uji aktivitas sitoprotektif ekstrak daun dan …repository.ump.ac.id/3406/1/cover.pdf · kelor...

i

UJI AKTIVITAS SITOPROTEKTIF EKSTRAK DAUN DAN BATANG

KELOR (Moringa oleifera) PADA INDUKSI H2O2 TERHADAP SEL

FIBROBLAST NIH3T3

SKRIPSI

Diajukan sebagai salah satu syarat

untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi

DESY AMALIA GHALYATI

(1308010010)

PROGRAM STUDY FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO

MEI 2017

ii

Uji Aktivitas Sitoprotektif…, Desy Amalia Ghalyati, Fakultas Farmasi, UMP, 2017

iii


iv


v

PERSEMBAHAN

Skripsi ini saya persembahkan kepada orang-orang yang sangat

berpengaruh dan berjasa dalam kehidupan maupun penyelesaian skripsi

ini.

Papah dan Mamah tercinta

Papah saya Komaruzzaman dan Mama saya Miftahul Baroroh dengan

penuh kasih sayang, kesabaran dan pengorbanan yang tidak bisa

terbalaskan senantiasa memberikan dukungan, bimbingan, dan doanya

sehingga saya dapat menyelesaikan skripsi ini.

Keluarga besar yang saya banggakan

Keluarga Besar yang selalu memberikan dukungan, nasehat, dan

bantuannya kepada saya selama ini.

Sahabat dan teman-teman

Untuk sahabat-sahabat saya Noni, Rumiyana, Darsini, Rita, Elin.

Teman baik saya Tim Kultur Sel Dyfa, Aisyah, Atika, Yana, Endah,

Yosi, Fina, Senja, Binar, Jibon yang telah banyak membantu serta

teman-teman Farmasi Angkatan 2013 terima kasih telah menjadi

teman, sahabat, dan keluarga di kota satria yang tidak akan

terlupakan.


vi

MOTTO

“ Ketika kita punya mimpi, maka bangun, dan kejarlah mimpi

itu”

“ Sesungguhnya bersama kesulitan ada kemudahan. Maka

apabila engkau telah selesai (dari suatu urusan) tetaplah bekerja

keras (untuk urusan yang lain). Dan hanya kepada Tuhanmulah

engkau berharap. (Q.S ASY-SYARH : 7 – 9).”

“ Ketika kita melibatkan Allah SWT dalam setiap proses, maka

Dia tak akan pernah mengecewakanmu”


vii

KATA PENGANTAR

Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa, karena atas berkat dan rahmat-

Nya , dapat menyelesaikan skripsi ini dengan judul Uji Aktivitas Sitoprotektif

Ekstrak Daun Kelor dan Batang Kelor (Moringa oleifera L.) Pada Induksi

H2O2 Terhadap Sel Fibroblast NIH3T3. Penulisan skripsi ini dilakukan dalam

rangka memenuhi salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi pada

Program Studi S1 Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah

Purwokerto.

Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai

pihak, dari masa perkuliahan sampai pada penyusunan skripsi ini, sangatlah

sulit untuk menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, pada kesempatan ini

penulis mengucapkan terima kasih kepada terhormat :

1) Dr. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H., M.H., selaku Rektor Universitas

Muhammadiyah puwokerto

2) Dr. Agus Siswanto, M.Si.,Apt selaku Ketua Program Study S1 Farmasi

yang telah memberi berbagai informasi dan bimbingan tentang tata laksana

penyusunan skripsi.

3) Dr. Nunuk Aries Nurulita M.Si.,Apt selaku dosen pembimbing I yang

telah memberikan bimbingan, arahan, dan petunjuk dalam menyusun

skripsi ini, sehingga dapat diselesaikan dengan baik.

4) Anjar Mahardian Kusuma M,Sc.,Apt selaku dosen pembimbing II yang

telah memberikan bimbingan, arahan, dan petunjuk dalam menyusun

skripsi ini, sehingga dapat diselesaikan dengan baik.

5) Papah dan mamah serta saudara tercinta yang selalu memberikan doa dan

dukungan baik material maupun moral.

6) Sahabat – sahabat (Noni, Rita, Elin, Rumiyana, Darsini, Isnaeni, Winda)

yang telah banyak membantu dan saling support. Sehingga penelitian ini

dapat berjalan dengan baik.


viii

7) Darsini yang telah berjuang bersama dalam suka maupun duka pada

penelitian ini dan telah banyak membantu sehingga penelitian ini dapat

diseleseikan dengan baik.

