uji aktivitas biji pepaya terhadap bakteri staphlococus aureus

8/13/2019 Uji Aktivitas Biji Pepaya Terhadap Bakteri Staphlococus Aureus

1/25

uji aktivitas biji pepaya terhadap bakteri staphlococus aureus.

LAPORAN TUGAS AKHIR

UJI AKTIVITAS EKSTRAK BIJI PEPAYA

TERHADAP BATERI STAPHYLOCOCUS AUREUS

Oleh :

IMAN SYAIFUL RACHMAN NIM 1O.O43

LABORATORIUM MIKROBIOLOGIAKADEMI FARMASI PUTRA INDONESIA MALANG

JULI 2011

KATA PENGANTAR

Puji syukur kami panjatkan kehadirat Allah SWT karena hanya berkat limpahan

karunia-nya penulis dapat menyelesaikan penyusunan Tugas Akhir yang berjudul UJI

AKTIVITAS EKSTRAK BIJI PEPAYA TERHADAP BAKTERI STAPHYLOCOCUS

AUREUS. Tugas akhir ini disusun sebagai persyaratan menyelesaikan pendidikan

praktikum mikrobiologi

Dalam penyusunan Tugas Akhir ini penulis banyak mendapatkan pengarahan,bimbingan dan saran dari berbagai pihak .Oleh karena itu penulis mengucapkan terima kasih

kepada :

1. Ernanin Dyah W,S,SI,MP sebagai koordinator praktikum mikrobiologi

2. Sofyan Hadi, A.md.Farm sebagai fasilitator praktikum mikrobiologi

3. Rizal Pratama N.S Farm .Apt sebagai fasilitator praktikum mikrobiologi

Penulis menyadari bahwa di dalam penulisan Tugas Akhir ini masih banyak

kekurangan ,untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun itu

yang di harapkan

Akhirnya penulis berharap semoga Tugas Akhir ini dapat bermanfaat khususnya bagi

praktikum yang akan dilakukan.


2/25

Malang, Juli 2011

Penulis

DAFTAR ISI

HALAMAN SAMPUL DEPAN.......................................................................... i

KATA PENGANTAR........................................................................................ ii

DAFTAR ISI................................................................................................................ iiiBAB 1 : PENDAHULUAN...................................................................... 1

1.1 Latar Belakang....................................................................... 1

1.2 Tujuan Penelitian...................................................................... 2

1.3 Manfaat Penelitian ................................................................... 2

BAB 2 : TINJAUAN PUSTAKA ................................................................... 3

2.1 Klasisifikasi tumbuhan............................................................... 4

2.2 Nama daerah............................................................................. 4

2.3 Penyakit diare .......................................................................... 5

2.4 Simplisia................................................................................... 5

2.5 Ekstraksi.................................................................................. 6

2.6 Etanol...................................................................................... 7

2.7 Cara Penyaringan....................................................................... 8

2.8 Bakteri Staphylococus Aureus...................................................... 9

2.9 Anti Bakteri............................................................................... 11

2.10 Uji Aktifitas Antimikroba 12

2.11. Resistensi 15

BAB 3 : METODE KERJA 17

3.1 Waktu dan tempat 173.2 Alat dan bahan 17

3.3 Cara kerja . 18

BAB 4: DATA HASIL PENGAMATAN . 24

4.1 Data hasil pengamatan 24

4.2 Analisa pengamatan 26

4.3 Analisa hasil 28

BAB 5 KESIMPULAN . 29

$3B 5.1 Kesimpulan

29

5.2 Saran 29


3/25

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Indonesia adalah Negara yang kaya akan sumber daya alam yang dapat di manfaatkan

sebagai obat tradisional .Obat tradisional merupakan obat yang berasal dari tumbuhan ,

hewan, mineral atau campuran dari bahan yang belum mempunyai uji klinis dan di

pergunakan untuk pengobatan yang berdasarkan pengalaman . Kemajuan teknologi dan ilmu

pengetahuan ternyata tidak mampu begitu saja menghilangkan arti pengobatan tradisional.

Apalagi keadaan perekonomian Indonesia saat ini yang dapat mengakibatkan harga obat

obatan modern menjadi mahal. Oleh karena itu salah satu pengobatan alternatif yang dapat

dilakukan adalah meningkatkan penggunaan tumbuhan berkhasiat obat dikalangan

masyarakat. Agar peranan obat tradidional dalam pelayanan kesehatan masyarakat dapat

ditingkatkan, perlu dilakukan upaya pengenalan, penelitian, pengujian dan pengembangan

khasiat dan keamanan suatu tumbuhan obat.Salah satu tanaman yang dapat di gunakan sebagai obat adalah biji papaya. Biji

pepaya dapat mengobati untuk obat cacing, peluruh haid, menambah nafsu makan,

meluruhkan haid dan menghilangkan sakit serta penyakit diare. Pengujian aktivitas anti

bakteri ekstrk biji papaya sebaiknya dilakukan terhadap bakteri yang dapat menyebabkan

penyakit diare, salah satu bakteri yang dapat menginfeksi adalah staphylococcus aureus.

Metode yang dapat digunakan dalam pengujian aktivitas bakteri ekstrak biji pepaya

adalah dengan menggunakan metode houl plate, semua ini bertujuan untuk mengetahui

keefektifan atau kekuatan ekstrak biji pepaya dalam menghambat atau mematikan bakteri

staphlococus Aureus ,dengan cara mengukur zona daerah hambatan yang terdapat disekiar zat

uji. Metode houl plate di gunakan untuk bahan yang berbentuk setengah padat sampai bahan

padat.

1

1.2 Manfaat

a. Untuk mengetahui ketahanan (kekuatan) ekstrak biji pepaya terhadapat bakteri

penyebab diare yaitu bakteri Staphylococus Aureus

1.3 Tujuan

Untuk mengetahui uji anti bakteri ekstrak biji papaya terhadap bakteri Staphlococus Aureus

Untuk mengetahui diameter daerah hambatan di sekitar lubang sebagai daerah hambatan

terhadap bakteri Staphlococus Aureus.


