang Kelas IV (Black Area):

jumlah partikel (non patogen) ukuran 0,5 m > 100.000/ft3 (dengan ventilasi udara

memadai).

Dalam percobaan ini disiapkan alat dan bahan yang digunakan, dan dibuat

medium NA dan PDA, lalu disterilkan, Dipet masing-masing medium kedalam 3 cawan

petri sebanyak 10 ml, dalam keadaan aseptis dan di diamkan hingga memadat. Ketiga

ruangan tersebut disemprotkan dengan alcohol 70%, Karena itu merupakan konsentrasi

optimal dari alcohol, yang bertujuan untuk mamatikan mikroorganisme yang mungkin

masih ada, dan didiamkan 15 menit lalu diopeasikan ketiga alat tersebut dan dimasukan

masing-masing dua capet dengan medium PDA dan NA kedalam ketiga ruangan tersebut,

dengan membuka 1/3 penutup cawan petri yang bertujuan untuk memberikan kesempetan

terhadap mikroba untuk dapat masuk sehingga dapat diamati. Penggunaan medium

Nutrien Agar (NA) dan Potato Dextrose Agar (PDA) dimaksudkan untuk mengetahui

sejauh mana pertumbuhan bakteri dan jamur/kapang pada ruang steril tersebut. Dibiarkan

15 menit karena pada selang waktu tersebut mikroba sudah mampu di isolasi dari suatu

tempat (lingkungan) ke dalam suatu medium.

Berdasarkan hasil pengamatan yang telah dilakukan, diperoleh data hasil jumlah

koloni yang diperoleh dari masing-masing alat sterilitas. Kelompok I memperoleh hasil

yakni untuk LAF (Laminator Air Flow) diperoleh jumlah koloni 66 pada medium NA dan 11

pada medium PDA. Untuk enkas diperoleh jumlah koloni 70 untuk medium NA dan 2

7/30/2019 1 (SR)

21/27



untuk medium PDA. Dan untuk lampu UV, diperoleh jumlah koloni sebanyak 40 untuk

medium NA dan 26 untuk medium PDA. Kelompok 2 memperoleh hasil yakni untuk LAF

(Laminator Air Flow) diperoleh jumlah koloni 101 pada medium NA dan 14 koloni pada

medium PDA. Untuk enkas diperoleh jumlah koloni 59 untuk medium NA dan 13 koloni


medium NA dan 38 koloni untuk medium PDA. Kelompok 3 memperoleh hasil yakni

untuk LAF (Laminator Air Flow) diperoleh jumlah koloni 78 pada medium NA dan 6 koloni

pada medium PDA. Untuk enkas diperoleh jumlah koloni 31 untuk medium NA dan 4 koloni


medium NA dan 5 koloni untuk medium PDA. Kelompok 4 memperoleh hasil yakni untuk

LAF (Laminator Air Flow) diperoleh jumlah koloni 85 pada medium NA dan 8 koloni pada

medium PDA. Untuk enkas diperoleh jumlah koloni 37 untuk medium NA dan 5 koloni


medium NA dan 8 koloni untuk medium PDA.

Berdasarkan teori yang ada, dari segi jumlah koloni mikroba yang tumbuh pada

ketiga ruangan tersebut dapat dikatakan bahwa ruangan tersebut termasuk ruang kelas 1,

dengan jumlah koloni baik bakteri maupun jamur yang dibawah 100 koloni. Namun pada

dasarnya seharusnya ruangan telah disterilkan tidak terkontaminasi atau bebas dari

semua bentuk kehidupan mikroba yang patogen ataupun non patogen termasuk sporanya,

sehingga suatu ruangan bisa dikatakan steril.

Dari hasil percobaan diperoleh jumlah koloni bakteri yang lebih sedikit pada ruang

lampu UV dibandingkan dengan ruang enkas dan ruang LAF. Dari hasil pengamatan

secara umum tersebut, maka dapat ditarik kesimpulan bahwa ruang yang memiliki jumlah

7/30/2019 1 (SR)

22/27



pertumbuhan minimal mikroba lebih sedikit adalah ruang lampu UV untuk medium NA

(Natrium Agar) dan ruang enkas untuk medium PDA (Potato Dextrosa Agar). Sedangkan

untuk pertumbuhan mikroba yang lebih banyak terdapat pada ruang LAF dengan medium

NA (Natrium Agar) dan medium PDA (Potato Dextrosa Agar.