8) M khaerul umam yang selalu memberikan semangat dan dukungan.

9) Serta teman – teman Farmasi angkatan 2013 yang tidak bisa disebutkan

satu persatu yang telah berjuang bersama dari awal perkuliahan sampai

akhir.

Akhir kata, semoga Allah SWT memberikan balasan atas segala kebaikan

semua pihak yang telah membantu. Semoga skripsi ini membawa manfaat bagi

pengembangan ilmu. Aamiin.

Purwokerto, 15 Juni 2017

Penulis

Desy Amalia Ghalyati

1308010010


ix

RIWAYAT HIDUP

Nama : Desy Amalia Ghalyati

Nim/Angkatan : 1208010010/2013

Tempat,tanggal Lahir : Brebes, 28 Januari 1995

Jenis Kelamin : Perempuan

Agama : Islam

Alamat : Jl. Nusa Indah No. 29 RT/RW 004/002

Desa Kluwut Kec. Bulakamba

Kab. Brebes

Riwayat Pendidikan : Fakultas Farmasi UMP (Angkatan 2013)

SMK Farmasi Muhammadiyah 1 Cirebon (Lulus tahun

2013)

SMP Muhammadiyah 1 Kluwut (Lulus tahun 2010)

MI Al-Mujahiddin 01 Kluwut (Lulus tahun 2007)

Pengalaman Organisasi :

1. Anggota IMM Komisariat Farmasi (2013-2014).


x


xi

Uji Aktivitas Sitoprotektif Daun Kelor dan Batang Kelor (Moringa oleifera, L)

pada Induksi H2O2 Terhadap Sel Fibroblast NIH3T3

Desy Amalia Ghalyati1, Nunuk Aries Nurulita

2, Anjar Mahardian Kusuma

3

ABSTRAK

Kelor (Moringa oleifera L) merupakan tanaman yang banyak digunakan dalam

pengobatan tradisional. Analisis fitokimia tanaman kelor mengungkapkan adanya

kandungan senyawa flavonoid dan senyawa polifenol lain yang diketahui

memiliki aktivitas antioksidan. Antioksidan adalah senyawa yang mampu

menunda, memperlambat atau menghambat reaksi oksidasi yang dapat meredam

radikal bebas dalam tubuh manusia. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui

aktivitas antioksidan dengan melihat efek sitoprotektifnya pada ekstrak etanol

daun kelor dan batang kelor ( Moringa oleifera ) terhadap sel fibroblast NIH3T3

yang diinduksi H2O2 dibandingkan dengan vitamin C. Uji Viabilitas sel

menggunakan metode MTT dengan konsentrasi sebesar 50, 125, 250, 500, dan

1000 µg/ml. Uji induksi H2O2 dilakukan sebagai efek pelindung kronis secara in

vitro dengan pengobatan 1 jam setiap hari selama 3 hari berturut – turut. Uji

recovery effects dilakukan sebagai efek pemeliharaan akut dengan pengobatan 1

jam dalam 1 hari dengan dosis H2O2 100µM. Hasil uji viabilitas sel pada ekstrak

daun dan batang kelor menunjukkan peningkatan viabilitas sel dan dilihat nilai

sitotoksik IC50 pada daun kelor yaitu sebesar 1526,434 μg/ml dan batang kelor

memiliki IC50 2040,72 μg/ml. Hasil uji sitoprotektif pada induksi H2O2 dan

recovery effect ekstrak daun dan batang kelor menunjukkan adanya nilai yang

signifikan (p=0,05) terhadap kontrol perlakuan H2O2 tanpa ekstrak dan vitamin C.

Kata kunci : antioksidan, sitoprotektif, kelor (Moringa oleifera L.), sel fibroblast

NIH3T3


xii

Test cytoprotective activity Moringa leaves and stems Moringa (Moringa oleifera,

L) Against Induction H2O2 on Fibroblast Cells NIH3T3

Desy Amalia Ghalyati1, Nunuk Aries Nurulita

2, Anjar Mahardian Kusuma

3

ABSTRACT

Moringa (Moringa oleifera L) is a plant widely used in traditional medicine.