4/25

2BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 BIJI PEPAYATanaman pepaya berbentuk batang yang lurus, bulat silindris, di atas bercabang atau

tidak bercabang, sebelah dalam berongga, tinggi 2,5-10,0 m. Daun berjejal pada ujung batang

dan ujung cabang (roset), tangkai daun bulat silindris, berongga, bertulang daun menjari,

ujung runcing. Bunga jantan pada tandan seperti malai dan bertangkai panjang, kelopak

sangat kecil, mahkota berbentuk terompet, putih kekuningan. Bunga betina kebanyakan

berdiri sendiri, daun mahkota lepas atau hampir lepas, putih kekuning-kuningan, bakal buahberuang satu, kepala putik lima, duduk. Buah berbentuk buni bulat telur memanjang,

berdaging, dengan biji banyak (Steenis, 1997).

Getah pepaya mengandung enzim papain yang dapat melarutkan putih telur. Tanaman

pepaya memiliki kandungan senyawa karpain, yang dapat menurunkan tekanan darah,

membunuh mikrobia, cacing dan juga mengandung sedikit damar (Soediroatmodjo dan

Soetomo, 1988). Karpain merupakan suatu alkaloid yang diisolasi dari tanaman pepaya yang

memiliki aktivitas antimikrobia (Labhsetwar, 1997). Menurut Bell (1999), aktivitas

antimikrobia pada beberapa bagian tumbuhan pepaya antara lain

A. Getah dan ekstrak akar menghambat pertumbuhan Candida albica

B. Ekstrak biji menunjukkan sifat bakteriostatik terhadap S. aureus, E. coli, Salmonella typhi

dan Bacillus subtilis secara in vitro.

C. Alfa-D-mannosidase dan N-asetil-beta-D-glukosaminidase (diisolasi dari getah) menghambat

pertumbuhan khamir.

Pepaya bersifat manis dan netral. Akar berguna sebagai peluruh kencing(diuretik),

obat cacing, penguat lambung, serta perangsang kulit. Biji dapatdipakai untuk obat cacing

dan peluruh haid. Buah matang dapat memacu enzimpencdrnaan, peluruh empedu

(cholagogue), menguatkan lambung (stomakik) dan

antiscorbut. Buah mentah bermanfaat sebagai pencahar ringan (laxative), peluruhkencing,

pelancar keluarnya ASI (galaktagog), dan abortivum. Daun dapat

menambah nafsu makan, meluruhkan haid dan menghilangkan sakit (analgetik)(Dalimarta dan Hembing,1994).


5/25

3

2.1.1 Klasifikasi IlmiahKingdom : Plantae

Divisio : Spermatophyta

Sub division : Angiospermae

Kelas : Dicotylidonae

Ordo : Caricalis

Famili : CaricaceaeSpesies : Carica papaya L (Backer, 1968)

2.1.2 Nama DaerahCarica papaya di kenal dengan nama pepaya (Indonesia)Kates : Jawa, Madura,lampungGedang : SundaRenten : AcehBima : Kampaya

Makasar : Until jawa

4

2.1.3 Penyakit DiareDiare adalah sebuah penyakit di mana penderita mengalami buang air besar

yang sering dan masih memiliki kandungan air berlebihan. Kondisi ini merupakangejala dari luka, penyakit, alergi (fructose, lactos, penyakit dari makanan ataukelebihan vitamin C ) dan biasanya disertai sakit perut, dan seringkali enek danmuntah. Ada beberapa kondisi lain yang melibatkan tapi tidak semua gejala diare,dan definisi resmi medis dari diare adalah defekasi yang melebihi 200 gram perhari. Hal ini terjadi ketika cairan yang tidak mencukupi diserap oleh usus besar.Sebagai bagian dari proses digestasi, atau karena masukan cairan, makanantercampur dengan sejumlah besar air. Oleh karena itu makanan yang dicernaterdiri dari cairan sebelum mencapai usus besar. Usus besar menyerap air,meninggalkan material yang lain sebagai kotoran yang setengah padat.

Diare kebanyakan disebabkan oleh beberapa infeksi virus tetapi jugaseringkali akibat dari racun bakteria. Dalam kondisi hidup yang bersih dan dengan


6/25

makanan mencukupi dan air tersedia, pasien yang sehat biasanya sembuh dariinfeksi virus umum dalam beberapa hari dan paling lama satu minggu. Namununtuk individu yang sakit atau kurang gizi, diare dapat menyebabkan dehidrasiyang parah dan dapat mengancam jiwa bila tanpa perawatan.

2.1.4 SimplisiaSimplisia adalah bahan alamiah yang dipergunakan sebagai obat yangbelum

mengalami pengolahan apapun juga dan kecuali dinyatakan lain simplisiamerupakan bahan

yang dikeringkan. Simplisia dapat berupa simplisia nabati,simplisia hewani, simplisia pelikan

atau mineral (Anonim, 1985).

Sebagai bahan simplisia, tumbuhan obat dapat berupa tumbuhan liar atauberupa

tumbuhan budidaya. Tumbuhan liar umumnya kurang baik untuk dijadikanbahan simplisia

jika dibandingkan dengan hasil budidaya, karena simplisia yangdihasilkan mutunya tidak

seragam (Anonim, 2005).

52.1.5 Ekstaksi

Ekstraksi adalah pemisahan suatu zat dari campurannya dengan pembagian sebuah zat

terlarut antara dua pelarut yang tidak dapat tercampur untuk mengambil zat terlarut tersebut

dari satu pelarut ke pelarut yang lain. Seringkali campuran bahan padat dan cair

(misalnyabahan alami)tidak dapat atau sukar sekali dipisahkan dengan metode pemisahan

mekanis atau termis yang telah dibicarakan. Misalnya saja,karena komponennya salingbercampur secara sangat erat, peka terhadap panas,beda sifat-sifat fisiknya terlalu kecil,

atautersediadalamkonsentrasiyangerlalurendah.

