UJI EFEK STIMULAN EKSTRAK DAUN PACAR CINA (AGLAIA ODORATA LOUR.)

PADA MENCIT

OLEH

MELANIA SEA KEDANG 2443003163

\

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS KATOLIK WIDYA MANDALA

SURABAYA

SEPTEMBER 2008

UJI EFEK STIMULAN EKSTRAK DAUN PACAR CINA (AGLAIA ODORATA LOUR.)

PADA MENCIT

SKRIPSI Diajukan untuk memenuhi sebagian persyaratan

memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya

OLEH:

MELANIA SEA KEDANG 2443003163

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS KATOLIK WIDYA MANDALA SURABAYA

SEPTEMBER 2008

LEMBAR PERSETUJUAN

Naskah skripsi bef udul U ji Efek Stimulut Ekstrak Daurl' P acar cina @ s I a i a odor at a

Lour.) pada Mencit yang ditulis oleh Melania Sea Kedang. Naskah telah disetujui dan

diterima untuk diajukan ke Tim Penguji

Pembimbing I: Dra. Siti Surdijati. MS.. Apt.

Pembimbing II:

LEMBAR PENGESAHAN

Skripsi yang ditulis oleh Melania Sea Kedang NRP 2443003163

Telah disetujui pada tanggal 24Iuli 2008 dan dinyatakan LULUS

Ketua Tim Penguji

Mengetahui,

Dekan

Dr. dr. Paulus Liben. MS

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur kepada Allah Bapa di surga yang telah senantiasa menyertai,

melindungi dan membimbing dalam segala usaha dan karya yang telah dilakukan

sehingga skripsi ini dapat terselesaikan dengan baik. Skripsi yang berjudul “Uji Efek

Stimulan Ekstrak Daun Pacar Cina (Aglaia odorata Lour.) Pada Mencit” ini disusun

dan diajukan untuk memenuhi persyaratan guna memperoleh gelar Sarjana Farmasi

pada Fakultas Farmasi Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya.

Terselesaikannya skripsi ini tidak mungkin terlepas dari dukungan, bantuan

dan bimbingan baik secara langsung maupun tidak langsung dari berbagai pihak.

Dalam kesempatan ini dengan segala ketulusan dan kerendahan hati, disampaikan

ucapan terima kasih kepada :

1. Dra. Siti Surdijati, MS., Apt. dan Dra. Sri Harti, Apt, selaku dosen pembimbing I

dan II yang telah banyak bersedia meluangkan waktu untuk membimbing,

memberi petunjuk dan pengarahan serta semangat selama penelitian dan

penyusunan skripsi.

2. Dr. dr. Paulus Liben, MS., Dra. Liliek S. Hermanu, MS., Apt. dan Dr. dr. Endang

Isbandiati, MS.,Sp.FK. sebagai dosen penguji yang telah banyak memberikan

saran dan masukkan untuk menyelesaikan skripsi ini.

3. Prof. Dr. J. S. Ami Soewandi, Apt, selaku Rektor Universitas Katolik Widya

Mandala Surabaya yang telah memberikan kesempatan untuk mendapatkan ilmu

dan belajar di Universitas Katolik Widya Mandala.

i

iii

iii

4. Dra. Monica W.Setiawan, M. Sc.,Apt, selaku dekan Fakultas Farmasi Universitas

Katolik Widya Mandala Surabaya.

5. Dra. Liliek S. Hermanu MS., Apt. selaku wali studi yang telah memberikan

dorongan dan dukungan moral selama penyusunan skripsi ini.

6. Kepala Laboratorium Farmasi Kedokteran dan Kepala Laboratorium Formulasi

Bahan Alam berserta seluruh laboran yang telah memberikan fasilitas untuk

penyelesaian skripsi ini.

7. Bapak Petrus Djuking Kedang, mama Ambronsia K. Kleden dan adik-adik (Ipi

dan Indah) tercinta, yang tidak henti-hentinya memberikan doa, dukungan moril

maupun materiil hingga terselesainya skripsi ini.

8. Teman- teman seperjuangan Ellyn, Marry, Hotnida, Inang, Christin, Dewi, Silvi,

Anas,Vero dan semua angkatan 2003 yang telah memberikan bantuan tenaga,

pikiran serta waktu dan semangatnya selama proses penyelesaian skripsi ini.

