PROTEIN INTERFERO

N

Apa itu Protein Interferon (IFN) ?

Protein yang diproduksi tubuh sebagai respon terhadap antigen termasuk

virus, bakteri dan parasit

Disekresikan oleh hampir semua sel eukariotik

PRINSIP KERJA IFN

Sel yang terserang akan mengeluarkan IFN,

melekat pada sel untuk sintesis protein antigen

Akan membuat pertumbuhan virus, bakteri terhambat.

Vektor pET-32b (+)Multiple Situs Restriksi

Thioredoxin (Trx.Tag) : Pembentukan ikatan disulfida, tingkatkan kelarutan protein

Histidin (His.Tag) : Purifikasi protein rekombinan

Situs pemotongan trombin dan enterokinase : Pemisahan antara fusi tag dengan protein target setelah purifikasi

Vektor pET-32b (+)

Ekspresi gen pada E. coli

Kepadatan koloni tinggi

Mudah untuk seleksi dan

ekspresi

Mudah untuk menerima kehadiran

benda asing (insert)

Laju rekombinasi yang rendah

Proses produksi IFN metode TBIO(Thermodynamically Balanced Inside-Out)

Gen IFN dipotong dengan NcoI dan

XhoI

Ligasi ke vektor pET-32b(+)

Transformasi ke E. coli DH5α (analisis protein rekombinan) (uji coba)

Heat shock

Rekombinan akan tumbuh

Tumbuhkan pada

LB+ampisilin

Vektor rekombinan transformasi ke E. coli

BL21 (DE3) Heat shock

PCR+elektroforesis, deteksi rekombinan

yang benar

Protein dikarakterisasi melalui metode SDS PAGE (Sodium

Deodesyl-Poly Acrylamide Gel Electrophoresis) pewarnaan

CBB

TBIO

DNA template diganti dengan pasangan oligonukleotida sintetis dan memiliki urutan nukleotida = nukleotida pada gen yang akan disintesis.

Sintesis berlangsung dari arah berlawanan, dari arah dalam ke luar.

Hanya oligonukleotida dari polimerisasi dengan urutan benar yang akan menempel dengan pasangan oligonukleotida selanjutnya.

Oligonukleotida yang digunakan memilki konsentrasi yang berbeda, dimana konsentrasi terendah berada di dalam dan konsentrasi tertinggi berada di luar.

Obat Hepatitis B dan C, IFNα2b diinjeksi sebanyak 5 juta unit (1 hari) – 10 juta unit (3 hari)

Human papiloma virus

Hairy cell leukimia

Kaposi’s sarcoma (kanker yang berasosiasi dengan HIV)

Kegunaan IFNα

REFERENCE

• Kusumawati A. 2013. Kloning Gen Human Interferon Alpha 2α pada Vektor pET-32b(+) dan Ekspresi pada Escherichia coli [Thesis]. Depok(ID): Universitas Indonesia.

• Ningrum RA. 2008. Kloning Daerah Pengkode Interferon Alfa-2B (IFNα2b) Sintetik pada Escherichia coli, Overproduksi, Purifikasi dan Karakteristik Protein Rekombinan IFNα2b [Thesis]. Bandung(ID). ITB.