Dalam hal semacam. itu, seringkali ekstraksi adalah satu-satunya proses yang dapat

digunakan atau yang mungkin paling ekonomis. Sebagai contoh pembuatan ester (essence)

untuk bau-bauan dalam pembuatan sirup atau minyak wangi, pengambilan kafein dari daun

teh, biji kopi atau biji coklat dan yang dapat dilihat sehari-hari ialah pelarutan komponen-

komponen kopi dengan menggunakan air panas dari biji kopi yang telah dibakar atau

digiling.Factor yang mempengaruhi kecepatan penyarian adalah kecepatan difusi zat yang

larut melalui lapisan-lapisan batas antara cairan penyari dengan bahan yang mengandung zat

tersebut.

Pemilihan pelarut atau cairan penyari harus mempertimbangkan banyak faktor.

Cairan penyari yang baik harus memenuhikriteria berikut ini:

a.Murah dan mudah diperoleh

b.Stabil secara fisika dan kimia

c.Bereaksi netral

d.Tidak mudah menguap dan tidak mudah terbakar

e.Selektif yaitu hanya menarik zat berkhasiat yang dikehendaki

f.Tidak mempengaruhi zat berkhasiat

Untuk ekstraksi ini Farmakope Indonesia menetapkan bahwa sebagai cairan penyari adalah

air,etanol,etanolair atau eter.Pengekstraksian pada perusahaan obat tradisional masih

terbatas pada penggunaan cairan penyari air, etanol atau etanolair.


7/25

Air dipertimbangkan sebagai penyari karena:

1. Murah dan mudah diperoleh

2. Stabil

3. Tidak mudah menguap dan tidak mudah terbakar

4. Tidak beracun, alamiah

6Kerugian penggunaan air sebagai penyari:

1. Tidak selektif

2. Sari dapat ditumbuhi kapang dan kuman serta cepat rusak

3. Untuk pengeringan diperlukan waktu lama

Air disamping melarutkan garam alkaloid, minyak menguap, glikosida, tanin dan

gula, juga melarutkan gom, pati, protein, lendir, enzim, lilin, lemak, pectin, zat warna dan

asam organic. Dengan demikian penggunaan air sebagai cairan penyari kurang

menguntungkan. Disamping zat aktif ikut tersari juga zat lain yang tidak diperlukan atau

malah mengganggu proses pembuatan sari seperti gom, pati, protein, lemak, enzim, lendir

dan lain-lain.Air merupakan tempat tumbuh bagi kuman, kapang dan khamir, karena itu pada

pembuatan sari dengan air harus ditambah zat pengawet. Air dapat melarutkan enzim. Enzim

yang terlarut dengannya air akan menyebabkan reaksi enzimatis, yang mengakibatkan

penurunan mutu. Disamping itu adanya air akan mempercepat proses hidrolisa.Untuk

memekatkan sari air dibutuhkan waktu dan bahan bakar lebih banyak bila dibandingkan

dengan etanol.

2.1.6 EtanolEtanol dipertimbangkan sebagai penyari karena:

1. Lebih selektif

2. Kapang dan kuman sulit tumbuh dalam etanol 20% ke atas

3. Tidak beracun

4. Netral

5. Absorbsinya baik

6. Etanol dapat bercampur dengan air pada segala perbandingan

7. Panas yang diperlukan untuk pemekatan lebih sedikit.

Sedang kerugiannya adalah bahwa etanol mahal harganya.Etanol dapat melarutkan

alkaloida basa, minyak menguap, glikosida, kurkumin, kumarin, antrakinon, flavonoid, steroid,

damar dan klorofil. Lemak, malam, tannin, dan saponin hanya sedikit larut hanya terbatas.

72.1.7 CARA CARA PENYARINGANA. Maserasi

Merupakan cara penyarian yang sederhana. Maserasi dilakukan dengan cara merendam

serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari akan menembus dinding seldan masuk

ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif, zat aktif akan larut dank arena adanya

perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dsalam sel dengan yang diluar sel,maka

larutan yang terpekat didesak keluar. Peristiwa tersebut berulang sehingga terjadi

keseimbangan konsentrasi antara larutan diluar sel dengan larutan di dalam sel.

Maserasi digunakan untuk penyarian simplisia yang mengandung zat aktif yang

mudah larut dalam cairan penyari, tidak mengandung zat yang mudah mengembang dalam


8/25

cairan penyari, tidak mengandung benzoin, stirak dan lain-lain.Cairan penyari yang

digunakan dapat berupa air, etanol, air-etanol, atau pelarut lain. Bila cairan penyari digunakan

air maka untuk mencegah timbulnya kapang, dapat ditambahkan bahan

pengawet,yangdiberikanpadapenyarian.

- Keuntungan cara penyarian dengan maserasi adalah cara pengerjaan dan peralatan

sederhana dan mudah diusahakan.- Kerugian cara maerasi adalah pengerjaanya lama,dan penyariannya kurang sempurna.

(Anonim, 1986).

B. PERKOLASICara penyarian yang dilakukan dengan mengalirkan cairan penyari melalui serbuk

simplisia yang telah dibasahi. Kekuatan yang berperan pada perkolasi antara lain: gaya berat,

kekentalan, daya larut, tegangan permukaan, difusi, osmosa, adesi, daya kapiler dan daya

geseran (friksi). Cara perkolasi lebih baik dibandingkan dengan cara maserasi karena:

a.)Aliran cairan penyari menyebabkan adanya pergantian larutan yang terjadi dengan larutan

yang konsentrasinya lebih rendah, sehingga meningkatkan derajat perbedaan konsentrasi.b.)Ruangan diantara serbuk-serbuk simplisia membentuk saluran tempat mengalir cairan

penyari.karena kecilnya saluran kapiler tersebut,maka kecepatan pelarut cukup untuk

mengurangilapisan batas,sehingga dapat meningkatkan perbedaan konsentrasi.

(Anonim, 1986).

8

2.1.8 Bakteri Staphylococus Aureus

2.1.7.1 Klasifikasi

Divisio : Protophyta

Subdivisio : Schizomycetea

Kelas : Schizomycetes

Ordo : Eubacteriales

Famili : Micrococcaceae

Genus : StaphylococcusSpesies : Staphylococcus aureus ( Salle, 1961)

2.1.7.2 Morfologi Bakteri

Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram Positif, tidak bergerak,

tidak berspora dan mampu membentuk kapsul. (Boyd, 1980), berbentuk kokus dantersusun seperti buah anggur (Todar, 2002) sebagaimana terlihat pada gambar 2.4.