9. Teman-teman kos, Mba Fanny, Osan, Mba sinta, Triana, Eka, Opin, Risty, Maria,

Nina, Ita, Winda, Ratna, Ase, yang telah memberikan dorongan dan semangat

dalam penyelesaian skripsi ini.

Semoga Tuhan melimpahkan rahmat dan berkatnya kepada kita semua atas segala

kebaikan yang telah saya terima.

Skripsi ini masih jauh dari sempurna untuk itu saya mengharapkan kritik dan

saran yang bermanfaat untuk penyempurnaan skripsi ini. Semoga hasil penelitian ini

dapat bermanfaat bagi pengembangan ilmu pengetahuan dibidang farmasi.

Surabaya, Juli 2007

DAFTAR ISI

Halaman

KATA PENGANTAR .......................................................................................... i

DAFTAR ISI......................................................................................................... iv

DAFTAR TABEL ................................................................................................ x

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ xiii

DAFTAR LAMPIRAN......................................................................................... xv

ABSTRAK ............................................................................................................ xvii

ABSTRACT.......................................................................................................... xviii

BAB I PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang ....................................................................................... 1

1.2. Rumusan Masalah .................................................................................. 3

1.3. Tujuan Penelitian ................................................................................... 4

1.4. Hipotesis Penelitian................................................................................ 4

1.5. Manfaat Penelitian ................................................................................. 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Tinjauan Tentang Tanaman Pacar Cina (Aglaia odorata Lour.) .......... 5