phytochemical analysis revealed the presence of flavonoid compounds and other

polyphenolic compounds known to have antioxidant activity. Antioxidants are

compounds capable of delaying, slowing or inhibiting oxidation reactions that can

absorb free radicals in the human body. This study aims to determine the

antioxidant activity by looking at the effect of sitoprotective on the extract of

ethanol of Moringa leaves and Moringa oleifera rods against H2O2 induced

NIH3T3 fibroblast cells compared with vitamin C. Test viability cell using MTT

method with concentration of 50, 125, 250, 500, and 1000 μg/ml. H2O2 induction

test is performed as a chronic protective effect in vitro with 1 hour treatment every

day for 3 consecutive days. While the recovery effects test was performed as an

acute treatment effect with 1 hour treatment in 1 day with 100 μm H2O2 dose. The

result of cell viability test on leaf extract and stem of kelor showed increase of cell

viabacity and seen cytotoxic value of IC50 on leaf to 1526.434 μg / ml and stem

have IC50 2040.72 μg / ml. The result of cytoprotective test on induction of H2O2

and recovery effect of leaf and stem extract showed significant value (p = 0.05) to

H2O2 treatment control without extract and vitamin C.

Keyword: Antioxidant, Cytoprotective, Moringa oleifera, Fibroblast cell NIH3T3


xiii

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ........................................................................................ i

HALAMAN PERSETUJUAN ........................................................................ ii

HALAMAN PENGESAHAN .......................................................................... iii

HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS ........................................... iv

HALAMAN PERSEMBAHAN ...................................................................... v

MOTTO ............................................................................................................ vi

KATA PENGANTAR ...................................................................................... vii

RIWAYAT HIDUP .......................................................................................... ix

HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ................................................. x

ABSTRAK ........................................................................................................ xi

ABSTRACT ....................................................................................................... xii

DAFTAR ISI ..................................................................................................... xiii

DAFTAR TABEL ............................................................................................ xvi

DAFTAR GAMBAR . ....................................................................................... xvii

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xix

BAB I PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Masalah ............................................................... 1

B. Perumusan Masalah ..................................................................... 3

C. Tujuan Penelitian ......................................................................... 3

D. Manfaat Penelitian ....................................................................... 3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

A. Hasil Penelitian Terdahulu ........................................................... 4

B. Landasan Teori ............................................................................. 4

1. Antioksidan ............................................................................ 5

a. Definisi ............................................................................ 5

b. Radikal bebas ................................................................... 6

2. Uraian Tanaman Kelor (moringa oleifera L.) ........................ 8

a. Nama daerah .................................................................... 8

b. Deskripsi .......................................................................... 8


xiv

c. penyebarang ..................................................................... 9

d. Khasiat………………………………………………… .. 10

e. kandungan kimia ............................................................. 10

3. Sel Fibroblas .......................................................................... 11

C. Kerangka Konsep ......................................................................... 12

D. Hipotesis ....................................................................................... 13

BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian ................................................... 14

B. Variabel Penelitian ....................................................................... 14

C. Waktu dan Tempat Penelitian ...................................................... 14

D. Determinasi …………………………………………………… .. 14

E. Alat dan Bahan ............................................................................. 15

1. Bahan ..................................................................................... 15

2. Alat ........................................................................................ 15

F. Tahapan Penelitian ...................................................................... 15

1. Penyiapan simplisia ................................................................ 15

2. Ekstraksi ................................................................................. 15

3. Skrining fitokimia ................................................................. 16

a. Analisis senyawa flavonoid ....................................... 16

b. Analisis senyawa saponin .......................................... 16

c. Analisis senyawa tanin ............................................... 16

d. Analisis senyawa alkaloid .......................................... 16

4. Preparasi sampel ..................................................................... 16

5. Kulutur sel fibroblast NIH3T3 ............................................... 17

6. Panen sel fibroblast NIH3T3………………………………… 17

7. Uji viabilitas sel ..................................................................... 17

8. Induksi kronis H2O2 ............................................................... 17

9. Recovery Effect Induksi H2O2………………………………. 18

10. Analisis Data .......................................................................... 18

a. Uji Viabilitas sel ............................................................... 18

b. Recovery effects dan induksi kronis ................................. 18


xv

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil dan Pembahasan ......................................................................... 19

1. Determinasi tanaman .................................................................... 19

2. Pembuatan serbuk simplisia ......................................................... 19

3. Pembuatan ekstrak etanol daun dan batang kelor ........................ 20

4. Identifikasi tanaman ..................................................................... 21

5. Viabilitas sel (MTT assay) ............................................................ 23

6. Induksi H2O2 dan Recovery Effects pada sel fibroblast NIH3T3 . 26

B. Keterbatasan Penelitian ....................................................................... 35

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan .................................................................................. 36