9/25

Ukuran Staphylococcus berbeda-beda tergantung pada media pertumbuhannya.Apabila ditumbuhkan pada media agar, Staphylococcus memiliki diameter 0,5-1,0mm dengan koloni berwarna kuning. Dinding selnya mengandung asam teikoat,yaitu sekitar 40% dari berat kering dinding selnya. Asam teikoat adalah beberapa

kelompok antigen dari Staphylococcus. Asam teikoat mengandung aglutinogen dan

N-asetilglukosamin. (Boyd, 1980).Staphylococcus aureus adalah bakteri aerob dan anaerob, fakultatif yang mampu menfermentasikan

manitol dan menghasilkan enzim koagulase, hyalurodinase, fosfatase, protease dan lipase.

Staphylococcus aureus mengandung lysostaphin yang dapat menyebabkan lisisnya sel darah merah.

Toksin yang dibentuk oleh Staphylococcus aureus adalah haemolysin alfa, beta, gamma delta dan

apsilon.,

9

Enterotosin dan eksoenzim dapat menyebabkan keracunan makanan terutama yang

mempengaruhi saluran pencernaan. Leukosidin menyerang leukosit sehingga daya tahan tubuh akan

menurun. Eksofoliatin merupakan toksin yang menyerang kulit dengan tanda-tanda kulit terkenaluka bakar. (Boyd, 1980; Schlegel, 1994).

Suhu optimum untuk pertumbuhan Staphylococcus aureus adalah 35o 37o C dengan suhu minimum

6,7o C dan suhu maksimum 45,4o C. Bakteri ini dapat tumbuh pada pH 4,0 9,8 dengan pH

optimum 7,0 7,5. Pertumbuhan pada pH mendekati 9,8 hanya mungkin bila substratnya

mempunyai komposisi yang baik untuk pertumbuhannya. Bakteri ini membutuhkan asam nikotinat

untuk tumbuh dan akan distimulir pertumbuhannya dengan adanya thiamin.

Pada keadaan anaerobik, bakteri ini juga membutuhkan urasil. Untuk pertumbuhan optimum

diperlukan sebelas asam amino, yaitu valin, leusin, threonin, phenilalanin, tirosin, sistein,

metionin, lisin, prolin, histidin dan arginin. Bakteri ini tidak dapat tumbuh pada media sintetik yang

tidak mengandung asam amino atau protein.

(Supardi dan Sukamto, 1999).

Selain memproduksi koagulase, S. aureus juga dapat memproduksi berbagai toksin,

diantaranya :1. Eksotoksin-a yang sangat beracun

2. Eksotoksin-b yang terdiri dari hemosilin, yaitu suatu komponen yang dapat menyebabkan lisis

pada sel darah merah.

3. Toksin F dan S, yang merupakan protein eksoseluler dan bersifat leukistik.

4. Hialuronidase, yaitu suatu enzim yang dapat memecah asam hyaluronat di dalam tenunan

sehingga mempermudah penyebaran bakteri ke seluruh tubuh.

5. Grup enterotoksin yang terdiri dari protein sederhana. (Supardi dan Sukamto, 1999).

Staphylococcus aureus hidup sebagai saprofit di dalam saluran-saluran pengeluaran lendir daritubuh manusia dan hewan-hewan seperti hidung, mulut dan tenggorokan dan dapat dikeluarkan

pada waktu batuk atau bersin. Bakteri ini juga sering terdapat pada pori-pori dan permukaan kulit,

kelenjar keringat dan saluran usus. Selain dapat menyebabkan intoksikasi, S. aureus juga dapat

menyebabkan bermacam-macam infeksi seperti jerawat, bisul, meningitis, osteomielitis,

pneumonia dan mastitis pada manusia dan hewan. (Supardi dan Sukamto, 1999)

10

2.1.9 ANTI BAKTERI

Antibakteri merupakan bahan yang dapat mengganggu pertumbuhan dan metabolisme

bakteri. Antibakteri dapat bersifat bakteriostatik yaitu menghambat pertumbuhan bakteri ataubakterisidal sebagai bahan yang dapat mematikan bentuk-bentuk vegetatif bakteri (Pelczar


10/25

dan Chan, 1988). Menurut Lay (1994), bahan antibakteri dapat bersifat bakteriostatik pada

konsentrasi rendah, namun bersifat bakterisidal pada konsentrasi tinggi. Antibakteri

merupakan bahan antimikrobia yang khusus digunakan untuk kelompok bakteri. Berdasarkan

mekanisme kerjanya, antimikrobia dapat dibagi dalam 4 kelompok(Brooks et al., 2002) :

a.Antimikrobia yang menghambat sintesis dinding sel

b.Antimikrobia yang mengakibatkan perubahan permeabilitas membran sel atau

menghambat pengangkutan aktif melalui membran sel

c.Antimikrobia yang menghambat sintesis protein

d.Antimikrobia yang menghambat sintesis asam nukleat

2.8.1 Faktor- faktor yang mempengaruhi kerja anti bakteri

1.suhu

2. Konsentrasi senyawa anti bakteri

3.Spesies mikroorganisme

4. Jumlah mikroorganisme

5.Keasaman ph

11

2.1.10 Uji Aktifitas Antimikroba

Penentuan kepekaan bakteri patogen terhadap antimikroba dapat dilakukandengan salah

satu dari dua metode pokok yakni dilusi atau difusi. Penting sekaliuntuk menggunakan

metode standar untuk mengendalikan semua faktor yangmempengaruhi aktivitas antimikroba(Jawetz et al., 2005).