2.1.1. Klasifikasi Tanaman .................................................................... 5

2.1.2. Nama Daerah................................................................................ 6

2.1.3. Ekologi dan Penyebaran............................................................... 6

2.1.4. Morfologi Tanaman Pacar Cina (Aglaia odorata Lour.) ............. 6

iii

iv

iv

Halaman

2.1.5. Tinjauan Tentang Daun................................................................ 7

2.1.6. Tinjauan Tentang Daun Pacar Cina (Aglaia odorata Lour.)........ 9

2.1.6.1. Makroskopis Daun Pacar Cina (Aglaia odorata Lour.) ... 9

2.1.6.2. Mikroskopis Daun Pacar Cina (Aglaia odorata Lour.).... 9

2.1.7. Kandungan Kimia ....................................................................... 10

2.1.8. Kegunaan .................................................................................... 10

2.2. Tinjauan Tentang Hewan Coba............................................................. 11

2.3. Tinjauan Tentang Simplisia .................................................................. 12

2.4. Tinjauan Tentang Ekstrak ..................................................................... 12

2.4.1. Definisi Ekstrak .......................................................................... 12

2.4.2. Pembagian Ekstrak ...................................................................... 13

2.4.3. Cara-cara Ekstraksi ..................................................................... 14

2.4.4. Tinjauan Tentang Perkolasi ......................................................... 15

2.5. Tinjauan Tentang Rutin ...................................................................... 17

2.6. Tinjauan Tentang Flavonoid ................................................................ 18

2.6.1. Struktur Umum Flavonoid ........................................................... 18

2.6.2. Penggolongan Flavonoid.............................................................. 19

2.6.2.1. Penggolongan Berdasarkan Struktur Aglikon................. 19

2.6.2.2. Penggolongan Berdasarkan Jenis Ikatan ........................ 20

2.6.2.2.1. Flavonoid O-glikosida.................................... 21

2.6.2.2.2. Flavonoid C-glikosida.................................... 21

2.6.2.2.3. Flavonoid Sulfat ............................................. 21

v

v

Halaman

2.6.2.2.4. Biflavonoid..................................................... 22

2.6.2.2.5. Sifat Kelarutan Flavonoid .............................. 22

2.6.2.2.6. Distribusi Senyawa Flavonoid ....................... 22

2.7. Tinjauan Tentang Metode Penelitian .................................................... 23

2.7.1. Metode Hole board ..................................................................... 23

2.7.2. Metode Evasi Box........................................................................ 23

2.7.3. Metode Rotarod........................................................................... 24

2.7.4. Metode Activity Cage .................................................................. 25

2.8. Tinjauan Tentang Stimulan ................................................................ 25

2.9. Obat-obat Susunan Saraf Pusat ........................................................... 26

2.10. Tinjauan Tentang Kofein ................................................................... 28

2.11. Tinjauan Tentang Kromatografi Lapis Tipis ...................................... 29

BAB III : METODOLOGI PENELITIAN ........................................................... 30

3.1. Bahan dan Alat Penelitian..................................................................... 30

3.1.1. Bahan Tanaman............................................................................ 30

3.1.2. Bahan Kimia Penelitian ............................................................... 30

3.1.3. Hewan Coba ................................................................................. 31

3.1.4. Alat-alat Penelitian ...................................................................... 31

3.1.4.1. Alat-alat Untuk Pembuatan Ekstrak ............................. 31

3.1.4.2. Alat-alat Untuk Percobaan ........................................... 32

3.2. Metode Penelitian ................................................................................. 32

3.2.1. Rancangan Penelitian.................................................................. 32

vi

vi

Halaman

3.2.1.1. Penelitian Dengan Alat Hole board ............................ 33

3.2.1.2. Penelitian Dengan Alat Evasi Box .............................. 34

3.2.1.3. Penelitian Dengan Alat Rotarod ................................. 35

3.2.1.4. Penelitian Dengan Alat Activity Cage ........................ 36

3.3. Tahapan Penelitian ............................................................................. 36

3.3.1. Pengambilan Sampel Tanaman................................................ 36

3.3.2. Persiapan Hewan Coba ............................................................ 37

3.3.3. Perlakuan Terhadap Tanaman.................................................. 37

3.3.3.1. Pembuatan Serbuk ..................................................... 37

3.3.3.2. Pemeriksaan Makroskoipis Simplisia ........................ 38

3.3.3.3. Penentuan Kadar Sari Larut Etanol ............................ 38

3.3.3.4. Penetapan Kadar Abu ................................................ 38

3.3.3.5. Pembuatan Ekstrak Kental ......................................... 39

3.3.3.6. Uji Kromatografi Lapis Tipis Flavonoid ................... 40

3.3.4. Pembuatan Sediaan Uji ............................................................ 40

3.3.4.1. Pembuatan Sediaan Uji kontrol ................................. 40

3.3.4.2. Dosis Ekstrak ............................................................. 40

3.3.4.3. Perhitungan Dosis Kafein .......................................... 41

3.3.4.4. Pembuatan Suspensi Kafein ....................................... 42

3.5. Teknik Analisis Data.......................................................................... 43

3.5.1 Uji Anava Rambang Lugas ...................................................... 43

3.5.2. Koefisien Korelasi .................................................................. 45

vii

vii

Halaman

3.6. Hipotesis Statistik .............................................................................. 45

3.7. Skema Kerja Penelitian ...................................................................... 47

3.7.1. Pembuatan Ekstrak Daun Pacar Cina (Aglaia odorata Lour.) 47

3.7.2. Skema kerja Penelitian............................................................. 48

BAB IV : ANALISIS DATA DAN INTERPRETASI PENEMUAN

4.1. Analisis Data ......................................................................................... 50

4.1.1. Hasil Pemeriksaa Makroskopis Daun Pacar Cina (Aglaia

odorata Lour.) .......................................................................... 50

4.1.2. Hasil Pengamatan Mikroskopis Daun Pacar Cina (Aglaia

odorata Lour.) ........................................................................... 51

4.1.3. Hasil Penetapan Kadar Abu Serbuk Dan kadar Sari

Larut Etanol Ekstrak Daun Pacar Cina (Aglaia odorata

Lour.) ......................................................................................... 52