Dari percobaan ini, ada beberapa kesalahan yang mungkin dilakukan sehingga

menyebabkan data yang diperoleh tidak terlalu valid, yaitu antara lain :

1. Proses pengerjaan yang kurang aseptis dan tidak menggunakan sarung tangan.2. Medium yang dibuat tidak diinkubasi terlebih dahulu guna mengetahui ada tidaknya

pertumbuhan dalam medium yang belum tampak yang berasal dari lingkungan luar

pada waktu pembuatan.

3. Waktu pengamatan yang kurang tepat, yang mana harusnya untuk bakteri dilakukanpengamatan pada hari pertama (1x24 jam), dan jamur pada hari ketiga (3x24 jam),

namun dilakukan pada hari kedua (2x24 jam) sehingga menyebabkan pertumbuhan

bakteri lebih pesat dibanding dengan jamur, yang dapat ditinjau dari jumlah koloninya.

7/30/2019 1 (SR)

23/27



BAB V

PENUTUP

A. Kesimpulan

Dari percobaan yang telah dilakukan terhadap sampel Dettol, dapat disimpulkan

bahwa :

1. Enkas

Jumlah koloni pada medium NA : 37

Jumlah koloni pada medium PDA : 5

Ruang kelas : I

2. Lampu UV



Ruang kelas : I

3. LAF (Laminator Air Flow)



Ruang kelas : I

Dari ketiga ruanngan yang diujikan, ternyata lampu UV memiliki tingkat kesterilan

yang tinggi yaitu pada NA 27 koloni, dan Pada PDA 8 koloni, dibanding dengan Enkas

yang jumlah koloni pada NA 37 koloni, dan pada PDA 5 koloni, serta pada LAF untuk NA

sebanyka 85 koloni dan PDA sebanyak 8.

7/30/2019 1 (SR)

24/27



B. Saran

Sekiranya alat dan bahan lebih dilengkapi sehingga tidak ada lagi bahan lain

yang digunakan untuk menggantikan bahan yang sebelumnya.

7/30/2019 1 (SR)

25/27



DAFTAR PUSTAKA

Dirjen POM., 1979, FARMAKOPE INDONESIA, Edisi III, Depkes RI : Jakarta.

Dirjen POM., 1995, FARMAKOPE INDONESIA, Edisi IV, Depkes RI : Jakarta

Jenkins, L.Glenn, 1957, The Art of Compounding Scovilles , McGraw-Hill BookCompany, Inc ; New York , Toronto : London.

Waluyo, Lud.2004. Mikrobiologi Umum. UGM-Press : yogyakarta

Koes, Irianto.drs, 2006, Mikrobiologi Menguak Dunia Mikroorganisme , Yrama Widya :Jakarta

Natsir Djide,Ms, Apt, 2008, Mikrobiologi Farmasi. Lembaga Penerbitan UniversitasHasanuddin.

Noer,Muh.Syamsi, 2010, Sterilitas Ruangan, Medicafarma : Jakarta.

Pratiwi, T Sylvia, 2008, Mikrobiologi Farmasi, Erlangga : Jakarta.

Rusli, M.si. Apt., 2011. Tuntunan Praktikum Analisis Mikrobiologi Farmasi. UMI : Makassar

7/30/2019 1 (SR)

26/27



Skema Kerja

Medium Steril(NA dan PDA)

Dimasukan dalam cawan petri Sebanyak 10 ml

Sebelumnya di semprot dengan alkohol 70% pada masing-masing ruangan

Biarkan 15 menit

Letakkan medium sterilBuka 1/3 bagian

Biarkan 15 menitTutup cawan

Inkubasi terbalik1 x 24 jam, 37C (untuk medium NA)

3 x 24 jam, suhu kamar (untuk medium PDA)

Pengamatan

LampuUV LAF Enkas

7/30/2019 1 (SR)

27/27


J fi Adh Ridh M A di

LAMPIRAN

I. Komposisi Medium1. Medium NA (Nutrien Agar)

Peptone 5,0 g

Ekstrak beef 3,0 g

Agar 15 g

Aquadest 1000 ml

2. Medium PDA (Potato Dextrose Agar)Ekstrak kentang 4,0 dari 200 g kentang

D- glukosa 20 g

Agar 15 g

Aquadest 1000 ml

1 (sr)

Documents