Uji aktivitas antimikrobia merupakan uji kepekaan antibiotik atau bahan antimikrobial

terhadap mikrobia patogen (Lay, 1994). Menurut Bailey and Scott (1966) dan Lay (1994)metode yang digunakan untuk uji aktivitas antimikrobia secara in vitro ada 2 macam

yaitu :A.Metode Difusi

Metode difusi adalah cara pemeriksaan yang dilakukan dengan menggunakan bulatan kertas

saring yang telah ditetesi berbagai antibiotik, diletakkan di atas medium agar dalam cawan petri

yang telah diinokulasi dengan mikroorganisme uji. Penghambatan pertumbuhan terlihat sebagai

zona jernih di sekitar bulatan kertas saring yang diukur setelah inkubasi selama 18-24 jam.

Pengujian difusi dengan cara lain yaitu membuat sumuran pada medium agar dengan garis tengah

tertentu dan diisi dengan larutan antibiotik yang digunakan. Metode difusi merupakan metode yang

biasa digunakan karena metode ini mudah dan relatif murah.

B.Minimum Inhibitory Concentration (MIC)


11/25

Minimum Inhibitory Concentration (MIC) adalah uji aktivitas antibiotik atau bahan

antimikrobia dengan mengetahui konsentrasi terendah bahan antimikrobial yang masih

mampu menghambat pertumbuhan mikroorganisme uji. Dalam uji ini diperlukan suspensi

mikroorganisme uji yang dimasukkan dalam medium. Mikroorganisme uji dimasukkan dalam

medium yang berisi berbagai konsentrasi bahan antimikrobia.Minimum Inhibitory

Concentrationdigunakan sebagai petunjuk konsentrasi antibiotik yang mampu menghambatpertumbuhan mikroorganisme dan juga memberikan petunjuk mengenai dosis yang

diperlukan dalam pengobatan penyakit. Suspensi mikroorganisme uji ditambah pada tabung

seri pengenceran yang berisi antibiotik dan pertumbuhan mikroorganisme dilihat dari

kekeruhan dalam tabung, sehingga kemampuan antibiotik secara in vitrodapat

ditentukan.Minimum Inhibitory Concentrationdapat pula ditentukan dengan penggunaan

satu konsentrasi antibiotik dan membandingkan kecepatan pertumbuhan mikroorganisme

dalam tabung kontrol dan tabung yang berisi antibiotik.

12

Metode uji sensitivitas yaitu : Metode Dilusi

Pada prinsipnya antibiotik diencerkan hingga diperoleh beberapa konsentrasi. Metode yang

dipakai ada dua macam, yaitu metode dilusi kaldu disebut juga dengan dilusi cair dan metode

dilusi agar atau dilusi padat. Pada dilusi cair, masing masing konsentrasi obat ditambah

suspense kuman atau bakteri dalam media. Sedangkan dalam dilusi padat, tiap konsentrasi

obat dicampur dengan media agar, lalu ditanami bakteri. Pertumbuhan bakteri ditandai oleh

adanya kekeruhan setelah 16 20 jam diinkubasi. Konsentrasi terendah yang menghambat

pertumbuhan bakteri ditunjukkan dengan tidak adanya kekeruhan, dan disebut dengan

Konsentrasi Hambat Minimal (KHM). Masing masing konsentrasi antibiotic yang

menunjukkan hambatan pertumbuhan ditanam pada agar padat media pertumbuhan bakteri

dan diinkubasi. Konsentrasi terendah dari antibiotic yang membunuh 99,9% inokulum bakteridisebut Konsentrasi Bakterisid Minimal (KBM)

Metode Difusi

Media difusi menggunakan kertas disk yang berisi antibiotik dan telah diketahui

konsentrasinya. Pada metode difusi, media yang dipakai adalah agar Mueller Hinton. Ada

beberapa cara pada metode difusi ini, yaitu:

a. Cara KirbyBauer

Merupakan suatu metode uji sensitivitas bakteri yang dilakukan dengan membuat suspensi

bakteri pada media Brain Heart Infusion (BHI) cair dari koloni pertumbuhan kuman 24 jam,

selanjutnya disuspensikan dalam 0,5 ml BHI cair (diinkubasi 4 8 jam pada suhu 370C).

Hasil inkubasi bakteri diencerkan sampai sesuai dengan standar konsentrasi kuman 108

CFU /ml (CFU : Coloni Forming Unit). Suspensi bakteri diuji sensitivitas dengan meratakan

suspensi bakteri tersebut pada permukaan media agar. Disk antibiotik diletakkan di atas

media tersebut dan kemudian di inkubasi pada suhu 370C selama 1924 jam.

13

Dibaca hasilnya :


12/25

Zona radical

Suatu daerah disekitar disk dimana sama sekali tidak ditemukan adanya pertumbuhan bakteri.

Potensi antibiotic diukur dengan mengukur diameter dari zona radical.

Zona iradica

Suatu daerah disekitar disk yang menunjukkan pertumbuhan bakteri dihambat oleh antibiotic

tersebut, tapi tidak dimatikan. Disini akan terlihat adanya pertumbuhan yang kurang suburatau lebih jarang disbanding dengan daerah diluar pengaruh antibiotic tersebut.

a. Cara sumuran (hole plate)Suspensi bakteri 108 CFU / ml diratakan pada media agar, kemudian agar tersebut

dibuat sumuran dengan garis tengah tertentu menurut kebutuhan. Larutan antibiotik yang

digunakan diteteskan kedalam sumuran. Diinkubasi pada suhu 370 C selam 18 24 jam.

Dibaca hasilnya, seperti pada cara KirbyBauer

b. Cara pour plate

Setelah dibuat suspensi kuman dengan larutan BHI sampai konsentrasi standar(108CFU / ml), lalu diambil satu mata ose dan dimasukkan ke dalam 4 ml agar base 1,5%

dengan temperature 500C. Suspensi kuman tersebut dibuat homogeny dan dituang pada media

agar MULLER Hilton. Setelah beku, kemudian dipasang disk antibiotik (diinkubasi 15 20

jam pada suhu 370C) dibaca dan disesuaikan dengan standar masingmasing antibiotik).

14

2.1.11. Resistensi

Dalam pengobatan penyakit infeksi salah satu masalah sulit yang dihadapikini adalah

terjadinya resistensi bakteri terhadap antibiotik yang digunakan (Volkdan Wheeler, 1993).