4.1.4. Hasil Penelitian Efek Stimulan Pada Hewan Coba .................. 53

4.1.4.1. Data Hasil Penelitian Efek Stimulan Pada Mencit

Dengan Alat Hole board ............................................... 53

4.1.4.2. Data Hasil Penelitian Efek Stimulan Pada Mencit

Dengan Alat Evasi Box ................................................. 58

4.1.4.3. Data Hasil Penelitian Efek Stimulan Pada

Mencit Dengan Alat Rotarod ........................................ 63

4.1.4.4. Data Hasil Penelitian Efek Stimulan Pada

Mencit Dengan Alat Activity Cage ............................... 68

viii

viii

4.2. Hasil Penapisan Fitokimia Senyawa Golongan Flavonoid ................. 73

Halaman

4.2.1. Kromatografi Lapis Tipis ...................................................... 73

4.2.1.1. Hasil Uji Kromatografi Lapis Tipis ......................... 73

4.3. Interpretasi Penemuan ........................................................................ 75

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN-SARAN

5.1. Kesimpulan ................................................................................................... 80

5.2. Saran-saran .................................................................................................... 80

DAFTARA PUSTAKA ....................................................................................... 81

LAMPIRAN.......................................................................................................... 83

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

3.1. Rangkuman Rumus Anava Rambang Lugas .............................................. 44

4.1. Hasil Pengamatan Makroskopis Daun Pacar Cina......................................... 50

4.2. Hasil Pengamatan Makroskopis Serbuk Daun Pacar Cina .......................... 51

4.3. Hasil Penetapan Kadar Abu Serbuk dan Kadar Sari Larut Etanol

Ekstrak Daun Pacar Cina ............................................................................. 52

4.4. Uji Rasa Ingin Tahu Dan Aktivitas Motorik Mencit Dengan

Alat Hole board ............................................................................................. 53

4.5. Harga Kumulatif Jumlah Jengukkan kepala Mencit Selama 5 Menit............ 54

4.6. Efek Stimulan Pada Mencit Dengan Alat Hole Board ................................. 54

4.7. Rangkuman Hasil Perhitungan Anava Rambang Lugas ................................ 55

4.8. Rangkuman Hasil Perhitungan Uji HSD Jumlah Jengukkan

Kepala Pada Mencit ...................................................................................... 56

4.9 Rangkuman Hasil Perhitungan Uji HSD Jumlah Jengukkan

Kepala Pada Mencit ...................................................................................... 56

4.10. Rangkuman Hasil Uji Koefisien Korelasi Jumlah Jengukkan

Kepala Pada Mencit ...................................................................................... 57

4.11. Uji Rasa Ingin Tahu Dan Aktivitas Motorik Mencit

Dengan Alat Evasi Box ................................................................................. 58

4.12. Harga Kumulatif Jumlah Mencit Menaiki Dan Menuruni Papan

Melewati Garis Tengahnya Selama 5 Menit................................................ 59

ix

x

x

Halaman

4.13. Efek Stimulan Pada Mencit dengan Alat Evation box ................................. 59

4.14. Rangkuman Hasil Perhitungan Anava rambang Lugas ............................... 60

4.15. Rangkuman Hasil Perhitungan Uji HSD Jumlah Mencit Menaiki dan

Menuruni Papan Pada Bagian Tengah……………. ................................... 61

4.16. Rangkuman Perhitungan HSD Jumlah Naik Turunnya Mencit di atas

Papan Miring................................................................................................ 61

4.17. Rangkuman Hasil Uji Koefisien Korelasi.................................................... 62

4.18. Uji Rasa Ingin Tahu dan Aktivitas Motorik Mencit Dengan Alat

Rotarod......................................................................................................... 63

4.19. Harga Kumulatif Lama Waktu Mencit Bertahan Pada Rotarod Selama 5

Menit ............................................................................................................ 64

4.20. Efek Stimulan Pada Mencit Dengan Alat Rotarod ..................................... 64

4.21. Rangkuman Hasil Perhitungan Anava rambang Lugas ............................... 65

4.22. Rangkuman Hasil Perhitungan Uji HSD Lama Waktu Mencit Bertahan

di Atas Rotarod……………….……………… ........................................... 66

4.23. Rangkuman Hasil Perhitungan Uji HSD Lama Waktu Mencit Bertahan

di Atas Balok................................................................................................ 66

4.24. Rangkuman Hasil Uji Koefisien Korelasi.................................................... 67

4.25 Uji Rasa Ingin Tahu dan Aktivitas Motorik Mencit Dengan Alat Activity

Cage ............................................................................................................. 68

