TIARA DWI NURMALITA (120342400172/G-GE)ESSAY: MOLECULAR CLONINGKloning DNA merupakan proses penggandaan organisme inang yang didalamnya terdapat DNA rekombinan dan membentuk organisme yang memiliki seperangkat genetik DNA yang identik. Organisme inang yang digunakan hampir selalu menggunakan bakteri E.coli. vektor yang digunakan secara normal harus dapat direplikasi dan diisolasi secara bebas. Enzim yang digunakan dalam kloning DNA : alkaline phosphatase, DNA ligase, DNA polymerase I, Exonuclease III, mung bean nuclease, nuclease S1, Polinucleotide kinase, enzim retriksi, reverse transcriptase, RNase A, RNase H, T7, T3, dan SP6 RNA polymerase, Taq DNA polymerase, dan terminal transferase. Kloning DNA ada yang berupa subkloning (transfer DNA yang telah di klon dari satu vektor ke vektor lainnya). Tahap subkloning yang pertama yaitu isolasi plasmid DNA yang berisi sekuen yang diklon . tahap kedua yaitu digesti (pemotongan) plasmid dalam fragmen yang terpisah dengan endonuclease restriksi, ketiga yaitu pemisahan fragmen-fragmen dengan elektroforesis gel agarose, keempat yaitu ligase (penyambungan) fragmen ke dalam vektor plasmid baru, untuk membentuk molekul rekombinan, kelima yaitu transfer plasmid yang sudah ada sambungannya ke dalam strain E.coli (transformasi), keenam yaitu seleksi bakteri yang tertransformasi, terakhir yaitu analisis plasmid rekombinan.Kloning gen dapat menggunakan DNA libraries. Caranya, pertama mRNA total diekstrak dari jaringan khusus dan hibridisasi dengan primer poli-T, kedua yaitu pembentukan komlementer DNA copy dengan reverse transcriptase, ketiga yaitu degradasi RNA dengan menggunakan enzim RNase H, keempat yaitu menyintesis untai cNDA kedua menggunakan fragmen RNA sebagai primer.Jurnal yang ditemukan metode kloningnya perpaduan antara DNA libraries dengan subkloning: isolasi A.niger, persiapan cDNA, ligase dan identifikasi DNA yang masuk, ligase produk PCR, persiapan cell line yang kompeten, transformasi E.coli, dan isolasi dan identifikasi plasmid rekombinan.DAFTAR PUSTAKA

Alberts, Bruce., Johnson, Alexander., Lewis, Julian., Raff, Martin., Roberts, Keith., dan Walter, Peter. Molecular Biology of the Cell fifth Edition. 2008. New York : Garland Science Taylor & Francis Group. Mukadam, D.S., Chavan, A.M., Taware, dan D.S, Taware, S.D. 2010. Isolation, Cloning, and Molecular Characterization of Polygalacturonase I (pgaI) Gene from Aspergillus niger Isolate from Mango. Indian Journal of Biotechnology, 9: 153159.Turner, P.C., McLennan, A.G., bates, A.D., dam White, M.R.H. 1998. Instant Notes in Molecular Biology. Liverpool : Bios Scientific Publishers.