Berkembangnya resistensi terhadap obat-obatan hanyalah salah satu contoh proses alamiah

yang tak pernah ada akhirnya yang dilakukanoleh organisme untuk mengembangkan toleransi

terhadap keadaan lingkungan

yang baru. Resistensi terhadap obat pada suatu mikroorganisme dapat disebabkanoleh suatu

faktor yang memang sudah ada pada mikroorganisme itu sebelumnyaatau mungkin jugafaktor itu diperoleh kemudian (Pelczar dan Chan, 1988).

Mikroorganisme dapat memperlihatkan resistensi terhadap obat-obatan melalui berbagai

mekanisme :

a. Mikroorganisme menghasilkan enzim yang merusak obat aktif.

b. Mikroorganisme mengubah permeabilitasnya terhadap obat tersebut.

c. Mikroorganisme mengembangkan sasaran struktur yang diubah terhadapobat.

d. Mikroorganisme mengembangkan jalur metabolisme lain yang melalui jalanpintas reaksi

yang dihambat oleh obat.e. Mikroorganisme membentuk suatu enzim yang telah mengalami perubahantetapi enzim

tersebut masih dapat menjalankan fungsi metabolismenya serta tidak begitu dipengaruhi oleh

obat seperti enzim pada bakteri yang peka.(Jawetz et al., 1996)


13/25

Penyebab terjadi resistensi mikroba adalah penggunaan antibiotik yangtidak tepat,

misalnya penggunaan dengan dosis yang tidak memadai, pemakaianyang tidak teratur atau

tidak kontinu, demikian juga waktu pengobatan yang tidakcukup lama. Maka untuk

mencegah atau memperlambat timbulnya resistensimikroba, harus diperhatikan cara-cara

penggunaan antibiotik yang tepat (Wattimena et al., 1991).

Resistensi dibagi dalam kelompok resistensi genetik, resistensi nongenetik, dan resistansisilang.

a. Resistensi non genetik

Bakteri dalam keadaan istirahat (inaktivitas metabolik) biasanya tidakdipengaruhi

oleh antimikroba. Bila berubah menjadi aktif kembali, mikrobakembali bersifat sensitif

terhadap antimikroba. Keadaan ini dikenal sebagairesistensi non genetik (Anonim, 1995).

15

B. Resistensi genetikTerjadinya resistensi kuman terhadap antibiotik umumnya terjadi karenaperubahan

genetik. Perubahan genetik bisa terjadi secara kromosomal dan ekstrakromosomal.

1). Resistensi kromosomalIni terjadi akibat mutasi spontan pada lokus yang mengendalikan kepekaanterhadap

obat antimikroba yang diberikan.

2). Resistensi ekstrakromosomal (resistensi dipindahkan)Bakteri sering mengandung

unsur-unsur genetik ekstrakromosom yangdinamakan plasmid. Bahan genetik dan plasmid

tersebut dapat dipindahkan melalui mekanisme transduksi, transformasi, konjugasi, dan

translokasi DNA.

C. Resistensi silang

Mikroorganisme yang resisten terhadap suatu obat tertentu dapat pularesistenterhadap obat-obat lain yang memiliki mekanisme kerja yang sama (Jawetzet

al.,1996).


14/25

16


15/25

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Waktu dan Tempat

Dalam melaksanakan tugas akhir praktikum mikrobiologi dilaksanakan pada:

Hari : SeninTanggal : 30 Mei 2010

Waktu : 07.30 WIBselesai

Tempat : Laboratorium Mikrobiologi Putra Indonesia Malang.

3.2 Alat dan Bahan

Alat Bahan

1.Tissue 17.Batang pengaduk 1. Alkohol 70%

2.Serbet 18.erlemeyer 2.NA

3.kapas 19. Beaker glass 3.Bakteri S.aureus

4. pipet 20. Botol infus + selang 4.ekstak biji pepaya

5. asbes 21. Pelubang hool6. spiritus 22.kertas saring

7. kaki tiga 23.statip

8. pinset 24.buret9. kertas cakram 25.sprektometer

10. alkohol 26. Alumunium oil

11. cawan petri 27. Kain kasa

12. blue tip 28. Korek bensol13. pelubang hole

14. kertas coklat

15. karet/tali

16. botol semprot

17

3.3Cara kerja

A. Ekstraksi1) Siapkan biji pepaya basah sebanyak 100 g

2) Cuci biji tersebut hingga bersih

3) Keringkan biji dengan sinar matahari

4) Blender biji tesebut sampai halus

5) Ayak serbuk dengan ayakan B 12 dan B 14

6) Timbang ekstrak biji pepaya sebanyak 30 g

B. Maserasi

1) Cuci botol sampai bersih dengan sabun, air,aquadest,dan alkohol

2) Keringkan botol tersebut

3) Timbang ekstak biji pepaya sebanyak 30 gram


16/25

4) Masukan ekstrak biji pepaya ke dalam botol + etanol 70% dengan perbandingan 110

5) Selama proses maserasi ekstrak biji pepaya tersebut harus dikocok

6) tunggu selama 5 hari dan

7) Jauhkan dari sinar matahari

C. Perkolasi1) Dari hasil maserasi kemudian diperkolasi

2) Siapkan infuse cuci hingga bersih dan keringkan

3) Masukan kapas dan kain kasa ke dalam botol infus

4) Hasil dari botol gelap hasil maserasi masukkan dalam infuse, kemudian tambahkan etanol

70% sebanyak 100 ml dan atur kecepatan penetesannya dalam wadah yang telah disediakan

(erlemeyer)

18

4) Setelah habis tambahan etanol lagi sebanyak 50 ml untuk pembilasan dan atur kecepatan

penetesannya sedikit lebih lambat dari yang pertama

5) Setelah selesai, sisihkan hasil perkolasi tersebut, masukkan dalam cawan uap

D. Penguapan

1. Dari hasil perkolasi kemudian diuapkan

2. Siapkan waterbath dan panasi

3. Setelah itu taruh cawan penguap yang telah berisi hasil perkolasidiatas waterbath.

4. panaskan sambil diaduk sampai mendapatkan ekstrak kentalnya


17/25

5. kemudian masukkan dalam botol kecil agar lebih praktisnya

19

E Sterilisasi alat :