4.26 Harga Kumulatif Jumlah Sentuhan Mencit Pada Jeruji-jeruji Activity

Bar ................................................................................................................ 69

xi

xi

Halaman

4.27 Efek Stimulan Pada Mencit Dengan Activity Cage ……………. ……..... 69

4.28 Rangkuman Hasil Perhitungan Anava Rambang Lugas ............................... 70

4.29 Rangkuman Hasil Perhitungan Uji HSD Jumlah Sentuhan Mencit Pada

Activity Bar.................................................................................................. 71

4.30 Rangkuman Hasil Perhitungan HSD............................................................ 71

4.31 Rangkuman Hasil Uji Koefisien Korelasi.................................................... 72

4.32 Hasil Analisis KLT dari Ekstrak Daun Aglaia odorata

Lour........................ ..................................................................................... 73

4.33 Hasil Analisis KLT dari Ekstrak Daun Aglaia odorata Lour Pada

Panjang Gelombang 366 nm........................................................................ 74

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

2.1. Tanaman pacar cina (Aglaia odorata Lour) ................................................. 5

2.2. Struktur kimia rutin Quercetin-rutinosid Quercetin-3-(α-L-ramnosida-6-β-

O-glukosida).................................................................................................. 17

2.3. Struktur kimia quercetin ............................................................................... 17

2.4. 1,3-diaril propan............................................................................................ 19

2.5. Beberapa golongan flavonoid berdasarkan struktur aglikon.......................... 20

2.6. Struktur kimia kafein (1, 3, 7-trimetilxantin)................................................ 27

3.1. Hewan coba .................................................................................................. 31

3.2. Penelitian dengan alat hole board ................................................................ 33

3.3. Penelitian dengan evation box ..................................................................... 34

3.4. Penelitian dengan alat rotarod ....................................................................... 35

3.5. Penelitian dengan alat Activity Cage.............................................................. 36

4.1. Makroskopis daun pacar cina......................................................................... 50

4.2. Penampang melintang daun pacar cina (Aglaia odorata Lour.) pada

media Florogusin HCl (perbesaran 10 x 10).................................................. 51

4.3. Irisan epidermis bawah dengan stomata tipe aktinositik................................ 52

4.4. Diagram batang jumlah jengukan kepala mencit ke dalam lubang............... 55

4.5. Grafik linieritas jumlah jengukan kepala mencit ke dalam lubang................ 57

4.6. Diagram batang jumlah aktivitas mencit yang menaiki dan menuruni papan

miring............................................................................................................. 60

xii

xiii

xiii

Gambar Halaman

4.7 Grafik linieritas jumlah mencit menaiki dan menuruni papan miring .......... 62

4.8. Diagram batang lama waktu mencit bertahan di atas balok......................... 65

4.9. Grafik linieritas lama waktu mencit bertahan di atas balok......................... 67

4.10. Diagram batang jumlah aktivitas motorik mencit ........................................ 70

4.11. Grafik linieritas jumlah aktivitas motorik mencit ........................................ 72

4.12. Hasil KLT ekstrak daun pacar cina.............................................................. 73

4.13. Hasil KLT ekstrak daun pacar cina pada pengamatan UV 366 nm ............. 74

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1. Perhitungan Kadar Abu Serbuk Daun Pacar Cina .......................................... 83

2. Perhitungan Anava Untuk Uji Efek Jumlah Jengukkan Kepala Mencit ke

Dalam Lubang................................................................................................. 84

3. Perhitungan Anava Untuk Uji Efek Jumlah Aktivitas Mencit Menaiki dan

Menuruni Papan .............................................................................................. 87

4. Perhitungan Anava Untuk Uji Efek Stimulan Dengan Uji Ketangkasan

Mencit Pada Alat Rotarod Dihitung Berdasarkan Detik................................. 90

5. Perhitungan Anava Untuk Uji Efek Stimulan Dengan Uji Acitivity Cage

Pada Mencit .................................................................................................. 93

6. Hasil Perhitungan HSD Jumlah Jengukkan Kepala Mencit ke Dalam

Lubang ............................................................................................................ 97

7. Hasil Perhitungan HSD Jumlah Aktivitas Mencit Yang Menaiki dan

Menuruni Papan .............................................................................................. 98