B. Saran ............................................................................................. 36

DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................... 37

LAMPIRAN ....................................................................................................... 40


xvi

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1.4 Hasil randemen ekstrak ................................................................... 20

Tabel 2.4 Hasil uji fitokimia daun kelon dan batang kelor .............................. 21

Tabel 3.4 Hasil rata – rata nilai IC50 ± SD pada ekstrak daun kelor dan

batang kelor ..................................................................................... 23


xvii

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1.2 Mekanisme Antioksidan endogen sebagai pertahanan tubuh ..... 7

Gambar 2.2 Batang, daun dan pohon kelor .................................................... 9

Gambar 3.2 Tahapan Penelitian pada sel fibroblast NIH3T3 ........................ 12

Gambar 4.4 grafik konsentrasi vs persentase kehidupan sel pada ekstrak

daun kelor dan batang kelor ........................................................ 24

Gambar 5.4 Morfologi sel fibroblast perebesaran 20x dibawah mikroskop

interved menggunakan kamera handphone berbentuk kurus

dan lonjong .................................................................................. 26

Gambar 6.4 Grafik % kehidupan sel pada perlakuan induksi H2O2

ekstrak daun kelor konesentrasi menunjukkan aktivitas

kemampuan pemulihan yang lebih baiki dibandingkan

dengan kontrol positif ................................................................ 27

Gambar 7.4 Uji perlindungan sel Fibroblast NIH3T3 selama 3 hari

sebelum induksi dan setelah induksi pada daun kelor

konsentrasi 50 (DK 50), konsentrasi 250 (DK 250),

konsentrasi 1000 (DK 1000), dan batang kelor konsentrasi 50

(BK 50), konsentrasi 250 (BK 250), konsentrasi 1000 (BK

1000), kontrol positif (VIT C) dan kontrol negatif (H2O2),

pengamatan dibawah mikroskop interved 20x menggunakan

kamera handphone. ...................................................................... 29

Gambar 8.4 Grafik % kehidupa sel pada perlakuan recovery effect induksi

H2O2 pada ekstrak daun kelor konstentrasi 50 µg/ml

menunjukkan aktivitas kemampuan pemulihan yang lebih

tinggi dari pada konsentrasi 125, 250, 500 dan 1000 µg/ml.

Sedangkan pada ekstrak batang kelor memiliki kemampuan

pemulihan yang lebih baik daripada vitamin c. ........................... 31

Gambar 9.4 Uji pemulihan sel Fibroblast NIH3T3 selama 1 hari sebelum

induksi dan setelah induksi pada daun kelor konsentrasi 50

(DK 50), konsentrasi 250 (DK 250), konsentrasi 1000 (DK


xviii

1000), dan batang kelor konsentrasi 50

(BK 50), konsentrasi 250 (BK 250), konsentrasi 1000 (BK

1000), kontrol positif (VIT C) dan kontrol negatif (H2O2),

pengamatan dibawah mikroskop interved 20x menggunakan

kamera handphone. ...................................................................... 33


xix

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Hasil determinasi tanaman kelor (Moringa oleifera) ................. 41

Lampiran 2. Tahap penelitian .......................................................................... 42

Lampiran 3. Ekstraksi daun kelor dan batang kelor dan perhitungan

randemen .................................................................................... 43

Lampiran 4. Hasil skrining fitokimia .............................................................. 44

Lampiran 5. Perhitungan seri konsentrasi sampel ekstrak daun dan batang

kelor untuk uji viabilitas sel, recovery effect, dan induksi

H2O2 ............................................................................................ 45

Lampiran 6. Persentase viabilitas sel pada uji viabilitas daun kelor dan

batang kelor metode MTT .......................................................... 49

Lampiran 7. Hasil rata – rata viabilitas sel induksi H2O2 ............................... 50

Lampiran 8. Hasil rata – rata viabilitas sel recovery effects ........................... 51

Lampiran 9. Hasil induksi H2O2 dengan uji normality, kruskal wallis, dan

mann witney ................................................................................ 52

Lampiran 10. Hasil Recovery effects dengan uji normality, kruskal walis,

dan mann witney.......................................................................... 77

Lampiran 11. Hasil nilai rata – rata IC50±SD ekstrak daun kelor dan batang

kelor ............................................................................................ 102


uji aktivitas sitoprotektif ekstrak daun dan …repository.ump.ac.id/3406/1/cover.pdf · kelor...

Documents