1) Siapkan alatalat yang akan di gunakan2) Cuci alat (cawanpetri, bluetiip,erlemenyer,dll) dengan

menggunakan sabun kemudian keringkan

3) Bungkus dengan kertas coklat

4) Siapkan autoklaf

5) Masukkan alatalat yang akan di sterilkan ke dalam autoklaf

6) Tutup autoklaf

7) Atur suhu autoklaf sampai 1200C , jika sudah selesai tunggu selama

15 menit sampai jarum menunjukan angka 0

8) Keluarkan alatalat dari autoklaf


18/25

20

F. Pembuatan media NA

1. Siapkan alat dan bahan yang diperlukan2. timbang media NA sebanyak 2,07 g di timbangan analitik

3. masukkan NA ke dalam erlemeyer kemudian tambahkan aquadest sebanyak 30 ml

4. panaskan dengan kompor listrik hingga mendidih sambil diaduk dengan batang pengaduk

5. kemudian tunggu sampai dingin, tutup dengan kapas dan bungkus dengan kertas coklat,

masukkan dalam autoklaf untuk ikut dusterilkan

21

G. Suspensi bakteri Staphylococus Aureus

1. siapkan alat spectrometer dan bahan yang diperlukan dalam melakukan suspense bakteri

Staphylococus Aureus2. panaskan spektrometer selama 30 menit


19/25

3. ambil 2 tabung, yang pertama isi dengan NaCL sampai batas dan sisihkan, yang kedua cuci

terlebih dulu dengan NaCL sedikit saja, panaskan dengan nyala api sampai bersih, setelah itu

isi dengan suspense bakteri

4. masukkan dalam apektrometer, ukur dan lihat angka yang menunjukkan tabung pertama

sebagai pembanding dan tabung kedua. Angka tabung kedua menunjukkan setengah dari

tabung pembanding.5. Masukkan suspensi bakteri dalam beaker glass kecil dan tutup

dengan alumunium foil

6. suspensi bakteri Staphylococus Aureus siap diuji

H. Praktikum dengan metode Houl Plate

1. Siapkan alat dan bahan yang akan di pakai

2. Ambil cawan petri yang telah disterilakn sebanyak tiga cawan petri

3. Pipet bakteri Staphylococus Aureus sebanyak 1 ml kemudian

masukkan dalam 3 cawan petri

4. Tuang media NA yang telah di sterilkan yang masih hangat ke dalam

cawan petri yang telah terisi dengan bakteri Staphylococus Aureus

dan cawan petri yang masih kosong sebanyak 15 ml

22

5. Sisihkan cawan petri yang telah terisi media NA saja, satu cawan petriyang telah terisi bakteri Sthapylococus Aureus dan media NA

6. Kemudian pipet ekstrak biji pepaya dan teteskan ke dalam lubang

yang telah dibuat.


20/25

7. kemudian tiga cawan tersebut bungkus dengan kertas coklat dan

beri tanda

8. masukkan dalam inkubator untuk diinkubasi selama 2 x 24 jam, amati

dan catat hasilnya

23

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Data Hasil Pengamatan

Dalam praktikum ini kami melakukan pengamatan uji aktivitas ekstrak biji

papaya terhadap mikroorganisme.penulis menggunakan bakteri staphylococcus aureus yaitu

:

Bakteri Staphlococus Aureus

Ekstrak biji pepaya


21/25

Hari pertama, cawan petri 1 (media NA)

24

Hari pertama, cawan petri 2 (bakteri + media NA)

Hari pertama, cawan petri 3 (bakteri + media NA + ekstrak biji pepaya)

Hari kedua, cawan petri 1 (media NA)


22/25

Hari kedua, cawan petri 2 (bakteri + media NA)

25

Hari kedua, cawan petri 3 (bakteri + media NA + ekstrak daun salam)

4.2 Analisa Prosedur

Prosedur uji aktivitas ini menggunakan metode houl plate. Terlebih dulu pembuatan

ekstrak biji pepaya sebagai sample bahan penguji dengan mengekstraksi biji pepaya tersebut.

Metode yang dipakai adalah ekstraksi, maserasi, perkolasi dan penguapan. Kemudian darihasil ekstraksi dipakai dalam metode houl plate. Untuk mendapatkan bakteri Staphlococus

Aureus yang akan diuji, harus dilakukan suspensei terhadap bakteri, jadi disini saya juga

melakukan suspensi terhadap bakteri Staphylococus Aureus untuk mendapatkan bakteri

Staphylococus Aureus tersebut.

Metode Ekstraksi

Pertama siapkan biji pepaya basah sebanyak 100 g, setelah itu di cuci biji tersebut sampai

bersih , kemudian keringkan biji tersebut dengan sinar matahari, setelah biji tersebut kering

blender biji tersebut sampai halus kemudian di ayak menggunakan ayakan B12 dan B14,

setelah diayak timbang ekstrak biji pepaya sebanyak 30g.


23/25

Metode Maserasi

Pertama siapkan alat dan bahan yang dibutuhkan. Timbang ekstrak biji pepaya yang telah

kering dan halus pada timbangan analitik. Kemudian masukkan dalam botol gelap dan

menggunakan perbandingan 1:10 denagn bahan. Tutup botol yang telah berisi ekstrak biji

pepaya yang halus dan etanol 70% dan kocok kocok. Diamkan selama 5 hari sambil

sesekali dikocokkocok.

26

Metode perkolasi

Siapkan alat dan bahan yang dibutuhkan. Ambil infuse, cuci dan bersihkan lalu

keringkan, bilas dengan aquadest. Kemudian ambil kapas yang dilapisi dengan kasa,

masukkan dalam infus untuk menyaring atau mengambil sari dari daun salam yang telah

dimaserasi. Terlebih dulu basahi kapas yang dilapisi kasa tersebut dengan etanol sedikit saja

kemudian masukkan hasil maserasi dalam infuse yang telah disiapkan, tambahkan etanol

70% sebanyak 100 ml dan gantungkan pada klem pada statif yang telah disiapkan lalu aturtetesan infuse untuk masuk dalam tempat tetesan yang disediakan. Setelah selesai, tambahkan

lagi etanol sebanyak 50 ml untuk membilas, atur tetesan sedikit lebih lambat dari tetesan

yang pertama. Setelah selesai, sisihkan hasil perkolasi tersebut untuk siap diuapkan.