8. Hasil Perhitungan HSD Jumlah Ketangkasan Mencit Dengan Alat Rotarod . 100

9. Hasil Perhitungan HSD Mencit Dengan Alat Activity cage ........................... 101

10. Perhitungan Linieritas Rata-rata Jumlah Jengukan Kepala Mencit ke Dalam

Lubang ............................................................................................................ 103

11. Perhitungan Linieritas Rata-rata Jumlah Aktivitas Mencit dengan alat

Rotarod Dihitung Berdasarkan Detik.............................................................. 104

xiv

xvi

xvi

Lampiran Halaman

12. Contoh Perhitungan Harga Rf......................................................................... 105

13. Tabel Uji F ...................................................................................................... 106

14. Tabel Uji HSD (0,01)...................................................................................... 107

15. Tabel Uji HSD (0,05)...................................................................................... 108

16. Tabel Uji r ....................................................................................................... 109

17. Sertifikat Analisis Kofein................................................................................ 110

18. Surat Keterangan Identifikasi.......................................................................... 111

xvii

xvii

ABSTRAK

Uji Efek Stimulan Ekstrak Daun Pacar Cina (Aglaia odorata Lour.) Pada Mencit

Melania Sea Kedang

Telah dilakukan penelitian mengenai uji efek stimulan ekstrak daun pacar cina (Aglaia odorata Lour.) pada mencit. Mencit yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit jantan sehat dengan berat 20-30 g sebanyak 25 ekor dan dibagi menjadi lima kelompok. Masing-masing terdiri dari lima ekor mencit. Kelompok pertama sebagi kontrol negatip hanya diberikan PGA 3% dengan Volume 0,2 ml.,ekstrak daun pacar cina (Aglaia odorata Lour.) diberikan pada kelompok perlakuan dengan dosis masing-masing 2,0g/kgBB, 2,5 g/kgBB, 3,0 g/kgBB, dengan volume pemberian 0,2 ml. Kelompok kontrol positip diberikan kofein 15,6 mg dalam PGA 3% dengan volume pemberian 0,2 ml. Pengujian efek stimulasi sistem saraf pusat pada mencit ini menggunakan metode hole board, metode evasi box, metode rotarod, dan metode activity cage. Hasil analisa statistik dengan menggunakan anava menunjukkan bahwa ada perbedaan yang bermakna antara kelompok perlakuan dengan kelompok kontrol. Dapat disimpulkan bahwa ekstrak daun pacar cina (Aglaia odorata Lour.) pada semua dosis mempunyai efek stimulan serta tidak ada hubungan antara peningkatan dosis ekstrak daun pacar cina (Aglaia odorata Lour.) dengan peningkatan efek stimulan pada metode hole board, evasi box, rotarod dan activity cage.

Kata kunci : efek stimulan; Aglaia odorata Lour.;mencit; hole board; evasi box; rotarod; activity cage

1

1

ABSTRACT

The stimulant effect of Aglaia odorata Lour. Leaves extract on mice Melania Sea Kedang

A research has been carried out to study the stimulant effect of Aglaia odorata Lour. leaves extract on mice. The mice used in this experiment were 25 healthy Swiss Webster male mice weighted 20-30 g and devided into five groups. Each groups was composed of five mice. The first group served as a negative control and received 3% PGA suspension by per oral at a volume of 0,2 ml/10 g BB. Three treated groups were given a suspension of Aglaia odorata Lour. leaves extract at doses 2,0 g/kg BB; 2,5 g/kg BB; and 3,0 g/kg BB by per oral at a volume 0,2 ml/10 g BB. The positive control was given caffeine at dose 15,6 mg/kg BB by per oral at a volume 0,2 ml/10 g BB. Central nervous system stimulatory effect on mice used holeboard method, evasi box method, rotarod method, and activity cage method. The results of statistical analysis using Anova showed a significant difference between the treated groups and the control group. It was concluded that Aglaia odorata Lour. leaves extract at all doses showed stimulant effect and there was no correlation between the increased dose and the increased stimulant effect of Aglaia odorata Lour. leaves extract. Keywords: stimulant effect, Aglaia odorata Lour., hole board, evasi box, rotarod,

activity cage