Metode penguapan

Pertama siapkan alat dan bahan yang dibutuhkan. Siapkan waterbath dan panasi

terlebih dulu. Ambil cawan penguap yang telah steril, hasil dari perkolasi tuang dalam cawan

penguap tersebut kemudian taruh diatas waterbat, panasi sambil diaduk dan tunggu sampai

mendapat hasil ekstrak dari biji pepaya tersebut. Setelah itu masukkan hasil ekstrak biji

pepaya dalam botol kecil agar lebih praktis.

Metode suspensi bakteri

Pertama siapkan alat dan bahan yang dibutuhkan. Panasi alat selama 30 menit. Setelahitu, ambil satu tabung pertama, isi dengan NaCL sampai batas sisihkan. ambil satu tabung

kedua lagi kemudian cuci dengan NaCL sedikit saja, kocok dan buang, lalu masukakan nyala

api dalam tabung sampai api tidak masuk lagi dalam tabung dan berarti tabung sudah bersih,

tapi jika api masih masuk berarti tabung belum bersih, ulangi sampai tabung bersih.

Kemudian isi tabung yang sudah bersih tersebut dengan suspense bakteri Sthaphylococus

Aureus sampai batas. Ambil tabung pertama yang berisi NaCL dan tabung kedua yang berisi

suspense bakteri Sthaphylococus Aureus, masukkan dalam alat yang telah dipanasi, pertama

masukkan tabung pertama sebagai pembanding dan ukur berapa angka yng menunjukkan,

kemudian masukkan suspensi tabung kedua dan ukur angka yang menunjukkan suspensi

bakteri tersebut.27

Angka yang menunjukkan suspensi bakteri Sthaphylococus Aureus adalah tepat

setengah dari angka tabung pembanding, berarti suspensi bakteri sesuai, jika angka yang

menunjukkan tabung suspensi bakteri lebih atau kurang dari tabung pembanding, berarti

suspensi bakteri terlalau pekat ataupun terlalu encer. Setelah itu suspensi bakteri tersebut

masukkan dalam beaker glass kecil dan tutup dengan aluminum foil. Suspensi bakteri siap di

uji.

Metode hole plate (sumuran)

Pertama siapkan alat yang dibutukan kemudian disterilisasi. Setelah itu buat media NA

timbang NA masukkan dalam erlemeyer, tambahkan aquades, panaskan hingga mendidih


24/25

sambil di aduk. Di amkan sampai tidak terlalu panas (hangat). Pipet sample bakteri,

masukkan dalam cawan petri yang telah steril. Setelah hangat, tuangkan media NA ke cawan

yang telah berisi sample bakteri, kemudian goyang-goyangkan cawan seperti angka delapan

supaya sample bakteri merata pada media. Lalu diamkan supaya media memadat. Setelah

memadat bagian tengah atau bagian yan diinginkan dilubangi menggunakan alat pelubang.

Kemudian pipet ekstrak biji pepaya dan teteskan ke dalam lubang yang telah tdibuat.Diusahakan tetesan ekstrak biji papaya jangan sampai melebihi lubang (tumpah). Lalu cawan

petri dibungkus menggunkan kertas coklat dan dimasukkan dalam lemari incubator untuk

diinkubasi selama 2 x 24 jam.

4.3 Analisa Hasil

Dari hasil pengamatan yang telah saya lakukan pada cawan petri pertama yang berisi

media saja, menunjukkan bahwa adanya jamur pada media tersebut. Untuk cawan petri yang

kedua berisi bakteri dan media NA menunjukkan adanya pertumbuhan bakteri secara merata.

Sedangkan pada cawa pwtri ketiga yang berisi bakteri, media NA dan ekstrak daun biji

pepaya dengan menggunakan metode houl plate menunjukkan adanya zona bening tetapihanya sedikit sekali yaitu selebar 0,5 cm. Dari hasil pengamatan tersebut dapat

disimpulkan bahwa ekstrak biji pepaya memiliki kemungkinan kecil untuk dapat

menghambat dan membunuh bakteri Ekstrak biji pepaya penyebab penyakit diare.

28

BAB V

KESIMPULAN

5.1Kesimpulan

Dari hasil pengamatn praktikum yang telah saya lakukan dapat disimpulkan bahwa ekstrak

biji pepaya mempunyai kemungkinan kecil untuk dapat menghambat dan membunuh bakteri

Staphlococus Aureus penyebab penyakit diare.

Dalam proses uji antibakteri terhadap bakteri, ruangan harus steril dan benar-benar dijaga

agar tidak terkontaminasi dengan mikroorganisme lain, Sehingga akan diperoleh hasil yang

baik.

5.2 Kritik dan Saran

Kami menyadari bahwa dalam penyusunan tugas akhir ini masih banyak kekurangan untuk

itu kami mengharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun. Semoga tugas akhir ini

bermanfaat bagi pembaca pada umumnya dan penulis pada khususnya.


25/25

29

DAFTAR PUSTAKA

http://id.wikipedia.org/wiki/Diare.

http://id.wikipedia.org/wiki/Sthapylococus Aureus.

http://sekarmenur.blogspot.com/2008/05/khasiat-biji pepaya.html.

http://kimia.unp.ac.id/?p=1195.

http://khasiatherbal.tk/tanaman-obat khasiat biji pepaya.

Anonim, 2006, Tanaman Obat di Indonesia, Cakrawala

IPTEK, http:/www.iptek.net.id/ind/cakra-obat/tanaman obat, 10 Juli 20.

http: // slideshare//igoranus/ pertumbuhan tanaman .biji pepaya //etd.epirintis.UMS.ac.id.

http//www.ifsurbud.wordpress.com/2009/06/25/antimikroba.

uji aktivitas biji pepaya terhadap bakteri staphlococus aureus

Documents